基于DNA條形碼和SRAP的太子參種質(zhì)遺傳多樣性分析

李萍萍，王澤榕，王 丁，莫晶晶，陳美霞,3，葉祖云,3*

基于DNA條形碼和SRAP的太子參種質(zhì)遺傳多樣性分析

李萍萍1,2，王澤榕1,2，王 丁1,2，莫晶晶1，陳美霞1,3，葉祖云1,3*

1. 寧德師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，福建寧德 352100；2. 福建農(nóng)林大學(xué)農(nóng)學(xué)院，福建福州 350000；3. 福建省特色藥用植物工程技術(shù)研究中心，福建寧德 352100

應(yīng)用DNA條形碼和SRAP分子標(biāo)記技術(shù)，開展15份太子參種質(zhì)資源遺傳差異分析。太子參DNA條形碼顯示：序列的突變位點(diǎn)占比最多為2.16%，序列的突變位點(diǎn)占比最少為1.23%；序列缺失位點(diǎn)占比最多為4.88%；序列的GC含量最高，達(dá)55.52%；序列的GC含量最低，僅為24.71%。太子參SRAP標(biāo)記篩選出9對(duì)引物，擴(kuò)增出215個(gè)位點(diǎn)，其中42個(gè)為多態(tài)性位點(diǎn)，多態(tài)性位點(diǎn)百分率（PPL）為19.53%；從擴(kuò)增位點(diǎn)總數(shù)看，多態(tài)性條帶豐富、清晰，既有共同位點(diǎn)又有特異性位點(diǎn)；7個(gè)居群Nei’s遺傳多樣性指數(shù)（）范圍為0.3466～0.4985，Shannon信息指數(shù)（）范圍為0.5301～0.6917，顯示出較高的遺傳多樣性水平，太子參種群基因多樣性（t）為0.4004，其中種群內(nèi)基因多樣性（s）和遺傳分化系數(shù)（st）分別為0.0901、0.3103，分別占t的77.50%、22.50%。種源間st為0.7506，即有75.06%的遺傳變異存在于種源間，24.94%的遺傳變異存在于種源內(nèi)，表明太子參種源間遺傳變異大于種源內(nèi)遺傳變異，存在較低程度的遺傳分化。太子參種源的平均基因流（m）為0.1929，表明太子參各種源之間的基因交流順利。15份太子參種質(zhì)間的K2P遺傳距離范圍為0.0005～0.0056，而遺傳相似系數(shù)在0.3913～0.8695之間，遺傳相似系數(shù)在0.5900時(shí)，可將15份種質(zhì)分為3個(gè)類群，其中雜交種質(zhì)為獨(dú)立類型。15份不同種質(zhì)太子參DNA條形碼和SRAP分子標(biāo)記的遺傳距離、遺傳相似系數(shù)及聚類分析結(jié)果相近，以這2種方法相結(jié)合，能更準(zhǔn)確有效鑒定太子參種質(zhì)，這對(duì)太子參種質(zhì)資源的利用及雜交新品種的選育具有重要意義。

