永春佛手茶對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠的輔助保護(hù)功能及主要成分分析

彭佳堃，戴偉東，顏涌泉，武檸子，張信岳，李 欽，董明花，陳 丹，高健健，林 智

（1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部茶樹生物學(xué)與資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州 310008；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究生院，北京 100081；3.永春縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，福建 泉州 362600；4.浙江省神經(jīng)精神疾病藥物研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州 310013）

永春佛手烏龍茶是以福建省永春縣‘佛手’茶樹品種（cv. Foshou）的鮮葉為原料，經(jīng)過曬青、做青（涼青、搖青）、炒青、揉捻、初烘、包揉、復(fù)烘、復(fù)包揉、足火的加工工藝制成。根據(jù)焙火工藝的不同，可分為清香型和濃香型永春佛手，經(jīng)過5 年以上貯藏后可進(jìn)一步形成具有陳香風(fēng)味的陳香型烏龍茶。永春佛手烏龍茶因具有獨(dú)特的香櫞香而受到福建、廣東、東南亞等地區(qū)人民的喜愛。永春佛手鮮葉烘干樣中茶多酚（34.3%）和兒茶素（20.6%）相對(duì)含量高于鐵觀音（茶多酚22.1%、兒茶素12.2%），咖啡堿含量差異不大，此外用永春佛手品種制成的烏龍茶，其黃酮類成分含量高于其他品種烏龍茶，達(dá)到10.68～12.81 mg/g。茶葉中的黃酮類化合物主要以糖苷形式存在，具有抗氧化、抗腫瘤和抑菌等活性。烏龍茶具有多種生物活性，如抗過敏、降血糖、減肥降脂、預(yù)防心血管疾病等，對(duì)于人體具有良好的保健功效。除了上述作用，永春佛手烏龍茶可能還具有保護(hù)胃腸道的功能。福建省永春縣民間常用永春佛手烏龍茶治療結(jié)腸炎等胃腸道疾病；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明，對(duì)乙酸性結(jié)腸炎模型大鼠灌胃3 g/kg的永春佛手茶湯，能夠明顯減少模型大鼠的黏液便和縮短便血持續(xù)時(shí)間，其糞便形成和局部炎癥均得到改善，表明永春佛手茶湯對(duì)大鼠乙酸性結(jié)腸炎具有較為顯著的療效。

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）是一種常見炎癥性腸病，復(fù)發(fā)率高且病情易反復(fù)，臨床表現(xiàn)主要為帶血腹瀉、里急后重、腹痛、大便急癥、體質(zhì)量下降等。對(duì)病理部位觀察發(fā)現(xiàn)，患者結(jié)腸和直腸出現(xiàn)黏膜炎癥性潰瘍，產(chǎn)生白細(xì)胞浸潤、氧化和亞硝化應(yīng)激、促炎細(xì)胞因子水平上調(diào)等病征。該病的病因復(fù)雜，可能與環(huán)境感染、遺傳因素、免疫失調(diào)、腸道微生物等多種因素有關(guān)。Nie Jiayan等通過分析公共數(shù)據(jù)庫的相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)軟飲料的攝入會(huì)增加患UC的風(fēng)險(xiǎn)，而大量飲茶則有可能降低該風(fēng)險(xiǎn)。研究表明，綠茶提取物通過降低炎癥部位的氧化應(yīng)激，對(duì)乙酸誘導(dǎo)的UC具有保護(hù)作用，其中兒茶素等多酚類物質(zhì)是起到關(guān)鍵作用的化學(xué)成分。茶紅素是紅茶中主要的多酚類物質(zhì)之一，40 mg/kg的茶紅素預(yù)處理10 d可顯著改善UC引起的腹瀉和結(jié)腸結(jié)構(gòu)破壞。烏龍茶中也存在大量的多酚類物質(zhì)，包括兒茶素、聚酯型兒茶素、黃酮及黃酮苷等成分，目前鮮有系統(tǒng)研究烏龍茶對(duì)UC保護(hù)作用的報(bào)道。三硝基苯磺酸（2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid，TNBS）誘導(dǎo)的UC在各種組織學(xué)特征方面類似于人體炎癥性腸病，包括中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤結(jié)腸黏膜，以及炎癥因子水平的增加。本研究通過探究永春佛手烏龍茶提取物對(duì)TNBS誘導(dǎo)的UC模型小鼠的保護(hù)作用，結(jié)合多種生理指標(biāo)對(duì)3 種香型（清香型、濃香型、陳香型）永春佛手烏龍茶進(jìn)行比較，以期為永春佛手烏龍茶對(duì)胃腸道疾病的保健功效提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

