• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    淫羊藿苷聯(lián)合齊墩果酸對RAW264.7小鼠巨噬細胞遷移和M1極化的影響

    2016-07-07 02:23:31明康文洪創(chuàng)雄姜濤王劍
    廣州中醫(yī)藥大學學報 2016年3期
    關鍵詞:齊墩藿苷果酸

    明康文,洪創(chuàng)雄,姜濤,王劍

    (1.廣州市中醫(yī)醫(yī)院,廣東廣州 510301;2.廣州中醫(yī)藥大學,廣東廣州 510405)

    ?

    淫羊藿苷聯(lián)合齊墩果酸對RAW264.7小鼠巨噬細胞遷移和M1極化的影響

    明康文1,洪創(chuàng)雄2,姜濤2,王劍2

    (1.廣州市中醫(yī)醫(yī)院,廣東廣州510301;2.廣州中醫(yī)藥大學,廣東廣州510405)

    摘要:【目的】探討淫羊藿苷與齊墩果酸聯(lián)合使用對RAW264.7巨噬細胞遷移及極化的影響,并探究雌激素受體在此過程中的作用?!痉椒ā颗囵B(yǎng)RAW264.7巨噬細胞,隨機分為空白組[不加脂多糖(LPS)及藥物]、LPS組(加入終濃度為20 μg/L 的LPS)、1.5 μmol/L淫羊藿苷+1.5 μmol/L齊墩果酸組、3.0 μmol/L淫羊藿苷+3.0 μmol/L齊墩果酸組、雌激素受體拮抗劑ICI182780(終濃度1×10-3mmol/L)+1.5 μmol/L淫羊藿苷+1.5μmol/L齊墩果酸組、ICI182780(終濃度1×10-3mmol/L)+3.0 μmol/L淫羊藿苷+3.0 μmol/L齊墩果酸組。應用Transwell小室遷移實驗觀察淫羊藿苷與齊墩果酸聯(lián)合使用對LPS誘導的巨噬細胞遷移效應的影響;應用流式細胞術觀察淫羊藿苷與齊墩果酸聯(lián)合使用對LPS誘導的巨噬細胞M1極化的抑制作用,并用雌激素受體阻斷劑ICI183780觀察雌激素受體在這個過程中的作用?!窘Y果】Transwell小室遷移實驗結果表明:與空白組比較,LPS組可顯著促進RAW264.7巨噬細胞的遷移(P<0.05);與LPS組比較,ICI182780+1.5 μmol/L淫羊藿苷+1.5 μmol/L齊墩果酸組、ICI182780+3.0 μmol/L淫羊藿苷+3.0 μmol/L齊墩果酸組均可顯著抑制LPS誘導的RAW264.7巨噬細胞的遷移(P<0.05),且ICI182780+3.0 μmol/L淫羊藿苷+3.0 μmol/L齊墩果酸組作用優(yōu)于ICI182780+1.5 μmol/L淫羊藿苷+1.5 μmol/L齊墩果酸組(P<0.05)。流式細胞術檢測結果顯示:與空白組比較,LPS組CD11c+表達顯著升高(P<0.05),說明20 μg/L的LPS可以刺激RAW264.7巨噬細胞,使其向M1極化;與LPS組比較,1.5 μmol/L淫羊藿苷+ 1.5 μmol/L齊墩果酸組、3.0 μmol/L淫羊藿苷+3.0 μmol/L齊墩果酸組可協(xié)同LPS作用于RAW264.7巨噬細胞,使其向M1極化(P<0.05);與LPS組比較,ICI182780+1.5 μmol/L淫羊藿苷+1.5 μmol/L齊墩果酸組、ICI182780+3.0 μmol/L淫羊藿苷+3.0 μmol/L齊墩果酸組均可顯著抑制LPS誘導的RAW264.7巨噬細胞向M1極化(P<0.05),且ICI182780+3.0μmol/L淫羊藿苷+3.0μmol/L齊墩果酸組作用優(yōu)于ICI182780+1.5μmol/L淫羊藿苷+1.5μmol/L齊墩果酸組(P<0.05)?!窘Y論】淫羊藿苷與齊墩果酸聯(lián)合使用可能通過雌激素受體產生促進RAW264.7巨噬細胞的遷移和M1極化的作用,并在雌激素受體受到抑制后產生相反的作用。

    關鍵詞:淫羊藿苷;動脈粥樣硬化/中藥療法;齊墩果酸;巨噬細胞/病理學;遷移;極化;雌激素受體;細胞培養(yǎng)

    淫羊藿苷是中草藥淫羊藿的主要活性成分,屬于黃酮苷類化合物[1]。齊墩果酸是中藥女貞子的主要成分[2]。兩者皆為加味二至丸(淫羊藿、女貞子、墨旱蓮)的重要組成藥物,其中女貞子和淫羊藿均被證實有植物雌激素樣作用[3-4]。本研究采用體外培養(yǎng)RAW264.7小鼠巨噬細胞,通過脂多糖(LPS)刺激誘導其遷移及M1極化,以雌激素受體拮抗劑ICI182780拮抗雌激素受體,探究淫羊藿苷與齊墩果酸聯(lián)合使用對巨噬細胞遷移和極化過程中的作用,并探討其與雌激素受體之間的關系,現(xiàn)報道如下。

