吡非尼酮通過miRNA-425-5p調(diào)控TGF-β/Smad通路對(duì)大鼠心肌纖維化的影響

鄒琳，張昕，李麗

心力衰竭（heart failure，HF）標(biāo)志著心臟疾病發(fā)展到終末階段，其臨床特征為不同程度的呼吸困難、體力活動(dòng)受限、體液潴留。心肌纖維化是正常心肌組織受損后被纖維化組織替代，喪失心肌正常結(jié)構(gòu)、功能的病理性進(jìn)程，是獨(dú)立于射血分?jǐn)?shù)之外的心力衰竭患者死亡的重要因素之一。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）是在心肌纖維化的進(jìn)展中起主導(dǎo)作用的關(guān)鍵因子，可通過啟動(dòng)多條信號(hào)通路推動(dòng)心肌纖維化進(jìn)程，其中TGF-β/Smad通路是啟動(dòng)心肌纖維化的關(guān)鍵通路。微小RNA（microRNA，miRNA）是一類長(zhǎng)度為15～25個(gè)核苷酸的短鏈非編碼RNA，多條miRNA被證實(shí)與心肌纖維化進(jìn)程有關(guān)［1］。miRNA-425-5p可以通過抑制TGF-β/Smad通路改善心肌纖維化水平，對(duì)治療心肌梗死后心肌纖維化具有重要的研究及臨床意義［2］。吡非尼酮是一類小分子抗纖維化藥物，在臨床上廣泛應(yīng)用于特發(fā)性肺纖維化的治療，其作用機(jī)制與抗炎、抑制TGF-β/Smad信號(hào)通路有關(guān)［3］。現(xiàn)階段吡非尼酮尚未應(yīng)用于心肌纖維化的治療。本研究擬采用開胸結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支建立心肌梗死大鼠模型，并通過體外培養(yǎng)心肌成纖維細(xì)胞，觀察吡非尼酮能否通過上調(diào)miRNA-425-5p抑制TGF-β/Smad信號(hào)通路來減輕心肌纖維化程度，從而改善心肌梗死大鼠心臟功能。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物60只SPF級(jí)58～60日齡雄性SD大鼠，體質(zhì)量（300±20）g，購自內(nèi)蒙古大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（蒙）2016-0001。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開始實(shí)驗(yàn)，期間自由攝食、飲水。20只SPF級(jí)1～3日齡SD乳鼠，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2012-0001。

1.2主要試劑與儀器吡非尼酮膠囊（艾思瑞，北京康蒂尼藥業(yè)有限公司）；吡非尼酮（北京譜析科技有限公司；貨號(hào)53179-13-8）；水合氯醛、白細(xì)胞介素6（IL-6，批號(hào)CKE30219）、Ⅰ型膠原α2（COL1α2，批號(hào)CK-E31131）、Ⅲ型膠原纖維α1（COL3α1，批號(hào)CK-E37320）試劑盒均購自上海機(jī)純實(shí)業(yè)有限公司；BCA蛋白定量試劑盒（Thermo，PICPI23223）；RIPA組織細(xì)胞快速裂解液（北京索萊寶科技有限公司，R0020）；蛋白預(yù)染Marker（Fermentas，SM1811）；TGF-β1（批號(hào)Ab215715）、GAPDH（批號(hào)Ab9485）兔單克隆抗體購自英國(guó)Abcam公司；Smad2（批號(hào)#5339）、Smad3（批號(hào)#9523）兔單克隆抗體購自美國(guó)CST公司；山羊抗兔IgG（H+L）HRP購自美國(guó)Thermo公司（貨號(hào)31460）；Lipofectamine 2000試劑（Thermo）；miRNA-425-5p mimic及實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）引物由上海信帆生物科技有限公司合成；SYBR Green PCR試 劑 盒（Thermo，#K0223）；逆 轉(zhuǎn) 錄 試 劑 盒（Fermentas，#K1622）；Trizol（invitrogen，1596-026）。mini protean 3 cell型電泳儀（美國(guó)BIO-RAD公司），TE77XP型電轉(zhuǎn)儀（美國(guó)HOEFER公司），MK3型酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司），Vivid E9型心動(dòng)超聲儀器（美國(guó)GE公司），Real-time檢測(cè)儀（美國(guó)ABI公司），TG-16M型低溫冷凍離心機(jī)（上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司）。

