大麻遺傳標(biāo)記的法醫(yī)學(xué)應(yīng)用研究進(jìn)展

夏若成，陶瑞旸，林 源，張曉春，楊 琪，2，于 歡，2，席世涵，3，熊 磊，4，李成濤，張素華

（1.司法鑒定科學(xué)研究院上海市法醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室上海市司法鑒定專業(yè)技術(shù)服務(wù)平臺(tái) 司法部司法鑒定重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海200063；2.蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)部法醫(yī)學(xué)系，江蘇蘇州215123；3.內(nèi)蒙古民族大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古通遼028000；4.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué) 法醫(yī)學(xué)教研室，內(nèi)蒙古 呼和浩特010030）

大 麻 （Cannabis sativa L.） 是 大 麻 科 （Cannabinaceae）大麻屬（Cannabis）一年生雌雄異株的草本植物，偶有雌雄同株，主要分布于加拿大、意大利、印度以及我國的云南、新疆、黑龍江等地區(qū)。 大麻是一種多用途、多功能作物，其纖維是良好的紡織和造紙?jiān)?，植株?nèi)含有的多種化學(xué)成分被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域， 種子中富含人體易吸收的蛋白質(zhì)、氨基酸、不飽和脂肪酸與微量元素等多種營養(yǎng)成分，已成為許多國家重要的經(jīng)濟(jì)作物。 然而，大麻的花和葉中含有四氫大麻酚（Tetrahydrocannabinol，THC）這一具有強(qiáng)烈成癮性和麻醉性的致幻成分，已被聯(lián)合國禁毒公約列為與海洛因、可卡因并列的三大毒品之一。

大麻的毒性成分主要為THC，研究資料顯示：當(dāng)人類攝入THC 質(zhì)量分?jǐn)?shù)低于3 g·kg的大麻，不顯示精神活性；只有攝入THC 質(zhì)量分?jǐn)?shù)高于3 g·kg的大麻，才具有一定的濫用傾向。 鑒于不同品種的大麻 THC 質(zhì)量分?jǐn)?shù)差別較大（0.1～200 g·kg），許多國家為防止大麻濫用，按植株內(nèi)所含THC 含量并結(jié)合植株特征和用途，將大麻分為工業(yè)大麻/纖維大麻（THC＜ 3 g·kg）、中間型大麻（3 g·kg＜ THC＜5 g·kg）和毒品大麻/藥用大麻（THC ＞ 5 g·kg）3種類型。 我國于2002 年在《云南省工業(yè)大麻管理暫行規(guī)定》中首次提出了工業(yè)大麻的概念，并將工業(yè)大麻稱為漢麻或火麻，規(guī)定其THC 質(zhì)量分?jǐn)?shù)低于0.3 g·kg。 大麻是一種二倍體植物，共含有 20 條染色體（18 條常染色體和2 條性染色體），其雌株染色體為 XX 型，雄株染色體為 XY 型。 研究顯示：大麻雌雄植株的利用價(jià)值并不相同，雄株的纖維質(zhì)量明顯高于雌株，但雄性植株中不含THC 或含量較低，雌性植株內(nèi)THC 含量則相對(duì)較高，因此雌株具有藥用價(jià)值和濫用可能。

目前，大麻是全球范圍內(nèi)種植、生產(chǎn)、販賣和吸食最為廣泛的毒品，也是國際社會(huì)普遍嚴(yán)禁的管制對(duì)象。 《中華人民共和國刑法》和《中華人民共和國禁毒法》也明確將大麻列為管制毒品，并采取嚴(yán)厲措施打擊涉及大麻的違法犯罪行為。 然而，近年來受到國際上部分國家和地區(qū)（如烏拉圭、加拿大和美國阿拉斯加、科羅拉多、華盛頓等州）大麻合法化的影響，我國吸食和濫用大麻人數(shù)持續(xù)上升，境外走私案件也日益增多。因此，為打擊毒品犯罪，對(duì)大麻進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的司法鑒定已成為迫切的社會(huì)需求。 目前，常規(guī)的大麻鑒定方法主要是基于形態(tài)學(xué)和化學(xué)成分的分析。 但在實(shí)際案件中，大麻經(jīng)過加工或與煙葉等混在一起，導(dǎo)致其在形態(tài)上無法識(shí)別。 對(duì)于大麻化學(xué)成分的分析，大多采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（Gas Chromatography-Mass Spectrometry，GC-MS）對(duì)生物檢材中的THC 進(jìn)行定性和定量分析，但利用該方法分析大麻化學(xué)成分時(shí)，存在所需樣本量較大且對(duì)檢材質(zhì)量要求較高，以及THC 在陳舊樣本中易被氧化等局限性。此外，THC 的含量亦受大麻植株的年齡、性別和種植環(huán)境等因素影響，因而影響其化學(xué)分析的準(zhǔn)確性。