    1 材料與方法

    1.1細胞株小鼠巨噬細胞系RAW 264.7(由本實驗室保存),加入含10%(體積分數)胎牛血清、100 U/mL青霉素、鏈霉素的高糖DMEM,置于體積分數5%CO2、37℃培養(yǎng)箱中生長。細胞生長至70%~80%融合后傳代,一般2~3 d傳代1次。

    1.2藥物齊墩果酸(廣州齊云生物技術有限公司提供,批號:110709,純度>980 mg/g)、淫羊藿苷(上海市融禾醫(yī)藥公司提供,批號:20081478,純度>980 mg/g)。采用二甲基亞砜(DMSO)助溶,-4℃保存,實驗前用培養(yǎng)基稀釋至所需濃度,DMSO終濃度小于體積分數0.1%。雌激素受體拮抗劑ICI182780以DMSO配置成50 mmol/L的儲存液,-20℃避光保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3試劑與儀器脂多糖(LPS,美國Sigma公司產品,批號:L2880);四甲基偶氮唑鹽(MTT)、DMSO(上海翊圣生物科技有限公司產品);雌激素受體拮抗劑ICI182780(購自齊云生物技術有限公司,貨號:M182780);異硫氰酸熒光素(FITC)標記CD11c+抗體(美國BD公司產品);結晶紫染色液(碧云天公司產品);Transwell 24孔板(美國Corning公司產品,孔徑為8 μm);ORMA 371型CO2細胞培養(yǎng)箱(美國Thermo Fisher公司產品);iMark型酶標儀16138、C6流式細胞儀(美國Bio-Rad公司產品)。

    1.4RAW264.7細胞活力檢測調整RAW264.7細胞懸液濃度為1×105/mL,加入96孔培養(yǎng)板內,每孔體積為100 μL,置于5%(體積分數)CO2、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至貼壁。吸出舊的培養(yǎng)基,分別加入淫羊藿苷與齊墩果酸混合培養(yǎng)基,終濃度分別為1.5 μmol/L、3.0 μmol/L??瞻捉M加含0.1%(體積分數)DMSO的培養(yǎng)基,每組設6個復孔,繼續(xù)培養(yǎng)24 h。每孔加入MTT 20 μL,37℃培養(yǎng)4 h后,每孔加入150 μL的DMSO,于490 nm處檢測各孔的吸光度值。實驗重復3次以上。

    1.5Transwell小室遷移實驗調整RAW264.7細胞懸液濃度為1×106/mL,上室每孔加入100 μL細胞懸液,下室加入600 μL含10%(體積分數)的胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)至細胞貼壁,換無血清DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h(使細胞同步化),加入藥物干預。實驗分組:空白組(不加LPS及藥物)、LPS組(加入終濃度為20 μg/L的LPS)、給藥1組(1.5 μmol/L淫羊藿苷+ 1.5 μmol/L齊墩果酸組)、給藥2組(3.0 μmol/L淫羊藿苷+3.0 μmol/L齊墩果酸組)、給藥3組(ICI182780+1.5 μmol/L淫羊藿苷+ 1.5 μmol/L齊墩果酸組)、給藥4組(ICI182780+3.0 μmol/L淫羊藿苷+3.0 μmol/L齊墩果酸組)。除空白組和LPS組外,各給藥組均在加藥后4 h加入終濃度為20 μg/L的LPS作用24 h。取出小室,用棉簽擦去上室的細胞,以40 g/L多聚甲醛固定15 min,再用PBS清洗1次,結晶紫染色10 min,顯微鏡下拍照并統(tǒng)計遷移至下室的細胞數量(隨機選取3個視野)。

    1.6流式細胞術檢測RAW264.7細胞CD11c+的表達調整RAW 264.7細胞懸液濃度為1×106/mL,接種至12孔板。待細胞貼壁后換無血清DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h(使細胞同步化),加入藥物干預。實驗分組同1.5項。除空白組和LPS組外,各給藥組均在加藥后4 h加入終濃度為20 μg/L的LPS作用24 h。消化收集細胞于250 μL的離心管中PBS清洗2~3次,離心,加入200 μL PBS重懸細胞后,加入1 μL大鼠抗小鼠的流式抗體CD11c+,4℃避光孵育30 min。采用流式細胞分析儀檢測,以CD11c+標記百分率代表M1極化的比例。

    1.7統(tǒng)計方法采用SPSS 17.0 for Windows軟件進行分析。數據以均數±標準差(±s)表示,多組間比較采用方差分析(ANOVA),以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1各組RAW264.7細胞活力檢測結果比較表1結果顯示:與空白組比較,分別給予1.5 μmol/L淫羊藿苷+1.5 μmol/L齊墩果酸、3.0 μmol/L淫羊藿苷+ 3.0 μmol/L齊墩果酸均未顯示出細胞毒性作用(P>0.05)。

    表1 各組RAW264.7細胞活力檢測結果比較Table 1 RAW264.7 macrophage viability of various groups (±s)

    表1 各組RAW264.7細胞活力檢測結果比較Table 1 RAW264.7 macrophage viability of various groups?。ā纒)

