多形性腺瘤基因樣因子2 在上皮性卵巢癌組織中的表達及與預(yù)后的關(guān)系研究

張青松，張陽，曹迎九，張金偉

上皮性卵巢癌是一類起源于卵巢上皮表皮或輸卵管等組織的婦科惡性腫瘤，組織學(xué)類型多樣且年齡區(qū)間分布廣泛，近些年在婦科惡性腫瘤發(fā)病率中穩(wěn)居首位，嚴重威脅患者的生命安全［1-2］。目前臨床實踐中多以手術(shù)聯(lián)合術(shù)后規(guī)范化化療方案為主要治療方針，通過手術(shù)切除卵巢周圍病變組織同時輔以化療抑制腫瘤細胞增殖，提高患者的疾病控制率，延長生存期［3-4］。但近些年研究顯示，部分上皮性卵巢癌患者治療結(jié)局差強人意，多數(shù)患者均出現(xiàn)復(fù)發(fā)或不同程度的腫瘤細胞轉(zhuǎn)移和侵襲，患者預(yù)后不佳［5-9］。因此，提高上皮性卵巢癌患者術(shù)后腫瘤轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的早期預(yù)測水平以采取積極干預(yù)措施改善患者預(yù)后，成為學(xué)者不斷探索的重點。多形性腺瘤基因樣因子2（PLAGL2）是癌蛋白的一種，可通過介導(dǎo)胰島素樣生長因子Ⅱ（IGF-Ⅱ）等途徑促進腫瘤細胞完成有絲分裂，在反映腫瘤細胞增殖活性領(lǐng)域具有積極的研究價值［10］。但目前針對PLAGL2 在上皮性卵巢癌組織中的表達及與預(yù)后的關(guān)系研究文獻有限，尚無統(tǒng)一共識或指南?；诖搜芯楷F(xiàn)狀，為進一步推動上皮性卵巢癌的研究進展，現(xiàn)選取106 例上皮性卵巢癌患者進行研究，以分析PLAGL2 在上皮性卵巢癌組織中的表達及與預(yù)后的關(guān)系，為后續(xù)臨床研究提供數(shù)據(jù)參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取南京醫(yī)科大學(xué)附屬無錫人民醫(yī)院婦科2014 年7 月至2020 年1 月收治的106 例上皮性卵巢癌患者作為研究對象，年齡29～58 歲［（47.96 ± 5.31）歲］。納入標準：（1）均符合《2012NCCN 卵巢癌包括輸卵管癌和原發(fā)腹膜癌臨床實踐指南（第二版）》［11］中上皮性卵巢癌的臨床診斷標準，且病理活檢確診；（2）年齡＞18 歲；（3）均已接受腫瘤細胞減滅術(shù)并保留上皮性卵巢癌組織及少量癌旁正常組織；（4）臨床資料完整且治療依從性良好；（5）患者或家屬簽訂知情同意書。排除標準：（1）合并其他婦科惡性腫瘤；（2）術(shù)前接受化療、放療或生物靶向等標準化治療者；（3）有溶栓術(shù)或心臟手術(shù)既往史；（4）孕期或哺乳期女性；（5）肝、腎等重要器官功能障礙；（6）預(yù)計生存期＜6 個月。

