諾氟沙星膠囊溶出度的分析方法評價(jià)

梁 宣，于澤源，劉媛媛，吳 琪，劉小芬

(綿陽市食品藥品檢驗(yàn)所，四川 綿陽 621000)

諾氟沙星膠囊亦稱氟哌酸，是第三代喹諾酮類全合成抗菌藥，為第一個(gè)氟喹諾酮類藥。具有抗菌作用強(qiáng)，抗菌譜廣，不良反應(yīng)發(fā)生率低等特性，同時(shí)耐藥性還未大量產(chǎn)生等優(yōu)點(diǎn)[1-3]，主要用于治療敏感菌所引起的尿道、腸道等感染性疾病。現(xiàn)目前國內(nèi)諾氟沙星單方制劑一共有802個(gè)批準(zhǔn)文號，其中諾氟沙星膠囊有697個(gè)批準(zhǔn)文號(規(guī)格均為0.1 g)[4]。諾氟沙星膠囊溶出的方法在國內(nèi)現(xiàn)行的法定標(biāo)準(zhǔn)為中國藥典2020年版二部[5-6]，而國外英國藥典(BP)[7]、美國藥典(USP)[8]、日本橙皮書(JP)[9]均沒有收載諾氟沙星膠囊，但收載有諾氟沙星片。膠囊劑要在體內(nèi)發(fā)揮作用，前提是有良好的溶解性[10]。藥物的溶解性通常用溶出度來表達(dá)，溶出度也稱溶出速率，是指在規(guī)定的溶劑和條件下，藥物以不同的劑型(片劑、膠囊劑、顆粒劑等固體制劑)溶出的速度和程度。溶出度是一種模擬口服固體制劑在胃腸道中的崩解和溶出的體外試驗(yàn)方法，同時(shí)也在一定程度上反映主藥的晶型、粒度、處方組成、輔料品種和性質(zhì)、生產(chǎn)工藝等的不同，造成產(chǎn)品質(zhì)量存在差異，進(jìn)一步影響臨床療效，因此溶出度是藥品質(zhì)量控制必檢項(xiàng)目之一。國內(nèi)現(xiàn)行2020年版中國藥典諾氟沙星膠囊的溶出度方法與諾氟沙星片溶出度方法一致，采用紫外分光光度法測量溶出液，但近年來國內(nèi)有關(guān)藥品質(zhì)量公告及文獻(xiàn)顯示采用現(xiàn)行溶出度方法發(fā)現(xiàn)諾氟沙星膠囊溶出度不合格的情況較多[11]，不同廠家因?yàn)樯a(chǎn)工藝等區(qū)別，法定標(biāo)準(zhǔn)檢測方法結(jié)果差異較大[12]。因此針對諾氟沙星膠囊的溶出度的檢測方法研究具有實(shí)際意義。

我國法定標(biāo)準(zhǔn)中諾氟沙星膠囊溶出度的測量方法是紫外可見分光光度法，而本文使用該藥品法定標(biāo)準(zhǔn)中含量測定項(xiàng)下的高效液相色譜法與法定標(biāo)準(zhǔn)測量方法同時(shí)測定不同溶出介質(zhì)中的溶出度。討論兩種分析方法的結(jié)果，尤其是處于不合格邊緣值的樣品，兩種測試方法的結(jié)果比較分析討論顯得尤為重要。根據(jù)影響因素如溶出介質(zhì)pH值、溶出反應(yīng)時(shí)間t、溶出介質(zhì)溫度T對諾氟沙星膠囊溶出曲線進(jìn)行評價(jià)，為更準(zhǔn)確的測量結(jié)果提出建議。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 主要試劑與儀器

RCZ-8M溶出試驗(yàn)儀，天津市天大天發(fā)科技有限公司；RZQ-8C溶出儀自動(dòng)取樣器，天津市天大天發(fā)科技有限公司；TU-1901紫外-可見分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；XS205電子天平，梅特勒托利多公司；BSA224S-CW電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司；S40H/電導(dǎo)率/離子綜合測試儀，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；Waters2695高效液相色譜儀,waters公司。

