外源腐胺（Put）處理對黃皮甜瓜果實采后冷害及活性氧代謝的影響

徐 斌，安路明，孟新濤,2，張 婷,

（1.新疆農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)產(chǎn)品貯藏加工研究所，新疆烏魯木齊 830091；2.新疆主要農(nóng)副產(chǎn)品精深加工工程技術(shù)研究中心，新疆烏魯木齊 830091；

3.新疆農(nóng)產(chǎn)品加工與保鮮重點實驗室，新疆烏魯木齊 830091）

腐胺（Put）、亞精胺（Spd））和精胺（Spm）是植物中最常見和研究最多的多胺（PAs）。研究表明，PAs通過提高提高RNA酶、蛋白酶和抗氧化物酶的活性，減少活性氧的產(chǎn)生，保持膜的穩(wěn)定性，從而提高植物對逆境的抵抗能力，已在黃瓜、西紅柿、西葫蘆、藍莓等果蔬上得到證實。團隊前期的研究也證實，甜瓜采后冷害發(fā)生與果皮中內(nèi)源Put、Spd和Spm的含量相關(guān)，且連續(xù)2年開展了不同類型外源PAs誘導低溫條件下黃皮甜瓜采后抗冷性試驗，研究并步確定了施用外源2.0 mmol/L Put處理處理效果較好，然而其發(fā)生機制還尚不明確，仍需要進一步探討研究。為此，本研究中熟品種‘新密3號’黃皮甜瓜（果皮亮黃色或黃色，發(fā)生冷害時癥狀較明顯）為試材，研究了5±0.5℃低溫誘導條件下2.0 mmol/L外源Put處理對其果實冷害和活性氧代謝的影響，解析低溫條件下外源Put誘導黃皮甜瓜抗冷性的機理，以期為黃皮甜瓜采后冷害定向調(diào)控提供新思路和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

黃皮甜瓜 以‘新密3號’黃皮甜瓜為供試材料，于2021年7月21日采自新疆石河子地區(qū)124團，八成熟采收，可溶性固形物含量為12%～14%，單果重2.5～3.5 kg，采后12 h內(nèi)運回新疆農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)產(chǎn)品貯藏加工研究所；腐胺（Put） 分析純，上海麥克林生化科技有限公司；蛋氨酸（MET）、氮藍四唑（NBT） 純度99%，上海藝恩化學技術(shù)有限公司；丙酮、四氯化鈦、乙二胺四乙酸二鈉、愈創(chuàng)木酚、濃硫酸、鄰苯二酚、對氨基苯磺酸、亞油酸鈉、-萘芬、硫代巴比妥酸、三氯乙酸 國產(chǎn)優(yōu)級純，上海國藥集團；濃氨水、過氧化氫、鹽酸羥胺 國產(chǎn)分析純，天津市福晨化學試劑廠。

-80 ℃超低溫冰箱 青島海爾股份有限公司；Centrifge 5810R型高速冷凍離心機 德國Eppendorf公司；M20通用研磨機 德國IKA公司；DK-8D電熱恒溫水槽 上海精宏實驗設(shè)備有限公司；DELA30分析天平 江蘇海門士其林貝儀器公司；UV-2600紫外分光光度計 日本島津有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 試驗設(shè)置與處理 運回的甜瓜置于8±0.5 ℃冷庫中預(yù)冷24 h，然后挑選大小規(guī)格較為一致，無任何機械損傷和病蟲侵害的甜瓜果實，隨機分為2組：第一組使用2.0 mmol/L的外源Put（含2 g/L吐溫20）進行整果浸泡處理，時間為10 min，以蒸餾水處理作為對照，每組60個果實，待果實表面自然風干后置于5±0.5 ℃條件下貯藏，環(huán)境相對濕度75%～80%，庫房內(nèi)間隔10 d使用二氧化氯消毒。貯藏期間，每隔7 d取一次樣，每次取3個果實，用于統(tǒng)計果實冷害指數(shù)，另取果皮組織，-80 ℃液氮凍樣，用于測定抗氧化酶活性及活性氧代謝等相關(guān)指標。以上各組處理均設(shè)置3個重復(fù)。

