透骨香果實(shí)內(nèi)源抑制物質(zhì)研究

劉紹歡，萬(wàn)政敏，何晶晶，沈祥春*

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，貴州貴陽(yáng) 550025；2.貴州醫(yī)科大學(xué)天然藥物優(yōu)效利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州貴陽(yáng) 550025；3.貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，貴州貴陽(yáng) 550025)

透骨香來(lái)源于杜鵑花科植物滇白珠[Gaultheriayunnanensis(Franch.)Rehd.]的全株或根，味辛，性溫，有小毒，具有祛風(fēng)除濕、散寒止痛、活血通絡(luò)等功效[1]，主治風(fēng)濕痹痛、筋骨疼痛、跌打損傷等疾病[2]。透骨香藥材作為貴州常用民族藥之一，目前對(duì)其成分含量[3-4]、顯微特征[5]、藥理作用[5-7]進(jìn)行了深入的研究，但截至目前，該藥材來(lái)源均采自野生資源，在人工種植方面鮮見(jiàn)報(bào)道。

近年來(lái)，隨著需求的日益劇增，野生資源的逐年減少及自然環(huán)境的破壞，其人工馴化及栽培也顯得日益重要。內(nèi)源抑制物質(zhì)作為種子休眠的原因之一[8-9]，其可推遲、抑制同種或異種植物種子發(fā)芽，主要通過(guò)抑制種子的呼吸、酶的活性，阻礙種子吸水和胚生長(zhǎng)、改變其滲透壓，從而影響種子的萌發(fā)[10]；主要存在于果實(shí)的果皮、果肉、果汁中，種子中的胚、胚乳、種皮亦存在[11-14]；在相關(guān)試驗(yàn)研究中，通常采用測(cè)定白菜、小麥、油菜等種子的發(fā)芽率、胚根長(zhǎng)、胚軸長(zhǎng)來(lái)測(cè)定種子內(nèi)源抑制物質(zhì)是否有活性[15-17]。在前期研究的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)透骨香種子自然狀態(tài)下發(fā)芽率較低，長(zhǎng)勢(shì)較緩慢，從而影響種子的萌發(fā)，該試驗(yàn)擬通過(guò)對(duì)透骨香果實(shí)(果皮與種子)內(nèi)源抑制物質(zhì)活性進(jìn)行探究，從而為該藥材的進(jìn)一步試驗(yàn)提供相應(yīng)的數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料透骨香果實(shí)(果皮與種子)，自然干燥、人工分離果皮和種子，常溫放置。白菜種子(貴陽(yáng)金黔農(nóng)業(yè)科技有限公司)。試驗(yàn)所用試劑均為分析純。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1不同溶劑、不同部位浸提液制備。稱取2.5 g透骨香種子、果皮各1份，研碎，分別置于100 mL三角瓶中，各加入10倍量蒸餾水，密封，置暗處浸提24 h，過(guò)濾，再加上述溶劑浸提，連續(xù)浸提3次，合并濾液，濃縮，定容至25 mL，分別得濃度為0.10 g/mL的種子、果皮水浸提液，4 ℃保存?zhèn)溆?。甲醇的種子及果皮浸提液蒸干，再用蒸餾水定容，其余與上述方法相同。

1.2.2不同濃度浸提液制備。稱取10 g透骨香種子、果皮各1份，按“1.2.1”方法將種子、果皮浸提得到的母液，取適量稀釋成0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 g/mL的溶液各25 mL，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3不同浸提時(shí)間浸提液制備。稱取2.5 g透骨香種子、果皮各3份，研碎，分別置于100 mL三角瓶中，加10倍量蒸餾水，密封，置于暗處分別浸提12、24、48 h，過(guò)濾，濃縮，分別定容至25 mL，得濃度為0.10 g/mL的浸提液，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4不同溫度浸提液制備及活性測(cè)定。分別稱取2.5 g透骨香種子、果皮各3份，按“1.2.1”方法在25、35、45 ℃恒溫遮光環(huán)境下浸提24 h，過(guò)濾后，再加蒸餾水連續(xù)浸提3次，合并濾液，濃縮，分別定容至25 mL，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.5不同次數(shù)浸提液制備及活性測(cè)定。稱取2.5 g種子、果皮各1份，按“1.2.1”方法浸提12 h后所得的溶液記作第1次，再加溶液提取5次，分別記為第2～6次，濾液濃縮定容至25 mL，備用。