太子參；DNA條形碼技術(shù)；SRAP分子標(biāo)記技術(shù)；遺傳多樣性

太子參[(Miq.) Pax ex Pax et Hoffm]為石竹科草本藥用植物，以塊根入藥，具益氣健脾、生津潤肺之功效，是我國常用道地中藥材[1]。太子參在我國從華東到西北，從華中到東北的山林里均有生長，隨著野生太子參資源日漸減少，需求量不斷增大，在全國多地均有種植，主產(chǎn)于福建柘榮、貴州施秉、安徽宣城等地，入選福建省“福九味”閩產(chǎn)中藥材品種名單。太子參人工栽培發(fā)展至今，品種較為單一、種質(zhì)退化、病害嚴(yán)重等成為制約太子參種植發(fā)展的重要因素[2]。目前，太子參栽培品種較少，已通過省級(jí)認(rèn)定的栽培品種只有6個(gè)，其中5個(gè)是系統(tǒng)選育，1個(gè)是誘變選育，未見太子參雜交品種。雜交育種通過雜交、選擇和鑒定，不僅能夠獲得結(jié)合親本優(yōu)良性狀于一體的新類型，而且由于雜種基因的超親分離，在雜種后代群體中還可能出現(xiàn)性狀超越任一親本，或通過基因互作產(chǎn)生親本所不具備的新性狀的類型，該技術(shù)在我國育種工作中占據(jù)很重要的地位。國內(nèi)雜交育種技術(shù)在主栽作物如水稻、小麥、甘薯等的新品種選育工作中應(yīng)用非常廣泛[3-4]，但在我國藥用植物良種選育方面的研究現(xiàn)狀不容樂觀[5-6]，關(guān)于太子參雜交育種的報(bào)道也僅見本實(shí)驗(yàn)室[7-8]。

近些年，相繼出現(xiàn)了RAPD[9]、ISSR[10-11]、DNA條形碼[12-17]等標(biāo)記技術(shù)在太子參遺傳多樣性分析、種質(zhì)資源鑒定等方面的研究，加快了太子參遺傳育種的步伐。DNA條形碼技術(shù)是以染色體組為基礎(chǔ)，用一段標(biāo)準(zhǔn)DNA序列作為標(biāo)記，實(shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確和自動(dòng)化的物種鑒定技術(shù)[18]，2003年由HEBERT等[19]率先提出；2009年，國際條形碼協(xié)會(huì)植物工作組提出葉綠體基因作為植物核心DNA條形碼，隨后又以rDNA、作為補(bǔ)充[20-21]。余永邦等[12]利用引物對(duì)14個(gè)產(chǎn)區(qū)的太子參進(jìn)行測序，其中大部分種質(zhì)的序列存在變異。趙海等[13]以和序列多片段組合方式可準(zhǔn)確鑒定太子參品種‘黔太子參1號(hào)’和‘太子參豐抗1號(hào)’。朱艷等[14]通過對(duì)太子參種質(zhì)及其混偽品rDNA區(qū)進(jìn)行序列測定，可準(zhǔn)確鑒定出太子參種質(zhì)。

相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性（SRAP）分子標(biāo)記方法是2001年在蕓薹屬植物中開發(fā)出來的一種隨機(jī)引物標(biāo)記系統(tǒng)[22-24]。近年來，SRAP標(biāo)記在植物遺傳多樣性分析、種質(zhì)資源鑒定、遺傳連鎖圖的構(gòu)建與基因定位中得到了廣泛應(yīng)用，與RAPD、ISSR、SSR等標(biāo)記相比，SRAP具有更豐富的多態(tài)性、高共顯性、操作簡便和費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)，并且省去了引物開發(fā)的過程[25-29]。本研究采用DNA條形碼和SRAP分子標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合的方法，對(duì)來源于福建、江蘇、貴州、山東、安徽及湖南等主要產(chǎn)地的太子參種質(zhì)進(jìn)行遺傳差異分析，研究各產(chǎn)地不同種質(zhì)間的遺傳關(guān)系，鑒定太子參雜交種質(zhì)，推進(jìn)雜交新品種的選育，并為建立太子參基因資源庫、品種鑒定、種質(zhì)資源保護(hù)和創(chuàng)新利用奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料共15份，包括從全國收集的8份太子參種質(zhì)及本實(shí)驗(yàn)室選育的7份雜交種質(zhì)，均栽培保存于福建省寧德市柘榮縣鳳洋村的太子參良種繁育基地（27°15￠302N，119°50￠152E）（表1）。