1.2.2 測定指標與方法

1.2.2.1 冷害指數(shù)測定 哈密瓜果實采后冷害癥狀主要表現(xiàn)為果皮出現(xiàn)褐色凹陷斑點，果肉呈水漬狀，評定標準參照張婷的方法：冷害程度分為5級：0級，無冷害發(fā)生；1級-冷害發(fā)生面積≤10%；2級-11%≤冷害發(fā)生面積≤20%；3級-21%≤冷害發(fā)生面積≤40%；4級-冷害發(fā)生面積≥40%。

冷害指數(shù)按以下公式計算：

在制作教學課件過程中，應(yīng)避免頁面中文字過多，教師要發(fā)揮創(chuàng)意思維，運用各種形狀、點、線、面等修飾內(nèi)容，讓教學內(nèi)容簡捷易懂，以最優(yōu)美的方式呈現(xiàn)。教學內(nèi)容的布局沒有固定的模式，但也有一些常用的布局方式，如圖4所示，豎向、橫向、錯位、階梯等列表排列方式，教師還可以創(chuàng)作出更好看的排列方式。

1.2.2.2 酶液提取 隨機稱取2.0 g甜瓜果皮樣品，加入 6.0 mL 0.5 mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.8，含0.2 mol/L EDTA和5% PVP）。充分浸提30 min，在離心機4 ℃ 12000 r/min下離心20 min，吸取上清液存于 4 ℃冰箱中，待 SOD、CAT、POD和 APX酶活性測定。

1.2.2.3 超氧化物歧化酶（SOD）活性測定 參照張婷的方法稍作改進。取0.1 mL粗酶液，加入3.0 ml 50 mmol/L磷酸緩沖液（pH7.8，內(nèi)含0.13 mol/L甲硫氨酸，0.75 mmol/L氮藍四唑（NBT），0.2 mmol/L EDTA及0.02 mmol/L核黃素），把反應(yīng)液置于4000 Lx下照光20 min后，測定560 nm波長下的吸光值。以每分鐘樣品抑制NBT光化還原50%作為一個酶活性單位（U），重復(fù)測量三次，結(jié)果用U·gFW表示。

1.2.2.4 過氧化氫酶（CAT）活性測定 參照代慧等的方法略作修改。向10 mL試管中加入1.9 mL磷酸緩沖液（0.5 mol/L，pH7.0）和0.1 mL之前制備的粗酶液，最后吸取1 mL的0.2% HO溶液加入試管中，啟動反應(yīng)。同時以蒸餾水作為空白參比，在240 nm波長下測定吸光值。每隔15 s測量一次，記錄2 min內(nèi)的結(jié)果，以每克甜瓜樣品每分鐘變化240 nm吸光值0.01為一個酶活力單位（U），重復(fù)3次，結(jié)果用U·gFW表示。

1.2.2.5 過氧化物酶（POD）活性測定 參照李順等的方法略作有修改。取100 μL酶液，加入2.7 mL磷酸緩沖液（50 mmol/L，pH7.0），加入 0.1 mL 1% 愈創(chuàng)木酚溶液，再加入2% HO溶液0.1 mL，混勻后啟動反應(yīng)，在470 nm波長下測定吸光值的變化。以O(shè)D值每分鐘變化值0.01為一個酶活力單位（U），重復(fù)3次，結(jié)果用U·gFW表示。。