1.2 方法 （1）人口學(xué)資料及病歷資料統(tǒng)計：于所有受試者入組24 h 內(nèi)收集并整理基礎(chǔ)資料，包括年齡、體重指數(shù)（BMI）、孕次、基礎(chǔ)疾?。ㄌ悄虿　⒏哐獕旱龋?、吸煙史、飲酒史、國際婦產(chǎn)科聯(lián)合會病理分期（FIGO）、病理類型（漿液性癌、子宮內(nèi)膜樣癌、黏液性癌、透明細胞癌）、病理分級（低分化、高或中分化）、術(shù)后殘余病灶直徑、術(shù)后化療周期（術(shù)后均予以紫杉醇+順鉑化療方案維持治療）等。（2）上皮性卵巢癌組織及癌旁正常組織中PLAGL2 表達檢測方法［12］：①常規(guī)免疫組化法對組織樣本中PLAGL2表達檢測。取標本，中性甲醛（10%）固定、石蠟包埋后切片厚度4 μm，脫蠟、石化。加入0.01 mol/L 枸櫞酸鈉緩沖液（pH=6.0）煮沸20 min 熱修復(fù)抗原，室溫放置冷卻后，向切片滴加3% 過氧化氫（H2O2）適量，室溫孵育10 min。磷酸緩沖液（PBS）沖洗切片3 次，5 min/次，后加入1%牛血清封閉，室溫孵育25 min。將1∶100 稀釋兔抗人PLAGL2 單克隆抗體一抗滴入，恒溫4 ℃孵育過夜。PBS 沖洗切片3 次，5 min/次，后將1∶100 稀釋二抗加入，避光室溫孵育60 min。PBS 沖洗切片3 次，5 min/次，后二氨基聯(lián)茜胺（DBA）染色、蘇木素復(fù)染，不同濃度酒精梯度脫水。置于二甲苯中并以中性樹膠封片，顯微鏡觀察染色情況。②雙盲閱片，PBS 代一抗做陰性對照。染色強度評分：強染色3 分、中度染色2 分、弱染色1 分、無染色0 分；陽性細胞比例評分（著色細胞比例評分）：4 分（＞75%）、3 分（51%～75%）、2 分（26%～50%）、1 分（5%～25%）、0 分（＜5%）。染色指數(shù)（SI=染色強度評分×陽性細胞比例評分）≤1 分為陰性、2～12 分為陽性。（3）預(yù)后評估及分組：2 組患者術(shù)后均隨訪12 個月，隨訪截止日期2022 年1 月1 日，其間患者死亡為預(yù)后較差，記為預(yù)后不佳組；生存為預(yù)后較好，記為預(yù)后良好組。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 17.0 軟件進行數(shù)據(jù)分析，以百分比（%）表示計數(shù)資料，行χ2檢驗。COX回歸分析影響上皮性卵巢癌患者預(yù)后的因素。以受試者工作特征（ROC）曲線下面積（AUC）評估PLAGL2 對上皮性卵巢癌患者預(yù)后的預(yù)測價值。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 預(yù)后結(jié)局 隨訪12 個月內(nèi)，106 例上皮性卵巢癌患者中死亡19 例，生存率82.08%。

2.2 上皮性卵巢癌組織及癌旁正常組織中PLAGL2 表達比較 106 例上皮性卵巢癌組織中PLAGL2 陽性表達46 例，陽性表達率43.40%。106 例卵巢癌旁正常組織中PLAGL2 陽性表達25 例，陽性表達率23.58%。2 組PLAGL2 陽性表達率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，卵巢癌組織中PLAGL2 陽性表達率高于癌旁正常組織（χ2=9.339，P＜0.05）。

2.3 影響上皮性卵巢癌患者預(yù)后的單因素分析 分析結(jié)果顯示，預(yù)后不佳組年齡46～58 歲、FIGO 分期Ⅱ～Ⅳ期、病理分級低分化、術(shù)后殘余病灶直徑＞1 cm 及PLAGL2 陽性表達所占比例均高于預(yù)后良好組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 影響上皮性卵巢癌患者預(yù)后的單因素分析（例）

2.4 影響上皮性卵巢癌患者預(yù)后的多因素分析 變量賦值見表2。COX 多因素回歸分析結(jié)果顯示，年齡46～58 歲、FIGO 分期Ⅲ～Ⅳ期、病理分級低分化、術(shù)后殘余病灶直徑＞1 cm 及PLAGL2 陽性表達均為上皮性卵巢癌患者預(yù)后的影響因素（P＜0.05）。見表3。

表2 自變量賦值情況

表3 影響上皮性卵巢癌患者預(yù)后的COX 回歸分析

2.5 上皮性卵巢癌組織中PLAGL2 表達對上皮性卵巢癌患者預(yù)后的ROC 預(yù)測價值 ROC 分析顯示，上皮性卵巢癌組織中PLAGL2 表達對上皮性卵巢癌患者預(yù)后的ROC 的靈敏度、特異度和AUC 分別為89.47%、66.67%、0.781（P＜0.05）。

