• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    磷脂型二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸對(duì)脂多糖所致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用及機(jī)制

    2022-10-28 07:18:00黃玉潔郝儀銘周夢(mèng)晴伍梓健楊玉紅劉小芳王保珍
    食品科學(xué) 2022年19期
    關(guān)鍵詞:預(yù)防性磷酸化試劑盒

    黃玉潔,郝儀銘,2,周夢(mèng)晴,伍梓健,楊玉紅,劉小芳,王保珍,杜 磊,2,*

    (1.山東大學(xué)齊魯醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院,山東 濟(jì)南 250012;2.山東大學(xué)附屬濟(jì)南市中心醫(yī)院專科轉(zhuǎn)化研究中心,山東 濟(jì)南 250013;3.齊魯工業(yè)大學(xué)(山東省科學(xué)院)食品科學(xué)與工程學(xué)院,山東 濟(jì)南 250353;4.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所,農(nóng)業(yè)農(nóng)村部極地漁業(yè)開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東 青島 266071)

    肝臟作為人體最大的實(shí)質(zhì)器官,具有分泌膽汁、代謝、凝血、解毒和免疫等功能,在維持人體健康生理活動(dòng)中起至關(guān)重要的作用。病毒感染、氧化應(yīng)激、酒精、藥物等多種因素可導(dǎo)致急性肝損傷,嚴(yán)重者甚至發(fā)展為肝衰竭,造成重大健康威脅。因此,尋找新的并且安全有效的肝損傷保護(hù)食品功能因子具有重要意義。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的組成成分,在急性肝損傷的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起重要作用。因此,LPS誘導(dǎo)的急性肝損傷動(dòng)物模型常被用來(lái)探尋能有效防治急性肝損傷的干預(yù)措施。

    海洋食品富含-3系多不飽和脂肪酸,特別是二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)和二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA),二者具有抗炎、改善糖脂代謝、促進(jìn)視覺(jué)和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育等多種生物活性。不同海洋食品中DHA和EPA存在的分子形式不同,南海鳶烏賊()屬于鞘亞綱、槍形目、柔魚科,其生命周期短、生長(zhǎng)率高、繁殖力強(qiáng),是一種極具開(kāi)發(fā)潛力的頭足類海洋漁業(yè)資源。我國(guó)南海海域鳶烏賊資源豐富,其高值化加工利用是當(dāng)前的熱點(diǎn)問(wèn)題。冰島刺參()屬于海參綱、枝手目、瓜參科,是我國(guó)市場(chǎng)上消費(fèi)量較大的低值海參品種。課題組前期研究發(fā)現(xiàn),南海鳶烏賊卵以及冰島刺參體壁中分別富含磷脂型DHA(DHA-enriched phospholipids,DHA-PL)和磷脂型EPA(EPA-enriched phospholipids,EPA-PL),且其對(duì)高脂飲食所致代謝綜合征具有良好預(yù)防作用。與其他分子形式DHA和EPA相比,DHA-PL和EPA-PL的生物利用率更高,且具有更好的抗氧化穩(wěn)定性。然而,目前鮮見(jiàn)DHA-PL和EPA-PL對(duì)LPS誘導(dǎo)的急性肝損傷影響的報(bào)道。因此,本研究考察DHA-PL和EPA-PL對(duì)LPS所致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用并初步分析其分子機(jī)制,以期為南海鳶烏賊和冰島刺參的高值化利用以及開(kāi)發(fā)具有保肝護(hù)肝功效的新型海洋食品功能因子提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 動(dòng)物、材料與試劑

    雄性6 周齡健康C57BL/6J小鼠購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司,生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(京)2016-0006,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào):SYXK(魯)2020-0022。

    南海鳶烏賊和冰島刺參 青島市南山水產(chǎn)市場(chǎng);LPS 美國(guó)Sigma-Aldrich公司;天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase,AST)和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)試劑盒 南京建成生物工程有限公司;二喹啉甲酸(bicinchoninic acid,BCA)蛋白濃度測(cè)定試劑盒(增強(qiáng)型)和動(dòng)物組織RNA提取試劑盒 上海碧云天生物技術(shù)有限公司;小鼠腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白細(xì)胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-6酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)試劑盒 美國(guó)R&D Systems公司;逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)試劑盒 日本TaKaRa公司;絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)如細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases 1/2,ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(phosphorylated-ERK1/2,p-ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、磷酸化JNK(phosphorylated-JNK,p-JNK)、p38、磷酸化p38(phosphorylated-p38,p-p38)、核因子(nuclear factor,NF)-κB p65、磷酸化NF-κB p65(phosphorylated-NF-κB p65,p-NF-κB p65)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)以及山羊抗兔免疫球蛋白G辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記二抗 美國(guó)Cell Signaling Technology公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    BSA224S-CW電子天平 賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司;5430R離心機(jī) 德國(guó)Eppendorf公司;Bioprep-24R制冷型生物樣品均質(zhì)儀 杭州奧盛儀器有限公司;Excelsior AS全自動(dòng)組織脫水機(jī)、CTM6石蠟封片機(jī)和Gemini AS自動(dòng)玻片染色機(jī) 美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司;EC 350-1包埋機(jī)和HM 325切片機(jī)德國(guó)Microm公司;LightCycler 480實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng) 瑞士Roche公司;IX70型倒置熒光顯微鏡日本Olympus公司;Infinite M200 Pro多功能酶標(biāo)儀瑞士TECAN公司。

