電針對創(chuàng)傷性顱腦損傷大鼠腦組織中p-4E-BP1及VEGF蛋白表達(dá)的影響

馬怡林，吳 濤△，王瑞輝，楊 琪

(1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西 咸陽 712046；2.西安國際醫(yī)學(xué)中心醫(yī)院，陜西 西安 710061)

創(chuàng)傷性顱腦損傷(Traumatic brain injury，TBI)是指外力對顱腦產(chǎn)生直接或間接用力后引發(fā)的腦組織結(jié)構(gòu)性損傷和(或)大腦功能生理性中斷[1]。這一病癥涵蓋了腦水腫、腦血管破裂出血、腦組織挫傷和特定腦區(qū)的軸索損傷等一系列致病事件[2]。TBI發(fā)生后出現(xiàn)神經(jīng)血管機(jī)械性損傷等原發(fā)性損傷和顱內(nèi)壓升高、血腦屏障破壞等繼發(fā)性損傷的病理生理特征[3]?，F(xiàn)代臨床研究顯示，TBI已經(jīng)成為了一種危及人類生命安全的公共衛(wèi)生問題。但到目前為止，還未發(fā)現(xiàn)能夠通過靶向繼發(fā)性損傷機(jī)制來賦予神經(jīng)保護(hù)作用的藥物治療TBI[4]。而針灸作為一種中華民族傳統(tǒng)療法，具有安全、起效快、方便、治療時(shí)間短、起效時(shí)間長與副作用小等優(yōu)勢。有研究表明，電針治療能夠很好地改善腦缺血再灌注損傷[5]，亦有諸多報(bào)道證實(shí)了電針對TBI后肢體運(yùn)動(dòng)、語言和認(rèn)知等功能恢復(fù)確有較佳的療效[6]。通過電針刺激穴位可促進(jìn)一些內(nèi)源性營養(yǎng)神經(jīng)、抗凋亡因子的表達(dá)，并下調(diào)某些促炎因子的表達(dá)，促使腦損傷后的神經(jīng)發(fā)育新生，降低線粒體的損傷程度，阻止神經(jīng)細(xì)胞的凋亡[7]，促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖，調(diào)節(jié)腦血流，減輕腦損傷缺血后顱內(nèi)炎癥及水腫，一定程度上延長生存期[8]。為進(jìn)一步明確電針治療TBI起效的作用機(jī)制，本研究通過Feeny自由落體打擊法建立TBI大鼠模型，應(yīng)用mNSS評分評價(jià)大鼠造模前后神經(jīng)功能缺損程度，免疫印跡法以及免疫組化法觀察大鼠腦組織中真核起始因子4E結(jié)合蛋白1 (Eukaryote initiating factor 4E binding protein 1, 4E-BP1)和血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的表達(dá)情況，以期揭示電針治療TBI的部分效應(yīng)機(jī)制，為臨床采用針灸治療TBI提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

清潔級健康雄性6周齡SD大鼠70只，體質(zhì)量(200±20)g，購自成都達(dá)碩動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，許可證編號：SCXK(川)2015-30。按照12 h/12 h晝夜循環(huán)標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)于陜西中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)科研試驗(yàn)中心動(dòng)物房，自由飲水進(jìn)食，實(shí)驗(yàn)室溫度(25±2)℃，濕度(50±5)%，1周后隨機(jī)預(yù)留16只作為假手術(shù)組及空白組，其余54只用于Feeney自由落體打擊法造模，造模過程中及造模后死亡6只，最終順利成活并達(dá)到模型制備成功標(biāo)準(zhǔn)的大鼠共48只，平均分為模型組(24只)、電針組(24只)。全程遵循《國家醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》各項(xiàng)規(guī)定對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物嚴(yán)格進(jìn)行喂養(yǎng)及處理。

1.2 主要試劑及儀器

1.2.1 儀器 P16011A微型磨鉆(浩峰儀器公司)；ST-3ND腦立體定位儀(成都儀器公司)；華佗牌無菌針灸針(蘇州醫(yī)療用品廠有限公司)；CR22G高速冷凍離心機(jī)(日本日立公司)；XHF-D勻漿機(jī)(南北儀器公司)；JY600電泳儀(君意東方公司)；SpectraMax5酶標(biāo)儀(美國Molecular Devices公司)；Zeiss A1研究級正置數(shù)碼顯微鏡(德國卡爾蔡司公司)；G6805-2A電針治療儀(華誼公司)。