3 討論

上皮性卵巢癌作為臨床中常見的婦科惡性腫瘤，發(fā)病率高且致病機制復(fù)發(fā)，既往研究將其發(fā)病機制歸于2 類學(xué)說，有學(xué)者認為卵巢表面上皮內(nèi)陷形成皮質(zhì)包涵囊腫，并伴隨周圍微環(huán)境變化誘導(dǎo)表面上皮發(fā)生“化生性改變”，轉(zhuǎn)化為具有苗勒表型的上皮，繼而誘發(fā)惡性病變。另有學(xué)者認為輸卵管及卵巢旁的第二苗勒系統(tǒng)上皮優(yōu)先形成小囊腫，逐漸推擠占據(jù)卵巢組織，誘發(fā)組織學(xué)類型的病變［13-14］。目前臨床治療中通過手術(shù)、化療等治療方案雖可在一定程度上抑制患者病情進展，但由于缺乏特效治愈方案，復(fù)發(fā)率、轉(zhuǎn)移率及死亡率均較高，長期預(yù)后不佳。因此分析影響上皮性卵巢癌患者預(yù)后的危險因素，同時尋找高敏性或特異性腫瘤標志物，有助于積極制定早期干預(yù)措施以改善患者預(yù)后，一直是近些年臨床學(xué)者亟需突破的瓶頸。

PLAGL2 癌蛋白由496 個氨基酸殘基、氨基末端區(qū)域的6 個C2H2型鋅指結(jié)構(gòu)域和富含脯氨酸和絲氨酸的羧基末端組成，且在幾乎所有成人和胎兒人體組織中普遍表達，其致癌能力可能是通過激活I(lǐng)GF-Ⅱ促有絲分裂途徑來介導(dǎo)的，且與低氧誘導(dǎo)因子-1（HIF-1）相關(guān)聯(lián)的PLAGL2 也可能具有誘導(dǎo)凋亡的作用，因為它可以激活Nip3 啟動子并在成纖維細胞和神經(jīng)母細胞瘤細胞中誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致正常細胞凋亡。因此本研究分析認為，上皮性卵巢癌組織中PLAGL2 表達與患者預(yù)后關(guān)系密切［15-17］。本研究結(jié)果顯示，卵巢癌組織中PLAGL2 陽性表達率高于癌旁正常組織，提示上皮性卵巢癌患者癌組織中PLAGL2 陽性表達率更高。本研究COX 多因素回歸分析結(jié)果顯示，PLAGL2 陽性表達均為上皮性卵巢癌患者預(yù)后的影響因素，表明上皮性卵巢癌組織中PLAGL2 表達可用于反映上皮性卵巢癌患者的預(yù)后情況。此外，COX 多因素回歸分析結(jié)果顯示年齡46～58 歲、FIGO 分期Ⅲ～Ⅳ期、病理分級低分化、術(shù)后殘余病灶直徑＞1 cm 同樣是上皮性卵巢癌患者預(yù)后的影響因素。年齡作為反映機體組織及器官活性的重要參考指標，正常情況下伴隨患者年齡的增長，機體抵抗力逐漸降低，且治療耐受性較差，不利于患者預(yù)后。FIGO 分期Ⅲ～Ⅳ期提示患者病情進展較為迅速，且可能存在轉(zhuǎn)移風(fēng)險，患者預(yù)后不佳［18-19］。劉傳忠等［20］研究同樣發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)IGO 分期Ⅲ～Ⅳ期的上皮性卵巢癌患者生存期明顯縮短。病理分級低分化提示病灶組織與未分化癌腫瘤組織與正常組織相差很大，成熟度差，惡性度高，不利于患者預(yù)后［21-22］。此外術(shù)后殘余病灶直徑作為上皮性卵巢癌復(fù)發(fā)的高風(fēng)險因素之一，伴隨病灶殘留直徑的增大復(fù)發(fā)風(fēng)險隨之升高，從而影響患者預(yù)后［23-24］。本研究ROC 分析結(jié)果顯示，上皮性卵巢癌組織中PLAGL2 表達對上皮性卵巢癌患者預(yù)后的靈敏度、特異度和AUC 分別為89.47%、66.67%、0.781，進一步證實了上皮性卵巢癌組織中PLAGL2 表達對患者預(yù)后的預(yù)測效能較高。因此筆者認為臨床中針對上皮性卵巢癌患者治療，在不斷完善手術(shù)及化療等治療方案的同時，進一步提高PLAGL2 等腫瘤相關(guān)因子表達的監(jiān)測，更有助于改善患者長期預(yù)后，延長患者生存期。但本次研究納入樣本量有限，不同預(yù)后結(jié)局組間數(shù)據(jù)差異較為明顯，后續(xù)研究中仍需完善多中心大樣本研究試驗，進一步證實研究結(jié)論，完善上皮性卵巢癌患者預(yù)后的研究。

綜上所述，PLAGL2 在預(yù)后不佳的上皮性卵巢癌患者中陽性表達率較高，且上皮性卵巢癌組織中PLAGL2 表達對患者預(yù)后具有較高的預(yù)測效能。