長(zhǎng)順綠殼蛋雞快慢羽品系的建立與自別雌雄配套系的研究

丁金龍，劉敬壽

（長(zhǎng)順天農(nóng)綠殼蛋雞實(shí)業(yè)有限公司，貴州 長(zhǎng)順 550700）

長(zhǎng)順綠殼蛋雞產(chǎn)區(qū)位于黔南州長(zhǎng)順縣而得名，境內(nèi)喀斯特地貌特征，地勢(shì)復(fù)雜，山高坡陡，交通閉塞，閉鎖繁育，形成獨(dú)特的地方品種長(zhǎng)順綠殼蛋雞。長(zhǎng)順綠殼蛋雞體型緊湊，結(jié)構(gòu)勻稱，羽毛緊密，背部平直，皮膚為白色。喙平直，灰或黑色；虹彩橘黃色，耳葉紅色或黑色；脛、爪黑色。公雞單冠直立，5～7齒，髯大，呈鮮紅色；頸羽、鞍羽赤紅，背羽、腹羽紅黑相間，主翼羽、尾羽墨綠而有光澤。母雞羽色以麻黃色居多，有少量黑麻羽和白羽。雛雞絨毛以黃麻色居多，少數(shù)為黑色、淡黃色，背上有條狀黑色絨毛帶，喙、脛、趾多為黑色[1]。

隨著近年來經(jīng)濟(jì)水平提高，人們對(duì)生活品質(zhì)追求越來越高，對(duì)食材的選擇偏向健康和營(yíng)養(yǎng)。長(zhǎng)順綠殼雞蛋呈橢圓形，蛋殼墨綠色，厚而致密。長(zhǎng)順綠殼雞蛋中硒、碘、鋅等人體所需的礦物質(zhì)含量較高，還富含大量對(duì)人有益的腦磷脂、卵磷脂、神經(jīng)磷脂及多種微量元素和維生素[2]。長(zhǎng)順綠殼雞蛋于2014年9月通過原國(guó)家質(zhì)檢總局批準(zhǔn)對(duì)“長(zhǎng)順綠殼雞蛋”實(shí)施地理標(biāo)志產(chǎn)品保護(hù)。長(zhǎng)順綠殼雞蛋具有很大的市場(chǎng)和推廣價(jià)值。為了進(jìn)一步節(jié)約綠殼蛋雞的生產(chǎn)成本，提高經(jīng)濟(jì)效益，針對(duì)長(zhǎng)順綠殼蛋雞建立快、慢羽（以下簡(jiǎn)稱快慢羽）品系，使出殼雛雞根據(jù)羽型鑒別雌雄，提高鑒別效率和準(zhǔn)確率，減少鑒別感染風(fēng)險(xiǎn)，提高雛雞成活，實(shí)現(xiàn)商品雞分類飼養(yǎng)。

快慢羽基因是由性染色體上的一對(duì)同位點(diǎn)基因（K，k）控制，慢羽對(duì)快羽為顯性。鳥類性染色體的基因型為雄性（ZZ）雌性（ZW）。快慢羽公母共有5種基因型，即快羽型公雞（kk）、快羽型母雞（k-）、慢羽型母雞（K-）、慢羽型公雞（Kk）或（KK）[3]。根據(jù)羽速表現(xiàn)型區(qū)分快羽型公母雞和慢羽型母雞為純合子，慢羽型公雞有兩種基因型，可能存在雜合慢羽基因型，需要進(jìn)行測(cè)交或基因檢測(cè)選留純合慢羽基因型，淘汰雜合慢羽型。雛雞通過快慢羽鑒別雌雄簡(jiǎn)單便易、快速準(zhǔn)確、節(jié)約成本，可利用快慢羽基因的性連鎖這一特性，純化品系，建立快慢羽雌雄自別的配套系。