1.2.2 試劑 BSA牛血清白蛋白(A2153，美國 Sigma公司)；p-4E-BP1抗體(SC-293124，美國Santa cruz公司)；VEGF抗體(SC-7269，美國Santa cruz公司)；PVDF膜(IPV H00010，索萊寶公司)；預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)(P0066)、BCA蛋白濃度試劑盒(P0010)、RIPA裂解液(P0013B)、蛋白上樣緩沖液(6×)(P0015F)、SDS-PAGE凝膠(P0012A)、BeyoECL Plus(P0018)、PMSF(ST506)和β-Actin 抗體(AF0003)(碧云天公司)；免疫組化試劑盒(Kit-9902)、DAB 顯色試劑盒(DAB-0031)(邁新公司)；戊巴比妥鈉(上海上藥新亞藥業(yè)有限公司)。

1.3 TBI模型制備

實(shí)驗(yàn)參照改良Feeney自由落體打擊法制備TBI模型[9]。用2%的戊巴比妥鈉對模型組和電針組大鼠進(jìn)行腹腔注射麻醉(0.2 mL/100 g)，麻醉起效后剔除術(shù)部鼠毛，腦立體定位儀固定大鼠后在大鼠頭正中點(diǎn)左側(cè)0.5 cm處，切一1.5 cm左右的縱向切口，并充分暴露顱骨，用微型磨鉆在冠狀縫后6 mm，矢狀縫左側(cè)旁開4 mm處開一直徑約5 mm的骨窗，其間需使硬腦膜完整；將20 g的砝碼從長35 cm的透明玻璃管中垂直下落打擊骨窗，造成左腦頂葉損傷。常規(guī)外科消毒縫合后，腹腔注射硫酸慶大霉素注射液0.02 mL/100 g，預(yù)防術(shù)后感染，后進(jìn)行單籠常規(guī)喂養(yǎng)。假手術(shù)組只開骨窗不進(jìn)行打擊?？瞻捉M作為對照觀察不進(jìn)行處理。造模后采用mNSS評分評定大鼠即刻神經(jīng)功能，7～12分則為造模成功。本實(shí)驗(yàn)造模過程中及造模后死亡6只，最終順利成活并達(dá)到模型制備成功標(biāo)準(zhǔn)的大鼠共48只。

1.4 電針干預(yù)方案

造模后24 h參照《大鼠穴位圖譜的研制》[10]對電針組大鼠進(jìn)行電針干預(yù)治療，取“百會(huì)穴”“水溝穴”、患側(cè)“內(nèi)關(guān)穴”“足三里穴”,水溝穴：直刺2 mm，點(diǎn)刺20 s后不留針；百會(huì)穴：平刺5 mm；內(nèi)關(guān)穴：直刺3 mm；足三里：直刺5 mm。內(nèi)關(guān)和足三里給予帶電治療，2 Hz斷續(xù)波，強(qiáng)度1 mA，15 min/次，1次/ d，連續(xù)治療14 d。針具選取華佗牌一次性針灸針(0.25 mm×25 mm)，電針儀選取 G6805-2A型電針儀。模型組和假手術(shù)組同時(shí)抓取固定10 min?？瞻捉M不作干預(yù)。