    組別空白組給藥1組給藥2組N666 D(λ=490 nm)0.57±0.08 0.56±0.06 0.57±0.04

    2.2各組對RAW264.7巨噬細胞遷移能力的影響比較表2、圖1結果顯示:與空白組比較,20 μg/L 的LPS組刺激24 h可顯著促進RAW264.7巨噬細胞的遷移(P<0.05);與空白組比較,1.5 μmol/L淫羊藿苷+ 1.5 μmol/L齊墩果酸、3.0 μmol/L淫羊藿苷+3.0 μmol/L齊墩果酸也可促進RAW264.7巨噬細胞的遷移(P<0.05),但與LPS組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與LPS組比較,ICI182780+1.5 μmol/L淫羊藿苷+ 1.5 μmol/L齊墩果酸組、ICI182780 + 3.0 μmol/L淫羊藿苷+ 3.0 μmol/L齊墩果酸組均可顯著抑制LPS誘導的RAW264.7巨噬細胞的遷移(P<0.05),且ICI182780+3.0 μmol/L淫羊藿苷+3.0 μmol/L齊墩果酸組作用優(yōu)于ICI182780 + 1.5 μmol/L淫羊藿苷+ 1.5 μmol/L齊墩果酸組(P<0.05)。說明在雌激素受體拮抗劑ICI182780存在的情況下,淫羊藿苷與齊墩果酸聯(lián)合使用可以抑制RAW264.7巨噬細胞的遷移,其作用可能與雌激素受體相關。

    表2 各組對RAW264.7巨噬細胞遷移能力的影響比較Table 2 Comparison of macrophage migration of various groups?。ā纒)

    表2 各組對RAW264.7巨噬細胞遷移能力的影響比較Table 2 Comparison of macrophage migration of various groups?。ā纒)

    ①P<0.05,與空白組比較;②P<0.05,與LPS組比較;③P<0.05,與給藥3組比較

    組別N n遷移至下室的細胞/(個·視野-1)空白組LPS組給藥1組給藥2組給藥3組給藥4組333333 133.0±6.66 194.0±4.93①198.0±8.50①183.7±17.95①161.3±2.91②93.3±2.60②③

    2.3各組對RAW64.7巨噬細胞CD11c+表達的影響表3、圖2結果顯示:與空白組比較,LPS組CD11c+表達顯著升高(P<0.05),20 μg/L的LPS組可以刺激RAW264.7巨噬細胞,使其向M1極化;與LPS組比較,1.5 μmol/L淫羊藿苷+ 1.5 μmol/L齊墩果酸、3.0 μmol/L淫羊藿苷+ 3.0 μmol/L齊墩果酸組可協(xié)同LPS作用于RAW264.7巨噬細胞,使其向M1極化(P<0.05);與LPS組比較,ICI182780+ 1.5 μmol/L淫羊藿苷+ 1.5 μmol/L齊墩果酸組、ICI182780 + 3.0 μmol/L淫羊藿苷+ 3.0 μmol/L齊墩果酸組均可顯著抑制LPS誘導的RAW264.7巨噬細胞向M1極化(P<0.05),且ICI182780 + 3.0 μmol/L淫羊藿苷+3.0 μmol/L齊墩果酸組作用優(yōu)于ICI182780 + 1.5μmol/L淫羊藿苷+ 1.5 μmol/L齊墩果酸組(P<0.05)。說明雌激素受體在雌激素受體拮抗劑ICI182780存在的情況下,淫羊藿苷與齊墩果酸聯(lián)合使用可以抑制RAW264.7巨噬細胞向M1極化,其作用可能與雌激素受體相關。

    圖1 各組對RAW264.7巨噬細胞遷移能力的影響(結晶紫染色,×20)Figure 1 RAW264.7 macrophage polarization in various groups(by crystal violet staining,×20)

    表3 各組對LPS誘導RAW264.7巨噬細胞CD11c+表達的影響比較Table 3 The percentage of CD11c+positive labeling in LPS-induced RAW264.7 macrophages of various groups?。ā纒)

    表3 各組對LPS誘導RAW264.7巨噬細胞CD11c+表達的影響比較Table 3 The percentage of CD11c+positive labeling in LPS-induced RAW264.7 macrophages of various groups?。ā纒)

    ①P<0.05,與空白組比較;②P<0.05,與LPS組比較;③P<0.05,與給藥3組比較

    組別空白組LPS組給藥1組給藥2組給藥3組給藥4組N333333 pCD11c+標記百分率/% 16.9±0.8 86.6±0.3①95.1±0.8①②90.0±0.2①②79.7±1.0①②62.8±0.4①②③

    3 討論

    動脈粥樣硬化(AS)是一個復雜的代謝性心血管疾病,在針對其形成的研究中,提出了各種學說,如羅素發(fā)現(xiàn)動脈粥樣硬化斑塊內巨噬細胞的浸潤,提出了動脈粥樣硬化炎癥學說、損傷應答學說以及德國病理學家威爾嘯提出的脂質浸潤學說[5]。在上述各種學說中,巨噬細胞的作用可以說是貫穿了動脈粥樣硬化整個發(fā)生發(fā)展的過程中。巨噬細胞按照其表現(xiàn)和分泌的細胞因子可以分為2種極化類型,即經典活化的M1型和選擇性活化的M2型巨噬細胞[6]。其中,M1型巨噬細胞在炎癥的發(fā)生發(fā)展過程中通過分泌促炎性的細胞因子如腫瘤壞死因子-α等和趨化因子參與炎癥進程,表現(xiàn)為促進炎癥反應。而M2型巨噬細胞則通過分泌抑制性細胞因子如白細胞介素-10等下調免疫應答,表現(xiàn)為抑制炎癥反應[7]。在AS進程中,M1型巨噬細胞主要存在于不穩(wěn)定斑塊中[8],CD11c+為其表面特異性標志物,可作為其M1極化的檢測標志。