1.2.6活性測(cè)定。采用培養(yǎng)皿培養(yǎng)法，在培養(yǎng)皿內(nèi)放置兩層濾紙，分別加入透骨香的果皮和種子浸提液4 mL，作用于白菜種子的萌發(fā)，試驗(yàn)種子50粒/皿，每組重復(fù)3次，用蒸餾水作空白對(duì)照。采用QHX-350B光照培養(yǎng)箱，每天光照14 h(光照強(qiáng)度 10 000 lx)、黑暗10 h。24 h統(tǒng)計(jì)種子發(fā)芽率，48 h測(cè)白菜胚根長(zhǎng)、胚軸長(zhǎng)。發(fā)芽率=正常發(fā)芽種子數(shù)/供試種子數(shù)×100%。

內(nèi)源抑制物質(zhì)對(duì)種子萌發(fā)的抑制率=(1-處理種子發(fā)芽率/對(duì)照種子發(fā)芽率)×100%，其他抑制率依此法計(jì)算。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同溶劑、部位浸提液對(duì)白菜種子生長(zhǎng)的影響由表1可知，透骨香果皮水浸提液對(duì)白菜種子的萌發(fā)呈完全抑制狀態(tài)(種子未發(fā)芽)。與對(duì)照組相比，透骨香種子水浸提液、甲醇浸提液對(duì)白菜胚根有顯著抑制作用(P<0.05)，但組間差異不明顯，對(duì)其胚軸長(zhǎng)僅種子水提液起抑制作用，抑制率為98.78%；果皮甲醇浸提液對(duì)白菜種子胚根及胚軸的生長(zhǎng)有顯著的抑制作用，其抑制率分別為98.18%、99.19%。

表1 不同溶劑、部位浸提液對(duì)白菜種子生長(zhǎng)的影響

2.2 不同濃度浸提液對(duì)白菜種子生長(zhǎng)的影響由表2可知，當(dāng)透骨香種子水浸提液濃度達(dá)到0.10 g/mL時(shí)，對(duì)白菜種子的萌發(fā)有抑制作用，與對(duì)照組相比，其胚根長(zhǎng)有顯著差異(P<0.05)；當(dāng)透骨香果皮水浸提液濃度為0.10 g/mL 時(shí)，完全抑制白菜種子的萌發(fā)。由此可見(jiàn)，當(dāng)果皮浸提液達(dá)到一定濃度時(shí)，會(huì)對(duì)白菜種子的萌發(fā)產(chǎn)生較大影響。

表2 不同水濃度浸提液對(duì)白菜種子生長(zhǎng)的影響

2.3 不同浸提時(shí)間浸提液對(duì)白菜種子生長(zhǎng)的影響由表3可知，透骨香種子在12、24、48 h所得的水浸提液與對(duì)照組相比，對(duì)白菜種子萌發(fā)、胚軸長(zhǎng)的抑制均無(wú)顯著差異(P>0.05)，對(duì)胚根長(zhǎng)的抑制有顯著差異(P<0.05)。果皮浸提液對(duì)白菜種子萌發(fā)的抑制無(wú)顯著差異(P>0.05)，對(duì)胚根長(zhǎng)的抑制有顯著差異(P<0.05)，其中48 h浸提液的抑制最強(qiáng)，抑制率為91.24%，12、24 h所得浸提液的抑制率分別為55.28%、58.27%；12、24 h所得浸提液對(duì)白菜種子胚軸長(zhǎng)與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異，48 h浸提液對(duì)其抑制有顯著差異，其抑制率為83.70%。