1.5 取材及指標(biāo)檢測

1.5.1 行為學(xué)檢測大鼠神經(jīng)功能損傷程度 采用mNSS評分[11]評估大鼠神經(jīng)功能。評價(jià)方法主要包括：運(yùn)動(dòng)(6分，行走實(shí)驗(yàn)、提尾實(shí)驗(yàn))、感覺(2分，本體覺、痛溫覺)、反射(3分，耳廓反射、角膜反射以及驚恐反射)、平衡木實(shí)驗(yàn)(6分)及非正常性運(yùn)動(dòng)(1分)構(gòu)成，評分范圍0～18 分(正常為0分，最大缺損評分為18分)，分?jǐn)?shù)越高說明存在神經(jīng)功能缺失的部分越多。于正式測試前先對所有組的大鼠依據(jù)mNSS量表各項(xiàng)項(xiàng)目開展適應(yīng)性訓(xùn)練，并在造模后第24 h、3 d、7 d和14 d進(jìn)行正式測試，最終進(jìn)行各組mNSS評分的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.5.2 大鼠腦組織取材 模型組和電針組在造模后3 d、7 d和14 d行為學(xué)檢測完成后取材；假手術(shù)組和空白組在造模后14 d全部一并取材。用2%的戊巴比妥鈉(0.2 mL/100 g)對大鼠進(jìn)行腹腔注射麻醉，剪開胸骨，充分暴露心臟，用0.9%氯化鈉溶液(4 ℃預(yù)冷)灌注，從右心耳灌注入，待大鼠各臟器顏色變白，血液被沖出體內(nèi)后取出腦組織。將取出的大鼠腦組織以損傷部位為中心平均分成兩部分：一部分放置在EP管內(nèi)，疾速冰凍儲(chǔ)存在-80 ℃冰箱，為后期研究的提取蛋白和進(jìn)行WB檢測作準(zhǔn)備；另一部分腦組織置于冰4%多聚甲醛中進(jìn)行固定(固定時(shí)間不超過24 h)。固定完成后開始對組織進(jìn)行脫水和包埋進(jìn)一步處理，作為后期石蠟切片的免疫組化等病理學(xué)檢測標(biāo)本。

1.5.3 免疫組織化學(xué)法檢測腦組織vp-4E-BP1、VEGF的陽性表達(dá) 石蠟切片脫蠟后進(jìn)行抗原修復(fù)，完成后加3%過氧化物酶阻斷劑，靜置10 min后，用PBS溶液清洗3 min×3次；以5%BSA將切片封閉30 min后取出片子不洗，加一抗溶液后在4 ℃環(huán)境過夜；次日復(fù)溫1 h后用PBS溶液洗5 min×3次，完成后均勻滴加反應(yīng)增強(qiáng)液及聚合物，將DAB顯色液均勻滴加；最后用自來水緩慢沖洗后放入蘇木素溶液盒進(jìn)行染色，染色完成后對組織進(jìn)行梯度乙醇脫水及二甲苯透明，完成后以中性樹膠滴加封片，200×光學(xué)顯微鏡下觀察。

1.5.4 Western blot法檢測創(chuàng)傷腦組織p-4E-BP1、VEGF的陽性表達(dá) 取上述凍存損傷腦組織，配制好工作液后加組織裂解液勻漿，提取上清液。檢測腦組織總蛋白濃度，上樣、電泳、轉(zhuǎn)膜和封閉(5%脫脂奶粉)。目標(biāo)蛋白抗體用一抗稀釋液稀釋至合適濃度后，4 ℃搖床過夜后復(fù)溫1 h，TBSB溶液洗滌10 min×3次，二抗TBST稀釋后室溫孵育1 h，TBST洗滌10 min×3次，膜上滴加發(fā)光液，調(diào)整好曝光顯影拍照軟件進(jìn)行拍照。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠一般情況及行為學(xué)比較

造模后2～4 h各組大鼠開始蘇醒。空白組大鼠神經(jīng)功能正常，未見神經(jīng)功能缺損表現(xiàn)；假手術(shù)組大鼠模型制備后24 h、3 d表現(xiàn)出輕度神經(jīng)功能不全；模型組及電針組大鼠造模后均存在精神頹靡，行動(dòng)欠協(xié)調(diào)、飲食減少、行走時(shí)偏離直線、右側(cè)肢體運(yùn)動(dòng)及感覺障礙等神經(jīng)功能缺損現(xiàn)象。伴隨時(shí)間的遷延，模型組及電針組大鼠mNSS評分下降，精神狀態(tài)、飲食及運(yùn)動(dòng)開始逐漸恢復(fù)，對比發(fā)現(xiàn)電針組大鼠的各項(xiàng)評分及生活狀態(tài)與模型組比恢復(fù)情況較佳(P<0.01)。見表1。