1.2.2.6 抗壞血酸過氧化物酶（APX）活性測定 抗壞血酸過氧化物酶（APX）活性測定參照郭欣等的方法，稍作修改。APX活性測定的反應(yīng)體系包括0.1 mL 酶液，1.7 mL50 mmol/L 磷酸緩沖液（pH7.0），0.1 mL 0.5 mmol/L抗壞血酸和0.1 mL 0.2 mmol/L HO充分混合，反應(yīng)15 min，在290 nm波長下測定吸光值的變化。以O(shè)D每分鐘變化0.01為一個酶活力單位（U），重復(fù)3次，結(jié)果用U·gFW表示。

1.2.2.7 脂氧合酶（LOX）活性測定 脂氧合酶（LOX）活性測定參照劉發(fā)強等的方法略作修改，稱取甜瓜果皮凍樣2 g，將10 mL預(yù)冷的0.1 mol/L磷酸鉀緩沖液（pH6.8）與0.15 g的PVP混合均勻，12000 r/min，4 ℃離心處理 20 min，采集上清液檢測LOX活性。采用3 mL反應(yīng)體系，其中亞油酸鈉母液 25 μL，50 mmol·L磷酸緩沖液 2775 μL（pH7.0），粗酶液 200 μL。在室溫（25 ℃）下反應(yīng)，于 234 nm處測定吸光值。加酶液15 s后開始計時，記錄2 min內(nèi)的OD值變化，酶活性以U·gFW表示，重復(fù)3次。

1.2.2.8 丙二醛（MDA）含量測定 參照Zheng等的方法并略作修改。隨機稱取3.0 g果皮組織凍樣，加 7.0 mL 50 mmol/L磷酸緩沖液（pH7.8，內(nèi)含0.2 mmol/LEDTA），在 4 ℃、13000 r/min下離心20 min。取2 mL上清液加入3.0 mL 0.5%硫代巴比妥酸（溶于5%三氯乙酸），置于100 ℃沸水中反應(yīng)30 min后快速冷卻，10000 r/min下離心15 min測定上清液在450 nm、532 nm和600 nm下的吸光值，MDA含量根據(jù)以下公式計算：MDA含量（nmol·gFW）=[6.452×（A-A）-0.559×A]×Vt/（Vs×m），Vt、Vs分別為浸提液的總體積和反應(yīng)混合液中所含浸提液的體積，m為樣品質(zhì)量，結(jié)果以nmol·gFW表示，每個處理3個重復(fù)。

1.2.2.9 超氧陰離子自由基（O·）生成速率測定 超氧陰離子自由基（O·）生成速率的測定參照喬沛等的方法稍作修改。稱取1.0 g果皮組織凍樣，加入6 mL 提取緩沖液，于4 ℃、12000 r/min 下離心20 min，收集上清液進行測定。取1 mL上清液，加入1 mL 50 mmol/L磷酸緩沖液（pH7.8）和0.1 mL 的10 mmol/L鹽酸羥胺溶液，搖勻后于25 ℃反應(yīng)1 h。取出反應(yīng)后溶液，充分混勻。依次加入17 mmol/L對氨基苯磺酸溶液1 mL及7 mmol/L-萘胺溶液1 mL，混勻后于室溫保溫20 min進行顯色反應(yīng)。測定530 nm波長下的吸光值，根據(jù)標準曲線計算O·的物質(zhì)的量。以每克甜瓜樣品每分鐘產(chǎn)生的超氧陰離子的物質(zhì)的量作為超氧陰離子的產(chǎn)生速率，結(jié)果以nmol/（min·g）表示。