1.3方法

1.3.1動(dòng)物分組、造模及給藥60只SD大鼠，按隨機(jī)數(shù)字表法抽取10只作為假手術(shù)組（只穿線不結(jié)扎），其余50只造模。大鼠術(shù)前禁食水12 h，腹腔內(nèi)注射10%水合氯醛（注射劑量0.4 g/kg）。麻醉后固定于手術(shù)臺(tái)上，連接心電圖儀器，備皮、消毒、經(jīng)喉氣管插管，連接小動(dòng)物呼吸機(jī)，調(diào)整呼吸機(jī)數(shù)值。依據(jù)參考文獻(xiàn)［4］方法并改進(jìn)建立大鼠心肌梗死模型。術(shù)后大鼠腹腔注射青霉素5萬U/d，連續(xù)注射3 d預(yù)防感染。造模后假手術(shù)組全部存活，其余50只造模后存活35只，15只均于結(jié)扎后24 h內(nèi)死亡。各組大鼠于術(shù)后給與正常飲食，成模大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組17只和吡非尼酮組18只。造模4 d后吡非尼酮組給予0.3 g/kg灌胃給藥，每日1次，其余2組給予等量超純水灌胃，連續(xù)4周。

1.3.2大鼠心臟多普勒超聲檢測(cè)大鼠在末次給藥12 h后進(jìn)行10%水合氯醛0.4 g/kg腹腔注射麻醉。麻醉后固定、備皮，采用心臟多普勒超聲檢測(cè)大鼠左心室收縮期末徑（LVESd）、左心室舒張期末徑（LVEDd）、左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）、左心室短軸縮短率（FS）。每只大鼠測(cè)8個(gè)心動(dòng)周期，取平均值。操作及分析由?？漆t(yī)生完成。

1.3.3酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)IL-6、COL1α2、COL3α1水平處死動(dòng)物當(dāng)天取大鼠腹主動(dòng)脈血，置于抗凝管中搖勻，3 000 r/min離心20 min，收集上清液。采用ELISA法按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，檢測(cè)大鼠血漿中IL-6、COL1α2、COL3α1水平。每組取10個(gè)樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3.4大鼠心肌組織處理處死大鼠，剪下心臟，生理鹽水灌洗心腔，洗凈心腔內(nèi)殘余血液，將結(jié)扎處以下心室壁從心底到心尖切為3等份，分別用于Masson染色、Western blot和qPCR。將第一部分置于4%多聚甲醛中固定，剩余部分置于-80℃冰箱凍存。

1.3.5Masson染色洗掉心肌組織甲醛，梯度乙醇浸泡脫水，二甲苯透明，浸蠟，切片。取覆蓋整個(gè)梗死部位的石蠟切片，Masson染色，觀察膠原纖維及肌纖維的形態(tài)及分布。使用Image-Pro Plus 6.0分析各組心肌膠原容積分?jǐn)?shù)（CVF）。CVF=膠原面積/視野總面積×100%。每組取10個(gè)樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3.6Western blot法檢測(cè)心肌組織中TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表達(dá)取-80℃保存的心肌組織，置于冰上研磨，加入裂解液。裂解后的樣品4℃、12 000×g離心15 min，取上清液進(jìn)行BCA蛋白定量。加入適量上樣緩沖液，沸水浴10min后離心取等量蛋白上樣。十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，PVDF轉(zhuǎn)膜；5%脫脂奶粉室溫封閉1 h，分別加入TGF-β1、Smad2、Smad3一抗（稀釋倍數(shù)均1∶1 000）室溫孵育2 h；隨后加入HRP標(biāo)記的二抗（1∶1 000稀釋），與膜37℃孵育1 h；條帶用發(fā)光液發(fā)光，照片用Gel-Pro Analyzer 4.0軟件分析。每組取4個(gè)樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3.7qPCR檢測(cè)心肌組織中TGF-β1和miRNA-425-5p表達(dá)取適量大鼠心肌組織，提取組織總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA。按照試劑盒說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，配制PCR反應(yīng)液，總體系為25 μL，PCR反應(yīng)條件為95℃30 s；95℃5 s，60℃30 s，共40個(gè)循環(huán)。引物序列見表1。目的基因的相對(duì)表達(dá)水平用2-ΔΔCt表示。每組取3個(gè)樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