表1 各組大鼠mNSS評分情況

2.2 免疫組化檢測電針對SD大鼠腦組織中p-4E-BP1蛋白表達(dá)的影響

對大鼠腦組織切片進(jìn)行免疫組化染色后，可見p-4E-BP1陽性表達(dá)呈圓形或類圓形棕黃色斑片，在空白組和假手術(shù)組大鼠腦組織中僅有少量p-4E-BP1陽性表達(dá)，空白組與假手術(shù)組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；模型組和電針組在造模后3 d、7 d和14 d有程度不一的陽性表達(dá)，各時(shí)間點(diǎn)電針組p-4E-BP1表達(dá)量均高于模型組(P<0.05)；模型組、電針組與空白組、假手術(shù)組進(jìn)行比較后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見圖1、表2。

圖1 免疫組化檢測大鼠腦組織中 p-4E-BP1的表達(dá)(免疫組化染色200×)

表2 各組大鼠腦組織中p-4E-BP1表達(dá)情況

2.3 免疫組化檢測電針對SD大鼠腦組織中VEGF蛋白表達(dá)的影響

對大鼠腦組織切片進(jìn)行免疫組化染色后，可見VEGF陽性表達(dá)呈圓形或類圓形棕黃色斑片，在空白組和假手術(shù)組僅有少量陽性表達(dá)，空白組與假手術(shù)組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),模型組和電針組則有增多程度不一的VEGF陽性表達(dá)，各時(shí)間點(diǎn)電針組的VEGF表達(dá)量均高于模型組(P<0.05)；與空白組、假手術(shù)組相比較，模型組與電針組的VEGF含量表達(dá)差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見圖2、表3。

圖2 免疫組化檢測腦組織中VEGF的表達(dá)(免疫組化染色200×)

表3 各組大鼠腦組織中VEGF表達(dá)情況

2.4 各組大鼠腦組織p-4E-BP1蛋白免疫印跡法表達(dá)的結(jié)果

經(jīng)過分析蛋白條帶的平均灰度值發(fā)現(xiàn)，空白組與假手術(shù)組腦組織中含有少量的p-4E-BP1蛋白表達(dá)，在造模后14 d，模型組與空白組、假手術(shù)組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；模型組和電針組在造模后不同時(shí)間出現(xiàn)不同程度的表達(dá)增多,各時(shí)間點(diǎn)電針組p-4E-BP1蛋白表達(dá)量均高于模型組(P<0.05)；電針組與空白組、假手術(shù)組相比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見圖3、表4。

圖3 免疫印跡檢測腦組織中p-4E-BP1的蛋白表達(dá)情況

表4 各組大鼠腦組織中p-4E-BP1蛋白表達(dá)情況比較

2.5 各組大鼠腦組織VEGF蛋白免疫印跡法表達(dá)的結(jié)果

經(jīng)過分析蛋白條帶的平均灰度值發(fā)現(xiàn)，空白組與假手術(shù)組腦組織中含有少量的VEGF蛋白表達(dá)。與空白組和假手術(shù)組相比較，模型組和電針組在造模后不同時(shí)間點(diǎn)出現(xiàn)不同程度的VEGF蛋白表達(dá)增多，各時(shí)間點(diǎn)電針組VEGF蛋白表達(dá)量均高于模型組(P<0.05)；造模后14 d，模型組與空白組、假手術(shù)組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),電針組與空白組、假手術(shù)組比較差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見圖4、表5。