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，在DNA 水平上對(duì)物種進(jìn)行鑒定已成為研究的熱點(diǎn)。 鑒于常規(guī)的檢測技術(shù)不能滿足一些案件中大麻檢材的鑒定需求， 法庭科學(xué)家嘗試將DNA 遺傳標(biāo)記技術(shù)運(yùn)用到大麻的鑒定中，并取得較為理想的效果。 本文針對(duì)近年來大麻遺傳學(xué)的相關(guān)研究進(jìn)行綜述，旨在為司法鑒定和法庭科學(xué)中大麻的種屬鑒定、個(gè)體識(shí)別及來源地推斷的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 大麻DNA 遺傳標(biāo)記及其應(yīng)用

1.1 序列特異性擴(kuò)增區(qū)

大麻雌、雄植株的利用價(jià)值并不相同，只有雌性植株存在濫用傾向。 然而，陳舊的大麻樣本、經(jīng)過加工的大麻樣本以及花期之前的大麻樣本都無法從形態(tài)上準(zhǔn)確判斷其性別。 因此，利用遺傳標(biāo)記技術(shù)檢測大麻性別對(duì)于大麻育種以及打擊毒品犯罪均具有重要的意義。

序列特異性擴(kuò)增區(qū)（Sequence-Characterized Amplified Region，SCAR）標(biāo)記因其特異性高、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于大麻性別研究。 SCAR遺傳標(biāo)記是在隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA（Randomly Amplified Polymorphic DNA， RAPD）和擴(kuò)增片段長度多態(tài)性（Amplified Fragment Length Polymorphism，AFLP）標(biāo)記的基礎(chǔ)上衍生而得，兼具RAPD 和AFLP標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)。 新的SCAR 引物通常是在原有10 個(gè)堿基標(biāo)記引物的基礎(chǔ)上延長了目標(biāo)基因組DNA 末端序列的14 個(gè)堿基構(gòu)成，該過程不僅加強(qiáng)了與模板DNA 的特異性結(jié)合，還提高了退火溫度以及轉(zhuǎn)化后新標(biāo)記的專一性。 MANDOLINO 等發(fā)現(xiàn)由隨機(jī)引物OPA8 擴(kuò)增產(chǎn)生的長度為400 bp 的RAPD序列與大麻雄性表型相關(guān)，并將此性別特異性RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化為長度為 390 bp 的 SCAR 標(biāo)記。 T?RJéK等利用20 條RAPD 引物分別對(duì)雌雄同株和雌雄異株大麻進(jìn)行性別特異性遺傳標(biāo)記的篩選，發(fā)現(xiàn)引物OPD05 和引物UBC354 在雄性植株中產(chǎn)生了特異性條帶，并將這兩個(gè)雄性特異性RAPD 標(biāo)記轉(zhuǎn)化為SCAR 標(biāo)記，命名為 SCAR323 和SCAR119。 TECHEN等根據(jù)MANDOLINO 等人的研究，使用一對(duì)與大麻雄性相關(guān)的引物MADC2 擴(kuò)增大麻基因組DNA，在雌性和雄性植株中分別得到約450 bp 和約300 bp的片段，且DNA 分析結(jié)果與大麻雌雄植株外觀形態(tài)學(xué)結(jié)果一致。這項(xiàng)研究結(jié)果表明，SCAR 遺傳標(biāo)記技術(shù)可作為大麻植株早期發(fā)育階段的性別鑒定技術(shù)。