表1 實(shí)驗(yàn)材料及來源

1.2 方法

1.2.1 提取DNA 剪取新鮮幼嫩太子參葉片0.1 g，采用植物全基因組DNA提取試劑盒（北京康為）提取葉片DNA，–20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 PCR擴(kuò)增 以15份太子參的DNA作為模板，應(yīng)用ITS1、ITS5、psbA-trnH、rbcL、rbcL2、rbcL6共6對(duì)DNA條形碼通用引物（表2）進(jìn)行PCR擴(kuò)增[30-33]。PCR反應(yīng)體系：DNA模板2 μL，10×ex緩沖液2 μL，dNTPMix 2 μL，上下游引物各1 μL，ex酶0.2 μL，ddH2O補(bǔ)足至20 μL。（1）以ITS為引物的PCR反應(yīng)程序：94℃預(yù)變性5 min；94℃變性30 s，53℃退火1 min，72℃延伸1.5 min，35個(gè)循環(huán)；72℃延伸10 min。（2）以psbA-trnH為引物的PCR反應(yīng)程序：94℃預(yù)變性5 min；94℃變性30 s，58℃退火1 min，72℃延伸1.5 min，30個(gè)循環(huán)；72℃延伸10 min。（3）以rbcL為引物的PCR反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性5 min；94℃變性1 min，57℃退火1 min，72℃延伸1.5 min，33個(gè)循環(huán)；72℃延伸10 min。

1.2.3 克隆子驗(yàn)證 凝膠回收操作按照微柱濃度DNA凝膠試劑盒說明書進(jìn)行（莊盟生物）；連接和轉(zhuǎn)化按照M5 HiPer pTOPO-TA Cloning Kit操作（北京聚合美），克隆子驗(yàn)證后送樣測序（鉑尚生物）。菌落PCR反應(yīng)體系：模板 1 μL，10×PCR buffer 2.5 μL，dNTPMix 1 μL，上下游引物各0.5 μL，r酶0.15 μL，ddH2O補(bǔ)足至25 μL。菌落PCR反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性5 min；94℃變性30 s，54℃退火30 s，72℃延伸100 s，35個(gè)循環(huán)；72℃延伸7 min，4℃保存。

1.2.4 序列分析、遺傳距離分析及構(gòu)建進(jìn)化樹 利用Sequencher 5.4.5和DNAMAN對(duì)已完成測序的序列進(jìn)行拼接、比對(duì)和校正[12]，統(tǒng)計(jì)序列長度、變異位點(diǎn)和GC含量等數(shù)據(jù)，利用Mega 7.0軟件計(jì)算太子參不同種質(zhì)資源之間的K2P遺傳距離，并構(gòu)建NJ系統(tǒng)進(jìn)化樹。

1.2.5 SRAP-PCR擴(kuò)增 太子參基因組DNA的提取同1.2.1，SRAP引物序列參照BUDAK等[24]的方法，篩選出9對(duì)多態(tài)性引物（M1E3、M1E8、M1E18、M1E19、M2E13、M2E14、M2E16、M3E3、M4E16），引物由公司合成。SRAP-PCR體系：DNA模板1 μL，10×exbuffer 2 μL，dNTPMix 2 μL，上下游引物各1 μL，ex酶 0.3 μL，ddH2O補(bǔ)足至20 μL。SRAP-PCR程序：94℃預(yù)變性5 min；90℃變性1 min，35℃退火1 min，72℃延伸1 min，5個(gè)循環(huán)；94℃變性1 min，51℃退火1 min，72℃延伸1 min，30個(gè)循環(huán)；72℃延伸10 min，12℃保存。

1.2.6 聚丙烯酰胺凝膠電泳及數(shù)據(jù)分析 配制6%聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，經(jīng)固定、洗滌、銀染、顯影和拍照。對(duì)電泳圖譜每個(gè)樣品的擴(kuò)增條帶進(jìn)行記錄，相同遷移率位置上，用1來表示有條帶，0表示無條帶。采用POPGENE 32軟件[34]計(jì)算材料間的Nei’s遺傳多樣性指數(shù)（），Shannon’s多態(tài)性指數(shù)（），種群的基因多樣性（t），種群內(nèi)基因多樣性（s），遺傳分化系數(shù)（st），種源間基因流（m），并利用NTSYS-PC 2.1軟件[35]采用UPGMA方法構(gòu)建聚類分析圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 DNA提取結(jié)果

