鹽酸小檗堿共振光散射光譜法測(cè)定酚磺乙胺的含量

王 振，姜瑩瑩，吳佳懿，賀高韻，馬衛(wèi)興

(江蘇海洋大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 連云港 222005)

酚磺乙胺(Etamsylate)化學(xué)名稱為2，5-二羥基苯磺酸二乙胺鹽，是促凝血因子活性藥物[1-2]，可用于預(yù)防手術(shù)前后出血[3-5]，對(duì)治療腦出血、肝出血、消化道出血、泌尿道出血等十分有效。酚磺乙胺片劑是其常見(jiàn)的一種制劑形式。目前關(guān)于酚磺乙胺的測(cè)定方法主要有高效液相色譜法[6-7]、示波伏安法[8]、化學(xué)發(fā)光法[9]和可見(jiàn)分光光度法[10]等，以上各種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，因此開(kāi)發(fā)靈敏快速測(cè)定酚磺乙胺的新方法具有現(xiàn)實(shí)意義。共振光散射光譜法[11-13]是一種靈敏快速檢測(cè)技術(shù)，至今未見(jiàn)用于酚磺乙胺的含量測(cè)定。

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)酚磺乙胺無(wú)共振光散射信號(hào)，而酚磺乙胺的磺酸根陰離子在與鹽酸小檗堿發(fā)生離子締合反應(yīng)后，產(chǎn)生的離子締合物使得共振光散射信號(hào)顯著增強(qiáng)。依此建立共振光散射光譜法測(cè)定藥物酚磺乙胺的含量。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

pHS-3D型酸度計(jì),中國(guó)上海精密科學(xué)儀器有限公司；RF-6000型熒光分光光度計(jì),日本島津公司；JJ224BC型電子分析天平,常熟市雙杰測(cè)試儀器廠。

酚磺乙胺(Etamsylate)，(分析純，羅恩試劑)，配置成1 mg·L-1的水溶液；鹽酸小檗堿(Berberine hydrochloride，分析純，天圣制藥集團(tuán)股份有限公司)，配置成5×10-4mol·L-1的鹽酸小檗堿溶液；在 0.04 mol/L的磷酸(分析純，南京化學(xué)試劑有限公司)、硼酸(分析純，南京化學(xué)試劑有限公司)和醋酸(分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)混合液中加入不同體積的 0.2 mol/L的氫氧化鈉制成伯瑞坦-羅賓森(Britton-Robinson，BR)緩沖溶液，在酸度計(jì)上調(diào)制pH值；實(shí)驗(yàn)用水為去離子水。

2 實(shí)驗(yàn)方法

試劑制備：將酚磺乙胺溶液、鹽酸小檗堿溶液和BR緩沖溶液分別加入10 mL比色管中并用去離子水稀釋至刻度，進(jìn)行充分的振蕩后靜置待測(cè)，該溶液為樣品溶液。另以鹽酸小檗堿混合BR溶液于10 mL比色管中，用去離子水稀釋至刻度，做試劑空白溶液參比。

方法：在RF-6000熒光分光光度計(jì)上設(shè)置同步掃描并且令激發(fā)波長(zhǎng)(λex)等于發(fā)射波長(zhǎng)(λem)，繪制共振光散射圖譜，測(cè)得樣品溶液最大散射峰峰值為IRSL1，試劑空白溶液最大散射峰峰值為IRSL2，以試劑空白參比的樣品溶液共振光散射強(qiáng)度為ΔIRSL， ΔIRSL=IRSL1-IRSL2。

3 結(jié)果與討論

3.1 光譜分析

按照實(shí)驗(yàn)方法配制樣品溶液和試劑空白溶液，掃描 200 ～400 nm范圍內(nèi)(λex=λem)的共振光散射光譜，結(jié)果如圖1所示，曲線2為樣品溶液的共振光散射圖譜，曲線1為試劑空白溶液共振光散射圖譜，由圖可知兩種溶液在297 nm處出現(xiàn)最大共振光散射峰峰值且差值也為最大值，說(shuō)明離子締合物在此處使共振光散射信號(hào)增強(qiáng)，故選擇 297 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖1 共振光散射光譜圖Fig.1 Resonance light scattering spectra

3.2 pH值影響

在鹽酸小檗堿測(cè)定酚磺乙胺含量的實(shí)驗(yàn)中，緩沖介質(zhì)起著重要的作用，因此對(duì)緩沖液的pH值進(jìn)行優(yōu)化。通過(guò)實(shí)驗(yàn)考察了多種緩沖液如：Clark-Lubs、鹽酸、BR等對(duì)共振光散射體系的影響后，由于BR緩沖液在反應(yīng)體系中維持穩(wěn)定的pH值，故選用BR緩沖液作為緩沖介質(zhì)。

按照實(shí)驗(yàn)方法配制樣品溶液和試劑空白溶液且固定兩者用量并在pH1.81～6.09范圍內(nèi)對(duì)緩沖液pH值進(jìn)行優(yōu)化測(cè)試，計(jì)算ΔIRSL。結(jié)果如圖2所示，隨著pH值的不斷升高，ΔIRSL呈現(xiàn)先增強(qiáng)到最大值后緩慢降低的趨勢(shì)，pH值等于2.87時(shí)ΔIRSL為最大值，故選擇pH 2.87的BR緩沖液作為緩沖介質(zhì)進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。