SCAR 遺傳標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用于大麻的性別研究在國內(nèi)也有所開展。陳其軍等用30 對(duì)隨機(jī)引物對(duì)雌雄異株大麻——“云麻一號(hào)”進(jìn)行擴(kuò)增，得到一條約2.5 kb 的雄性特異性片段，并根據(jù)測序結(jié)果將其轉(zhuǎn)化為重復(fù)性和特異性更好的SCAR 標(biāo)記。 李仕金等以“云麻一號(hào)”為實(shí)驗(yàn)材料，利用200 條RAPD隨機(jī)引物進(jìn)行大麻性別相關(guān)位點(diǎn)的篩選，結(jié)果顯示，引物S208 擴(kuò)增得到一條大小為429 bp 且與大麻雄性相關(guān)的特異性條帶。 根據(jù)測序結(jié)果合成了2條SCAR 標(biāo)記引物，該SCAR 標(biāo)記可對(duì)已知性別花期和未知性別幼苗期的大麻植株進(jìn)行準(zhǔn)確的性別鑒定。 張貴芹 等使用 T?RJéK 等人開發(fā)的SCAR 標(biāo)記引物，對(duì)我國4 個(gè)不同地區(qū)的120 株已知性別的大麻樣本進(jìn)行特異性檢測并隨機(jī)抽取樣本進(jìn)行盲測研究。 結(jié)果顯示：120 株已知性別的大麻樣本中有113 株樣本檢測結(jié)果正確，準(zhǔn)確率為94.2%；16 株盲測樣本中有15 株樣本檢測結(jié)果正確，準(zhǔn)確率為93.8%。

上述研究表明，SCAR 標(biāo)記可作為大麻性別鑒定可靠而穩(wěn)定的遺傳標(biāo)記，但已轉(zhuǎn)化的SCAR 標(biāo)記并非都能成功用于大麻性別的鑒定，其準(zhǔn)確性仍需進(jìn)一步驗(yàn)證。 此外，由于大麻品種多達(dá)150 余種，已開發(fā)的SCAR 性別連鎖標(biāo)記是否具有廣泛的適用性還需進(jìn)一步驗(yàn)證。 由于在研究已開發(fā)的大麻SCAR 遺傳標(biāo)記中并未發(fā)現(xiàn)雌性特異性引物， 因此有必要進(jìn)一步開發(fā)雌性特異性標(biāo)記，以提高大麻性別鑒定的準(zhǔn)確性。

1.2 DNA 條形碼

DNA 條形碼是由加拿大動(dòng)物學(xué)家HEBERT等于2003 年首次提出，是指通過一段短而標(biāo)準(zhǔn)的DNA 片段作為遺傳標(biāo)記來實(shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確、自動(dòng)化的物種鑒定。 與傳統(tǒng)的依賴形態(tài)學(xué)進(jìn)行物種鑒定的方法相比，DNA 條形碼不受鑒定對(duì)象的環(huán)境、發(fā)育階段以及人為等因素的影響，且對(duì)鑒定人員的專業(yè)知識(shí)要求不高，一經(jīng)提出就被廣泛應(yīng)用于動(dòng)物、植物以及微生物領(lǐng)域的物種鑒定。 2009 年，生命條形碼聯(lián)盟（the Consortium for the Barcode of Life，CBOL）植物工作組推薦將葉綠體DNA（chloroplast DNA,cpDNA）片段成熟酶 K（maturase K, matK）和核酮糖-1，5-二磷酸羧化酶/加氧酶大亞基（ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit,rbcL）作為鑒定陸生植物的通用條形碼。 然后，又將葉綠體間隔區(qū)psbA-trnH 和核糖體DNA 的內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（Internal Transcribed Spacer，ITS）作為植物的補(bǔ)充條形碼。