1.2.2.10 過氧化氫（HO）含量測定 過氧化氫（HO）含量測定參照陳晨等的方法并略作修改。隨機稱取4.0 g果皮組織凍樣，加入5.0 mL預(yù)冷的丙酮，于4 ℃下10 000 r/min離心20 min。收集上清液即為樣品提取液。吸取1.0 mL樣品上清液，加入0.1 mL四氯化鈦-鹽酸溶液、0.2 mL濃氨水，混合液于12000 r/min、4 ℃下離心15 min。將離心后的上清液倒掉，用丙酮反復(fù)洗滌2～3次，直到去除色素（洗滌完之后倒掉）。再向洗滌后的沉淀物中加入5 mL 2 mol/L硫酸，完全溶解后進行比色測定。于波長412 nm處比色測定溶液的吸光值，以濃度范圍從10～100 μmol/L 的 HO建立校正曲線。結(jié)果以μmol·g·FW 表示，每組 3 個重復(fù)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Microsoft Excel 2019進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，Sigma Plot 14.0作圖，SPSS 20.0軟件進行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 外源Put處理對黃皮甜瓜貯藏期冷害指數(shù)的影響

由圖1可以看出，對照組‘新密3號’果實在貯藏14 d后開始出現(xiàn)輕微的冷害癥狀，貯藏21 d后冷害指數(shù)出現(xiàn)較大幅度升高；貯藏21 d外源Put處理的‘新密3號’果實出現(xiàn)果皮褐變等冷害癥狀，外源Put處理果實冷害出現(xiàn)時間比對照推遲了7 d。隨著貯藏時間延長，兩組果實冷害癥狀逐漸加重，冷害指數(shù)上升。貯藏35 d后，兩組果實冷害癥狀進一步加劇，但Put處理組始終比對照組的冷害程度輕。整個貯藏期內(nèi)，外源Put處理的果實冷害指數(shù)顯著低于對照組（＜0.05）?？梢姡?.0 mmol/L外源Put處理可以延緩‘新密3號’黃皮甜瓜果實冷害的發(fā)生，同時減輕其冷害癥狀。

圖1 外源Put處理對黃皮甜瓜冷害指數(shù)的影響Fig.1 Effect of exogenous Put treatments on chilling injury index of yellow melon fruits

2.2 外源Put處理對黃皮甜瓜貯藏期果皮SOD活性的影響

SOD是活性氧代謝的關(guān)鍵酶之一，可有效清除機體損傷產(chǎn)生的有害自由基，減少機體受損。黃皮甜瓜SOD活性變化如圖2所示，對照組甜瓜SOD活性呈先上升再下降的變化趨勢，而Put處理組SOD活性出現(xiàn)了波動，分別在第14 d和第35 d時出現(xiàn)了峰值，這與冷害指數(shù)出現(xiàn)快速升高的時間基本一致。在貯藏前期（0～14 d），SOD活性不斷上升，這表明低溫脅迫下甜瓜自身會產(chǎn)生調(diào)節(jié)代謝保護性反應(yīng)以減少冷害的發(fā)生。貯藏第7 d與貯藏0 d比較，對照組增加了48.71%，Put處理更能激發(fā)甜瓜SOD的活性，是對照組的 2.62倍。貯藏后期（35～49 d），兩組SOD活性不斷降低，期間黃皮甜瓜果實冷害癥狀加重，冷害指數(shù)出現(xiàn)大幅升高，SOD酶清除冷害發(fā)生過程中產(chǎn)生的自由基消耗量持續(xù)增加，導致其活性逐漸降低，至貯藏第49 d時，2.0 mmol/L Put處理組黃皮甜瓜果皮SOD活性為對照組的2.13倍?？梢钥闯?，2.0 mmol/L Put處理組的SOD活性顯著高于對照組（＜0.05），表明外源Put處理組果皮組織內(nèi)清除自由基能力優(yōu)于對照組。

圖2 外源Put處理對黃皮甜瓜SOD活性的影響Fig.2 Effect of exogenous Put treatments on SOD activity of yellow melon fruits