1 材料與方法

1.1 材料

采用飼養(yǎng)于長(zhǎng)順天農(nóng)綠殼蛋雞實(shí)業(yè)有限公司原種場(chǎng)長(zhǎng)順綠殼蛋雞純種公雞100只，母雞1 500只為素材。

1.2 方法

1.2.1 種蛋收集 將長(zhǎng)順綠殼蛋雞純種100只公雞人工采精于集精杯中，用輸精槍混精后人工輸精到1 500只母雞，連續(xù)輸精3遍后，12 d為1個(gè)周期，收集2個(gè)周期，第一次收集種蛋9 760枚，第二次收集9 680枚，合計(jì)19 440枚。

1.2.2 種蛋入孵 將每天收集的長(zhǎng)順綠殼蛋雞種蛋在長(zhǎng)順天農(nóng)公司原種場(chǎng)孵化車間熏蒸消毒20 min，熏蒸試劑采用28 ml/m3甲醛。每批次集蛋結(jié)束后用青島41研究所生產(chǎn)的19 200型全自動(dòng)孵化機(jī)進(jìn)行孵化出雛。

1.2.3 出殼雛雞觀測(cè)羽型分布 參照包世增[4]，宋素芳、康相濤、孫桂榮等[5]劃分羽型的方法，將快羽羽型分為2類，慢羽羽型劃分為4類?？煊鹦停褐饕碛痖L(zhǎng)于覆主翼羽且絕對(duì)差值大于等于5 mm的為R1型，小于5 mm而大于2 mm的為R2型；慢羽型：等長(zhǎng)型（主翼羽與覆主翼羽等長(zhǎng)）；倒長(zhǎng)型（主翼羽短于覆主翼羽）；未長(zhǎng)出型（主翼羽未長(zhǎng)出或主、覆翼羽均未長(zhǎng)出）；微長(zhǎng)型（主翼羽長(zhǎng)于覆主翼羽在2 mm以內(nèi)）。將出殼的雛雞依據(jù)上述羽型劃分方法進(jìn)行快慢羽分類鑒別，統(tǒng)計(jì)出長(zhǎng)順綠殼蛋雞純系的快慢羽羽型分布。

1.2.4 翻肛鑒別 24 h內(nèi)將分好類的長(zhǎng)順綠殼蛋雞快慢羽雞群進(jìn)行翻肛雌雄鑒別，選留快羽型和慢羽的等長(zhǎng)型、倒長(zhǎng)型、未長(zhǎng)出型且符合長(zhǎng)順綠殼蛋雞外貌特征的健康雛雞。

1.2.5 切腳標(biāo)記 快羽R1型切左外腳趾；快羽R2型切左中腳趾；慢羽等長(zhǎng)型切右外腳趾；慢羽型倒長(zhǎng)型和未長(zhǎng)出型切右中腳趾。

1.2.6 飼養(yǎng)方法 飼養(yǎng)地點(diǎn)在長(zhǎng)順天農(nóng)綠殼蛋雞實(shí)業(yè)有限公司原種場(chǎng)，進(jìn)苗前將育雛舍升溫至35 ℃[6]。育雛舍飼養(yǎng)階段0～7周，全自動(dòng)控溫，1～2周33～35 ℃，2周之后每周下降2 ℃，直至降至室溫[7]。8～18周齡在育成舍飼養(yǎng)，19周齡后在單體產(chǎn)蛋籠飼養(yǎng)，全程的飼養(yǎng)管理和免疫保健均按照長(zhǎng)順綠殼蛋雞飼養(yǎng)管理手冊(cè)進(jìn)行。并分別在8、12、18周齡對(duì)長(zhǎng)順綠殼蛋雞快羽群和慢羽群進(jìn)行外觀和生長(zhǎng)性能選擇，淘汰不符合育種要求的個(gè)體。在13、17周齡和30周齡對(duì)快慢羽群進(jìn)行白痢檢測(cè)，淘汰陽(yáng)性個(gè)體。在28周齡對(duì)快慢羽群進(jìn)行白血病檢測(cè)，淘汰陽(yáng)性個(gè)體。31周齡對(duì)留種公雞進(jìn)行精液品質(zhì)測(cè)定，選留發(fā)育良好、外觀符合品種特征且精液品質(zhì)好的健康種雞備用。

