CAMK1及SPHK1在胰腺癌組織中的表達(dá)及與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系

李梅桂 黃國(guó)定 劉海劍 曾業(yè)平 陳其珠

海南西部中心醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，儋州 571799

【提要】 回顧性分析105例行手術(shù)切除且經(jīng)病理確診的胰腺癌患者的臨床資料，探討胰腺癌組織CAMK1、SPHK1的表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果顯示，胰腺癌組織CAMK1、SPHK1均呈高表達(dá)，其高表達(dá)組的臨床分期，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及脈管浸潤(rùn)與低表達(dá)組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且高表達(dá)與患者的總生存期短有關(guān)，是影響胰腺癌患者預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)。

研究表明，鈣/鈣調(diào)素依賴(lài)性蛋白激酶1(calcium/calmodulin-dependent protein kinase 1，CAMK1)作為具有重要生理功能的蛋白激酶，在消化道腫瘤中異常表達(dá)，且與腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性顯著相關(guān)，有望作為胰腺癌預(yù)后判斷的潛在標(biāo)志物[1]。鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase 1，SPHK1)是一種促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲的癌基因，調(diào)控包括抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞增殖和血管生成等多種生物學(xué)過(guò)程，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起到關(guān)鍵作用，可能為胰腺癌的診療提供重要的信息[2]。但CAMK1、SPHK1在胰腺癌中的表達(dá)及其臨床意義尚未清楚。本研究通過(guò)分析CAMK1、SPHK1在胰腺癌組織中的表達(dá)情況，探討它們與臨床病理特征的關(guān)系及其對(duì)胰腺癌患者預(yù)后判斷的價(jià)值。

一、資料與方法

1．一般資料 ：選取2017年1月至2020年12月間海南西部中心醫(yī)院行手術(shù)治療且經(jīng)病理確診的原發(fā)性胰腺癌患者105例。納入標(biāo)準(zhǔn)為(1)胰腺癌的診斷符合《胰腺癌綜合診治指南》(2018年版)[3]；(2)首次確診并接受手術(shù)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)為(1)合并其他惡性腫瘤及嚴(yán)重疾??；(2)確診時(shí)已接受過(guò)其他治療；(3)隨訪過(guò)程中不配合，資料不齊全者。記錄患者的性別、年齡及腫瘤大小、部位、組織學(xué)類(lèi)型、臨床分期、分化程度、是否轉(zhuǎn)移等。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬知情同意。

2．胰腺癌組織CAMK1及SPHK1表達(dá)檢測(cè)：術(shù)中分別采集患者的癌組織及癌旁正常胰腺組織標(biāo)本置入甲醛溶液中固定，石蠟包埋并制備病理切片，使用免疫組織化學(xué)鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)(SP)法檢測(cè)并進(jìn)行染色。兔抗人多克隆抗體CAMK1及SPHK1均購(gòu)自北京博奧森生物有限公司。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)[4-5]，CAMK1、SPHK1蛋白陽(yáng)性細(xì)胞以胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色的顆粒樣著色為準(zhǔn)，按陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的比例計(jì)分：<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分；按染色強(qiáng)度計(jì)分：未著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。兩者相乘得到最終得分，<4分為低表達(dá)，≥4分為高表達(dá)。采用電話或門(mén)診就診等方式進(jìn)行隨訪，隨訪截止時(shí)間為2021年7月，總生存率為自確診第1天至患者死亡的時(shí)間。

3．統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料以例(%)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。單因素生存分析應(yīng)用Kaplan-Meier法，組間比較行Log-rank檢驗(yàn)，多因素生存分析應(yīng)用COX回歸分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

1．臨床資料：105例患者中，男性64例，女性41例，年齡37～71(58.6±7.9)歲。胰腺導(dǎo)管腺癌95例，其他亞型腫瘤10例；腫瘤位于胰頭69例，胰體20例，胰尾16例；Ⅰ～Ⅱ期31例，Ⅲ～Ⅳ期74例；低分化43例，中分化45例，高分化17例；遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移60例，無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移45例。

2．胰腺癌及癌旁組織CAMK1、SPHK1蛋白表達(dá)：與癌旁正常胰腺組織比較，胰腺癌組織CAMK1、SPHK1蛋白均呈高表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。105例胰腺癌中，CAMK1高表達(dá)68例，低表達(dá)37例；SPHK1高表達(dá)72例，低表達(dá)33例(表1)。

表1 胰腺癌及癌旁正常胰腺組織CAMK1和SPHK1蛋白表達(dá)情況[例(%)]

3．CAMK1、SPHK1蛋白表達(dá)水平與胰腺癌臨床病理特征的關(guān)系： CAMK1、SPHK1高表達(dá)組的臨床分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及脈管浸潤(rùn)與CAMK1、SPHK1低表達(dá)組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表2)。

表2 CAMK1、SPHK1蛋白表達(dá)水平與胰腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系[例(%)]

4．CAMK1、SPHK1蛋白表達(dá)水平與胰腺癌患者總生存率的關(guān)系： 105例患者的隨訪時(shí)間為7～39個(gè)月，中位隨訪時(shí)間為21個(gè)月。生存分析結(jié)果顯示，CAMK1高表達(dá)患者總生存率明顯低于CAMK1低表達(dá)患者，SPHK1高表達(dá)患者總生存率也明顯低于SPHK1低表達(dá)患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為14.53、12.37，P值均<0.001；圖1、圖2 )。