BALB/c雄性小鼠，體質(zhì)量18～22 g，由上海市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（滬）2018-0006。小鼠飼養(yǎng)于杭州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（SPF級(jí)），溫度18～24 ℃，相對(duì)濕度60%～80%，全價(jià)顆粒飼料由杭州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

清香型、濃香型和陳香型永春佛手烏龍茶由永春縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局收集，為春季采摘駐芽2～4 葉嫩梢及對(duì)夾葉經(jīng)過傳統(tǒng)工藝制作而成，陳香型烏龍茶為永春佛手茶貯藏10 年的樣品。上述茶葉與水以1∶20（/）的比例煮沸30 min，過濾后冷凍干燥獲得3 種香型烏龍茶提取物，密封后置于干燥處保存?zhèn)溆谩?/p>

5%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同）TNBS、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（epigallocatechin gallate，EGCG）、表兒茶素沒食子酸酯（epicatechin gallate，ECG）、表沒食子兒茶素（epigallocatechin，EGC）、表兒茶素（epicatechin，EC）、茶沒食子素、沒食子酸、槲皮素3--葡萄糖苷、槲皮素3--半乳糖苷、山柰酚3--半乳糖苷、山柰酚3--蕓香糖苷、牡荊素、異牡荊素和楊梅苷標(biāo)準(zhǔn)品 美國Sigma公司；水合氯醛（分析純） 上海麥克林生化科技有限公司；無水乙醇（分析純） 上海凌峰化學(xué)試劑有限公司；白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-6、IL-10、IL-1β、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor α，TNF-α）酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒 上海酶聯(lián)生物科技有限公司；乙腈（色譜級(jí)） 德國Merck公司；甲酸（色譜級(jí)）日本東京化成工業(yè)株式會(huì)社；茶氨酸 北京百靈威科技有限公司；咖啡堿 美國Enzo Life Sciences公司。

1.2 儀器與設(shè)備

CYTATION1多功能微孔板酶標(biāo)儀 美國BioTek公司；BS分析天平 北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；DKB-600A電熱恒溫水浴鍋 上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；FD GOLD-SIM冷凍干燥機(jī) 美國西盟公司；BH-2光學(xué)顯微鏡 日本Olympus公司；超高效液相色譜-四極桿軌道阱質(zhì)譜（ultra high performance liquid chromatography-quadrupole orbital trap mass spectrometry，UHPLC-Q-Exactive/MS）儀 美國Thermo Fisher Scientific公司。

1.3 方法

1.3.1 干預(yù)組茶葉提取物劑量計(jì)算

按照成人（平均體質(zhì)量60 kg）每日平均飲茶量（5 g）計(jì)算，飲茶劑量為83.33 mg/（kg·d），參照文獻(xiàn)中成人（體質(zhì)量60 kg）與小鼠（體質(zhì)量20 g）的千克體質(zhì)量劑量折算系數(shù)為9.01計(jì)算，小鼠的飲茶劑量為750.83 mg/（kg·d）。按照上述茶葉提取物制備方法，提取率約為25%（冷凍干燥后獲得的茶葉提取物質(zhì)量占茶葉質(zhì)量的比例），則使用茶葉提取物時(shí)小鼠的實(shí)際劑量應(yīng)為187.71 mg/（kg·d），為方便計(jì)算，最終茶葉提取物的劑量設(shè)定為200 mg/（kg·d）。

