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    2021年寧波市南美白對(duì)蝦苗種病原攜帶情況調(diào)查

    2022-11-04 07:41:46許昊川葛明峰徐開(kāi)崇夏武強(qiáng)王雯瓊徐勝威
    中國(guó)水產(chǎn) 2022年10期
    關(guān)鍵詞:蝦苗白對(duì)蝦南美

    文/許昊川 葛明峰 徐開(kāi)崇 夏武強(qiáng) 王雯瓊 徐勝威

    為了解寧波市南美白對(duì)蝦苗種病原攜帶情況,于2021年在寧波市象山、寧海、奉化、余姚、慈溪、鄞州等區(qū)縣主要南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖產(chǎn)區(qū)采集522批次蝦苗樣品,以PCR方法檢測(cè)樣品攜帶蝦肝腸胞蟲(chóng)(EHP)、急性肝胰腺壞死?。ˋHPND)、十足目虹彩病毒1(DIV1)和白斑綜合征病毒(WSSV)病原情況,結(jié)果表明近年來(lái)寧波市南美白對(duì)蝦苗種病原攜帶狀況日漸改善,并為下一步寧波市開(kāi)展南美白對(duì)蝦疾病防控工作提供參考。

    南美白對(duì)蝦作為一種生長(zhǎng)迅速、廣泛耐鹽、適應(yīng)性強(qiáng)的水產(chǎn)動(dòng)物,自引入寧波市以來(lái),在象山、寧海、慈溪、奉化、余姚、鄞州等地形成了一定養(yǎng)殖規(guī)模。目前寧波市南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖面積超過(guò)10萬(wàn)畝,每年產(chǎn)值超過(guò)10億元。

    與此同時(shí),養(yǎng)殖病害問(wèn)題日漸嚴(yán)重,蝦肝腸胞蟲(chóng)病、白斑綜合征、急性肝胰腺壞死病、十足目虹彩病毒病等疾病時(shí)有發(fā)生,導(dǎo)致養(yǎng)殖南美白對(duì)蝦大量死亡,給養(yǎng)殖戶造成巨大經(jīng)濟(jì)損失,對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖造成較大影響。

    為了摸清寧波市南美白對(duì)蝦疾病情況,降低疾病發(fā)生概率,寧波市于2021年采集象山、寧海、奉化、余姚、慈溪、鄞州等地蝦苗進(jìn)行蝦肝腸胞蟲(chóng)(EHP)、急性肝胰腺壞死病(AHPND)、十足目虹彩病毒1(DIV1)和白斑綜合征病毒(WSSV)等病原檢測(cè),統(tǒng)計(jì)寧波市南美白對(duì)蝦蝦苗病原攜帶率,以期為寧波市南美白對(duì)蝦疾病防控工作提供參考。

    一、材料與方法

    (一)試驗(yàn)材料

    2021年從象山、寧海、奉化、余姚、慈溪、鄞州等地養(yǎng)殖區(qū)和南美白對(duì)蝦苗種標(biāo)粗場(chǎng)采集樣品,共計(jì)522批次,每批次樣品不少于400尾。樣品置于充氧袋中或無(wú)水乙醇中固定后送至實(shí)驗(yàn)室,24h內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。具體采樣信息見(jiàn)表1。

    表1 樣品采集時(shí)間及數(shù)量信息(單位:批次)

    (二)方法

    1.樣品處理

    樣品送達(dá)實(shí)驗(yàn)室后,瀝干水分并以超純水沖洗,隨機(jī)取150尾左右蝦苗混合后研磨均質(zhì)待用,剩余蝦樣作為備份于-80℃保存。

    2.DNA提取

    利用DNA提取試劑盒提取樣品總DNA,于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    3.病原PCR檢測(cè)

    采用套式PCR檢測(cè),引物序列及目的條帶大小見(jiàn)表2。

    表2 引物序列和產(chǎn)物片段大小

    4.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)

    取5μL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,于1.5%瓊脂糖凝膠中(含核酸染料)電泳檢測(cè),并記錄檢測(cè)結(jié)果。