    1.3 方法

    1.3.1 DHA-PL和EPA-PL的制備

    參照課題組前期研究方法分別從南海鳶烏賊卵以及冰島刺參體壁中提取、分離和純化DHA-PL和EPA-PL。制備得到的DHA-PL和EPA-PL經(jīng)高效液相色譜法檢測(cè)純度分別為93.7%和92.5%。氣相色譜法分析結(jié)果顯示,DHA-PL中DHA質(zhì)量分?jǐn)?shù)為38.3%,EPA-PL中EPA質(zhì)量分?jǐn)?shù)為42.0%。

    1.3.2 動(dòng)物模型的建立和處理

    32 只雄性6 周齡C57BL/6J小鼠于SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng),溫度(22±2)℃、相對(duì)濕度(50±10)%、12 h/12 h光照循環(huán)。實(shí)驗(yàn)期間小鼠自由飲食飲水。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格遵照山東大學(xué)公共衛(wèi)生倫理委員會(huì)相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后,按隨機(jī)數(shù)字表法分為4 組,每組8 只:正常對(duì)照組(Control)、模型組(LPS)、DHA-PL干預(yù)組(LPS+DHA-PL)和EPA-PL干預(yù)組(LPS+EPA-PL)?!吨袊?guó)居民膳食營(yíng)養(yǎng)素參考攝入量(2013版)》中將成年人DHA+EPA的宏量營(yíng)養(yǎng)素可接受范圍(acceptable macronutrient distribution ranges,AMDR)定為0.25~2.00 g/d,結(jié)合前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果,DHA-PL和EPA-PL分別制備成脂質(zhì)體并以400 mg/kg劑量連續(xù)給予小鼠灌胃28 d,灌胃體積為10 mL/kg。Control組和LPS組小鼠每天按20 mL/kg灌胃生理鹽水。第29天時(shí),Control組小鼠經(jīng)腹腔注射無(wú)菌生理鹽水,其余小鼠腹腔注射劑量為10 mg/kg的LPS,注射體積為10 mL/kg,建立急性肝損傷模型。6 h后,小鼠摘眼球取血,室溫靜置30 min后,1 000×、4 ℃離心10 min,分離收集血清備用。隨后,小鼠引頸處死,取肝臟并稱質(zhì)量,計(jì)算肝指數(shù)(肝質(zhì)量/小鼠體質(zhì)量×100%),肝臟保存于-80 ℃進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

    1.3.3 血清ALT和AST活力測(cè)定

    按對(duì)應(yīng)試劑盒說(shuō)明書測(cè)定小鼠血清ALT和AST活力。

    1.3.4 肝組織病理學(xué)檢查

    取小鼠相同部位的肝組織置于10%中性福爾馬林溶液固定48 h,經(jīng)脫水、浸蠟、包埋和切片等步驟制成4 μm厚的石蠟切片,蘇木精-伊紅染色后于光學(xué)顯微鏡下觀察各組小鼠肝組織病理學(xué)變化。

    1.3.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測(cè)定促炎細(xì)胞因子mRNA相對(duì)表達(dá)水平

    利用RNA柱式提取試劑盒提取各組小鼠肝組織中總RNA,檢測(cè)RNA濃度和完整性后取1 μg RNA逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。設(shè)計(jì)合成引物并以cDNA作為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增。以作為內(nèi)參,根據(jù)2計(jì)算基因mRNA相對(duì)表達(dá)水平。本研究所用引物(表1)委托生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

    表1 本研究所用基因引物序列Table 1 Primer sequences used in this study

    1.3.6 小鼠肝臟中促炎細(xì)胞因子含量的測(cè)定

    稱取0.1 g小鼠肝組織,按1∶9(/)的比例加入預(yù)冷生理鹽水,在制冷型生物樣品均質(zhì)儀中勻漿,12 000×、4 ℃條件下離心15 min,收集組織勻漿上清液。利用ELISA檢測(cè)試劑盒分別測(cè)定小鼠肝組織上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6含量,并使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒檢測(cè)肝組織上清液蛋白質(zhì)量濃度進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理。

