CD47單抗與CD38單抗對輸血前檢查的影響對比分析

王曉寧，劉 冰，王 恒，張冬霞，盧偉偉*

(1.吉林大學(xué)第一醫(yī)院 輸血科，吉林 長春130021;2.吉林省腫瘤醫(yī)院 輸血科)

CD47是一種廣泛表達的跨膜糖蛋白，也稱為整聯(lián)蛋白相關(guān)蛋白(IAP)，分子量52kDa[1]。該蛋白具有免疫球蛋白可變的N端結(jié)構(gòu)域、5個跨膜結(jié)構(gòu)域和一個短的C端胞內(nèi)尾，胞內(nèi)尾部有四種可變不同剪接異構(gòu)體，從而形成4個亞型。CD47亞型2主要在造血細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞中表達，1亞型在角質(zhì)形成細(xì)胞中表達，3和4亞型在神經(jīng)元細(xì)胞、腸黏膜細(xì)胞和睪丸細(xì)胞中均有表達[2]。CD47在體內(nèi)多種正常細(xì)胞和組織上表達，包括紅細(xì)胞和血小板。2012年,Willingham等發(fā)現(xiàn)CD47在實體腫瘤細(xì)胞上過表達，在卵巢癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、肝細(xì)胞癌和前列腺腫瘤細(xì)胞中的表達均顯著高于正常細(xì)胞[3]。CD47與血液腫瘤關(guān)系更為密切，在急性髓系白血病、非霍奇金淋巴瘤和急性淋巴細(xì)胞白血病中檢測到CD47的高表達[4]。但是應(yīng)用此類藥物后，會對患者輸血檢驗產(chǎn)生一定的影響，包括抗篩陽性、直抗陽性等。分析用藥后對患者輸血前的影響，可以加快輸血檢驗時間，提高輸血效率。

1 材料與方法

1.1 樣本來源應(yīng)用藥物TJ011133前后的患者標(biāo)本10例。

1.2 試劑與儀器單克隆抗-A、抗-B、抗-D及反定型用試劑紅細(xì)胞(長春博德)，抗球蛋白檢測卡、Rh血型抗原檢測卡及低離子鹽溶液(長春博迅)，抗人球蛋白試劑(上海血液生物)，抗體篩查細(xì)胞(長春博迅)，凝聚胺試劑盒(珠海貝索)，pH7.4磷酸鹽PBS緩沖液，二硫蘇糖醇(DTT)，血型血清學(xué)離心機(日本久保田，型號KA2200)，卡式離心機(長春博研，型號TD-A)。

1.3 給藥方法劑量遞增研究將采用改良的“3+3”方案，直至確定MTD或RP2D。TJ011133暫定每周給藥1次，每28天為1個治療周期。Ⅰ期劑量遞增階段預(yù)設(shè)五個遞增劑量水平，分別為：1 mg/kg、3 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg和30 mg/kg，每周給藥1次。治療每28天為1個治療周期，首次給藥起28天為DLT觀察期。

1.4 方法

1.4.1樣本采集 采集被檢對象靜脈血，加入含EDTA或枸櫞酸鈉抗凝劑的試管中。將采集的標(biāo)本配制成0.5%-0.8%紅細(xì)胞生理鹽水懸液。將Rh血型抗原檢測卡(單克隆抗體)做標(biāo)記，將待檢者0.5%-0.8%紅細(xì)胞懸液分別加入第1- 6支微管中(第1-5支微管分別含有IgM單克隆抗-D、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e抗體，第6支微管為中性膠做陰性對照)，每管50 μl。使用專用離心機離心5 min，900 rpm 2 min，1500 rpm 3 min，取出，根據(jù)試劑說明書，判定結(jié)果。

1.4.2血漿鑒定及抗體篩查 ABO血型、直接抗人球試驗、Rh血型、抗體篩查，參照第18版《AABB技術(shù)手冊》[5]進行檢測。

2 結(jié)果

2.1 血型應(yīng)用CD47前后血型結(jié)果對比，見表1。

表1 應(yīng)用CD47前后ABO血型和Rh五分型結(jié)果對比

2.2 抗篩及直抗應(yīng)用CD47前后抗篩結(jié)果對比，檢測用藥前患者自身、直抗、鹽水抗篩、凝聚胺抗篩、經(jīng)典抗人球抗篩、微柱凝膠抗篩均呈陰性結(jié)果，無不規(guī)則抗體產(chǎn)生，患者用藥后復(fù)查，直抗、自身一般呈“2+”，四種方法檢測的抗篩均呈強陽性結(jié)果。結(jié)果見表2。