肉眼觀察牙根數(shù)目，上頜第一前磨牙單根型為42.95%，雙根型為57.05%(P>0.05)；而下頜第一磨牙單根型(94.67%)顯著高于雙根型(5.33%)(P<0.05)(表2)。

1.3.8心肌成纖維細(xì)胞分離、培養(yǎng)與分組1～3日齡SD乳鼠消毒、開胸取心臟，去除心房、大血管等組織，將組織消化，收集細(xì)胞懸液種植于培養(yǎng)瓶中，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中差速貼壁法去除心肌細(xì)胞。原代培養(yǎng)得到的非心肌細(xì)胞加入DMEM培養(yǎng)液，傳代培養(yǎng)2～3代。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，按照2×105個(gè)/孔標(biāo)準(zhǔn)接種于培養(yǎng)板上。分為對(duì)照組、miRNA-425-5p mimic組和吡非尼酮組，進(jìn)行藥物干預(yù)。

1.3.9細(xì)胞轉(zhuǎn)染及藥物干預(yù)對(duì)照組不做處理。miRNA-425-5p mimic組按照Lipofectamine 2000說明書，于細(xì)胞融合80%左右時(shí)，將miRNA-425-5p mimic轉(zhuǎn)染至心肌成纖維細(xì)胞。吡非尼酮組加入吡非尼酮，使其終濃度為1.5 g/L。各組細(xì)胞培養(yǎng)6 h后更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24 h后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3.10qPCR檢測(cè)各組細(xì)胞中miRNA-425-5p與TGF-β1mRNA表達(dá)用胰酶將各組細(xì)胞消化制成單細(xì)胞懸液，細(xì)胞計(jì)數(shù)，稀釋為1×106個(gè)/mL。引物序列見表1，其余步驟參考1.3.7。每個(gè)樣本重復(fù)3次。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 26.0統(tǒng)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示；多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用LSD-t法，2組間比較采用t檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

Tab.1 Sequences of the primers表1引物序列

2 結(jié)果

2.1 3組大鼠心功能對(duì)比與假手術(shù)組相比，模型組大鼠LVEDd、LVESd顯著增大，LVEF、FS顯著降低（P＜0.05），吡非尼酮組與模型組相比大鼠心臟LVEDd、LVESd縮小，LVEF、FS顯著升高（P＜0.05）。見圖1、表2。

2.2 3組大鼠心肌纖維化程度大鼠心肌經(jīng)Masson染色，心肌組織與胞質(zhì)呈紅色，膠原纖維呈藍(lán)色。假手術(shù)組心肌組織間有極少量膠原纖維，模型組心肌組織間可見明顯的膠原纖維沉積，吡非尼酮組纖維化程度較模型組明顯減輕。模型組大鼠CVF為4.12%±0.66%，與假手術(shù)組的17.98%±0.88%相比，心肌纖維化程度明顯增加。吡非尼酮組CVF為10.35%±0.82%，與模型組相比心肌纖維化程度減輕（n=10，F(xiàn)=770.880，P＜0.01）。見圖2。