太子參測試樣品DNA主條帶清晰整齊、無雜帶和拖帶情況，濃度均超過40 ng/μL，260/280在1.80左右，是理想的PCR擴(kuò)增模板（圖1A）。

2.2 DNA條形碼PCR擴(kuò)增結(jié)果

應(yīng)用引物ITS1、ITS5、psbA-trnH、rbcL、rbcL2、rbcL6對(duì)太子參測試樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增片段長度分別為648、685、389、703、327、815 bp，條帶清晰明亮。PCR擴(kuò)增結(jié)果以引物ITS1和rbcL2為例（圖1B、圖1C）。

1～15：與表1中的材料對(duì)應(yīng)。A：全DNA電泳圖譜，M1：15 000 bp DNA marker；B：ITS1引物PCR擴(kuò)增電泳圖譜-DNA條形碼，M2：DL2000 DNA marker；C：rbcL2引物PCR擴(kuò)增電泳圖譜-DNA條形碼，M3：DL2000 DNA marker；D：M1E18引物PCR擴(kuò)增部分聚丙烯酰胺凝膠電泳圖譜-SRAP，M4：100 bp DNA marker。

2.3 DNA條形碼片段序列信息

太子參DNA條形碼長度、變異位點(diǎn)和GC含量等序列信息見表2。各候選條形碼序列的測序成功率均為100%，序列質(zhì)量均較高，6對(duì)候選條形碼片段的序列長度從327～815 bp不等；以rbcL6作為引物的樣本序列最長，為815 bp；以rbcL2作為引物的樣本序列最短，為327bp；rbcL6序列的保守位點(diǎn)占比最多為98.65%；ITS1序列的突變位點(diǎn)占比最多為2.16%，rbcL6序列的突變位點(diǎn)占比最少為1.23%；psbA-trnH序列缺失位點(diǎn)占比最多為4.88%，ITS1、ITS5和rbcL2序列沒有缺失位點(diǎn)。各候選條形碼片段序列的GC含量均不相同，ITS1序列的GC含量達(dá)55.52%；psbA-trnH序列的GC含量僅為24.71%。

2.4 SRAP引物篩選及PCR擴(kuò)增結(jié)果

太子參SRAP引物篩選結(jié)果見圖1D和表3，共有9對(duì)引物可擴(kuò)增出多態(tài)性豐富、重復(fù)性高、穩(wěn)定性好的條帶。15個(gè)樣本共擴(kuò)增出215個(gè)位點(diǎn)，其中42個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，平均每個(gè)引物擴(kuò)增24個(gè)位點(diǎn)，多態(tài)性位點(diǎn)百分率（PPL）為19.53%，擴(kuò)增片段在80～650 bp之間。引物M4E16擴(kuò)增出的條帶最多，有29條；引物M3E3擴(kuò)增出的多態(tài)性條帶較多，有7條；引物M2E13擴(kuò)增出的多態(tài)性條帶最少，只有2條；從擴(kuò)增位點(diǎn)總數(shù)看，多態(tài)性條帶豐富、清晰，既有共同位點(diǎn)又有特異性位點(diǎn)。