DNA 條形碼技術(shù)已廣泛應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域的物種鑒定，MELLO 等利用 rbcL 序列引物對(duì) 24 例產(chǎn)自巴西的毒品大麻樣本進(jìn)行PCR 擴(kuò)增并測序，結(jié)果顯示，24 例大麻樣本具有相同的rbcL 序列，且將該序列在NCBI 上進(jìn)行BLAST 相似性檢索，發(fā)現(xiàn)測序所得序列與數(shù)據(jù)庫中大麻的rbcL 序列相似性高于99%，因而可確認(rèn)其為大麻。 該研究結(jié)果表明，rbcL序列可作為鑒定毒品原植物大麻的DNA 條形碼，且該序列能將產(chǎn)自巴西的大麻樣本與產(chǎn)自中國、美國和英國的樣本相區(qū)分。ROMAN 等根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫中大麻cpDNA 全基因組序列篩選出2 個(gè)熱點(diǎn)區(qū)域rp132-trnL 和trnS-trnG，并對(duì)5 個(gè)不同組別（美國纖維大麻、加拿大纖維大麻、美國-墨西哥毒品大麻、智利毒品大麻、智利醫(yī)用大麻）的大麻樣本進(jìn)行遺傳多態(tài)性分析，盡管超過80%的樣本具有相同的序列，但在5 個(gè)樣本組之間仍然觀察到特異性差異，這表明rp132-trnL 和trnS-trnG 標(biāo)記在確定大麻樣本來源及樣本類型方面具有一定的作用。

國內(nèi)應(yīng)用DNA 條形碼技術(shù)主要是對(duì)大麻及其混偽品進(jìn)行鑒別，宋炳軻等利用psbA-trnH 和ITS2 序列對(duì)產(chǎn)自5 個(gè)不同地區(qū)的大麻樣本及其混偽品進(jìn)行鑒別。 ITS2 序列分析顯示：不同地區(qū)的大麻ITS2 序列完全一致，未發(fā)現(xiàn)變異位點(diǎn)，且通過BLAST 檢索可鑒定為大麻；psbA-trnH 序列分析結(jié)果表明，該序列不但可鑒別不同地域來源的大麻，還可分辨出大麻的性別并區(qū)分野生型與栽培型。 代勇等對(duì)采自云南的工業(yè)大麻和新疆的毒品大麻進(jìn)行ITS 全序列分析，通過序列比對(duì)顯示：新疆大麻與云南大麻ITS 序列具有22 個(gè)變異位點(diǎn)，從構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹可看出，新疆毒品大麻與云南工業(yè)大麻親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。 該研究結(jié)果表明，基于ITS 全序列分析能夠準(zhǔn)確地區(qū)分出毒品大麻與工業(yè)大麻。

DNA 條形碼技術(shù)的應(yīng)用主要是快速準(zhǔn)確地進(jìn)行物種鑒定，上述研究均表明DNA 條形碼可作為鑒定大麻的遺傳標(biāo)記，且對(duì)于確定大麻來源及樣本類型方面也具有一定的作用。 我國對(duì)于DNA 條形碼的研究起步相對(duì)較晚，且對(duì)于大麻的鑒定研究也不夠深入。 為了獲得更多的遺傳信息，CBOL 植物工作組提出需要用多個(gè)遺傳標(biāo)記組合作為植物物種鑒定的標(biāo)準(zhǔn)條形碼。 因此，在今后的研究中，應(yīng)擴(kuò)大DNA 條形碼在物種中的應(yīng)用范圍，開發(fā)更多的條形碼序列，以建立一個(gè)屬于我國生物物種的條形碼數(shù)據(jù)庫，這對(duì)于物種鑒定以及保護(hù)我國物種多樣性方面均具有重要的意義。

1.3 短串聯(lián)重復(fù)序列

短串聯(lián)重復(fù)序列（Short Tandem Repeats，STR）也稱微衛(wèi)星DNA（Microsatellite DNA）或簡單重復(fù)序列（Simple Sequence Repeat，SSR），是由 2～6 bp的核心序列串聯(lián)組成的寡核苷酸序列，因其具有高靈敏度、高鑒別能力、高種屬特異性、高準(zhǔn)確性以及易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)，而被廣泛應(yīng)用于司法鑒定領(lǐng)域的個(gè)體識(shí)別、親緣鑒定和群體調(diào)查，并成為法庭科學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用最為廣泛的遺傳標(biāo)記。 目前， 植物STR 遺傳標(biāo)記主要用于植物個(gè)體識(shí)別、 種屬鑒定、遺傳多樣性分析和遺傳圖譜構(gòu)建等多個(gè)方面。 李慧峰等利用10 對(duì)多態(tài)性良好的STR 引物對(duì)山東省原產(chǎn)的蘋果資源進(jìn)行分析，其中共檢測到139 個(gè)等位基因及244 種基因型。 該研究成功構(gòu)建了山東蘋果種質(zhì)的分子身份證，為山東省蘋果資源的鑒定工作提供了重要依據(jù)。 李元元利用STR 標(biāo)記構(gòu)建了包含3 個(gè)基因座的罌粟熒光復(fù)合擴(kuò)增檢測體系，并證明該體系能夠?qū)⒗浰谂c其近緣物種及混偽品相區(qū)分。