2.3 3組大鼠血漿中IL-6、COL1α2、COL3α1水平比較與假手術(shù)組相比，模型組大鼠血漿中IL-6、COL1α2、COL3α1水平明顯增高（P＜0.05）；與模型組相比較，吡非尼酮組大鼠血漿中IL-6、COL1α2、COL3α1水平明顯降低（P＜0.05）。見表3。

Fig.1 Results of cardiac color ultrasound in three groups of rats圖1 3組大鼠心臟彩超結(jié)果

Fig.2 Heart histopathological changes in the three groups of rats(Masson,×100)圖2 3組大鼠心臟組織病理學(xué)變化（Masson染色，×100）

Tab.2 Comparison of the heart structure and function between the three groups of rats表2 3組大鼠心臟結(jié)構(gòu)及功能比較 （±s）

Tab.2 Comparison of the heart structure and function between the three groups of rats表2 3組大鼠心臟結(jié)構(gòu)及功能比較 （±s）

＊＊P＜0.01；a與假手術(shù)組比較，b與模型組比較，P＜0.05。

組別假手術(shù)組模型組吡非尼酮組F n 10 17 18 LVEF 0.815±0.015 0.608±0.021a 0.723±0.022ab 348.388＊＊FS 0.482±0.061 0.286±0.062a 0.397±0.046ab 41.636＊＊LVEDd（mm）6.61±0.18 7.75±0.42a 7.09±0.25ab 44.271＊＊LVESd（mm）1.22±0.10 2.99±0.23a 1.96±0.20ab 290.946＊＊

Tab.3 Comparison of plasma levels of IL-6,COL1α2 and COL3α1 between the three groups of rats表3 3組大鼠血漿IL-6、COL1α2、COL3α1水平比較（n=10，ng/L，±s）

Tab.3 Comparison of plasma levels of IL-6,COL1α2 and COL3α1 between the three groups of rats表3 3組大鼠血漿IL-6、COL1α2、COL3α1水平比較（n=10，ng/L，±s）

＊＊P＜0.01；a與假手術(shù)組比較，b與模型組比較，P＜0.05。

組別假手術(shù)組模型組吡非尼酮組F IL-6 60.99±5.89 101.80±3.04a 80.71±4.80ab 186.376＊＊COL1α2 15.16±1.31 27.24±1.03a 20.99±2.21ab 143.790＊＊COL3α1 15.09±1.70 28.25±1.23a 22.28±1.71ab 179.023＊＊

2.4 3組大鼠心肌組織中TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表達(dá)水平比較與假手術(shù)組相比，模型組大鼠心肌組織中TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表達(dá)升高（P＜0.05）；與模型組相比較，吡非尼酮組大鼠心肌組織中TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表達(dá)水平降低（P＜0.05）。見圖3、表4。

Fig.3 The protein expression levels of TGF-β1,Smad2 and Smad3 in myocardial tissues of rats detected by Western blot assay圖3 Western blot檢測(cè)3組大鼠心肌組織TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表達(dá)

Tab.4 Comparison of protein expression levels of myocardial tissue TGF-β1,Smad2 and Smad3 between the three groups of rats表4 3組大鼠心肌組織TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表達(dá)水平比較 （n=4，±s）

Tab.4 Comparison of protein expression levels of myocardial tissue TGF-β1,Smad2 and Smad3 between the three groups of rats表4 3組大鼠心肌組織TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表達(dá)水平比較 （n=4，±s）

＊＊P＜0.01；a與假手術(shù)組比較，b與模型組比較，P＜0.05。

組別假手術(shù)組模型組吡非尼酮組F TGF-β1 0.40±0.02 0.97±0.07a 0.71±0.03ab 155.789＊＊Smad2 0.58±0.01 1.09±0.02a 0.76±0.03ab 689.734＊＊Smad3 0.56±0.07 1.12±0.04a 0.86±0.02ab 127.620＊＊