諾氟沙星對照，批號為：130450-201907，含量99.6%(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.6%)中國食品藥品檢定研究院；乙腈(色譜純)，賽默飛世爾科技有限公司；冰醋酸、氫氧化鈉、鹽酸、磷酸、三乙胺(均為分析純)，市售；實(shí)驗(yàn)室用水為純化水；諾氟沙星膠囊為同廠家，某醫(yī)藥集團(tuán)有限責(zé)任公司，同批次(批號：210203)生產(chǎn)的市售品。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

溶出液的制備：是取諾氟沙星膠囊6粒，照溶出度測定法《中國藥典》2020年版四部0931溶出度第二法[6]，根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)條件下的溶出介質(zhì)，依法操作，取溶液10 mL，濾過，即得諾氟沙星膠囊溶出液。對照品溶液是取諾氟沙星對照品加對應(yīng)溶出介質(zhì)溶解，稀釋制成約每毫升含5 g的溶液。

測定方法：紫外分光光度法參考《中國藥典》2020年版測定條件為在277 nm的波長處分別測定溶出液的吸光度值。高效液相色譜法參考《中國藥典》2020年版諾氟沙星膠囊膠含量測定項(xiàng)下色譜條件，以0.025 mol/L磷酸溶液(用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.0±0.1)-乙腈(87:13)為流動(dòng)相，檢測波長為278 nm，測量溶出液吸光度值。

溶出曲線：溶出曲線中的溶解度值為同一影響因素下的6粒樣品溶出的平均值。

2 結(jié)果與討論

2.1 溶出介質(zhì) pH值對溶出度的影響

同批諾氟沙星膠囊在不同pH溶出介質(zhì)中的溶出結(jié)果見圖1?？疾靝H值范圍從3.25～5.00之間，溶出度的變化。隨著pH值的增加，溶出度值逐漸降低，當(dāng)pH值在3.25～3.50時(shí)，溶出值達(dá)到短暫平衡后繼續(xù)下降，說明諾氟沙星膠囊在此酸性條件下已經(jīng)達(dá)到最高的溶出狀態(tài)，溶出液濃度為90%以上，pH值再繼續(xù)變小已沒有實(shí)際意義。當(dāng)在酸性條件pH4.25～4.50時(shí)，溶出度值也達(dá)到穩(wěn)定的狀態(tài)，pH再繼續(xù)增加時(shí)，溶出度值也下降，當(dāng)pH值大于5.00時(shí)，溶出度小于50%。兩種檢測方法顯示，溶出曲線趨勢一致，紫外分光光度法(UV)較高效液相色譜法(HPLC)溶出值更高，可能是HPLC具有分離作用，專屬性更強(qiáng)，干擾更少。

圖1 不同pH值條件下紫外和液相測得的結(jié)果Fig.1 Comparison of different pH by UV and HPLC measured

通過實(shí)驗(yàn)顯示設(shè)定諾氟沙星膠囊溶出介質(zhì)的pH值不能太小，pH值太小藥物很快溶解即沒有生理意義，pH值太大藥物溶出慢溶出效率低，也不能正確判斷膠囊質(zhì)量。通過紫外分光光度法和高效液相色譜法測定的結(jié)果比較，當(dāng)pH值在4.0～4.1時(shí)，紫外分光光度法測定的溶出度值高于高效液相色譜法測定的結(jié)果，且紫外分光光度法測量值存在短暫平臺(tái)，說明藥物輔料及其它因素對紫外分光光度法的干擾更大，而高效液相色譜法中色譜柱的分離，使得測量結(jié)果受干擾情況較少。另外pH值對膠囊殼的溶解性影響較大，部分膠囊殼在pH為4.1時(shí)，已經(jīng)有未溶解完全的現(xiàn)象，未溶解完全的膠囊勢必會(huì)影響有效藥物的溶解。