    雌激素通過雌激素受體(ER)參與體內生理和病理相關過程,在AS進程中,雌激素可直接作用于內皮細胞、平滑肌細胞、血管外膜的成纖維細胞,對心血管系統(tǒng)有直接的保護作用。如雌激素可以通過非基因途徑激活ERK1/2途徑上調cyclin D1的表達促進內皮細胞增殖與修復[9];在血管平滑肌細胞則可通過膜雌激素受體激活ERK1/2信號通路而抑制平滑肌細胞的增殖,這一過程受caveeolin-1蛋白介導[10-12];雌激素還可以抑制球囊損傷術后血管外膜成纖維細胞的增殖[13-14]。但國外流行病學研究[15-16]結果顯示:在50~59歲婦女中(對應中醫(yī)中絕經期前)通過補充雌激素或具有雌激素效應的藥物可以降低心肌梗死發(fā)病風險,但在70~79歲時(對應中醫(yī)絕經期后),補充雌激素反而會增加心肌梗死的發(fā)病風險。所以說,雌激素的作用在女性動脈粥樣硬化的進程中呈拋物線形作用。ICI172780是一種甾體類選擇性雌激素受體調節(jié)劑,是ER的特異性拮抗劑,它通過ER降解而下調雌激素受體,影響ER二聚體化、干擾ER細胞核定位等方式減少與ER的結合。ERα和ERβ都對特異性拮抗劑ICI172780反應,ICI172780基本可以完全阻斷雌激素的效應[17]。

    圖2 各組經LPS誘導RAW264.7巨噬細胞CD11c+表達流式細胞圖Figure 2 Flow cytometry results of CD11c+expression in LPS-induced RAW264.7 macrophages of various groups

    本課題組發(fā)現(xiàn)臨床上加味二至丸在防治更年期婦女動脈粥樣硬化中有著較好的療效,并通過卵巢切除更年期大鼠模型,以加味二至丸進行干預。預實驗結果提示加味二至丸可以改善卵巢切除大鼠動脈管周脂肪收縮功能。因淫羊藿與女貞子為具有植物雌激素效應的中藥,推測加味二至丸可能通過雌激素受體產生作用。本研究RAW264.7巨噬細胞活力檢測結果顯示:1.5 μmol/L淫羊藿苷+1.5 μmol/L齊墩果酸、3.0 μmol/L淫羊藿苷+ 3.0 μmol/L齊墩果酸對細胞生長增殖無任何毒性作用,可用于實驗后續(xù)研究。Transwell小室遷移實驗結果表明:在LPS刺激下巨噬細胞遷移數量明顯增加,加入淫羊藿苷與齊墩果酸后,其效應反而是增加的,表明淫羊藿苷與齊墩果酸聯(lián)合使用可促進巨噬細胞的遷移。此實驗結果與預期不相符,推測原因可能是在體內與體外藥物作用濃度不一致所導致的。但當雌激素受體拮抗劑ICI183780存在時,淫羊藿苷與齊墩果酸聯(lián)合使用卻能顯著抑制巨噬細胞的遷移,提示淫羊藿苷與齊墩果酸聯(lián)合使用在雌激素受體受到拮抗時發(fā)揮作用,而且隨著濃度的增加抑制巨噬細胞遷移的能力逐漸增強。流式細胞術檢測巨噬細胞M1極化實驗結果表明:LPS可以誘導巨噬細胞向M1極化,且作用明顯。加入淫羊藿苷與齊墩果酸后,M1極化的比例是增加的,表明淫羊藿苷與齊墩果酸聯(lián)合使用可促進巨噬細胞向M1極化。但當雌激素受體拮抗劑ICI183780存在時,淫羊藿苷與齊墩果酸聯(lián)合使用卻能顯著抑制巨噬細胞向M1極化,提示淫羊藿苷與齊墩果酸聯(lián)合使用在雌激素受體受到拮抗時產生作用,并隨濃度的增加作用增強。

    2個實驗的結果相符,共同證實雌激素受體在巨噬細胞的遷移和M1極化中有著重要的作用,而淫羊藿苷與齊墩果酸聯(lián)合使用可能通過雌激素受體產生促進巨噬細胞遷移和向M1極化。而當雌激素受體拮抗劑ICI182780阻斷了雌激素受體后,淫羊藿苷與齊墩果酸聯(lián)用可以抑制RAW264.7巨噬細胞和M1極化。本研究結果提示加味二至丸在防治女性動脈粥樣硬化中不僅是通過雌激素受體產生作用,還可通過其他途徑產生作用,具體機制有待進一步研究。

    參考文獻:

    [1]李梨,周岐新.淫羊藿苷藥理作用研究進展[J].中國藥房,2005,16(12):952.

    [2]程曉芳,何明芳,張穎,等.女貞子化學成分的研究[J].中國藥科大學學報,2000,31(3):169.