    1.3.7 蛋白免疫印跡法檢測(cè)蛋白相對(duì)表達(dá)水平

    稱取0.1 g小鼠肝組織,加入含蛋白酶/磷酸酶抑制劑和苯甲基磺酰氟(phenylmethanesulfonyl fluoride,PMSF)的RIPA裂解液,在制冷型生物樣品均質(zhì)儀中進(jìn)行組織勻漿,測(cè)定蛋白濃度。將蛋白樣品高溫變性后,經(jīng)10%十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE),濕法轉(zhuǎn)印至聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluoride,PVDF)膜上。室溫下用5%脫脂奶粉封閉1 h,分別加入p-ERK1/2、ERK1/2、p-JNK、JNK、p-p38、p38、p-NF-κB p65、NF-κB p65和GAPDH一抗(1∶1 000,TBST稀釋),4 ℃孵育12 h,TBST洗滌3 次后,加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗室溫孵育1 h,TBST再次洗滌3 次后,通過(guò)增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光試劑(enhanced chemiluminescence,ECL)顯色,采用5200 multi全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光圖像處理系統(tǒng)(上海天能科技有限公司)進(jìn)行圖像分析,ImageJ軟件進(jìn)行蛋白條帶灰度分析,以GAPDH作為內(nèi)參,分析目的蛋白的相對(duì)表達(dá)水平,蛋白的磷酸化水平以磷酸化蛋白與對(duì)應(yīng)蛋白條帶灰度的比值表征。

    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

    實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行單因素方差分析,采用Tukey’s事后檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性分析。當(dāng)<0.05時(shí),表示組間差異顯著。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 DHA-PL和EPA-PL對(duì)小鼠體質(zhì)量、肝質(zhì)量和肝指數(shù)的影響

    如表2所示,各組小鼠體質(zhì)量無(wú)顯著性差異(>0.05),但與Control組相比,LPS組小鼠肝臟質(zhì)量和肝指數(shù)極顯著升高(<0.01),但DHA-PL和EPA-PL預(yù)防性干預(yù)可明顯抑制LPS所致小鼠肝質(zhì)量以及肝指數(shù)的增加。

    表2 DHA-PL和EPA-PL對(duì)LPS處理后小鼠體質(zhì)量、肝質(zhì)量和肝指數(shù)的影響(n=8)Table 2 Effects of DHA-PL and EPA-PL on body mass, liver mass and hepatic index in LPS-treated mice (n = 8)

    2.2 DHA-PL和EPA-PL對(duì)小鼠血清ALT和AST活力的影響

    ALT和AST是反映肝損傷最敏感的指標(biāo)。如圖1所示,與Control組相比,LPS組小鼠血清ALT和AST活力極顯著升高(<0.01),而DHA-PL和EPA-PL預(yù)防性干預(yù)可有效抑制ALT(<0.01)和AST活力(<0.01、<0.05)的升高。

    圖1 DHA-PL和EPA-PL對(duì)LPS處理后小鼠血清ALT(A)和AST(B)活力的影響Fig. 1 Effects of DHA-PL and EPA-PL on serum ALT (A) and AST (B)activities in LPS-treated mice

    2.3 DHA-PL和EPA-PL對(duì)小鼠肝組織形態(tài)學(xué)變化的影響

    各組小鼠肝組織蘇木精-伊紅染色結(jié)果如圖2所示,正常小鼠肝組織形態(tài)正常,肝細(xì)胞胞質(zhì)豐富,無(wú)病變、無(wú)壞死、無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn),肝小葉結(jié)構(gòu)清晰完整,肝細(xì)胞索呈放射狀排列。LPS作用6 h后可見(jiàn)小鼠肝組織受損明顯,大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。DHA-PL和EPA-PL預(yù)防性干預(yù)后小鼠肝組織病變較輕,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)不明顯。上述結(jié)果提示,DHA-PL和EPA-PL預(yù)防性干預(yù)可有效保護(hù)LPS誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷。

    圖2 DHA-PL和EPA-PL對(duì)LPS處理后小鼠肝組織形態(tài)學(xué)變化的影響(200×)Fig. 2 Effects of DHA-PL and EPA-PL on hepatic histopathology in LPS-treated mice (200 ×)

    2.4 DHA-PL和EPA-PL對(duì)小鼠肝臟中促炎細(xì)胞因子表達(dá)的影響

    如圖3所示,與Control組相比,LPS組小鼠肝臟中TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表達(dá)水平和含量極顯著升高(<0.01);DHA-PL和EPA-PL預(yù)防性干預(yù)可極顯著抑制LPS誘導(dǎo)的TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表達(dá)水平以及含量的增加(<0.01)。

    圖3 DHA-PL和EPA-PL對(duì)LPS處理后小鼠肝臟中促炎細(xì)胞因子mRNA相對(duì)表達(dá)水平(A)和含量(B)的影響Fig. 3 Effects of DHA-PL and EPA-PL on mRNA levels (A) and contents (B) of pro-inflammatory cytokines in LPS-treated mice