1.2.7 基因型檢測(cè) 根據(jù)快慢羽伴性遺傳規(guī)律，快羽為隱性，其表現(xiàn)型和基因型一致，不必再進(jìn)行基因檢測(cè)，可確定快羽雞為純合基因型[8]。在慢羽雞中，由于母雞性染色體為異型染色體，在Z染色體上只有1個(gè)K基因，雖屬于顯性遺傳，但表現(xiàn)型仍與基因型一致，也不需要進(jìn)行基因檢測(cè)[9]。但慢羽型母雞中等長(zhǎng)型羽型存在鑒別誤差，需要對(duì)慢羽型母雞中等長(zhǎng)型羽型群體（切右外趾）和慢羽公雞群體進(jìn)行基因檢測(cè)。慢羽公雞和慢羽等長(zhǎng)型母雞進(jìn)行基因檢測(cè)。

1.2.8 純繁驗(yàn)證及純系擴(kuò)群 34周齡將選出的快羽公雞群和母雞群混精自交擴(kuò)群；將基因檢測(cè)出的純合慢羽群混精自交擴(kuò)群。分別收取2批種蛋，每批3 000枚合格種蛋，熏蒸消毒后在原種場(chǎng)孵化車間進(jìn)行孵化，分別統(tǒng)計(jì)后代雛雞快慢羽群體準(zhǔn)確率。用快羽公雞群雜交慢羽母雞群，收2批種蛋，每批500枚各個(gè)種蛋，熏蒸消毒后在原種場(chǎng)孵化車間進(jìn)行孵化，統(tǒng)計(jì)雜交后代雛雞快慢羽自別雌雄準(zhǔn)確率。

1.2.9 純系擴(kuò)群建立純系 根據(jù)上述出苗測(cè)定結(jié)果，若快慢羽純系的快慢羽比例達(dá)到99 % 以上，配套系自別準(zhǔn)確率達(dá)98 % 以上，即可組建長(zhǎng)順綠殼蛋雞快慢羽純系。

2 結(jié)果與分析

2.1 育種素材孵化結(jié)果

長(zhǎng)順綠殼蛋雞素材群種蛋孵化出苗統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1。2個(gè)批次平均受精率91.8 %，出苗率85.5 %，健雛率95.55 %。經(jīng)快慢羽觀測(cè)雛雞統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表2，快羽比例為77.3 %，慢羽比例為22.7 %，由此可見長(zhǎng)順綠殼蛋雞原始群主要以快羽為主。

表1 長(zhǎng)順綠殼蛋雞素材群孵化出苗結(jié)果

表2 雛雞快慢羽羽型分布

2.2 慢羽公雞和慢羽等長(zhǎng)型母雞基因檢測(cè)結(jié)果

經(jīng)過對(duì)長(zhǎng)順綠殼蛋雞外觀表型、生長(zhǎng)性能、疫病凈化選擇后，共選留下慢羽公雞278羽，慢羽等長(zhǎng)型母雞594羽，采血進(jìn)行基因檢測(cè)結(jié)果見表3，慢羽公雞雜合子有116羽，純合子162羽，純合子比例58.3 %，慢羽等長(zhǎng)型母雞雜合子31羽，純合子比例94.8 %。

表3 慢羽公雞和慢羽等長(zhǎng)型母雞基因檢測(cè)結(jié)果

2.3 自繁擴(kuò)群建立快慢羽純系及驗(yàn)證

將通過品種選擇留下的快羽群和基因檢測(cè)留下的慢羽群分別自繁擴(kuò)群，分別建立快羽純系和慢羽純系。根據(jù)孵化出雛快慢羽觀測(cè)驗(yàn)證結(jié)果見表4。由表4可以看出：快羽系中快羽占比99.86 %，慢羽系中，慢羽占比99.96 %，符合建立純系要求。長(zhǎng)順綠殼蛋雞快慢羽自別雌雄配套系后代快慢羽自別雌雄準(zhǔn)確率均在99 % 以上，符合大生產(chǎn)使用要求。