表3 不同浸提時(shí)間水浸提液對(duì)白菜種子生長(zhǎng)的影響

2.4 不同溫度浸提液對(duì)白菜種子生長(zhǎng)的影響由表4可知，透骨香種子浸提液對(duì)白菜種子萌發(fā)抑制無(wú)顯著差異(P>0.05)；但白菜種子胚根長(zhǎng)與對(duì)照組相比有顯著抑制(P<0.05)，25、35、45 ℃的組間差異不明顯，其抑制率分別為85.37%、85.30%、84.20%；當(dāng)溫度為25 ℃時(shí)，種子浸提液對(duì)白菜種子胚軸長(zhǎng)有顯著抑制作用，當(dāng)溫度為35、45 ℃時(shí)無(wú)抑制作用。25、45 ℃下所得透骨香果皮浸提液對(duì)白菜種子的萌發(fā)有顯著抑制作用(P<0.05)，35 ℃浸提液對(duì)白菜種子萌發(fā)無(wú)抑制作用；不同溫度果皮浸提液對(duì)白菜胚根長(zhǎng)的抑制顯著(P<0.05)，與對(duì)照組相比，25、35、45 ℃其抑制率分別為97.65%、97.50%、95.38%，但組內(nèi)的抑制作用不明顯；不同溫度的果皮浸提液與對(duì)照組相比，抑制白菜種子的胚軸生長(zhǎng)差異顯著(P<0.05)，25、35、45 ℃的抑制率分別為99.68%、99.03%、92.58%。

表4 不同溫度水浸提液對(duì)白菜種子生長(zhǎng)的影響

2.5 不同浸提次數(shù)(12 h)浸提液對(duì)白菜種子生長(zhǎng)的影響由表5可知，6次種子水浸提液與對(duì)照組相比，對(duì)白菜種子的萌發(fā)和胚軸長(zhǎng)均無(wú)顯著抑制作用(P>0.05)，但對(duì)胚根長(zhǎng)有顯著的抑制作用(P<0.05)。6次果皮水浸提液與對(duì)照組相比，對(duì)白菜種子的萌發(fā)無(wú)影響(P>0.05)，對(duì)白菜種子的胚根生長(zhǎng)有顯著的抑制作用(P<0.05)，第2次的浸提液對(duì)胚軸長(zhǎng)有抑制作用(P<0.05)，其他浸提次數(shù)的浸提液對(duì)胚軸長(zhǎng)均無(wú)抑制作用且有增強(qiáng)作用。

表5 不同浸提次數(shù)(12 h)水浸提液對(duì)白菜種子生長(zhǎng)的影響

由表6可知，6次種子醇浸提液對(duì)白菜種子萌發(fā)和胚軸生長(zhǎng)均無(wú)顯著抑制作用(P>0.05)，但其對(duì)白菜胚根的生長(zhǎng)有一定的抑制作用，其中第1次浸提液的抑制作用最強(qiáng)，為85.14%，第2次至第6次的浸提液與對(duì)照組相比對(duì)白菜胚根長(zhǎng)均有不同程度的抑制作用；6次果皮醇浸提液與對(duì)照組比，對(duì)白菜種子萌發(fā)無(wú)差異(P>0.05)，對(duì)白菜胚根、胚軸的生長(zhǎng)僅第1次浸提液有明顯抑制作用，分別為95.22%、82.33%。

表6 不同浸提次數(shù)(12 h)甲醇浸提液對(duì)白菜種子生長(zhǎng)的影響

3 結(jié)論與討論

透骨香種子、果皮的水及甲醇浸提液均對(duì)白菜種子萌發(fā)存在一定的抑制作用，水浸提液抑制作用強(qiáng)于甲醇浸提液；相同提取溶劑，果皮浸提液比種子浸提液的抑制作用強(qiáng)，當(dāng)果皮水浸提液濃度為0.10 g/mL時(shí)，白菜種子呈完全抑制狀態(tài)。因此，建議在人工育苗過(guò)程中應(yīng)將其果皮和種子分離后進(jìn)行相關(guān)試驗(yàn)。