    2.5 DHA-PL和EPA-PL對(duì)小鼠肝臟中MAPK和NF-κB信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白表達(dá)水平的影響

    MAPK和NF-κB信號(hào)通路被認(rèn)為是介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵信號(hào)通路。蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與Control組相比,LPS組小鼠肝臟中p-ERK1/2/ERK1/2、p-JNK/JNK、p-p38/p38及p-NF-κB p65/NF-κB p65極顯著上調(diào)(<0.01);DHA-PL和EPA-PL預(yù)防性干預(yù)可有效抑制ERK1/2、JNK、p38以及NF-κB p65蛋白的磷酸化(圖4)。上述結(jié)果提示DHA-PL和EPA-PL可能通過(guò)抑制MAPK和NF-κB信號(hào)通路的激活改善LPS誘導(dǎo)的肝組織炎癥反應(yīng)。

    圖4 DHA-PL和EPA-PL對(duì)LPS處理后小鼠肝臟中MAPKs和NF-κB信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白表達(dá)水平的影響Fig. 4 Effects of DHA-PL and EPA-PL on protein expression of key factors involved in MAPKs and NF-κB signaling pathways in LPS-treated mice

    3 討 論

    急性肝損傷是以肝功能迅速惡化為臨床特點(diǎn)的急性綜合征,嚴(yán)重者會(huì)出現(xiàn)肝臟大面積壞死甚至肝衰竭,病死率較高。研究表明,腸道來(lái)源的內(nèi)毒素是造成肝功能損傷的重要因素,在LPS刺激下,肝竇狀隙內(nèi)的枯否細(xì)胞發(fā)生M1型極化,可分泌大量促炎細(xì)胞因子,導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷,并可分泌趨化因子招募中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞進(jìn)入肝臟,進(jìn)一步加重炎癥介導(dǎo)的肝損傷。

    南海鳶烏賊卵和冰島刺參體壁富含DHA和EPA,且主要結(jié)合在甘油磷脂的-2位上,磷脂在小腸中被磷脂酶A催化釋放游離型DHA和EPA以及溶血磷脂,溶血磷脂在小腸細(xì)胞中重新合成磷脂,被機(jī)體吸收利用。研究發(fā)現(xiàn),-3系多不飽和脂肪酸和磷脂具有護(hù)肝作用,但鮮見(jiàn)DHA-PL和EPA-PL對(duì)急性肝損傷影響的報(bào)道。因此,本研究通過(guò)腹腔注射LPS模擬急性肝損傷的病理過(guò)程,考察DHA-PL和EPA-PL對(duì)急性肝損傷是否具有保護(hù)作用。當(dāng)肝組織受損時(shí),肝細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)被破壞,通透性增加,導(dǎo)致肝細(xì)胞中ALT和AST大量釋放入血,從而使血清中ALT和AST活力升高。通過(guò)比較各組小鼠血清中ALT和AST活力發(fā)現(xiàn),DHA-PL和EPA-PL預(yù)防性干預(yù)可顯著降低LPS暴露引起小鼠血清ALT和AST活力的升高(<0.01、<0.05),提示DHA-PL和EPA-PL能有效緩解LPS誘導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷。肝組織病理學(xué)結(jié)果顯示,DHA-PL和EPA-PL預(yù)防性干預(yù)可明顯減少LPS誘導(dǎo)的小鼠肝細(xì)胞中炎性細(xì)胞浸潤(rùn),保護(hù)肝組織結(jié)構(gòu)正常。促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6等作為反映炎癥水平的指標(biāo),在急性肝損傷進(jìn)程中發(fā)揮重要作用。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),DHA-PL和EPA-PL預(yù)防性干預(yù)可明顯下調(diào)LPS誘導(dǎo)的小鼠肝臟中TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表達(dá)水平和含量的升高,且其效果相近。上述結(jié)果提示,DHA-PL和EPA-PL可有效降低LPS誘導(dǎo)的急性肝損傷小鼠肝臟的炎癥水平。

    MAPKs是哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)廣泛存在的一類絲、蘇氨酸蛋白激酶,目前研究最廣泛的是ERK1/2、JNK和p38。LPS可激活ERK1/2、JNK和p38,導(dǎo)致核轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)活化后進(jìn)入細(xì)胞核,進(jìn)而促使肝組織中枯否細(xì)胞釋放大量炎癥介質(zhì),誘發(fā)炎癥反應(yīng)。NF-κB是炎癥反應(yīng)中另一個(gè)重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,LPS可誘導(dǎo)其活性亞基p65進(jìn)入細(xì)胞核,促使細(xì)胞內(nèi)TNF-α、IL-1β和IL-6等促炎細(xì)胞因子大量釋放,隨后進(jìn)一步活化NF-κB,形成炎癥“瀑布效應(yīng)”,加重肝損傷程度。本研究結(jié)果表明,LPS可誘導(dǎo)小鼠肝臟中ERK1/2、JNK、p38以及NF-κB p65磷酸化水平上升,DHA-PL和EPA-PL預(yù)防性干預(yù)可有效降低小鼠肝臟中上述蛋白的磷酸化水平。該結(jié)果提示DHA-PL和EPA-PL可能通過(guò)陰斷MAPK和NF-κB信號(hào)通路的激活進(jìn)而發(fā)揮其對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。另外,本研究發(fā)現(xiàn)DHA-PL和EPA-PL保護(hù)LPS所致小鼠急性肝損傷的效果大致相同,這或許與雖然DHA對(duì)促炎細(xì)胞因子的抑制作用更加廣泛,但EPA-PL的消化吸收速率慢于DHA-PL,可使動(dòng)物血液中EPA長(zhǎng)時(shí)間維持在較高水平有關(guān)。