表2 應(yīng)用CD47抗篩前后抗篩結(jié)果對比

2.3 交叉配血應(yīng)用CD47后普通交叉配血出現(xiàn)明顯困難，應(yīng)用廠家提供的中和試劑(中和試劑:高特異性中和試劑通過與血漿中的TJ011133藥物結(jié)合,阻止藥物與紅細(xì)胞結(jié)合帶來的輸血前實驗干擾)和ImmucorAHG(anti-IgG)兩種方法去除CD47的用藥對配血、直抗、自身的干擾，應(yīng)用效果見表3。

表3 去干擾處理前后結(jié)果對比

2.4 應(yīng)用CD47(TJ011133)與CD38(達雷妥尤單抗Daratumumab，DARA)效果對比通過對比CD47和CD38的輸血后效果，發(fā)現(xiàn)CD47明顯強于CD38，CD38一般不對血型造成影響，CD47對反定型造成影響。CD38僅對抗人球法造成影響[6]，CD47對所有方法均造成影響[7]。見表4。

表4 CD47與CD38單抗效果比較

3 討論

CD47作為新一代腫瘤免疫治療的靶點可以引起先天性和適應(yīng)性免疫應(yīng)答的作用機制，這已經(jīng)反復(fù)在臨床試驗上得到證實[8-9]。近年來，CD47單克隆抗體的臨床研究在美國迅速開展。截至2021年8月28日，在臨床試驗中登記了CD47靶向治療的46項臨床試驗。這些臨床試驗中研究了不同類型的癌癥患者，包括29項實體瘤試驗和14項血液系統(tǒng)惡性腫瘤試驗和3項混合試驗[10]。在我國，抗CD47治療方面也取得了很大進展。根據(jù)NMPA的信息，至少有17種CD47靶向藥物已被批準(zhǔn)用于臨床研究，占全球CD47靶向藥物的一半以上。本次實驗是針對應(yīng)用TJ011133的患者，TJ011133(lemzoparlimab)是一種高度差異化的紅細(xì)胞保護CD47抗體，具有獨特的表位。它具有很強的抗腫瘤活性，并盡量減少與正常紅細(xì)胞的結(jié)合，從而減少某些CD47單抗可能引起的HA[11]。

本次試驗的五名患者，均為曾經(jīng)有過輸血史的患者，為避免患者在用藥前產(chǎn)生不規(guī)則抗體或其他藥物性抗體，均使用4種方法測定了抗篩、DAT和患者自身。均為陰性，確定患者未產(chǎn)生同種抗體、自身抗體及干擾配血結(jié)果的藥物性抗體。其中有一例患者對ABO血型和Rh五分型均造成了一定的影響，且影響不明顯(凝集強度為±)，其他患者均未對血型檢測造成影響，這與應(yīng)用CD38單抗的患者用藥后基本一致[12]。應(yīng)用CD47后，配血、抗篩均發(fā)生凝集，且凝集強度強，可以證明CD47是一個高親和力抗體，不同于CD38抗體的去除方式[13]，DTT無法去除CD47抗體的干擾，這是由于CD47是Rh抗原膜復(fù)合物的組成部分，大部分與底層細(xì)胞骨架相連[14]，因此應(yīng)用DTT無法去除CD47的干擾，應(yīng)用ImmucorAHG和中和試劑則可以有效去除干擾，完成配血工作。

隨著CD47臨床藥物研究的開展，包括IBI188、SRF231等的應(yīng)用，這種因藥物導(dǎo)致的干擾將越來越多的在臨床出現(xiàn)[15]。積極配合臨床，在用藥前完善基礎(chǔ)檢驗，積累更多的患者信息，將對用藥后的去干擾提供更多的判斷依據(jù)。