1.3.2 急性UC模型小鼠建立

BALB/c雄性小鼠80 只隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組及茶葉提取物干預(yù)組（分別為清香組、濃香組、陳香組），每組16 只。適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，對(duì)照組和模型組灌胃給予生理鹽水（20 mL/kg），干預(yù)組灌胃相應(yīng)的茶葉提取物（劑量均為200 mg/（kg·d）、灌胃體積為20 mL/kg），灌胃第7天，禁食不禁水36 h后用10 g/100 mL水合氯醛溶液腹腔注射麻醉（5 mL/kg），除對(duì)照組外，均以0.1 mL含2% TNBS的50%（體積分?jǐn)?shù)，下同）乙醇溶液（按照（5% TNBS）∶（無水乙醇）∶（蒸餾水）＝4∶5∶1配制）灌腸誘導(dǎo)建立急性UC模型，對(duì)照組小鼠灌胃等體積50%乙醇溶液。記錄造模前與造模后小鼠體質(zhì)量，繼續(xù)灌胃生理鹽水和茶葉提取物7 d，劑量同上。

1.3.3 結(jié)腸組織質(zhì)量測定和組織病理學(xué)觀察

在造模后第7天，處死所有小鼠，取結(jié)腸組織，量取結(jié)腸長度并稱質(zhì)量，使用預(yù)冷的生理鹽水清洗干凈結(jié)腸，拍取典型結(jié)腸炎小鼠及正常組小鼠結(jié)腸照片，分裝結(jié)腸，使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%多聚甲醛溶液固定病理切片，用蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin staining，HE）進(jìn)行病理組織染色，光學(xué)顯微鏡觀察并拍照。

1.3.4 血清炎癥因子質(zhì)量濃度測定

在造模后第7天，處死所有小鼠，取血清，按照ELISA檢測試劑盒說明書測定血清IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α質(zhì)量濃度。

1.3.5 烏龍茶提取物中主要生化成分檢測

參考課題組前期已建立的方法，采用UHPLC-QExactive-MS檢測烏龍茶提取物中的主要生化成分，使用Xcalibur 4.2（ThermoFisher，美國）軟件，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)荷比和保留時(shí)間進(jìn)行定性，根據(jù)峰面積進(jìn)行定量。

液相色譜條件：色譜柱：HSS T3柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；柱溫40 ℃；二元流動(dòng)相A相為超純水（含0.1%（體積分?jǐn)?shù)，下同）甲酸），B相為乙腈（含0.1%甲酸），流速0.4 mL/min，進(jìn)樣量3 μL；洗脫程序?yàn)椋?～0.5 min，2% B；0.5～10.0 min，2%～15% B；10～18 min，15%～40% B；18～20 min，40%～90% B；20.0～20.9 min，90% B；20.9～21.0 min，90%～2% B；21～25 min，2% B。質(zhì)譜條件：電噴霧電離源，正離子模式；掃描范圍/80～1 200；噴霧電壓3.5 kV；鞘氣和輔助氣流速分別為45、10 L/min；輔助氣溫度350 ℃；離子傳輸管溫度300 ℃。

使用外標(biāo)法對(duì)主要成分進(jìn)行定量，沒食子兒茶素沒食子酸酯（gallocatechin gallate，GCG）、兒茶素沒食子酸酯（catechin gallate，CG）、沒食子兒茶素（gallocatechin，GC）、兒茶素分別使用對(duì)應(yīng)的表型兒茶素立體異構(gòu)體EGCG、ECG、EGC、EC進(jìn)行定量，槲皮素3--蕓香糖苷使用槲皮素3--葡萄糖苷進(jìn)行定量，山柰酚3--葡萄糖苷使用山柰酚3--半乳糖苷進(jìn)行定量，8---乙基-2-吡咯烷酮取代的EGCG（8---ethyl-2-pyrrolidone substituted EGCG，8--EGCG-cThea）使用課題組前期合成、分離純化的8---乙基-2-吡咯烷酮取代的EGCG（8---ethyl-2-pyrrolidone substituted EGCG，8--EGCG-cThea）標(biāo)樣（純度＞95%）進(jìn)行定量。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