    綜上,DHA-PL和EPA-PL均可有效保護(hù)LPS所致急性肝損傷,保護(hù)效果接近,且其抗炎保肝作用依賴于其對(duì)MAPK和NF-κB信號(hào)通路的調(diào)控。本研究結(jié)果為南海鳶烏賊和冰島刺參等水產(chǎn)品的高值化利用以及開(kāi)發(fā)具有保肝護(hù)肝的新型保健食品提供了理論基礎(chǔ)。

    猜你喜歡
    預(yù)防性磷酸化試劑盒
    ITSN1蛋白磷酸化的研究進(jìn)展
    2015款奔馳R400車預(yù)防性安全系統(tǒng)故障
    微表處在瀝青路面預(yù)防性養(yǎng)護(hù)中的應(yīng)用
    GlobalFiler~? PCR擴(kuò)增試劑盒驗(yàn)證及其STR遺傳多態(tài)性
    GoldeneyeTM DNA身份鑒定系統(tǒng)25A試劑盒的法醫(yī)學(xué)驗(yàn)證
    MAPK抑制因子對(duì)HSC中Smad2/3磷酸化及Smad4核轉(zhuǎn)位的影響
    館藏唐卡保管與預(yù)防性保護(hù)
    西藏科技(2015年1期)2015-09-26 12:09:22
    高等級(jí)公路機(jī)電系統(tǒng)預(yù)防性維護(hù)探索與實(shí)踐
    組蛋白磷酸化修飾與精子發(fā)生
    遺傳(2014年3期)2014-02-28 20:59:01
    牛結(jié)核病PCR診斷試劑盒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究
    在线看a的网站| 日本av免费视频播放| 亚洲久久久国产精品| 国产不卡av网站在线观看| 午夜影院在线不卡| 亚洲少妇的诱惑av| 久久精品国产a三级三级三级| 另类精品久久| 亚洲美女搞黄在线观看| av黄色大香蕉| 亚洲美女搞黄在线观看| 97在线人人人人妻| 国产日韩欧美在线精品| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 伊人久久国产一区二区| 亚洲少妇的诱惑av| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲av在线观看美女高潮| 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲成人一二三区av| 国产69精品久久久久777片| 国产在视频线精品| 免费大片18禁| 人人澡人人妻人| 天堂8中文在线网| 大片免费播放器 马上看| 亚洲欧美清纯卡通| 精品国产国语对白av| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 一级毛片我不卡| 日韩欧美精品免费久久| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲国产色片| 秋霞在线观看毛片| a级毛色黄片| 亚洲av综合色区一区| 如何舔出高潮| 国产一级毛片在线| 国产精品蜜桃在线观看| 18禁动态无遮挡网站| 亚洲av不卡在线观看| 久久久久久久国产电影| 日本91视频免费播放| 一级毛片aaaaaa免费看小| 亚洲精品一二三| 人妻一区二区av| 久久精品国产亚洲av涩爱| 老司机影院毛片| 国产av码专区亚洲av| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 99久久精品国产国产毛片| 国产精品熟女久久久久浪| 国产黄色视频一区二区在线观看| 99热全是精品| 免费看av在线观看网站| 熟妇人妻不卡中文字幕| 精品亚洲成a人片在线观看| 青春草视频在线免费观看| 国产精品国产av在线观看| a级片在线免费高清观看视频| 精品少妇黑人巨大在线播放| 五月开心婷婷网| 热re99久久国产66热| 久久亚洲国产成人精品v| 国国产精品蜜臀av免费| 精品卡一卡二卡四卡免费| 久久久久久伊人网av| 亚洲色图综合在线观看| 色吧在线观看| 国国产精品蜜臀av免费| 在线观看免费高清a一片| 亚洲欧美一区二区三区国产| 午夜精品国产一区二区电影| 乱码一卡2卡4卡精品| 在线播放无遮挡| 国产免费现黄频在线看| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 街头女战士在线观看网站| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产av国产精品国产| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 熟女人妻精品中文字幕| 婷婷色av中文字幕| 精品亚洲成a人片在线观看| 午夜免费观看性视频| 十八禁网站网址无遮挡| 国产有黄有色有爽视频| 男女啪啪激烈高潮av片| 一区在线观看完整版| xxx大片免费视频| 免费观看无遮挡的男女| 九色亚洲精品在线播放| 内地一区二区视频在线| 国产色婷婷99| 九草在线视频观看| 寂寞人妻少妇视频99o| 黄片无遮挡物在线观看| 中国三级夫妇交换| 亚洲情色 制服丝袜| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 51国产日韩欧美| 自线自在国产av| 精品人妻在线不人妻| 国产成人精品福利久久| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲熟女精品中文字幕| 欧美精品国产亚洲| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| av国产久精品久网站免费入址| 少妇 在线观看| 乱人伦中国视频| 久热这里只有精品99| 成人亚洲欧美一区二区av| 免费高清在线观看视频在线观看| 色婷婷av一区二区三区视频| 久久久亚洲精品成人影院| 午夜av观看不卡| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产一区二区在线观看av| 18禁在线播放成人免费| 春色校园在线视频观看| 999精品在线视频| 男人添女人高潮全过程视频| 