2.2 溶出介質(zhì)的溫度對溶出度的影響

同批諾氟沙星膠囊在不同溫度溶出介質(zhì)中的溶出結(jié)果見圖2。取同一批次樣品的諾氟沙星膠囊，分別置于不同溫度溶出介質(zhì)中，取續(xù)濾液，按照1.2項(xiàng)下方法，分別考察25、30、33、35、37、40、45、47 ℃的溶出值，結(jié)果見圖2。當(dāng)溶解介質(zhì)溫度在25～40 ℃時(shí)，溶解度隨著溫度的升高溶解度在持續(xù)增大，不同的測試方法相比，測量結(jié)果值總體差異不大；但當(dāng)溫度在35～40 ℃時(shí)，紫外法測量的值大于高效液相色譜法測量的值，當(dāng)37 ℃時(shí)，兩方法測量結(jié)果值差異最大。當(dāng)溫度繼續(xù)增加至47 ℃時(shí)，兩種方法測量的值又幾趨于一致。

同時(shí)觀察藥物溶解狀況，當(dāng)溫度在25 ℃時(shí)，藥物還處于完好狀態(tài)，只是將膠囊殼軟化，從溶出度結(jié)果來看，藥物幾乎未溶解在介質(zhì)中。隨著溫度的升高，溶出度越來越大。溶出度的溫度是模擬人體溫度來設(shè)置的，人體正常溫度為36.5～37.3 ℃，因此溶出溫度為(37±0.5)℃，太高或太低都無生理意義。對比兩種方法的測量比較，溫度升高有利于藥物溶出，溶解過程屬于吸熱過程。

圖2 不同溫度下用紫外和液相條件下測得的溶出度Fig.2 Comparison of different temperature by UV and HPLC measured

2.3 不同溶出反應(yīng)時(shí)間條件下的藥物溶出度

圖3 不同時(shí)間紫外和液相測定的溶出度Fig.3 Comparison of different time by UV and HPLC measured

取同一批次樣品的諾氟沙星膠囊，分別置于溶出介質(zhì)中，控制溶出反應(yīng)時(shí)間，分別在15、20、25、30、35、40、45 min時(shí)，取續(xù)濾液，按照2.1項(xiàng)下方法，測量并繪制溶出曲線，結(jié)果見圖3。當(dāng)溶出時(shí)間至15 min時(shí)，已測得溶出度為55%左右，當(dāng)時(shí)間到30 min時(shí)兩種測量方式的結(jié)果數(shù)據(jù)差距最大，整個(gè)時(shí)間段內(nèi)，高效液相法測定值明顯高于紫外分光光度法測定值，至40 min時(shí)，溶解已趨于平衡，且兩種方式的測量值差異較小。

3 結(jié) 論

通過以上對諾氟沙星膠囊溶出曲線的研究發(fā)現(xiàn)，紫外分光光度法和高效液相色譜法兩種方法測得溶出曲線變化趨勢一致，但數(shù)據(jù)結(jié)果有差異。紫外分光光度法較高效液相色譜法易受到某些雜質(zhì)、輔料、膠囊殼的溶解性等因素影響。液相色譜分析法中有分離的步驟，所以在相同的溶出反應(yīng)條件下液相色譜法相比紫外分光光度法測量更準(zhǔn)確。溶出度受溶出介質(zhì)pH值和溫度的影響很大，當(dāng)pH值為4.0附近時(shí)，溶出度值差距較大。因此在配置介質(zhì)溶液時(shí)，一定要確保溶液pH準(zhǔn)確。當(dāng)溶出介質(zhì)pH值為4.0時(shí)，不同的反應(yīng)時(shí)間和不同的反應(yīng)溫度都顯示出液相色譜分析法的測得值更高。當(dāng)不合格樣品的溶出度值處于不合格邊緣值時(shí)，在排除其它因素的影響后，應(yīng)考慮使用高效液相色譜法對溶出液進(jìn)行再次測量，綜合判斷后給出判定。

綜上，諾氟沙星膠囊溶出度的測定中，pH值為4.0、溫度為37 ℃、反應(yīng)時(shí)間為30 min時(shí)，若出現(xiàn)溶出度臨界值影響結(jié)果判斷時(shí)，應(yīng)利用該品種含量測定項(xiàng)下的高效液相色譜法測定續(xù)濾液，綜合判定，其結(jié)果值能更為客觀的反應(yīng)該藥物溶出情況。