    [3]李柄如,佘運初.補腎藥對下丘腦垂體性腺軸功能的影響[J].中醫(yī)雜志,1984,25(7):6365.

    [4]趙澎,劉名彥,馬惠珍.從含雌、雄激素類化合物的中藥看中醫(yī)的雙向調節(jié)作用[J].北京中醫(yī)學院學報,1988,11(6):4142.

    [5]Ross R.Atherosclerosis--an inflammatory disease[J].N Engl J Med,1999,340(2):115.

    [6]Gordon S.Alternative activation of macrophages[J].Nat Rev Immunol,2003,3(1):23.

    [7]Van Ginderachter J A,Movahedi K,Hassanzadeh Ghassabeh G,et al.Classical and alternative activation of mononuclear phagocytes:picking the best of both worlds for tumor promotion [J].Immunobiology,2006,211(6-8):487.

    [8]Stoger J L,Gijbels M J,vander Velden S,et al.Distribution of macrophage polarization markers in human atherosclerosis[J].Atherosclerosis,2013,225:461.

    [9]Fu X D,Cui Y H,Lin G P,et al.Non-genomic effects of 17beta-estradiol in activation of the ERK1/ERK2 pathway induces cell proliferation through upregulation of cyclin D1 expression in bovine artery endothelial cells[J].Gynecol Endocrinol,2007,23(3):131

    [10]劉海梅,趙曉峰,徐進文,等.17β-雌二醇對新生牛血清誘導的血管平滑肌細胞增殖反應的影響及其機制[J].汕頭大學醫(yī)學院學報,2009,22(2):75.

    [11]Liu H M,Zhao X F,Guo L N,et al.Effects of caveolin-1 on the 17beta-estradiol-mediated inhibition of VSMC proliferation induced by vascular injury[J].Life Sci,2007,80(8):800.

    [12]劉海梅,趙曉峰,林桂平,等.iNOS及ERK1/2信號轉導通路在17β-雌二醇抑制血管平滑肌細胞增殖中的作用[J].心臟雜志,2009,21(6):761.

    [13]胡飛雪,王庭槐.17β-雌二醇抑制堿性成纖維細胞生長因子誘導的血管外膜成纖維細胞增殖[J].中華老年心腦血管病雜志,2006,8(2):122.

    [14]胡飛雪,王庭槐.17β-雌二醇抑制血管球囊損傷后血管外膜增殖[J].中華老年心腦血管病雜志,2005,7(5):337.

    [15]Clarkson T B.Estrogen effects on arteries vary with stage of reproductive life and extent of subclinical atherosclerosis progression[J].Menopause,2007,14(3,Pt 1):373.

    [16]Saren P,Welgus H G,Kovanen P T.TNF-alpha and IL-1beta selectively induce expression of 92 -kDa gelatinase by human macrophages[J].J Immunol,1996,157(9):4159.

    [17]朱曉峰,張榮華.淫羊藿苷通過雌激素受體和p38MAPK信號誘導MC3T3-E1Subclone14細胞的分化[J].中國老年學雜志,2012,3(32):957.

    【責任編輯:黃玲】

    Effect of Combined Use of Icariin and Oleanolic Acid on Migration and M1 Polarization of RAW264.7 Macrophages

    MING Kangwen1,HONG Chuangxiong2,JIANG Tao2,WANG Jian2
    (1.Guangzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine,Guangzhou 510301 Guangdong,China;
    2.Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510405 Guangdong,China)

    Abstract:Objective To investigate the effect of the combined use of icariin and oleanolic acid on the migrationand polarization of RAW264.7 macrophages,and to explore the role of estrogen receptor in the migration and polarization process.Methods The cultured RAW264.7 macrophages were randomized into blank control group,lipopolysaccharide(LPS)group(with a final concentration of 20 μg/L of LPS added),low-dose medication group (1.5 μmol/L of both icariin and oleanolic acid),high-dose medication group(3.0 μmol/L of both icariin and oleanolic acid),low-dose medication and ICI182780 group(estrogen receptor antagonist ICI182780 at final concentration of 1×10-3mmol/L+1.5 μmol/L of icariin and oleanolic acid),and high-dose medication and ICI182780 group(ICI182780 at final concentration of 1×10-3mmol/L + 3.0 μmol/L of both icariin and oleanolic acid).Transwell chamber culture was applied to observe the effect of combined use of icariin and oleanolic acid on the migration of macrophages induced by LPS.Flow cytometry was applied to observe the inhibitory effect of the combined use of icariin and oleanolic acid on M1 macrophage polarization induced by LPS,and ICI183780 was applied to observe the effect of estrogen receptor on the migration and polarization process.Results The result of Transwell chamber culture showed that LPS(20 μg/L)could significantly promote the migration of RAW264.7 macrophages.Compared with LPS group,LPS-induced RAW264.7 macrophage migration was obviously inhibited in low- and high-dose medication and ICI182780 groups(P<0.05),and inhibition of high-dose medication and ICI182780 group was superior to that of the low dose group(P<0.05).Flow cytometry results showed that CD11c +was highly expressed in LPS group(P<0.05 compared with the control group),indicating that 20 μg/L of LPS stimulated RAW264.7 macrophages and induced it to become M1 polarization.Compared with LPS group,low- and high-dose medication groups had synergistic action on LPS in inducing the M1 polarization of RAW264.7 macrophages(P<0.05).Compared with LPS group,low- and high-dose medication and ICI182780 groups had inhibitory effect on LPS-induced M1 polarization in RAW264.7 macrophages(P<0.05),and the effect of high-dose medication and ICI182780 group was superior to that of the low-dose group (P<0.05).Conclusion The combined use of icariin and oleanolic acid can promote the migration and M1 polarization of RAW264.7 macrophages probably mediated by estrogen receptors,and has the opposite effect when estrogen receptor is inhibited.