伊人久久精品亚洲午夜| 两个人的视频大全免费| 久久99蜜桃精品久久| 亚洲精品色激情综合| 国产免费视频播放在线视频| 老司机亚洲免费影院| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲三级黄色毛片| www.av在线官网国产| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 亚洲精品,欧美精品| 97超视频在线观看视频| 最近中文字幕高清免费大全6| 在现免费观看毛片| 中文字幕免费在线视频6| 在线观看免费视频网站a站| 看十八女毛片水多多多| 18在线观看网站| 日韩三级伦理在线观看| 国产av国产精品国产| 日韩一区二区三区影片| 老女人水多毛片| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 欧美日韩视频精品一区| 久久久久久伊人网av| 天美传媒精品一区二区| 男人爽女人下面视频在线观看| 欧美日韩亚洲高清精品| 高清在线视频一区二区三区| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产男女超爽视频在线观看| 母亲3免费完整高清在线观看 | 97精品久久久久久久久久精品| 国产亚洲精品第一综合不卡 | av有码第一页| 国产精品一国产av| 一级片'在线观看视频| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲人成网站在线播| 午夜福利,免费看| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产精品偷伦视频观看了| 日韩中文字幕视频在线看片| 精品久久久久久久久av| 9色porny在线观看| 一本久久精品| 欧美 日韩 精品 国产| 久久久精品免费免费高清| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 一本色道久久久久久精品综合| 热re99久久国产66热| 麻豆精品久久久久久蜜桃| av视频免费观看在线观看| 国产免费福利视频在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 久久 成人 亚洲| 麻豆乱淫一区二区| 国产又色又爽无遮挡免| 女性生殖器流出的白浆| 亚洲美女视频黄频| 日韩成人av中文字幕在线观看| 少妇人妻精品综合一区二区| av在线app专区| 亚洲中文av在线| 亚洲天堂av无毛| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 久久毛片免费看一区二区三区| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲欧洲国产日韩| 日本爱情动作片www.在线观看| 久久人人爽人人片av| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 色网站视频免费| 日韩中字成人| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲人与动物交配视频| 中文字幕久久专区| 色94色欧美一区二区| 男人操女人黄网站| 精品一区在线观看国产| 国产精品熟女久久久久浪| 国产在线一区二区三区精| 大香蕉久久网| 在线看a的网站| 最近最新中文字幕免费大全7| 一级二级三级毛片免费看| 简卡轻食公司| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲经典国产精华液单| 国产精品偷伦视频观看了| 夫妻午夜视频| 美女cb高潮喷水在线观看| 中文字幕制服av| 亚洲无线观看免费| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲综合色网址| 我要看黄色一级片免费的| 乱人伦中国视频| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲怡红院男人天堂| 一区二区三区四区激情视频| 国产精品一二三区在线看| 精品人妻在线不人妻| 高清黄色对白视频在线免费看| 色婷婷av一区二区三区视频| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| 看免费成人av毛片| 美女主播在线视频| xxxhd国产人妻xxx| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 蜜桃在线观看..| 久久久午夜欧美精品| 丰满乱子伦码专区| 日韩 亚洲 欧美在线| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 日本欧美视频一区| 欧美xxⅹ黑人| 欧美精品国产亚洲| 久久久久网色| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 边亲边吃奶的免费视频| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 国产高清三级在线| 亚洲人成77777在线视频| 欧美日韩精品成人综合77777| 成人漫画全彩无遮挡| 亚洲欧美一区二区三区国产| 精品一品国产午夜福利视频| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 久久久久久久大尺度免费视频| 一个人看视频在线观看www免费| 日本色播在线视频| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 中文字幕制服av| 成人亚洲精品一区在线观看| 最黄视频免费看| 久久韩国三级中文字幕| 极品少妇高潮喷水抽搐| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产精品熟女久久久久浪| 国产淫语在线视频| 一级,二级,三级黄色视频| 国产亚洲最大av| 久热久热在线精品观看| 亚洲在久久综合| 美女主播在线视频| 久久午夜福利片| 在线观看人妻少妇| 亚洲一区二区三区欧美精品| 一级a做视频免费观看| 