大麻可通過種子種植和克隆繁殖2 種方式進(jìn)行栽培。 種子種植產(chǎn)生的大麻植株具有其特有的基因型，而克隆產(chǎn)生的植株具有與“母性”個(gè)體相同的基因型。在一些特殊案件中，通常既需要對(duì)大麻檢材準(zhǔn)確鑒別，又需要對(duì)大麻樣本進(jìn)行個(gè)體化識(shí)別。據(jù)此，國內(nèi)外一些學(xué)者嘗試將STR 遺傳標(biāo)記應(yīng)用到大麻鑒定中，并證明了其在大麻個(gè)體化研究中的潛力。2003 年HSIEH 等報(bào)道了第一個(gè)大麻STR 基因座CS1，為一個(gè)六核苷酸重復(fù)序列STR 基因座，該基因座在108 株大麻樣本中的重復(fù)單位個(gè)數(shù)為3～40個(gè)，雜合度約為87.04%，這表明基因座CS1 具有高度多態(tài)性。在此之后有更多的大麻STR 基因座被開發(fā)出來，如 ALGHANIM 等開發(fā)了 C11-CANN1、B01-CANN1 和D02-CNAA1 等11 個(gè)具有多態(tài)性的 STR基因座；VALVERDE 等開發(fā)了 5159、4910 和 1528等6 個(gè)四核苷酸重復(fù)STR 基因座，這也是首次報(bào)道的大麻四核苷酸重復(fù)STR 基因座。

此外，大麻STR 基因座復(fù)合擴(kuò)增體系的研究也隨之展開。 HOWARD 等根據(jù)先前的研究報(bào)道，篩選到 ANUCS301、ANUCS302 和 ANUCS303 等 10 個(gè)大麻STR 基因座，并成功構(gòu)建了大麻STR 基因座復(fù)合擴(kuò)增體系，首次根據(jù)SWGDAM 驗(yàn)證指南對(duì)該體系進(jìn)行靈敏度、穩(wěn)定性以及物種特異性等方面的研究。 VALVERDE 等對(duì) 15 個(gè)大麻 STR 基因座的不同等位基因進(jìn)行測序分析，并根據(jù)國際法醫(yī)遺傳學(xué)會(huì) （International Society for Forensic Genetics，ISFG）準(zhǔn)則首次提出了大麻STR 基因座的命名方案——基于核心序列重復(fù)次數(shù)的命名法。 測序結(jié)果顯示：D02-CANN1、B05-CANN1、B02-CANN2、E07-CANN1 和ANUCS501 為簡單而穩(wěn)定的基因座，這也是法醫(yī)學(xué)中推薦使用的STR 基因座；基因座 H09-CANN2、H11-CANN1 和 ANUCS308 為二核苷酸重復(fù)，其表現(xiàn)出高stutter 峰和雜合子不均衡，且基因座ANUCS308 還被報(bào)道在33%的樣本中出現(xiàn)丟失現(xiàn)象，因此并不推薦使用這3 個(gè)基因座用于大麻STR 復(fù)合擴(kuò)增體系的構(gòu)建。 HOUSTON 等篩除了上述性能較差的STR 基因座并結(jié)合VALVERDE 等開發(fā)的6 個(gè)四核苷酸重復(fù)基因座，成功構(gòu)建了包含13 個(gè)基因座的STR 復(fù)合擴(kuò)增體系，并證明該體系可用于大麻樣品的鑒定分析。

目前，國內(nèi)對(duì)于大麻STR 基因座的研究才剛剛起步，關(guān)于大麻復(fù)合擴(kuò)增體系的研究還不夠深入。馬原等選取擴(kuò)增條件相近、雜合度較高的3 個(gè)基因座 ANUCS301、ANUCS305 和 CS1 對(duì)大麻進(jìn)行個(gè)體和群體遺傳多態(tài)性分析。 結(jié)果顯示，所構(gòu)建的大麻STR 基因座熒光擴(kuò)增檢測體系具有良好的組織同一性，基因座CS1 和ANUCS305 具有良好的種屬特異性，且CS1 具有高度多態(tài)性，ANUCS305 具有中度多態(tài)性。該研究為利用STR 遺傳信息推斷毒品原植物大麻的品種和產(chǎn)地提供了理論基礎(chǔ)。