    Key words:icariin;atherosclerosis/TCD therapy;oleanolic acid;macrophages/pathology;migration;polarization;estrogen receptors;cell culture

    中圖分類號:R285.5

    文獻標志碼:A

    文章編號:1007-3213(2016)03 - 0366 - 06

    DOI:10.13359/j.cnki.gzxbtcm.2016.03.020

    收稿日期:2015-10-23

    作者簡介:明康文(1976-),女,副主任中醫(yī)師,碩士研究生導師;E-mail:mkw1976828@sina.com

    基金項目:國家自然科學基金資助項目(編號:81373799);廣東省自然科學基金資助項目(編號:S201201001040967)

    猜你喜歡
    齊墩藿苷果酸
    淫羊藿中朝藿苷A、B和C的酶轉化及其稀有箭藿苷的制備
    新型雙相酶水解體系制備寶藿苷I
    中成藥(2018年12期)2018-12-29 12:26:00
    齊墩果酸固體分散體的制備
    中成藥(2018年10期)2018-10-26 03:40:56
    齊墩果酸對自然衰老大鼠睪丸DNA損傷保護作用及機制研究
    雙藿苷A分子印跡聚合物的制備及應用
    中成藥(2017年4期)2017-05-17 06:09:49
    齊墩果酸衍生物的合成及其對胰脂肪酶的抑制作用
    熊果酸對肺癌細胞株A549及SPCA1細胞周期的抑制作用
    水線草熊果酸和齊墩果酸含量測定
    淫羊藿苷與過氧化氫酶相互作用的熒光光譜法和分子對接研究
    赤兔流量卡办理| 亚洲av福利一区| 一级毛片aaaaaa免费看小| 少妇熟女欧美另类| av国产久精品久网站免费入址| 九色成人免费人妻av| 欧美日韩精品成人综合77777| av在线蜜桃| 久久女婷五月综合色啪小说 | 一级毛片久久久久久久久女| 97热精品久久久久久| 男人爽女人下面视频在线观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 日本三级黄在线观看| 在线观看一区二区三区激情| 国产伦精品一区二区三区四那| 一级爰片在线观看| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲av成人精品一二三区| 久久久久久伊人网av| 日韩av不卡免费在线播放| av福利片在线观看| 婷婷色综合www| 69av精品久久久久久| 69人妻影院| 一级毛片久久久久久久久女| 18禁在线播放成人免费| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 成人黄色视频免费在线看| 亚洲成人精品中文字幕电影| 91久久精品电影网| 九九在线视频观看精品| 永久网站在线| 久久久久久久久久成人| 97在线人人人人妻| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产日韩欧美在线精品| 久久久久久久久久久丰满| 九九爱精品视频在线观看| 免费看av在线观看网站| 国内精品宾馆在线| 91在线精品国自产拍蜜月| 久久久精品94久久精品| 亚州av有码| 搡女人真爽免费视频火全软件| av在线蜜桃| 日本-黄色视频高清免费观看| 伦理电影大哥的女人| 在线精品无人区一区二区三 | 久久久国产一区二区| 视频中文字幕在线观看| 嫩草影院新地址| 久久韩国三级中文字幕| 男人狂女人下面高潮的视频| 亚洲国产精品999| 亚洲国产高清在线一区二区三| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 精品久久久久久电影网| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 日韩 亚洲 欧美在线| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 成年版毛片免费区| 又大又黄又爽视频免费| 免费观看性生交大片5| 国产精品99久久99久久久不卡 | 中国美白少妇内射xxxbb| 天堂中文最新版在线下载 | 一级二级三级毛片免费看| 六月丁香七月| 国产精品伦人一区二区| 尾随美女入室| 街头女战士在线观看网站| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频 | 成人二区视频| 国产免费又黄又爽又色| 国产熟女欧美一区二区| 街头女战士在线观看网站| 2018国产大陆天天弄谢| 日本一二三区视频观看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 久久精品国产亚洲网站| 成人二区视频| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 看免费成人av毛片| 午夜福利在线在线| 中国国产av一级| 亚洲国产最新在线播放| 内地一区二区视频在线| 久热这里只有精品99| 国产精品一区二区性色av| 亚洲伊人久久精品综合| 91精品伊人久久大香线蕉| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 人妻制服诱惑在线中文字幕| 免费观看a级毛片全部| 久久久久久久午夜电影| 一级黄片播放器| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲伊人久久精品综合| 亚洲va在线va天堂va国产| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 在线天堂最新版资源| 看非洲黑人一级黄片| av在线天堂中文字幕| 国产片特级美女逼逼视频| 国产在线一区二区三区精| 亚洲最大成人中文| 日本午夜av视频| 在线观看国产h片| 免费观看的影片在线观看| 中文字幕亚洲精品专区| av在线老鸭窝| 九九在线视频观看精品| 男女下面进入的视频免费午夜| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 精品久久久久久久久av| 日本一二三区视频观看| 新久久久久国产一级毛片| 久久鲁丝午夜福利片| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 色网站视频免费| 黄片wwwwww| 日韩大片免费观看网站| 日本一二三区视频观看| 国产免费又黄又爽又色| 只有这里有精品99| 午夜免费鲁丝| a级毛色黄片| 一级毛片aaaaaa免费看小| 插逼视频在线观看| 国产成人免费观看mmmm| 免费大片18禁| 97精品久久久久久久久久精品| 青春草视频在线免费观看| 黄色日韩在线| 日本wwww免费看| 欧美激情在线99| 成人二区视频| 99久久九九国产精品国产免费| 