表2 太子參DNA條形碼片段序列信息

表3 以SRAP引物對(duì)太子參種質(zhì)PCR擴(kuò)增的DNA片段和序列多樣性

2.5 不同種質(zhì)太子參的遺傳多樣性和遺傳分化分析

15份太子參種質(zhì)可分為福建種、江蘇種、貴州種、湖南種、山東種、安徽種、雜交種質(zhì)7個(gè)居群，Nei’s遺傳多樣性指數(shù)（）范圍在0.3466～0.4985之間，Shannon信息指數(shù)（）范圍在0.5301～0.6917之間，平均值為0.4173，平均值為0.6052，顯示出較高的遺傳多樣性水平。由表4可知，太子參種群基因多樣性（t）為0.4004，其中種群內(nèi)基因多樣性（s）和遺傳分化系數(shù)（st）分別為0.0901、0.3103，分別占t的77.50%、22.50%。種源間st為0.7506，即有75.06%的遺傳變異存在于種源間，24.94%的遺傳變異存在于種源內(nèi)，表明太子參種源間遺傳變異大于種源內(nèi)遺傳變異，存在較低程度的遺傳分化。太子參種源的平均基因流（m）為0.1929，表明太子參各種源之間的基因交流順利[36]。

表4 不同種質(zhì)太子參遺傳多樣性

2.6 太子參測試樣品遺傳距離和遺傳相似系數(shù)分析

太子參測試樣品復(fù)合片段序列的K2P遺傳距離范圍在0.0005～0.0056之間，平均值是0.0028，遺傳相似系數(shù)是在0.3913～0.8695，表明樣品間遺傳差異較小，親緣關(guān)系較近，具有較高的遺傳多樣性，但各樣品之間仍存在一定的遺傳距離，DNA條形碼和SRAP分子標(biāo)記可對(duì)樣品進(jìn)行有效區(qū)分，能清晰劃分太子參種質(zhì)之間的親緣關(guān)系，適用于太子參遺傳多樣性的分析和不同種質(zhì)的鑒別（表5，表6）。

表5 15份太子參種質(zhì)K2P遺傳距離分析-DNA條形碼

續(xù)表5 15份太子參種質(zhì)K2P遺傳距離分析-DNA條形碼

Tab. 5 Genetic distance analysis of 15 P.heterophylla germplasms with K2P-DNA barcodes (continued)

表6 15份太子參種質(zhì)遺傳相似系數(shù)分析-SRAP分子標(biāo)記

2.7 構(gòu)建NJ系統(tǒng)進(jìn)化樹和聚類分析

在太子參DNA條形碼中，可將各省的種質(zhì)分為3個(gè)類群，其中江蘇種、山東種、貴州種和福建種的‘柘參2號(hào)’聚為一類，福建種的‘柘參3號(hào)’和安徽種聚為一類，湖南種和福建種的‘柘參1號(hào)’聚為一類；太子參SRAP標(biāo)記中遺傳相似系數(shù)在0.590時(shí)，可將各省的種質(zhì)分為3個(gè)類群，其中江蘇種和福建種的‘柘參1號(hào)’‘柘參3號(hào)’聚為一類，安徽種為一類，福建種的‘柘參2號(hào)’、湖南種、貴州種和山東種聚為一類。2種分子標(biāo)記方法顯示山東種和貴州種均聚為一類，親緣關(guān)系較近，可能是由于相互引種，福建種的3個(gè)品種均未聚為一類，說明太子參種質(zhì)資源間遺傳多樣性豐富，但并不完全按照地理分布聚類，各地太子參材料存在一定程度的基因交流。

在太子參雜交種質(zhì)中，2種標(biāo)記方法結(jié)果基本一致：F1（湖南種♀×山東種♂）與父本山東種聚為一類；F1（貴州種♀×江蘇種♂）與母本貴州種聚為一類；F1（江蘇種♀×山東種♂）與母本江蘇種聚為一類；F1（山東種♀×湖南種♂）與母本山東種聚為一類；F1（柘參1號(hào)♀×貴州種♂）、F1（柘參1號(hào)♀×湖南種♂）和F1（柘參1號(hào)♀×江蘇種♂）均與母本‘柘參1號(hào)’聚為一類（圖2）。