販毒案件中查獲的大麻檢材，多為同一產(chǎn)地或者不同產(chǎn)地的一種或者幾種，如果能對(duì)大麻進(jìn)行準(zhǔn)確的種屬鑒定和個(gè)體識(shí)別，不僅可幫助警方打擊毒品犯罪，還使得不同地區(qū)販毒案件的毒源追蹤成為可能。 上述研究表明，STR 基因座復(fù)合擴(kuò)增體系可對(duì)大麻進(jìn)行種屬鑒定、個(gè)體識(shí)別及來源地推斷。 但目前為止，國內(nèi)外已開發(fā)的大麻STR 基因座較少，僅有33 個(gè)，其中法醫(yī)遺傳學(xué)中常用的四核苷酸重復(fù)基因座僅有6 個(gè)，且對(duì)于大麻STR 基因座復(fù)合擴(kuò)增體系的研究仍處于初級(jí)階段，也尚未建立一個(gè)全球通用的大麻STR 數(shù)據(jù)庫。 因此，仍需投入更多的時(shí)間、人力和財(cái)力去開發(fā)符合要求的STR 基因座，這也在一定程度上制約了STR 遺傳標(biāo)記在大麻研究中的應(yīng)用和發(fā)展。

1.4 單核苷酸多態(tài)性

單核苷酸多態(tài)性（Single Nucleotide Polymorphism，SNP）是指基因組中特定部位單個(gè)核苷酸變異引起的DNA 序列多態(tài)性，被稱為第三代DNA 遺傳標(biāo)記。 與第一代遺傳標(biāo)記RFLP 及第二代遺傳標(biāo)記STR 截然不同，SNP 是單個(gè)堿基的轉(zhuǎn)換和顛倒。SNP 作為目前最具發(fā)展?jié)摿Φ倪z傳標(biāo)記，因具有數(shù)量豐富、分布廣泛、突變率低以及易于實(shí)現(xiàn)大規(guī)模自動(dòng)化檢測等優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于分子遺傳學(xué)、動(dòng)植物遺傳育種、法醫(yī)遺傳學(xué)、疾病診斷和治療等眾多應(yīng)用領(lǐng)域。 劉易科等利用90 K SNP 芯片技術(shù)對(duì)國內(nèi)240 個(gè)小麥品種進(jìn)行全基因組掃描，分析其遺傳多樣性。 結(jié)果顯示，我國各省市間小麥種質(zhì)資源交流較為頻繁，但部分品種遺傳相似度較高，因此急需引入新的小麥種質(zhì)，拓寬遺傳基礎(chǔ)。

目前，通過全基因組測序技術(shù)獲得多態(tài)性SNP位點(diǎn)已在水稻、小麥、玉米等農(nóng)作物中廣泛應(yīng)用，但針對(duì)大麻SNP 的研究甚少。ROTHERHAM 等基于四氫大麻酚酸（Tetrahydrocannabinol acid, THCA）合酶基因中399 bp 片段內(nèi)的4 個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，運(yùn)用SNP 技術(shù)對(duì)94 株大麻樣本（包含10 株未知樣本）進(jìn)行測序。 結(jié)果顯示，該研究開發(fā)的SNP 測定法能夠以100%的成功率識(shí)別毒品大麻樣本，同時(shí)還能區(qū)分大麻和其他物種。 SOORNI 等使用簡化基因組的測序方法對(duì)98 株大麻樣本進(jìn)行酶切、測序和分型，結(jié)果共檢測到24 710 個(gè)高質(zhì)量的 SNP 位點(diǎn)。 樣本間分析結(jié)果顯示，纖維大麻與毒品大麻之間的遺傳差異并不局限于THCA 合酶基因中，而是廣泛分布于整個(gè)基因組中。 陳璇等基于全基因組重測序技術(shù)對(duì)采自中國的野生型和栽培型大麻進(jìn)行全基因組重測序，并通過與大麻參考基因組（Cansat3_genome）進(jìn)行比對(duì)，共檢測到 2 264 150 個(gè)SNP 位點(diǎn)。 該研究結(jié)果表明，野生型大麻與栽培型大麻在基因組水平上存在一定的差異，這為野生型和栽培型大麻遺傳分離群體的構(gòu)建及遺傳標(biāo)記的開發(fā)提供理論基礎(chǔ)。