51国产日韩欧美| 麻豆成人av视频| 日本wwww免费看| 一本大道久久a久久精品| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲情色 制服丝袜| 中文字幕亚洲精品专区| 岛国毛片在线播放| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲精品日本国产第一区| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 最黄视频免费看| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产av码专区亚洲av| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 韩国av在线不卡| 涩涩av久久男人的天堂| 久久国产精品大桥未久av| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 老司机影院成人| 97超碰精品成人国产| 街头女战士在线观看网站| 免费观看无遮挡的男女| 精品亚洲成a人片在线观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 国国产精品蜜臀av免费| 麻豆乱淫一区二区| 国产精品.久久久| 亚洲国产欧美在线一区| 99热全是精品| 亚洲在久久综合| 极品人妻少妇av视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲性久久影院| 久久久久久伊人网av| 人妻系列 视频| 女人久久www免费人成看片| 亚洲av男天堂| 欧美 亚洲 国产 日韩一| av视频免费观看在线观看| 69精品国产乱码久久久| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产av一区二区精品久久| av女优亚洲男人天堂| 热99久久久久精品小说推荐| 男人操女人黄网站| 亚洲国产最新在线播放| 成年女人在线观看亚洲视频| 日产精品乱码卡一卡2卡三| av卡一久久| 一级毛片aaaaaa免费看小| 欧美精品一区二区免费开放| 91久久精品国产一区二区成人| videos熟女内射| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 91在线精品国自产拍蜜月| 少妇精品久久久久久久| 大香蕉久久成人网| 日日摸夜夜添夜夜爱| 91成人精品电影| av播播在线观看一区| 人妻人人澡人人爽人人| 国产av一区二区精品久久| 观看av在线不卡| 日韩欧美精品免费久久| 美女中出高潮动态图| av在线观看视频网站免费| 亚洲成人手机| 免费人成在线观看视频色| 男人操女人黄网站| 精品国产国语对白av| 久久久精品免费免费高清| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲,欧美,日韩| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 亚洲精品第二区| 老司机影院毛片| 夫妻午夜视频| 久久久久久久大尺度免费视频| 寂寞人妻少妇视频99o| 日韩成人av中文字幕在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 成人毛片60女人毛片免费| 久久99热这里只频精品6学生| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 在线观看免费日韩欧美大片 | videosex国产| 97在线视频观看| 亚洲少妇的诱惑av| 这个男人来自地球电影免费观看 | 韩国高清视频一区二区三区| 九九在线视频观看精品| 国产精品三级大全| 免费黄网站久久成人精品| 视频在线观看一区二区三区| av在线播放精品| 一级毛片aaaaaa免费看小| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲精品日本国产第一区| 九草在线视频观看| 色哟哟·www| 丝瓜视频免费看黄片| 在线观看免费日韩欧美大片 | 日本黄大片高清| 久久青草综合色| 精品视频人人做人人爽| 搡女人真爽免费视频火全软件| 熟女人妻精品中文字幕| 九草在线视频观看| 精品久久久久久久久av| 久久久久久人妻| 2022亚洲国产成人精品| 美女内射精品一级片tv| 97超碰精品成人国产| 爱豆传媒免费全集在线观看| 欧美 日韩 精品 国产| 母亲3免费完整高清在线观看 | 亚洲精品一二三| 十分钟在线观看高清视频www| 另类精品久久| 国产成人精品无人区| 亚洲色图综合在线观看| 日韩一区二区视频免费看| 精品国产一区二区久久| 青春草国产在线视频| 插逼视频在线观看| 国产成人av激情在线播放 | 纵有疾风起免费观看全集完整版| 久久97久久精品| 免费看不卡的av| 十分钟在线观看高清视频www| 久久精品久久久久久久性| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 天美传媒精品一区二区| 亚洲丝袜综合中文字幕| 91aial.com中文字幕在线观看| 日韩亚洲欧美综合| 黄色一级大片看看| 男女高潮啪啪啪动态图| 丝袜喷水一区| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 亚洲成人一二三区av| freevideosex欧美| 免费日韩欧美在线观看| 久久精品人人爽人人爽视色| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 中文字幕久久专区| 国产成人免费观看mmmm| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 日韩av不卡免费在线播放| av国产久精品久网站免费入址| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产男女内射视频| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产一区二区三区av在线| 狂野欧美激情性bbbbbb| 亚洲第一区二区三区不卡| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲精品久久成人aⅴ小说 | 国产精品久久久久久精品电影小说| 黑丝袜美女国产一区| 久久97久久精品| 欧美人与善性xxx| 久久ye,这里只有精品| 曰老女人黄片| 国产欧美亚洲国产| 成人影院久久| 精品一品国产午夜福利视频| 亚洲国产av影院在线观看| 飞空精品影院首页| 亚洲精品,欧美精品| 国产精品一区www在线观看| 九九在线视频观看精品| 免费观看无遮挡的男女| 蜜桃在线观看..