使用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和顯著性分析，結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，生理指標(biāo)的組間檢驗(yàn)方法為Student’s-test，主要生化成分的不同香型間檢驗(yàn)方法為單因素方差分析（Duncan多重比較）。使用GraphPad Prism 9軟件作圖。利用軟件R 4.1.0的cor函數(shù)進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析，采用corrplot和chart.Correlation函數(shù)進(jìn)行可視化作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 永春佛手茶提取物干預(yù)對(duì)UC模型小鼠體質(zhì)量減輕的影響

如圖1所示，對(duì)照組小鼠體質(zhì)量在50%乙醇溶液灌腸的情況下只在造模后第1～2天體質(zhì)量明顯下降，與造模前相比具有高度顯著差異（＜0.001），之后很快恢復(fù)到正常水平，造模后第3～7天的體質(zhì)量與造模前相比均無顯著差異（＞0.05），且實(shí)驗(yàn)過程中小鼠精神狀態(tài)良好，活動(dòng)和飲食均正常。模型組小鼠從造模后第1天開始出現(xiàn)體質(zhì)量減輕，造模后第2天體質(zhì)量降至最低，然后體質(zhì)量緩慢升高，造模后7 d內(nèi)體質(zhì)量與造模前相比均差異高度顯著（＜0.001）。臨床觀察顯示，模型組小鼠出現(xiàn)精神萎靡、虛弱消瘦、活動(dòng)性降低、毛發(fā)雜亂等表現(xiàn)并伴有糞便稀稠等癥狀。TNBS造模后，清香組、濃香組和陳香組的小鼠繼續(xù)給予相應(yīng)茶葉提取物干預(yù)，2 d后各組小鼠體質(zhì)量均有不同幅度升高，濃香組和陳香組小鼠第5～7天體質(zhì)量均與造模前無顯著差異（＞0.05），清香組小鼠體質(zhì)量雖有所增加，但與造模前相比仍有極顯著或高度顯著差異（＜0.01或＜0.001）。

圖1 TNBS造模前與造模后小鼠體質(zhì)量變化Fig. 1 Changes in body mass in mice before and after TNBS treatment

2.2 永春佛手茶提取物干預(yù)對(duì)UC模型小鼠單位長度結(jié)腸質(zhì)量的影響

如表1所示，模型組小鼠結(jié)腸質(zhì)量顯著高于對(duì)照組（＜0.05），結(jié)腸長度高度顯著大于對(duì)照組（＜0.001），其單位長度結(jié)腸質(zhì)量與對(duì)照組高度顯著差異（＜0.001），單位長度結(jié)腸質(zhì)量較對(duì)照組增加了40.6%。給予各茶葉提取物干預(yù)后，清香組、濃香組、陳香組小鼠結(jié)腸質(zhì)量與模型組無顯著差異（＞0.05），而結(jié)腸長度均極顯著或高度顯著大于模型組（＜0.01或＜0.001），單位結(jié)腸質(zhì)量相比模型組分別降低了20.3%、24.4%和16.1%，其中清香組和濃香組小鼠單位長度結(jié)腸質(zhì)量相對(duì)于模型組分別達(dá)到顯著和極顯著差異（＜0.05或＜0.01）。

表1 各組小鼠結(jié)腸質(zhì)量、結(jié)腸長度和單位長度結(jié)腸質(zhì)量Table 1 Colonic mass, colonic length and colonic mass per unit length of mice in each group