SNP 作為新一代分子標(biāo)記，以其數(shù)量多、分布廣、遺傳穩(wěn)定性高以及易于自動(dòng)化分型等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域。隨著SNP 分型檢測方法的不斷進(jìn)步，特別是與DNA 芯片技術(shù)相結(jié)合，使得檢測的準(zhǔn)確性更為可靠。現(xiàn)階段SNP 技術(shù)應(yīng)用于大麻的研究更多的存在于理論方面，但對(duì)于其他物種的研究已較為成熟。 因此，未來應(yīng)用測序技術(shù)開發(fā)出更多能把不同地區(qū)、不同品種的大麻鑒別出來的SNP位點(diǎn)就顯的十分必要，而且利用SNP 所具有的基因定位功能，使得毒源追蹤成為可能。

2 總結(jié)與展望

毒品問題仍然是當(dāng)今世界面臨的重大社會(huì)問題之一，無論在中國還是在世界范圍內(nèi)，該問題都對(duì)人類的生存和社會(huì)的發(fā)展構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅。 目前涉及大麻類檢材的鑒定大多采用GC-MS 對(duì)生物檢材中的THC 進(jìn)行定性和定量分析，然而在特殊情況下（如大麻的緝獲量極少、化學(xué)分析未檢測到THC、幼苗期大麻、需要分析大麻種子和根等），常規(guī)的檢測方法可能會(huì)影響鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性。 此外，在一些大麻犯罪案件中，既需要將案件檢材進(jìn)行鑒定，又需要對(duì)樣本進(jìn)行個(gè)體化分析以推斷毒源，常規(guī)的檢測方法無法滿足需求。 大麻遺傳標(biāo)記的研究彌補(bǔ)了大麻形態(tài)學(xué)及生化檢測技術(shù)的不足，其中SCAR 遺傳標(biāo)記對(duì)于大麻性別的鑒定具有較好的穩(wěn)定性和特異性，被廣泛應(yīng)用于大麻性別研究。 盡管對(duì)于大麻DNA 條形碼的研究較少，但rbcL 序列、psbA-trnH 序列、ITS2 序列均被證明可作為大麻種屬鑒定的DNA 條形碼，但上述遺傳標(biāo)記均不能解決大麻個(gè)體識(shí)別及來源地推斷等問題。 就筆者所知，STR 是目前唯一一個(gè)被應(yīng)用于大麻個(gè)體化識(shí)別的遺傳標(biāo)記，然而我國對(duì)于大麻STR 基因座復(fù)合擴(kuò)增體系的研究仍處于空白階段。 SNP 作為第三代遺傳標(biāo)記，可鑒別出不同個(gè)體間的遺傳差異，但現(xiàn)階段SNP 技術(shù)應(yīng)用于大麻的研究更多存在于理論。

由于樣本獲取受限，國內(nèi)外對(duì)于大麻DNA 遺傳標(biāo)記的研究仍較緩慢，我國法庭科學(xué)也尚未有對(duì)大麻種屬鑒定和個(gè)體化識(shí)別的DNA 鑒定標(biāo)準(zhǔn)。 因此，大麻遺傳標(biāo)記的研究尤其是STR 基因座的開發(fā)以及復(fù)合擴(kuò)增體系的構(gòu)建仍需不斷完善，期望隨著大麻STR 數(shù)據(jù)庫的建立與完善，能夠?qū)崿F(xiàn)全球大麻信息共享，便于大麻的毒源追蹤，并探索出適用于我國大麻鑒定的DNA 鑒定標(biāo)準(zhǔn)。 此外，隨著對(duì)大麻SNP 的深入研究，期望開發(fā)出更多能鑒別不同地區(qū)、不同品種大麻的SNP 位點(diǎn)，為警方查找毒品來源、鏟除毒品種植基地提供線索。