表4 快羽系、慢羽系自繁擴(kuò)群出雛羽型分布

表5 長(zhǎng)順綠殼蛋雞快慢羽自別雌雄配套系驗(yàn)證結(jié)果

3 討論

從長(zhǎng)順綠殼蛋雞孵化結(jié)果分析，其受精率、出苗率、健雛率均在正常范圍，孵化2批種蛋共計(jì)19 418枚，受精率、出苗率、健雛率結(jié)果相差不大，收集慢羽雞占比數(shù)據(jù)具有代表性。

長(zhǎng)順綠殼蛋雞以快羽為主，慢羽雞占比22.7 %，沒有找到長(zhǎng)順綠殼蛋雞慢羽占比相關(guān)報(bào)道，與其他地方品種慢羽雞占比沒有比價(jià)價(jià)值。

本配套系在對(duì)慢羽公雞雜合子測(cè)定中，選擇用慢羽基因檢測(cè)的方式，而非其他學(xué)者宋素芳[5]、謝金防[10]、歐陽(yáng)建華[11]等采用的測(cè)交測(cè)定的方式，測(cè)定效率和準(zhǔn)確率更高，成本更低。

利用慢羽伴性遺傳基因選育快慢羽自別雌雄配套系，其準(zhǔn)確率一般在98 % 以上，如宋素芳報(bào)道：公雛99.23 %，母雛99.58 %[5]，謝金防報(bào)道：98 %[10]，歐陽(yáng)建華報(bào)道：公雛100 %，母雛95.79 %[11]等。本配套系準(zhǔn)確率達(dá)到99.76 %，略高于98 %，可作為一項(xiàng)可靠的技術(shù)在生產(chǎn)中推廣。

在蛋雞和其他地方雞品種的生產(chǎn)中，早已利用快慢羽自別雌雄技術(shù)，長(zhǎng)順綠殼蛋雞作為我國(guó)優(yōu)質(zhì)地方品種還在使用翻肛鑒別的傳統(tǒng)技術(shù)，本研究為長(zhǎng)順綠殼蛋雞提供一種快慢羽鑒別雌雄技術(shù)，提高鑒別效率和準(zhǔn)確率，降低生產(chǎn)成本，減少鑒別感染風(fēng)險(xiǎn)。

4 結(jié)論

從出雛羽型觀察得出長(zhǎng)順綠殼蛋雞主要以快羽型為主，占77.3 %，慢羽型占比22.7 %。慢羽型公雞和慢羽等長(zhǎng)型母雞基因檢測(cè)純合子占比分布為58.3 % 和94.8 %。

組建快慢羽純系擴(kuò)繁后代出雛快羽系中快羽占比99.86 %，慢羽系中慢羽占比99.96 %。通過基因檢測(cè)能夠快速準(zhǔn)確的確定慢羽純合子公雞和慢羽母雞，與傳統(tǒng)測(cè)交基因試驗(yàn)相比減少工作量和提高準(zhǔn)確率?？炻鹱詣e雌雄配套系后代準(zhǔn)確率達(dá)到99.76 %，雖未達(dá)到完全純合，但較一般翻肛鑒別準(zhǔn)確率在95 % 以上要求，該研究比其鑒別準(zhǔn)確率提高4 % 以上，較宋素芳報(bào)道：公雛99.23 %，母雛99.58 %[5]，謝金防報(bào)道：98 %[10]，歐陽(yáng)建華報(bào)道：公雛100 %，母雛95.79 %[11]等配套系水平略高，可以應(yīng)用于生產(chǎn)推廣。