2.3 小鼠結(jié)腸形態(tài)及病理組織學(xué)觀察結(jié)果

如圖2、3所示，對(duì)照組小鼠結(jié)腸黏膜表面光滑，無出血及水腫現(xiàn)象，HE染色可見結(jié)腸結(jié)構(gòu)清晰、層次明顯、杯狀細(xì)胞豐富、各細(xì)胞排列緊密、無炎癥細(xì)胞浸潤；TNBS誘發(fā)UC后，模型組小鼠結(jié)腸腸壁紅腫、長度變短、有出血等現(xiàn)象，HE染色表明模型組小鼠結(jié)腸有大量炎癥細(xì)胞浸潤，結(jié)腸壁明顯增厚；各茶葉提取物干預(yù)后，各組小鼠結(jié)腸外觀均有所改善，其中濃香組小鼠結(jié)腸病理狀態(tài)改善最為明顯，基本無炎癥細(xì)胞浸潤，結(jié)腸壁未增厚，清香組、陳香組小鼠結(jié)腸仍有少量炎癥細(xì)胞浸潤。

圖2 小鼠結(jié)腸形態(tài)觀察Fig. 2 Morphological observation of mouse colon

圖3 光學(xué)顯微鏡下小鼠結(jié)腸病理組織HE染色結(jié)果（100×）Fig. 3 Histopathological observation of mouse colon under optical microscope (100 ×)

結(jié)合模型組小鼠的臨床表現(xiàn)、體質(zhì)量變化、結(jié)腸形態(tài)及組織病理學(xué)觀察結(jié)果，表明本研究中采用TNBS構(gòu)建UC模型小鼠成功。各干預(yù)組在造模前均灌胃相應(yīng)永春佛手茶提取物，小鼠未出現(xiàn)不良癥狀，表明200 mg/（kg·d）劑量的永春佛手茶提取物對(duì)小鼠不會(huì)造成負(fù)面影響。各茶葉提取物干預(yù)組小鼠結(jié)腸外觀和病理組織結(jié)構(gòu)也均有所改善，說明清香、濃香、陳香型永春佛手烏龍茶提取物均緩解了UC造成的小鼠體質(zhì)量降低和結(jié)腸縮短，其中濃香組小鼠結(jié)腸病理狀態(tài)改善最為明顯。有研究表明，UC會(huì)影響人體的腸道微生物，UC患者的腸道微生物種群豐富度顯著低于健康人群，同時(shí)失調(diào)的菌群還會(huì)影響腸道免疫系統(tǒng)，造成炎癥加劇。通過中醫(yī)藥、益生菌和移植健康人的腸道微生物來調(diào)節(jié)UC患者的腸道菌群，具有顯著的療效。文獻(xiàn)報(bào)道烏龍茶等六大茶類的提取物均能夠通過增加潛在有益菌豐度和抑制潛在有害菌豐度來緩解小鼠的腸道炎癥。

2.4 小鼠血清中IL-6、IL-1β、TNF-α及IL-10質(zhì)量濃度的變化

如圖4所示，與對(duì)照組相比，模型組IL-6、IL-1β、TNF-α質(zhì)量濃度均高度顯著增加（＜0.001），IL-10質(zhì)量濃度極顯著減少（＜0.01）；給予各茶葉提取物干預(yù)后，清香組、濃香組、陳香組小鼠IL-1β、IL-6質(zhì)量濃度與模型組相比均有所降低，其中濃香組IL-1β、IL-6質(zhì)量濃度分別降低了28.9%和27.1%，與模型組差異顯著（＜0.05），陳香組TNF-α質(zhì)量濃度高度顯著高于模型組（＜0.001），清香組和濃香組TNF-α質(zhì)量濃度與模型組無顯著差異（＞0.05），各干預(yù)組的IL-10質(zhì)量濃度相比模型組均有所增加，清香組、濃香組和陳香組分別增加了122.7%、71.8%和76.2%，且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（＜0.001或＜0.05）。