精品人妻视频免费看| 日韩强制内射视频| 嘟嘟电影网在线观看| 人妻一区二区av| 免费高清在线观看视频在线观看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产视频内射| 国产精品不卡视频一区二区| 91aial.com中文字幕在线观看| 91久久精品国产一区二区三区| 午夜爱爱视频在线播放| 日韩成人伦理影院| 国产极品天堂在线| 有码 亚洲区| 日韩一区二区三区影片| 久久久久久久久久久免费av| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 亚洲成人精品中文字幕电影| 久久国内精品自在自线图片| 人妻一区二区av| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 日本欧美国产在线视频| 不卡视频在线观看欧美| 精华霜和精华液先用哪个| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产成人aa在线观看| 美女被艹到高潮喷水动态| av在线蜜桃| 亚洲内射少妇av| 国产精品99久久99久久久不卡 | 伦理电影大哥的女人| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲av一区综合| 超碰97精品在线观看| 久久精品国产亚洲av涩爱| 日韩欧美 国产精品| 亚洲av国产av综合av卡| 国产免费一级a男人的天堂| 国产男女超爽视频在线观看| 在线看a的网站| 美女国产视频在线观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 中文字幕久久专区| 一区二区三区精品91| 99九九线精品视频在线观看视频| 久久久久性生活片| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 久久久久久伊人网av| 亚洲国产欧美人成| 在线免费十八禁| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲av国产av综合av卡| 久久6这里有精品| 亚洲久久久久久中文字幕| 九草在线视频观看| 草草在线视频免费看| 一二三四中文在线观看免费高清| 丝袜喷水一区| 身体一侧抽搐| 久久久精品94久久精品| 国产v大片淫在线免费观看| 一个人看视频在线观看www免费| 日日啪夜夜撸| 久久久久久久午夜电影| 好男人在线观看高清免费视频| 国产高清三级在线| 三级经典国产精品| 搡女人真爽免费视频火全软件| 好男人视频免费观看在线| 免费黄网站久久成人精品| 不卡视频在线观看欧美| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频 | 欧美人与善性xxx| 亚洲av欧美aⅴ国产| 看非洲黑人一级黄片| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 伊人久久国产一区二区| 国产免费福利视频在线观看| 一级二级三级毛片免费看| 久久久久九九精品影院| 人妻 亚洲 视频| 久久久午夜欧美精品| 综合色丁香网| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产高潮美女av| 丰满乱子伦码专区| 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲成色77777| 免费电影在线观看免费观看| 久久久久精品性色| 尾随美女入室| 日韩精品有码人妻一区| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲丝袜综合中文字幕| 少妇被粗大猛烈的视频| 高清欧美精品videossex| 夜夜爽夜夜爽视频| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 免费观看无遮挡的男女| 国产免费又黄又爽又色| 亚洲不卡免费看| 成人欧美大片| 精品国产乱码久久久久久小说| 久久午夜福利片| 最近最新中文字幕大全电影3| 大话2 男鬼变身卡| a级毛片免费高清观看在线播放| 下体分泌物呈黄色| av在线亚洲专区| av国产免费在线观看| 插阴视频在线观看视频| 成年女人在线观看亚洲视频 | 亚洲最大成人手机在线| 午夜精品一区二区三区免费看| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 亚洲三级黄色毛片| 久久久久九九精品影院| 亚洲人与动物交配视频| 国产精品国产三级国产专区5o| 久久精品夜色国产| 99热这里只有精品一区| 99热这里只有精品一区| 秋霞伦理黄片| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产精品一区二区性色av| 2021天堂中文幕一二区在线观| 最近最新中文字幕免费大全7| 舔av片在线| 亚洲va在线va天堂va国产| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 伊人久久国产一区二区| 夜夜爽夜夜爽视频| 网址你懂的国产日韩在线| 草草在线视频免费看| 一本一本综合久久| 日韩成人伦理影院| 高清日韩中文字幕在线| 国产中年淑女户外野战色| 成人午夜精彩视频在线观看| 日本午夜av视频| 97精品久久久久久久久久精品| 精品熟女少妇av免费看| videossex国产| 天天一区二区日本电影三级| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 99久久精品一区二区三区| 免费电影在线观看免费观看| 亚洲国产精品国产精品| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 亚洲av不卡在线观看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 禁无遮挡网站| 熟女电影av网| 精品久久久久久久末码| 免费大片黄手机在线观看| 日韩强制内射视频| 免费看不卡的av| 2018国产大陆天天弄谢| tube8黄色片| 日韩精品有码人妻一区| 国产91av在线免费观看| 国产精品福利在线免费观看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 交换朋友夫妻互换小说| 热99国产精品久久久久久7| 国产黄片美女视频| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 校园人妻丝袜中文字幕| 内射极品少妇av片p| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲三级黄色毛片| 2018国产大陆天天弄谢| 日本一本二区三区精品| 黑人高潮一二区| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲欧美精品专区久久| 