3 討論

3.1 DNA條形碼和SRAP相結(jié)合可較準(zhǔn)確鑒定太子參的親緣關(guān)系

本研究采用DNA條形碼和SRAP分子標(biāo)記相結(jié)合的方法，開展數(shù)量較多的太子參種質(zhì)遺傳差異分析。15份太子參種質(zhì)DNA條形碼和SRAP分子標(biāo)記的聚類分析結(jié)果基本一致，均能快速準(zhǔn)確鑒定出太子參雜交新種質(zhì)。DNA條形碼顯示，采用太子參葉綠體和核糖體的相對(duì)保守的多對(duì)引物，轉(zhuǎn)化子測序成功率可達(dá)100%，質(zhì)量較高，太子參雜交種質(zhì)復(fù)合序列的差異位點(diǎn)較多，存在一定的遺傳距離，對(duì)種質(zhì)資源鑒別能力較好；SRAP分子標(biāo)記顯示太子參擴(kuò)增條帶豐富，差異性條帶明顯、清晰、重復(fù)性好，呈現(xiàn)較高的遺傳多樣性水平，種源間遺傳變異大于種源內(nèi)遺傳變異，存在較低程度的遺傳分化，太子參各種源之間的基因交流順利。采用SRAP分子標(biāo)記開展太子參各種質(zhì)遺傳多樣性研究，太子參SRAP分子標(biāo)記引物擴(kuò)增的多態(tài)性條帶，最多的是7條，最少的僅2條，多態(tài)性條帶平均占比也較低，還需要進(jìn)一步從SRAP標(biāo)記引物中篩選出核心標(biāo)記，以便更準(zhǔn)確可靠分析太子參種質(zhì)資源的遺傳差異。2種方法結(jié)合，更好地顯示太子參種質(zhì)之間豐富的遺傳差異信息，這對(duì)加快太子參新種質(zhì)的選育鑒定、種質(zhì)資源遺傳多樣性研究和開發(fā)利用是非常重要的。

A：DNA條形碼；B：SRAP分子標(biāo)記。

3.2 DNA條形碼和SRAP相結(jié)合可為雜交后代的鑒定提供依據(jù)

在太子參種質(zhì)選育過程中，由于種種原因，可能存在不確定其親本組合的情況，通過這2種方法進(jìn)行聚類分析，可推測其遺傳背景。如F1（湖南種♀×山東種♂）與父本山東種聚為一類；F1（貴州種♀×江蘇種♂）與母本貴州種聚為一類；F1（江蘇種♀×山東種♂）與母本江蘇種聚為一類；F1（山東種♀×湖南種♂）與母本山東種聚為一類。

3.3 DNA條形碼和SRAP使用多對(duì)引物相結(jié)合鑒定太子參種質(zhì)

根據(jù)聚類結(jié)果，篩選出6對(duì)DNA條形碼和9對(duì)SRAP多態(tài)性標(biāo)記，雖然這些引物單獨(dú)使用時(shí)無法準(zhǔn)確鑒定所有太子參種質(zhì)，但共同使用時(shí)可增加鑒定太子參種質(zhì)的準(zhǔn)確性。相比通過單一引物來鑒定太子參種質(zhì)的方法，多對(duì)引物鑒定具有一定的創(chuàng)新性，這也為鑒定其他太子參種質(zhì)提供新的思路。鑒于本研究僅分析了15份太子參種質(zhì)，增加樣本量并結(jié)合其形態(tài)特性，采用多對(duì)引物鑒定太子參種質(zhì)，有望提高種質(zhì)鑒定的準(zhǔn)確度。本課題已開展了太子參雜交授粉及雜交種子種胚離體誘導(dǎo)培養(yǎng)[7-8]，下一步將加大樣品數(shù)量，對(duì)太子參雜交F1代遺傳信息進(jìn)行更加深入的研究。