2.3 外源Put處理對黃皮甜瓜貯藏期果皮CAT活性的影響

CAT是植物細胞內(nèi)重要的活性氧清除酶，能夠分解植物體內(nèi)的HO，以減少HO的積累對果實組織造成氧化損傷。由圖3可知，黃皮甜瓜在貯藏過程中，隨貯藏時間的延長，兩個處理組果皮中CAT活性均呈先上升后下降的趨勢，貯藏21 d時達到最大值，其中2.0 mmol/L Put處理的黃皮甜瓜果皮CAT活性約為對照組的2.3倍，此時正值冷害癥狀急劇出現(xiàn)時間，整個貯藏期內(nèi)，Put處理組黃皮甜瓜果皮的CAT活性顯著高于對照組（＜0.05）?？梢?，2.0 mmol/L Put處理可促進黃皮甜瓜低溫貯藏期間果皮CAT活性的升高，這種效果在冷害加劇出現(xiàn)時尤為明顯。

圖3 外源Put處理對黃皮甜瓜CAT活性的影響Fig.3 Effect of exogenous Put treatments on CAT activity of yellow melon fruits

2.4 外源Put處理對黃皮甜瓜貯藏期果皮POD活性的影響

POD廣泛存在于植物中，在果實體內(nèi)主要參與活性氧的清除過程，與機體逐漸衰老或者環(huán)境脅迫作用密切相關(guān)。如圖4所示，隨貯藏時間延長，兩個處理組黃皮甜瓜果皮中POD活性呈先上升后逐漸降低的趨勢，均在貯藏第21 d達到峰值，這與CAT變化趨勢一致。貯藏第21 d時，2.0 mmol/L Put處理組的POD活性最高，是對照組黃皮甜瓜果皮POD活性的1.6倍。貯藏28 d之后，對照組POD活性出現(xiàn)了小幅升高的現(xiàn)象，這可能與低溫脅迫下激發(fā)機體的防御反應(yīng)有關(guān)。貯藏42 d時，Put組黃皮甜瓜果皮的POD活性是對照組的4.57倍，且整個貯藏期內(nèi)，Put處理組POD活性始終高于對照組，由此表明，Put處理可顯著增強低溫貯藏期間黃皮甜瓜果皮POD 的活性（＜0.05）。

圖4 外源Put處理對黃皮甜瓜POD活性的影響Fig.4 Effect of exogenous Put treatments on POD activity of yellow melon fruits

2.5 外源Put處理對黃皮甜瓜貯藏期果皮APX活性的影響

果蔬發(fā)生冷害后，會引起氧化脅迫，造成活性氧自由基大量積累，抗壞血酸過氧化物酶（APX）作為植物抗氧化防御系統(tǒng)的成員之一，在防御活性氧自由基破壞作用方面扮演著重要角色。如圖5所示，貯藏期間，黃皮甜瓜果皮的APX活性隨貯藏時間的延長呈先升高后降低的變化趨勢，這與CAT、POD活性的變化趨勢相似。APX活性在0～21 d時間內(nèi)逐漸上升，貯藏7 d時，兩組處理APX活性較低，其值基本維持在10 U·gFW左右，之后隨著冷害的出現(xiàn)，APX活性快速升高，貯藏21 d，兩組處理的APX活性均達到峰值，分別為39.14和33.65 U·gFW，這可能是果實對冷害產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng)，通過自身提高APX酶活性來抵御冷害的發(fā)生，Put處理因減輕冷害使其維持較高的水平。貯藏28～49 d，兩個處理組黃皮甜瓜果皮組織中的APX酶活性隨著冷害的加重呈逐漸下降的趨勢，其原因可能是冷害的發(fā)生導致組織內(nèi)活性氧自由基的大量出現(xiàn)，APX酶需要發(fā)揮防御作用，其活性隨之逐漸下降。貯藏49 d，2.0 mmol/L Put處理組的黃皮甜瓜果皮APX活性是對照組的4倍，表明2.0 mmol/L Put處理能夠顯著提高低溫貯藏期間黃皮甜瓜果皮APX活性（＜0.05），從而相對提高果實的抗冷能力。

圖5 外源Put處理對黃皮甜瓜APX活性的影響Fig.5 Effect of exogenous Put treatments on APX activity of yellow melon fruits