注：CAMK1為鈣/鈣調(diào)素依賴(lài)性蛋白激酶1圖1 CAMK1高表達(dá)與低表達(dá)的胰腺癌患者總生存率比較

注：SPHK1為鞘氨醇激酶1圖2 SPHK1高表達(dá)與低表達(dá)的胰腺癌患者總生存率比較

5．CAMK1、SPHK1蛋白表達(dá)水平與胰腺癌患者預(yù)后的關(guān)系：?jiǎn)我蛩胤治鼋Y(jié)果顯示，臨床分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、脈管浸潤(rùn)、CAMK1及SPHK1表達(dá)水平是影響胰腺癌患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素。多因素COX回歸分析結(jié)果顯示，Ⅲ～Ⅳ期(HR=1.774，95%CI1.306～4.105)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(HR=1.975，95%CI1.618～4.690)、CAMK1高表達(dá)(HR=3.764，95%CI2.948～7.793)及SPHK1高表達(dá)(HR=2.513，95%CI1.985～5.427)是影響胰腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(表3)。

表3 影響胰腺癌患者預(yù)后因素的單因素及多因素回歸分析

討論CAMK1具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)及調(diào)控各種細(xì)胞功能信號(hào)通路的作用，與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，在癌細(xì)胞增殖、分化和凋亡中起關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用[6]。Hu等[7]研究發(fā)現(xiàn)，CAMK1作為致癌因子，在惡性腫瘤中異常表達(dá)；同時(shí)作為潛在治療靶點(diǎn)，可為惡性腫瘤治療提供新的思路。SPHK1是一種調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鞘脂代謝的激活酶，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的分化、增殖和轉(zhuǎn)移，同時(shí)可刺激血管新生和淋巴管生成，在惡性腫瘤的進(jìn)展及預(yù)后中發(fā)揮重要的作用[8]。Park等[9]研究認(rèn)為，SPHK1作為促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲的癌基因，在結(jié)腸癌中明顯上調(diào)，其高表達(dá)可抑制化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的效果，對(duì)結(jié)腸癌的治療及預(yù)后判斷有一定的指導(dǎo)作用。因此，推測(cè)CAMK1、SPHK1有望作為胰腺癌預(yù)后判斷以及療效監(jiān)測(cè)的潛在標(biāo)志物。

本研究結(jié)果顯示，胰腺癌組織CAMK1、SPHK1陽(yáng)性高表達(dá)率均明顯高于正常胰腺組織，提示CAMK1、SPHK1在胰腺癌患者中存在高表達(dá)，可能參與胰腺癌的發(fā)病過(guò)程。Yuza等[10]研究發(fā)現(xiàn)，SPHK1表達(dá)水平在胰腺癌組織中明顯高于非癌組織，SPHK1通過(guò)刺激癌細(xì)胞增殖促進(jìn)胰腺癌的進(jìn)展，可能是胰腺癌治療的一個(gè)潛在手段。以往的研究表明，SPHK1表達(dá)與結(jié)腸癌的臨床分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及脈管浸潤(rùn)的發(fā)生顯著相關(guān)，其高表達(dá)對(duì)患者的總生存率有極大影響，可能是結(jié)腸癌患者潛在的預(yù)后生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)[11]。本研究發(fā)現(xiàn)Ⅲ～Ⅳ期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及脈管浸潤(rùn)的胰腺癌患者CAMK1、SPHK1呈高表達(dá)；Ⅲ～Ⅳ期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是影響胰腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。其中Ⅲ～Ⅳ期患者預(yù)后不良的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)是Ⅰ～Ⅱ期患者的1.774倍，有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者預(yù)后不良的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)是無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者的1.975倍，可見(jiàn)臨床分期和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移對(duì)胰腺癌患者的預(yù)后影響極大。Liu等[12]研究認(rèn)為，臨床分期對(duì)胰腺癌患者的預(yù)后有重要影響(HR=2.091，95%CI1.060～4.125)，在實(shí)際工作中應(yīng)注意此類(lèi)人群的危險(xiǎn)分層。Shi等[13]認(rèn)為，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是影響胰腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子(HR=2.893，95%CI1.334～3.893)，對(duì)患者預(yù)后判斷有一定幫助。此外，本研究發(fā)現(xiàn)CAMK1、SPHK1高表達(dá)與患者的生存期短有關(guān)，且CAMK1及SPHK1呈高表達(dá)對(duì)胰腺癌患者的預(yù)后影響極大，是預(yù)測(cè)胰腺癌患者預(yù)后不良的重要標(biāo)志物。Yu等[14]研究表明，SPHK1主要參與細(xì)胞外基質(zhì)介導(dǎo)的細(xì)胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移，其高表達(dá)與胰腺癌患者的總生存期短顯著相關(guān)，可作為判斷胰腺癌預(yù)后的重要指標(biāo)。另有研究表明，CAMK1高表達(dá)與患者的總生存率降低有關(guān)，在胰腺癌患者的病情進(jìn)展中發(fā)揮作用，可作為胰腺癌患者預(yù)后判斷的生物學(xué)指標(biāo)[15]。由此可見(jiàn)影響胰腺癌患者預(yù)后的因素是多方面的，僅依靠臨床病理特征或影像學(xué)檢查不能做出準(zhǔn)確判斷，應(yīng)多方面綜合考慮，尤其是CAMK1、SPHK1在胰腺癌中應(yīng)用價(jià)值。

綜上所述，胰腺癌組織中CAMK1、SPHK1呈高表達(dá)，其高表達(dá)是影響胰腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，對(duì)指導(dǎo)胰腺癌患者預(yù)后判斷具有較好的幫助。但本研究病例來(lái)源較單一，缺乏大樣本多中心的前瞻性研究，未來(lái)仍需更多的臨床研究進(jìn)一步證實(shí)。

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