4 結(jié)論

本研究利用DNA條形碼和SRAP標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合的方法，對(duì)15份太子參材料進(jìn)行親緣關(guān)系分析，從聚類結(jié)果來看，2種分子標(biāo)記方法顯示出太子參種質(zhì)資源間遺傳多樣性豐富，但并不完全按照地理分布聚類，遺傳背景比較復(fù)雜，各地太子參材料存在一定程度的基因交流。2種標(biāo)記方法在這些材料的親緣關(guān)系分析中表現(xiàn)的可信度較高，且可根據(jù)聚類結(jié)果推測種質(zhì)的來源。此外，本研究發(fā)現(xiàn)結(jié)合6對(duì)DNA條形碼和9對(duì)SRAP多態(tài)性標(biāo)記能更準(zhǔn)確有效地鑒定太子參種質(zhì)，這為太子參種質(zhì)資源的利用及雜交新品種的選育等提供依據(jù)。

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Genetic Diversity Analysis ofGermplasms Based on DNA Barcoding and SRAP

LI Pingping1,2, WANG Zerong1,2, WANG Ding1,2, MO Jingjing1, CHEN Meixia1,3, YE Zuyun1,3*

1. College of Life Sciences, Ningde Normal University, Ningde, Fujian 352100, China; 2.College of Agriculture, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou, Fujian 350000, China; 3. Fujian Engineering Technology Research Center of Characteristic Medicinal Plants, Ningde, Fujian 352100, China

DNA barcoding and SRAP (sequence-related amplified polymorphism) molecular markers were used to analyze the genetic differences of 15 germplasms of.The mutation sites ofsequence accounted for 2.16% at most, and the mutation sites ofsequence accounted for 1.23% at least.sequence deletion sites accounted for 4.88% in the maximum. The highest GC content ofsequence was 55.52%, and the lowest GC content ofsequence was only 24.71%. Nine pairs of primers were screened out for the generation of SRAP markers by PCR amplification, and hereafter, 215 genomic DNA loci were amplified, including 42 polymorphic loci, and the percentage of polymorphic genomic DNA loci (PPL) was 19.53%,in terms of the total number of amplification sites, the polymorphic bands were rich and clear, with both common and specific sites. Nei’s genetic diversity index () ranged from 0.3466 to 0.4985 and Shannon information index () ranged from 0.5301 to 0.6917, showing a high level of genetic diversity. Population genetic diversity (t) ofwas 0.4004, in which the genetic diversity within populations (s) and genetic differentiation coefficient (st) was 0.0901 and 0.3103, accounting for 77.50% and 22.50% oft, respectively. Thestbetween provenances was 0.7506, meaning 75.06% of the genetic variation existed between provenances and 24.94% within provenances, indicating that the genetic variation among provenances was greater than that within provenances, and there was a low degree of genetic differentiation. The average gene flow (m) of the provenances ofwas 0.1929, and the result implied the gene exchange between provenances ofwas smooth. The genetic distance of K2P among 15 germplasms ofranged from 0.0005 to 0.0056, while the genetic similarity coefficient was between 0.3913 and 0.8695. When the genetic similarity coefficient was confined in superior 0.5900. 15 germplasms could be divided into three groups, among which the hybrid germplasm was an independent category. The results of genetic distance, genetic similarity coefficient and cluster analysis of 15 different germplasms ofwith DNA barcoding and SRAP molecular markers were similar. The combination of these two methods could identifygermplasms more accurately and effectively, which is of great significance for the utilization of germplasm resources and the breeding of new hybrid varieties of.

; DNA barcoding technology; SRAP molecular marker technology; genetic diversity

S567.21

A

10.3969/j.issn.1000-2561.2022.10.009

2022-01-20；

2022-03-11

國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究專項(xiàng)（No. 2019YFC1710500）；中央引導(dǎo)地方科技發(fā)展專項(xiàng)（No. 2021L3030）；寧德師范學(xué)院科研項(xiàng)目（No. 2019FZ04）。

李萍萍（1996—），女，碩士研究生，研究方向：作物遺傳育種。*通信作者（Corresponding author）：葉祖云（YE Zuyun），E-mail：zyye0593@163.com。