圖4 UC小鼠血清中炎癥因子質(zhì)量濃度變化Fig. 4 Changes of inflammatory factors in serum of UC mice

促炎因子和抗炎因子平衡紊亂導(dǎo)致的免疫異常是UC發(fā)病機(jī)制之一。促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1β的大量合成和釋放會(huì)促進(jìn)B細(xì)胞分泌活躍，導(dǎo)致抗體產(chǎn)生和體液免疫反應(yīng)亢進(jìn)，進(jìn)一步激發(fā)補(bǔ)體系統(tǒng)而引發(fā)炎癥反應(yīng)。IL-10屬于抗炎因子，能夠通過下調(diào)活化的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌IL-1β、IL-6、TNF-α等促炎因子，從而控制腸道免疫調(diào)節(jié)和改善腸炎。在永春佛手茶提取物干預(yù)后，各干預(yù)組小鼠血清中促炎因子IL-1β和IL-6質(zhì)量濃度均有不同程度的降低，與模型組相比，濃香組IL-1β、IL-6質(zhì)量濃度顯著下降（＜0.05），各干預(yù)組的IL-10質(zhì)量濃度高度顯著或顯著增加（＜0.001或＜0.05），說明永春佛手茶提取物可能通過抑制UC小鼠體內(nèi)促炎因子的合成，促進(jìn)抗炎因子IL-10的釋放，從而降低免疫反應(yīng)程度，促進(jìn)腸道黏膜修復(fù)，改善結(jié)腸炎癥。

2.5 永春佛手烏龍茶提取物中的主要生化成分

如表2所示，茶氨酸作為茶葉中主要的游離氨基酸，在清香型提取物中含量最高，為14.68 mg/g，在濃香型和陳香型提取物中茶氨酸含量僅為清香型提取物的17.4%和60.0%。在兒茶素類化合物中，EGC是含量最高的組分，在3 種香型提取物中均高于70 mg/g，EGCG含量為51.64～58.29 mg/g。同時(shí)在3 種香型提取物中非酯型兒茶素（EGC、GC、EC、兒茶素）的總量高于酯型兒茶素（EGCG、GCG、ECG、CG）總量。兒茶素類化合物中除了EGCG在陳香型提取物中的含量顯著高于另兩種香型（＜0.05），其他兒茶素類物質(zhì)均在清香型提取物中含量最高。沒食子酸、茶沒食子素、咖啡堿和兩種-乙基-2-吡咯烷酮取代的黃烷-3-醇（-ethyl-2-pyrrolidinonesubstituted flavan-3-ols，EPSF）類成分（8--EGCG-cThea和8--EGCG-cThea）在陳香型提取物中含量均顯著高于清香型和濃香型提取物（＜0.05）。在黃酮糖苷類化合物中，含量最高的為槲皮素3--半乳糖苷，在3 種香型永春佛手烏龍茶提取物中含量均大于1.6 mg/g。含量較高的3 個(gè)黃酮糖苷（槲皮素3--蕓香糖苷、槲皮素3--半乳糖苷、山柰酚3--蕓香糖苷）在清香型提取物中的含量均顯著高于濃香型和陳香型（＜0.05），黃酮糖苷總量在清香型提取物中最高。

表2 不同香型永春佛手烏龍茶提取物生化成分含量Table 2 Contents of biochemical components in water extracts from different aroma types of Yongchun Foshou tea mg/g