2.6 外源Put處理對黃皮甜瓜貯藏期果皮LOX活性的影響

LOX是催化膜脂上的不飽和脂肪酸發(fā)生過氧化作用的酶，低溫可誘導果蔬LOX活性的上升。如圖6所示，貯藏期內(nèi)，兩個處理組黃皮甜瓜果皮的LOX活性隨貯藏時間延長呈逐漸上升的變化趨勢，這種上升趨勢在貯藏14 d后尤其明顯，這與冷害出現(xiàn)時間一致。貯藏前期，對照組果皮的LOX活性出現(xiàn)快速上升，Put處理組果皮的LOX活性上升緩慢。貯藏第21 d，對照組LOX活性較0 d時上升了4.18倍，Put處理組LOX活性較采收0 d上升了3.04倍，比對照組降低了27.3%。至貯藏結(jié)束時，對照組LOX活性是Put處理組的1.58倍。貯藏7、21、42和49 d時，2.0 mmol/L Put處理組的LOX活性顯著低于對照組（＜0.05），但其它貯藏時間，兩者間差異不顯著（＞0.05）。由此表明，Put處理可在一定程度上抑制黃皮甜瓜低溫貯藏期間果皮LOX的活性。

圖6 外源Put處理對黃皮甜瓜LOX活性的影響Fig.6 Effect of exogenous Put treatments on LOX activity of yellow melon fruits

2.7 外源Put處理對黃皮甜瓜貯藏期果皮MDA含量的影響

丙二醛（MDA）是膜脂過氧化作用的產(chǎn)物，其含量變化表征細胞膜受傷害的程度，可作為評價果蔬細胞膜完整性與冷害程度的指標。如圖7所示，黃皮甜瓜在低溫貯藏期間，兩組果皮MDA含量隨著貯藏時間的延長總體呈現(xiàn)上升趨勢，這與LOX變化趨勢一致，說明果實在受到低溫脅迫時，脂質(zhì)自由基進一步誘發(fā)膜脂過氧化，進而促使MDA的積累。貯藏第21 d時，2.0 mmol/L Put處理組MDA含量顯著低于對照組（＜0.05），是對照組的0.56倍；至貯藏結(jié)束時，Put處理組MDA含量比對照組低24.5%。在整個貯藏期內(nèi)，Put處理組的MDA含量始終低于對照組。由此表明，Put處理能夠抑制丙二醛含量的積累，減緩果皮組織膜脂過氧化程度，從而減輕其冷害損傷。

圖7 外源Put處理對黃皮甜瓜MDA含量的影響Fig.7 Effect of exogenous Put treatment on MDA content of yellow melon fruit

2.8 外源Put處理對黃皮甜瓜貯藏期果皮O2·-生成速率的影響

超氧陰離子自由基（O·）是活性氧代謝的主要產(chǎn)物，O·產(chǎn)生速率可以作為衡量果蔬冷害發(fā)生程度的重要指標。如圖8所示，在貯藏期內(nèi)，Put處理組和對照組的超氧陰離子自由基生成速率變化一致，總體呈上升趨勢，對照組O·生成速率始終高于Put處理組。在貯藏前期（0～14 d），Put處理組 O·的生產(chǎn)成速率和對照組差異不顯著（＞0.05），但Put處理組的超氧陰離子自由基生成速率低于對照組。在貯藏第42 d時，兩組的O·生成速率均達到最大值，分別較0 d增加了2.90和7.78倍，對照組的O·生成速率顯著高于Put處理組（＜0.05），是 Put處理組的 2.3 倍。貯藏前期（0～35 d），兩個處理組 O·生成速率均處于較低水平，貯藏后期（35～49 d），兩個處理組O·生成速率均處于較高水平，這可能與SOD活性的變化有關(guān)。由此可見，Put處理可抑制超氧陰離子自由基的產(chǎn)生，維持細胞膜的穩(wěn)定性，從而降低活性氧對細胞膜脂質(zhì)過氧化損害的程度。