| 日韩av免费高清视频| 丝袜喷水一区| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 免费看av在线观看网站| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产av码专区亚洲av| 我的老师免费观看完整版| 亚洲成人手机| 亚洲在久久综合| 免费av中文字幕在线| 在线观看一区二区三区激情| 精品国产一区二区久久| 成人二区视频| 三级国产精品欧美在线观看| 午夜福利视频精品| 人妻一区二区av| 一级毛片电影观看| 日韩电影二区| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产精品国产三级专区第一集| 丝袜脚勾引网站| 欧美xxⅹ黑人| 大片免费播放器 马上看| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 校园人妻丝袜中文字幕| 午夜视频国产福利| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 亚洲,欧美,日韩| 一级a做视频免费观看| 国产成人精品一,二区| 一级毛片 在线播放| 日日啪夜夜爽| 搡女人真爽免费视频火全软件| 妹子高潮喷水视频| 久久久午夜欧美精品| a 毛片基地| 欧美xxⅹ黑人| 美女cb高潮喷水在线观看| 欧美日韩综合久久久久久| 久久 成人 亚洲| www.av在线官网国产| xxxhd国产人妻xxx| 亚洲性久久影院| av天堂久久9| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 一本色道久久久久久精品综合| 极品少妇高潮喷水抽搐| 69精品国产乱码久久久| 亚洲精品456在线播放app| 国产精品成人在线| 另类精品久久| 国产 一区精品| 51国产日韩欧美| 久久免费观看电影| 欧美xxxx性猛交bbbb| 精品人妻偷拍中文字幕| 简卡轻食公司| 美女大奶头黄色视频| 女性被躁到高潮视频| 亚洲av日韩在线播放| 国产老妇伦熟女老妇高清| 三级国产精品欧美在线观看| 美女国产高潮福利片在线看| 边亲边吃奶的免费视频| 国产片特级美女逼逼视频| 大话2 男鬼变身卡| 免费观看的影片在线观看| 熟女电影av网| 一区二区三区乱码不卡18| 99精国产麻豆久久婷婷| 丰满少妇做爰视频| 精品国产露脸久久av麻豆| 春色校园在线视频观看| 精品熟女少妇av免费看| 老司机亚洲免费影院| 亚洲av日韩在线播放| 国产精品嫩草影院av在线观看| 中文天堂在线官网| 狂野欧美激情性bbbbbb| 这个男人来自地球电影免费观看 | 丝袜喷水一区| 国产一区二区三区av在线| 99久国产av精品国产电影| 久久精品人人爽人人爽视色| 久久午夜福利片| 99视频精品全部免费 在线| 美女cb高潮喷水在线观看| 少妇高潮的动态图| 精品一区在线观看国产| 亚洲丝袜综合中文字幕| √禁漫天堂资源中文www| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 麻豆乱淫一区二区| 久久99蜜桃精品久久| 丰满饥渴人妻一区二区三| 日本午夜av视频| 亚洲图色成人| 久久久久久久久大av| 久久久国产欧美日韩av| 七月丁香在线播放| 黄色欧美视频在线观看| √禁漫天堂资源中文www| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产亚洲最大av| 不卡视频在线观看欧美| 国产成人a∨麻豆精品| 国产免费现黄频在线看| 亚洲国产最新在线播放| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 老司机影院成人| 这个男人来自地球电影免费观看 | 国产成人午夜福利电影在线观看| 亚洲国产精品一区三区| 国产探花极品一区二区| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 99精国产麻豆久久婷婷| 一本一本综合久久| 中文天堂在线官网| 亚洲精品第二区| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 欧美日韩亚洲高清精品| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 夫妻午夜视频| 麻豆成人av视频| 久久国产亚洲av麻豆专区| 精品国产露脸久久av麻豆| 老司机影院成人| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 热re99久久精品国产66热6| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 新久久久久国产一级毛片| av又黄又爽大尺度在线免费看| 成人午夜精彩视频在线观看| 9色porny在线观看| 女人久久www免费人成看片| 国产精品久久久久成人av| 日韩av不卡免费在线播放| 欧美3d第一页| 精品国产一区二区久久| 在线观看一区二区三区激情| √禁漫天堂资源中文www| 人妻一区二区av| 91精品伊人久久大香线蕉| 老司机影院毛片| 亚洲av免费高清在线观看| 人成视频在线观看免费观看| 久久人人爽人人片av| 成人黄色视频免费在线看| 老熟女久久久| 精品久久国产蜜桃| 精品少妇黑人巨大在线播放| av卡一久久| 国产成人精品无人区| 青春草国产在线视频| 少妇丰满av| 国产成人精品一,二区|