2.6 永春佛手烏龍茶提取物中生化成分與UC小鼠生理指標(biāo)相關(guān)性分析結(jié)果

將永春佛手烏龍茶提取物中主要生化成分含量與UC小鼠單位長度結(jié)腸質(zhì)量、體質(zhì)量、炎癥因子質(zhì)量濃度等指標(biāo)進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析，從圖5中可以發(fā)現(xiàn)各成分與生理指標(biāo)間存在較強(qiáng)的相關(guān)性。8--EGCG-cThea和8--EGCG-cThea兩個(gè)EPSF類成分均與促炎因子IL-1β呈極顯著負(fù)相關(guān)（＜0.01，分別為-0.87和-0.90），與IL-6呈負(fù)相關(guān)（＞0.05）。黃酮糖苷中槲皮素3--蕓香糖苷和山柰酚3--蕓香糖苷均與促炎因子TNF-α呈顯著負(fù)相關(guān)（＜0.05，均為-0.68）。與抗炎因子IL-10呈顯著正相關(guān)（＜0.05）的化學(xué)成分有茶氨酸、7 個(gè)兒茶素類化合物（GC、EGC、GCG、ECG、CG、EC、兒茶素）、槲皮素3--半乳糖苷和山柰酚3--半乳糖苷，同時(shí)黃酮糖苷總量也與IL-10質(zhì)量濃度高度顯著相關(guān)（＜0.001，＝0.95）。

圖5 永春佛手烏龍茶生化成分與UC小鼠生理指標(biāo)相關(guān)性Fig. 5 Correlation between biochemical components in Yongchun Foshou oolong tea and physiological indexes

研究表明在小鼠腸道炎癥損傷中氧化應(yīng)激水平會(huì)提高，其中丙二醛、一氧化氮等氧化介質(zhì)含量升高，造成腸黏膜損傷，而茶葉中的多酚類物質(zhì)具有很強(qiáng)的抗氧化能力，能夠降低結(jié)腸組織的氧化應(yīng)激水平，其中兒茶素類、沒食子酸等化合物效果顯著。烏龍茶中的多酚類成分主要包括兒茶素及其氧化產(chǎn)物、原花青素、聚酯型兒茶素、黃酮及其糖苷、酚酸等，尤其是黃酮類成分在永春佛手烏龍茶中的含量顯著高于其他茶樹品種制作的烏龍茶，這些物質(zhì)可能通過增強(qiáng)結(jié)腸組織的抗氧化能力，抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)，達(dá)到減輕結(jié)腸組織損傷的作用。主要生化成分與炎癥因子等生理指標(biāo)的相關(guān)性分析表明，烏龍茶中的多種成分協(xié)同發(fā)揮對(duì)UC具有調(diào)節(jié)作用。前期研究發(fā)現(xiàn)，EPSF類化合物對(duì)于脂多糖誘導(dǎo)的RAW264.7巨噬細(xì)胞具有較強(qiáng)的抗炎活性，可通過抑制核因子κB（nuclear factor κB，NF-κB）p65蛋白的表達(dá)和磷酸化，以及抑制p65蛋白的核位移，從而抑制NF-κB信號(hào)通路的活化，發(fā)揮抗炎作用。本研究中濃香型永春佛手烏龍茶具有相對(duì)較高的EPSF類成分含量，可能是其具有較好的UC輔助保護(hù)功能的重要原因。

3 結(jié) 論

通過對(duì)UC模型小鼠的生理指標(biāo)和細(xì)胞炎癥因子研究分析發(fā)現(xiàn)，3 種香型（清香型、濃香型、陳香型）永春佛手茶提取物均可一定程度改善UC引起的小鼠體質(zhì)量減輕、結(jié)腸縮短、腸壁增厚等現(xiàn)象，并降低小鼠機(jī)體炎癥水平，對(duì)UC均具有較好的輔助保護(hù)功能，其中濃香型永春佛手茶提取物改善作用最為顯著。永春佛手茶提取物的主要化學(xué)成分與血清炎癥因子相關(guān)性分析表明，EPSF類、黃酮糖苷類、兒茶素類等多酚類化合物可能是永春佛手茶改善UC癥狀的主要成分。茶葉具有天然、健康、安全的特點(diǎn)，將茶葉提取物應(yīng)用于UC的輔助治療具有良好的前景。