圖8 外源Put處理對黃皮甜瓜O2·-生成速率的影響Fig.8 Effect of exogenous Put treatments on O2·-generating rate of yellow melon fruits

2.9 外源Put處理對黃皮甜瓜貯藏期果皮H2O2含量變化的影響

果實細胞內(nèi)自由基的產(chǎn)生和清除在正常情況下處于動態(tài)平衡狀態(tài)，體內(nèi)維持穩(wěn)定的活性氧水平。但當處于冷脅迫條件下，這種平衡被破壞，導致活性氧大量積累。HO是植物體內(nèi)主要的自由基，其含量變化在一定程度上可以反映自由基產(chǎn)生情況。如圖9 所示，貯藏前期（0～14 d），兩組果皮中 HO含量均呈較低水平，Put處理組HO含量相較于初始值呈下降的變化，貯藏14 d后，兩組果皮中HO含量均出現(xiàn)升高，這與冷害指數(shù)的變化一致。貯藏第14 d，Put處理組的HO含量比對照組低20.3%。貯藏第35 d時，Put處理組HO含量較0 d增加了1.57%，而對照組HO含量增加了53.14%，是Put處理組的1.51倍。貯藏期內(nèi)，對照組HO含量始終高于Put處理組，由此表明，Put處理能夠抑制黃皮甜瓜低溫貯藏期間果皮中HO的積累，使HO含量保持在較低水平。

圖9 外源Put處理對黃皮甜瓜H2O2含量的影響Fig.9 Effect of exogenous Put treatments on H2O2 content of yellow melon fruits

3 討論與結(jié)論

一般情況下，甜瓜受到低溫脅迫時，正常生理代謝受到影響，活性氧代謝平衡遭到破壞，前人研究也證實了甜瓜果實采后冷害發(fā)生與其抗氧化系統(tǒng)有著密不可分的聯(lián)系。本研究發(fā)現(xiàn)，‘新密3號’黃皮甜瓜5 ℃低溫貯藏過程中，外源Put處理顯著提高了其果皮組織中SOD、POD、CAT和APX等的活性，抑制了O·生成速率和HO濃度，從而提高其抵御低溫的能力，這與外源Put誘導西藍花、獼猴桃、芒果、辣椒及番茄等果蔬低溫抗冷性減輕其冷害發(fā)生的研究結(jié)果較為一致。當植物發(fā)生冷害時，會產(chǎn)生大量自由基，造成膜脂損傷，導致膜脂氧化產(chǎn)物MDA的積累，且MDA含量水平與LOX活性有關(guān)。本研究表明，與對照組相比，Put處理可在一定程度上抑制黃皮甜瓜果皮組織LOX活性的增加和MDA含量的積累，表明外源Put處理可減輕膜脂氧化造成的損傷，從而減輕并延緩其果實采后冷害的發(fā)生，這與外源Put應(yīng)用于桃子和秋葵等果蔬上的報道較為相似。然而，果蔬采后低溫誘導中活性氧代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò)十分復(fù)雜，是否與其它相關(guān)酶活性或代謝相關(guān)，仍有待于進一步探索。

可見，5±0.5 ℃低溫誘導條件下，2.0 mmol/L外源Put處理可顯著降低‘新密3號’黃皮甜瓜的冷害指數(shù)，提高其果皮組織中超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、過氧化物酶（POD）和抗壞血酸過氧化物酶（APX）的活性，抑制脂氧合酶（LOX）的活性，減少過氧化氫（HO）、超氧陰離子自由基（O·）和丙二醛（MDA）的積累，從而減輕‘新密3號’黃皮甜瓜果實采后冷害發(fā)生癥狀，使其冷害發(fā)生時間推遲7 d，該結(jié)果可為生產(chǎn)中黃皮甜瓜采后冷害調(diào)控提供新思路。