    5.數(shù)據(jù)處理

    使用Origin9.1軟件對(duì)采樣檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析及數(shù)據(jù)對(duì)比。其中陽(yáng)性樣品指攜帶任意一種或多種檢測(cè)病原的蝦苗樣品,整體陽(yáng)性數(shù)指來(lái)自同一區(qū)域的陽(yáng)性樣品總數(shù)。整體陽(yáng)性率=整體陽(yáng)性數(shù)/樣品總數(shù)×100%。

    二、結(jié)果與討論

    (一)病原檢出結(jié)果

    檢測(cè)病原包括WSSV、DIV1、EHP、AHPND,522批次南美白對(duì)蝦蝦苗中共計(jì)檢出21批次攜帶病原,整體陽(yáng)性率為4.02%。其中,EHP陽(yáng)性15批次,陽(yáng)性率2.87%;AHPND陽(yáng)性4批次,陽(yáng)性率0.77%;DIV1陽(yáng)性2批次,陽(yáng)性率0.38%;WSSV未檢出。具體各月份病原檢出情況見(jiàn)表3。

    表3 2021年度南美白對(duì)蝦苗種病原陽(yáng)性樣品月度分布情況(單位:批次)

    (二)蝦苗整體質(zhì)量評(píng)價(jià)

    由圖1可知,2016年以來(lái),寧波市南美白對(duì)蝦苗種病原攜帶率持續(xù)下降。2021年監(jiān)測(cè)的522批次蝦苗中,共計(jì)檢出21批次攜帶病原,整體陽(yáng)性率為4.02%,顯著低于2020年15.30%的整體陽(yáng)性率。WSSV實(shí)現(xiàn)清零,DIV1和AHPND檢出率低于1%,EHP陽(yáng)性檢出率為2020年的32%。這說(shuō)明寧波市南美白對(duì)蝦苗種疾病防控工作取得了良好效果。

    圖1 近五年寧波市蝦苗病原監(jiān)測(cè)陽(yáng)性率情況

    (三)蝦苗病原檢出率與時(shí)間關(guān)系

    從病原檢出時(shí)間來(lái)看,AHPND、DIV1均只在某一個(gè)月檢出,說(shuō)明不同月份該類病原出現(xiàn)有一定的偏向性;EHP在3、4、6、7、8月間均有檢出,且6月檢出陽(yáng)性率最高,EHP檢出的普遍性說(shuō)明寧波市蝦苗EHP攜帶風(fēng)險(xiǎn)仍較高,且6月份育苗條件可能更適合EHP繁衍。這一結(jié)果與2020年檢測(cè)結(jié)果相吻合,這表明6月是南美白對(duì)蝦感染EHP的高峰期,須提高警惕。

    (四)EHP的防控建議

    從多年的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)來(lái)看,在苗種階段,EHP為寧波市近幾年南美白對(duì)蝦陽(yáng)性檢出率最高的病原。EHP已成為制約寧波市南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖發(fā)展最重要和最為高發(fā)的疾病之一。

    寧波市歷年對(duì)蝦苗種病原監(jiān)測(cè)分析結(jié)果表明:6月份為南美白對(duì)蝦蝦苗EHP檢出率最高的時(shí)段,而8月份為南美白對(duì)蝦養(yǎng)成期對(duì)蝦EHP檢出率最高期。這一數(shù)據(jù)提示本地養(yǎng)殖條件下,被EHP感染的蝦苗在養(yǎng)殖40天左右可能出現(xiàn)明顯癥狀,需要養(yǎng)殖戶密切觀察。

    目前EHP仍無(wú)有效治療措施,EHP在環(huán)境中的傳播機(jī)制尚不明確,但已有證據(jù)表明EHP可以在環(huán)境中經(jīng)由養(yǎng)殖餌料、水體實(shí)現(xiàn)水平傳播,還可由親蝦傳染至子代實(shí)現(xiàn)垂直傳播,傳染能力較強(qiáng)?;鶎羽B(yǎng)殖戶應(yīng)重視每年養(yǎng)殖前的消毒工作,減少其環(huán)境傳播的風(fēng)險(xiǎn)。養(yǎng)殖過(guò)程中,也應(yīng)盡量做到養(yǎng)殖工具專池專用,降低養(yǎng)殖塘口之間的疾病傳播概率。在購(gòu)苗、選苗時(shí)應(yīng)加強(qiáng)苗種病原檢測(cè),放養(yǎng)SPF苗種,在源頭上把關(guān)病原的輸入性傳播。

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