圖4 免疫印跡法檢測腦組織中VEGF的蛋白表達(dá)情況

表5 各組大鼠腦組織中VEGF蛋白表達(dá)比較

3 討論

創(chuàng)傷性顱腦損傷在中醫(yī)學(xué)中屬于外傷性腦病。外傷性腦病其證多屬實(shí)，后期多為虛證或虛實(shí)夾雜，急性期多病情危重，其病理因素主要包括氣、血、痰和虛，可相互搏結(jié)致病，遷延日久則遺留諸多難治性后遺癥。針灸作為一種物理療法，在中醫(yī)理論中具有疏通氣血、調(diào)和陰陽的獨(dú)特作用，其安全、創(chuàng)傷小和副作用小等優(yōu)勢在國際醫(yī)療體系中越來越大放異彩。近現(xiàn)代以來，電針的研發(fā)和應(yīng)用為針灸這一項(xiàng)傳統(tǒng)中醫(yī)療法賦予了新的意義。TBI發(fā)生后原發(fā)性損傷無法治療，重點(diǎn)放在預(yù)防上，所以治療本病的重點(diǎn)在于抑制繼發(fā)性損傷[12]。研究證實(shí)，電針在治療神經(jīng)功能紊亂、神經(jīng)退行性病變、腦和脊髓損傷及其后遺癥階段的肢體運(yùn)動(dòng)、語言等功能障礙方面療效確切[13-14]。1項(xiàng)對重度顱腦損傷遷延性昏迷患者的研究顯示，采用電針治療的觀察組昏迷量表評分及相應(yīng)的血流動(dòng)力學(xué)值上升，臨床總有效率達(dá)71.2% (52/73),顯著高于對照組的41.1%(30/73),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)[15]。另有研究顯示，通過穴位的外周電刺激可促進(jìn)內(nèi)源性阿片肽的釋放，產(chǎn)生鎮(zhèn)痛效應(yīng)，減輕癥狀，改善病患的短期預(yù)后[16]。對于腦損傷急性期患者，采用低頻率電針刺激治療后患者的顱內(nèi)灌注壓可得到提高，并使D-二聚體水平降低，血漿纖維蛋白原(Fib)水平提高，凝血功能得到改善，防止顱內(nèi)出血及血栓形成造成的風(fēng)險(xiǎn)，該刺激還促進(jìn)了患者的意識(shí)覺醒，并特異性地上調(diào)損傷區(qū)內(nèi)VEGF的表達(dá)，幫助腦血管系統(tǒng)的再生與重構(gòu)[17]。課題組前期研究亦觀察到，隨著不同時(shí)間點(diǎn)電針干預(yù)時(shí)間的延長，大鼠腦組織中促凋亡相關(guān)因子Fas/FasL表達(dá)量呈下降趨勢，抑制了神經(jīng)細(xì)胞的程序性死亡[18]。因此本研究觀察了電針對TBI大鼠神經(jīng)功能及腦組織中p-4E-BP1和VEGF表達(dá)的影響，探討電針在TBI治療中發(fā)揮作用的可能機(jī)制。

經(jīng)前期研究進(jìn)行文獻(xiàn)收集整理后，本研究遂選用水溝、足三里、百會(huì)與內(nèi)關(guān)4個(gè)腧穴作為干預(yù)觀察方法，因其在腦相關(guān)疾病研究中最為常用，且具有良好的治療作用。水溝隸屬于督脈，為督脈與足陽明胃經(jīng)、手陽明大腸經(jīng)的交會(huì)穴，具有通督調(diào)神、醒腦開竅的功效。足三里穴為足陽明胃經(jīng)的下合穴，古典醫(yī)籍有言“治痿獨(dú)取陽明”，因此針刺足三里穴對于疏通下肢氣血經(jīng)絡(luò)、幫助運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)有極大的作用。百會(huì)隸屬于督脈，為督脈、手少陽、足厥陰、足少陽和足陽明經(jīng)的交會(huì)穴，位居巔頂，總督一身之脈，能夠開竅促醒、補(bǔ)虛升提，為腦部疾病治療的首選穴位。內(nèi)關(guān)穴，隸屬手厥陰心包經(jīng)，為八脈交會(huì)穴，與陰維脈相通，能夠調(diào)理陰陽，緩解疼痛。