圖2 pH值的影響Fig.2 Effect of pH-value

3.3 緩沖液用量影響

檢測(cè)酚磺乙胺需要穩(wěn)定的pH環(huán)境，BR緩沖液作為實(shí)驗(yàn)的重要介質(zhì)，在確定緩沖液pH值后，對(duì)緩沖液的用量進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。按照實(shí)驗(yàn)方法配置樣品溶液和試劑空白溶液，在測(cè)定過(guò)程中逐量提高pH 2.87 BR緩沖液的用量，測(cè)定后計(jì)算ΔIRSL。

結(jié)果如圖3所示，當(dāng)pH 2.87 BR緩沖液用量0.8 mL時(shí)，ΔIRSL出現(xiàn)最大值，而隨著緩沖液用量增加時(shí)，散射信號(hào)差值逐漸降低，說(shuō)明介質(zhì)離子增多發(fā)生了競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系才使得信號(hào)差值降低。故選擇0.8 mL作為緩沖液的最佳用量。

圖3 緩沖液用量的影響Fig.3 Effect of buffer dosage

3.4 鹽酸小檗堿用量影響

鹽酸小檗堿是測(cè)定酚磺乙胺片劑中主要成分含量的重要試劑也是與酚磺乙胺反應(yīng)的離子締合劑，其用量影響測(cè)定結(jié)果的精確性，為此考察鹽酸小檗堿溶液用量對(duì)ΔIRSL產(chǎn)生的影響。按照實(shí)驗(yàn)方法配制樣品溶液和試劑空白溶液，在測(cè)定過(guò)程中逐量提高鹽酸小檗堿溶液的用量，測(cè)定后計(jì)算ΔIRSL，結(jié)果如圖4所示：共振光散射強(qiáng)度差值總體趨勢(shì)呈先增后減，在0.8 mL產(chǎn)生最大差值，因此選用0.8 mL的鹽酸小檗堿溶液作為反應(yīng)最佳的離子締合試劑。

圖4 鹽酸小檗堿用量的影響Fig.4 Effect of the volume of berberine hydrochloride

3.5 工作曲線和檢測(cè)限

在系列10 mL比色管中，分別準(zhǔn)確加入1 mg·L-1的酚磺乙胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行檢測(cè)，其掃描光譜以及繪制的工作曲線如圖5與圖6所示，酚磺乙胺在0.02 ～0.10 mg·L-1濃度范圍內(nèi)其離子締合物的共振光散射強(qiáng)度與濃度的線性關(guān)系良好，線性回歸方程為：IRLS=32060.36C+178.02，相關(guān)系數(shù)R=0.9994，檢出限(LOD)公式為L(zhǎng)OD=3d/k，其中，對(duì)試劑空白進(jìn)行測(cè)定11次，求得標(biāo)準(zhǔn)偏差即為d，工作曲線的斜率即為k，依據(jù)實(shí)驗(yàn)測(cè)得的數(shù)據(jù)計(jì)算得出該方法的檢出限：0.013 mg·L-1。

圖5 酚磺乙胺體系共振光散射光譜圖Fig.5 Resonance light scattering spectra of etamsylate system

圖6 工作曲線Fig.6 Work curve

3.6 干擾物質(zhì)的影響

表1 干擾試驗(yàn)結(jié)果Table 1 Interference test results

酚磺乙胺作為藥物較多為片劑，在片劑的制作過(guò)程中需加入輔料，因此在最佳實(shí)驗(yàn)條件下本研究考察了常見(jiàn)的金屬離子、氨基酸、淀粉、硬脂酸鎂、滑石粉、葡萄糖等物質(zhì)對(duì)反應(yīng)體系共振光散射強(qiáng)度的影響?？疾旖Y(jié)果見(jiàn)表1，測(cè)定誤差在±5%范圍內(nèi)，以下物質(zhì)對(duì)實(shí)驗(yàn)體系幾乎不造成影響，符合藥物分析的要求。

3.7 回收實(shí)驗(yàn)

將酚磺乙胺片研磨成粉，稱取適量模擬片粉于200 mL容量瓶中，加去離子水稀釋定容制成1 μg·mL-1的待測(cè)液，按照實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行光譜掃描測(cè)定，平行測(cè)定11次，測(cè)定結(jié)果如表2所示?；厥章试?8.75%～101.30%范圍內(nèi)，平均回收率為100.58%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.87%。

表2 回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 2 The result of the recovery experiment

3.8 樣品分析

將酚磺乙胺片(標(biāo)示量為0.25 g/片)研磨成粉，精密稱取100 mg置于1 L的容量瓶中，加入去離子水定容，搖勻得酚磺乙胺片樣品制備原液。將該原液用去離子水稀釋100倍，得樣品稀釋液，準(zhǔn)確吸取適量該樣品稀釋液，按照實(shí)驗(yàn)方法配制測(cè)定溶液并進(jìn)行光譜掃描測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3所示，本法測(cè)定結(jié)果與可見(jiàn)分光光度法[10]所得結(jié)果進(jìn)行比較，精密度更佳。

表3 樣品分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 3 Sample analysis experiment results

4 結(jié) 論

在pH 2.87 B-R介質(zhì)中，基于酚磺酸根陰離子與鹽酸小檗堿陽(yáng)離子發(fā)生離子締合反應(yīng)生產(chǎn)離子締合物導(dǎo)致體系共振光散射信號(hào)在297 nm處增強(qiáng)，建立了共振光散射光譜測(cè)定酚磺乙胺的新方法，用于酚磺乙胺片劑含量測(cè)定符合藥物分析要求，方法靈敏度高、重現(xiàn)性好，為酚磺乙胺片劑質(zhì)量控制提供了新思路。