2.5 3組大鼠心肌組織中miRNA-425-5p水平的比較模型組大鼠心肌組織中miRNA-425-5p相對(duì)表達(dá)量為0.99±0.01，與假手術(shù)組的3.36±0.11相比，表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05）；吡非尼酮組大鼠心肌組織中miRNA-425-5p相對(duì)表達(dá)量為1.77±0.14，與模型組相比表達(dá)水平明顯升高（n=3，F(xiàn)=536.613，P＜0.05）。

2.6 3組大鼠心肌成纖維細(xì)胞中miRNA-425-5p與TGF-β1 mRNA表達(dá)水平的比較與對(duì)照組相比，miRNA-425-5p mimic組大鼠心肌成纖維細(xì)胞中miRNA-425-5p表達(dá)水平明顯升高，TGF-β1 mRNA水平明顯降低（P＜0.05）；與對(duì)照組相比，吡非尼酮組大鼠心肌成纖維細(xì)胞中miRNA-425-5p表達(dá)水平明顯升高，TGF-β1 mRNA表達(dá)水平明顯降低（均P＜0.05）。見表5。

Tab.5 Comparison of mRNA relative expression levels of TGF-β1 and miRNA-425-5p between the three groups of rats表5 3組大鼠心肌成纖維細(xì)胞TGF-β1、miRNA-425-5p mRNA相對(duì)表達(dá)量比較 （n=3，±s）

Tab.5 Comparison of mRNA relative expression levels of TGF-β1 and miRNA-425-5p between the three groups of rats表5 3組大鼠心肌成纖維細(xì)胞TGF-β1、miRNA-425-5p mRNA相對(duì)表達(dá)量比較 （n=3，±s）

＊＊P＜0.01；a與對(duì)照組比較，b與miRNA-425-5p mimic組比較，P＜0.05。

組別對(duì)照組miRNA-425-5p mimic組吡非尼酮組F TGF-β1 2.08±0.07 0.93±0.03a 1.30±0.02ab 515.251＊＊miRNA-425-5p 1.31±0.03 3.78±0.20a 2.16±0.02ab 356.347＊＊

3 討論

吡非尼酮是第一個(gè)通過重復(fù)、隨機(jī)、安慰劑對(duì)照的Ⅲ期臨床試驗(yàn)證明對(duì)特發(fā)性肺纖維化有治療效果的藥物。有研究表明，吡非尼酮同樣可以減輕心力衰竭患者左心室心肌纖維化程度［5］。本研究通過結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈制備心肌梗死模型與培養(yǎng)大鼠心肌成纖維細(xì)胞，從體外與體內(nèi)兩個(gè)方面探討了吡非尼酮改善心肌纖維化的作用與機(jī)制。

3.1 吡非尼酮可以改善心肌梗死大鼠的心臟功能心肌梗死是心肌缺血性疾病的終末表現(xiàn)，其病理生理學(xué)表現(xiàn)為功能性心肌細(xì)胞的死亡、缺失，引起心臟功能下降，導(dǎo)致不良預(yù)后。應(yīng)用吡非尼酮可以改善心肌梗死大鼠的心肌肥厚與左心室收縮功能，該作用可能是通過調(diào)節(jié)腎素-血管緊張素系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的［6］。本研究心臟彩超結(jié)果證明了吡非尼酮可以改善心肌梗死大鼠心臟功能。

3.2 應(yīng)用吡非尼酮可以減輕心肌梗死后的心肌纖維化進(jìn)程心肌纖維化是心臟損傷后發(fā)生的心肌間質(zhì)重塑，心肌成纖維細(xì)胞異常增殖活化，膠原纖維大量分泌，壞死的心肌細(xì)胞被膠原基質(zhì)瘢痕替代的病理進(jìn)程。參與心肌纖維化的主要膠原纖維為Col-Ⅰ、Col-Ⅲ。在生理狀態(tài)下，Col-Ⅰ、Col-Ⅲ等膠原蛋白的合成、分解處于動(dòng)態(tài)平衡，而心肌梗死發(fā)生后，膠原蛋白大量分泌，其合成大于分解，沉積于心肌間質(zhì)，導(dǎo)致心肌纖維化［7］。膠原纖維的過量堆積將導(dǎo)致心肌僵硬度的提高，引起心功能損害和心室肌重構(gòu)，最終導(dǎo)致不良事件的發(fā)生。本研究結(jié)果表明，應(yīng)用吡非尼酮可以改善心肌梗死大鼠心肌纖維化程度。