急性腦損傷后，有研究表明在多個(gè)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭袡z測到了自噬標(biāo)志物——微管相關(guān)蛋白輕鏈3 (LC3)-Ⅱ和自噬相關(guān)基因12-ATG5綴合物的存在，這就提供了令人信服的證據(jù)證明腦組織受創(chuàng)傷后持續(xù)激活了自噬[19]。細(xì)胞自噬(Autophagy)，即“自我吞噬”，是一種依賴溶酶體在機(jī)體內(nèi)破壞和回收受損或不必要細(xì)胞成分的降解系統(tǒng)，也是真核細(xì)胞應(yīng)對壓力時(shí)的自我修復(fù)過程，以自噬小體的形成為主要特征[20]。在應(yīng)激狀態(tài)下促使細(xì)胞發(fā)生自噬的主要途徑是哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶體蛋白(the maimnalian target of rapamycin,mTOR)[21]。mTOR下游最具特征的主要效應(yīng)物是4E-BP1和p70S6激酶(P70S6K)，mTOR激活后能夠促進(jìn)其下游的重要靶蛋白4E-BP1的磷酸化，進(jìn)而調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的翻譯。現(xiàn)代研究證實(shí)，磷酸化的4E-BP1(即p-4E-BP1)可促進(jìn)其下游包括VEGF、細(xì)胞周期蛋白(Cyclin D1)和缺氧誘導(dǎo)因子-1α(Hypoxia indu-cible factor-1α, HIF-1α)等對細(xì)胞生長有至關(guān)重要作用的蛋白翻譯, 共同調(diào)節(jié)基因翻譯起始的速度、蛋白質(zhì)合成與細(xì)胞生長，調(diào)控細(xì)胞自噬，從而延長神經(jīng)元存活并促進(jìn)其修復(fù)再生[22-23]。Su M等在采用MicroRNA-221抑制自噬促心衰的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，p-mTOR、p-4E-BP1顯著上調(diào)后，LC3降低，可能為mTOR受到激活，自噬得到抑制[24]，說明p-4E-BP1的表達(dá)與自噬的調(diào)控有著密切的聯(lián)系[25-26]。VEGF是通過刺激血管生成，幫助氧向外周傳送，涉及內(nèi)皮細(xì)胞遷移、增殖和分化以及水解細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的一類蛋白[22]。Dodd K M[27]等發(fā)現(xiàn)，顯性抑制4E-BP1突變體的表達(dá)會(huì)對VEGF水平產(chǎn)生顯著影響，這反映了mTORC1/4E-BP1信號參與驅(qū)動(dòng)VEGF的表達(dá)。在組織缺氧情況下，VEGF表達(dá)增加，其存在保證了血管系統(tǒng)的完整性，并有助于調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和線粒體基因簇；而在細(xì)胞水平上，研究者發(fā)現(xiàn)VEGF的失活及耗竭會(huì)迫使線粒體斷開分裂、遏制細(xì)胞內(nèi)葡萄糖的代謝過程，導(dǎo)致自噬活性增加，進(jìn)而促使細(xì)胞死亡[28]。本研究主要參照梁楠等[9]對動(dòng)物模型的顱腦損傷制備及評價(jià)方法進(jìn)行造模，mNSS評分結(jié)果示電針組、模型組和假手術(shù)組在模型制備后都出現(xiàn)了神經(jīng)功能缺損表現(xiàn)，電針干預(yù)治療后，電針組與模型組神經(jīng)功能評分有所下降，相同時(shí)間點(diǎn)電針組分值減少程度較模型組明顯(P<0.01)，大鼠TBI后經(jīng)電針治療可以明顯降低mNSS評分，減輕神經(jīng)功能缺損程度，從行為學(xué)角度表明電針能夠幫助TBI后運(yùn)動(dòng)、感覺等神經(jīng)功能的恢復(fù)?？瞻捉M和假手術(shù)組大鼠腦組織中含有少量的p-4E-BP1和VEGF蛋白，以維持正常的腦組織生長代謝。而當(dāng)腦組織受到創(chuàng)傷后，經(jīng)電針干預(yù)后的電針組腦組織中的p-4E-BP1和VEGF含量明顯升高，但對比同時(shí)期模型組,電針組大鼠腦組織中p-4E-BP1和VEGF蛋白含量保持在較高水平,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)研究認(rèn)為電針能夠減緩TBI大鼠神經(jīng)細(xì)胞損傷進(jìn)程，減輕腦神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的破壞，從而發(fā)揮保護(hù)腦神經(jīng)功能的效用，其機(jī)制可能是通過促進(jìn)TBI大鼠腦組織中的p-4E-BP1及VEGF蛋白的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控腦細(xì)胞自噬，減輕腦組織的繼發(fā)性損傷程度，發(fā)揮腦保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)研究未能對目標(biāo)蛋白進(jìn)行阻斷后繼續(xù)檢測觀察，故在后續(xù)工作中有望展開進(jìn)一步研究。