3.3 吡非尼酮可以通過抗炎作用減輕心肌纖維化心肌梗死后單核細(xì)胞與巨噬細(xì)胞分泌大量炎性因子，在心肌纖維化進(jìn)程中起到重要作用［8］。IL-6是一類多效應(yīng)細(xì)胞因子，敲除IL-6基因可明顯減輕高脂飲食誘導(dǎo)心肌病小鼠的心肌纖維化程度［9］。另有研究表明，心肌成纖維細(xì)胞也可以分泌IL-6，通過旁分泌途徑作用于心肌細(xì)胞，促使心肌肥厚與纖維化［10］。IL-6影響心肌纖維化是通過IL-6-Ca2+/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶Ⅱ-STAT3與IL-6-絲裂原活化蛋白激酶途徑實(shí)現(xiàn)的［11］。本研究結(jié)果顯示，與模型組相比，吡非尼酮組大鼠血漿中IL-6水平明顯降低，提示吡非尼酮減輕心肌梗死后心肌纖維化進(jìn)程與其抗炎作用有關(guān)。

3.4 吡非尼酮可通過抑制TGF-β/Smad信號(hào)通路改善心肌纖維化TGF-β/Smad通路是調(diào)控心肌纖維化進(jìn)程的最主要通路之一。TGF-β/Smad信號(hào)通路可通過炎癥、心肌細(xì)胞凋亡、心肌肥大、心肌纖維化等多種進(jìn)程參與心室重構(gòu)。研究表明，注射異丙腎上腺素所致的大鼠心肌重塑模型中，炎性因子IL-6、TNF-α含量明顯增加，TGF-β/Smad通路激活，同時(shí)出現(xiàn)了心肌細(xì)胞的凋亡［12］。有研究表明，當(dāng)給予血管緊張素Ⅱ阻斷劑時(shí)，TGF-β減少，TAK1-p38磷酸化受抑制，同時(shí)可通過調(diào)節(jié)TGF-β/Smad通路抑制小鼠心肌肥大［13］。此外，心室壓力負(fù)荷實(shí)驗(yàn)表明，TGF-β表達(dá)水平隨心肌纖維化的增加明顯升高，過表達(dá)TGF-β1的轉(zhuǎn)基因小鼠心肌纖維化程度明顯加重［14］。梗死后心肌纖維化大鼠模型中p-Smad3與t-Smad3的表達(dá)較正常組明顯上升［15］。本研究結(jié)果表明，與模型組相比，吡非尼酮組大鼠心肌組織中TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表達(dá)明顯降低，提示吡非尼酮改善心肌纖維化與抑制TGF-β/Smad信號(hào)通路相關(guān)。

3.5 吡非尼酮可通過調(diào)節(jié)miRNA-425-5p表達(dá)水平抑制TGF-β/Smad信號(hào)通路miRNA與梗死后心力衰竭心肌纖維化進(jìn)程密切相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-425-5p可以通過調(diào)控靶基因CREB1抑制心肌纖維化的發(fā)生［16］。本研究細(xì)胞部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見，相比對(duì)照組，吡非尼酮組大鼠心肌成纖維細(xì)胞中miRNA-425-5p水平明顯升高，TGF-β1 mRNA水平明顯降低，證明了吡非尼酮可通過提高miRNA-425-5p的表達(dá)來抑制TGF-β/Smad信號(hào)通路。

綜上所述，吡非尼酮可通過調(diào)節(jié)miRNA-425-5p的表達(dá)抑制TGF-β/Smad信號(hào)通路，減輕炎癥反應(yīng)，改善心肌纖維化，治療心肌梗死，改善心臟功能。