干丝袜人妻中文字幕| 男人舔奶头视频| 简卡轻食公司| 91久久精品电影网| 在线 av 中文字幕| 亚洲第一区二区三区不卡| 成人无遮挡网站| 欧美激情久久久久久爽电影| 欧美zozozo另类| 一个人看视频在线观看www免费| 激情 狠狠 欧美| 成年女人在线观看亚洲视频 | 中国美白少妇内射xxxbb| 欧美国产精品一级二级三级 | 18禁动态无遮挡网站| 街头女战士在线观看网站| 99热全是精品| 久久99蜜桃精品久久| 久久久久性生活片| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 久久久色成人| 国产熟女欧美一区二区| 国产亚洲精品久久久com| 九九在线视频观看精品| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲av二区三区四区| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 在线精品无人区一区二区三 | 性色av一级| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 麻豆乱淫一区二区| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲四区av| 欧美日本视频| 成人二区视频| 内射极品少妇av片p| 26uuu在线亚洲综合色| 男女边吃奶边做爰视频| 久久精品国产亚洲av天美| 哪个播放器可以免费观看大片| 性色avwww在线观看| 日韩在线高清观看一区二区三区| 久久久精品欧美日韩精品| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产亚洲最大av| 午夜免费观看性视频| 精品久久久久久久久av| 成人欧美大片| 97在线视频观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 亚洲成人av在线免费| 午夜福利视频精品| 免费av不卡在线播放| 一二三四中文在线观看免费高清| 黄色一级大片看看| 亚洲,一卡二卡三卡| 亚洲欧美日韩东京热| 久久99热这里只频精品6学生| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 最近中文字幕高清免费大全6| 中文资源天堂在线| 天美传媒精品一区二区| 岛国毛片在线播放| 国产精品久久久久久av不卡| 亚洲欧洲日产国产| 别揉我奶头 嗯啊视频| 亚洲伊人久久精品综合| 男女那种视频在线观看| 国产男人的电影天堂91| 成人一区二区视频在线观看| a级毛片免费高清观看在线播放| 看黄色毛片网站| 激情五月婷婷亚洲| 久久久久久久久久成人| 久久韩国三级中文字幕| 全区人妻精品视频| 久久久久网色| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲精品456在线播放app| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 青春草国产在线视频| 日本与韩国留学比较| 亚洲精品456在线播放app| 少妇丰满av| 久久久久久久久久久丰满| av免费在线看不卡| 一级毛片aaaaaa免费看小| a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲在久久综合| 免费观看无遮挡的男女| 九九在线视频观看精品| 下体分泌物呈黄色| 日本与韩国留学比较| 91精品国产九色| 日韩不卡一区二区三区视频在线| av在线老鸭窝| 欧美少妇被猛烈插入视频| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产成人免费无遮挡视频| 黄色日韩在线| 婷婷色综合www| 寂寞人妻少妇视频99o| 国产精品99久久99久久久不卡 | 亚洲av免费高清在线观看| 在线看a的网站| 97精品久久久久久久久久精品| 免费看a级黄色片| 极品教师在线视频| 精品一区二区免费观看| 国产淫语在线视频| 久久影院123| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 午夜福利视频精品| 国产午夜福利久久久久久| 亚洲国产色片| 蜜臀久久99精品久久宅男| 超碰97精品在线观看| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲人成网站高清观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 99re6热这里在线精品视频| 一个人观看的视频www高清免费观看| 日本熟妇午夜| 国产在视频线精品| 男女边摸边吃奶| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲怡红院男人天堂| 国产日韩欧美在线精品| 青春草亚洲视频在线观看| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲国产最新在线播放| 久久久久久九九精品二区国产| 韩国av在线不卡| 久久国产乱子免费精品| 高清在线视频一区二区三区| 亚洲内射少妇av| 色5月婷婷丁香| 亚洲色图综合在线观看| .国产精品久久| 在线 av 中文字幕| 欧美日韩在线观看h| 国产爽快片一区二区三区| 日韩大片免费观看网站| 18+在线观看网站| 嫩草影院新地址| 色网站视频免费| 简卡轻食公司| av国产免费在线观看| videos熟女内射| 色哟哟·www| 亚洲性久久影院| 国产av国产精品国产| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 国产 精品1| 亚洲熟女精品中文字幕| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产 精品1| 亚洲成人精品中文字幕电影| 99热这里只有精品一区| 国产成年人精品一区二区| 欧美变态另类bdsm刘玥| 免费观看性生交大片5| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 九草在线视频观看| 女人久久www免费人成看片| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 极品少妇高潮喷水抽搐| eeuss影院久久| 日本黄色片子视频| 男的添女的下面高潮视频| 亚洲欧美清纯卡通| av福利片在线观看| 91精品伊人久久大香线蕉| 看免费成人av毛片| 久久精品久久精品一区二区三区| 人妻一区二区av| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 精品一区在线观看国产| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 夜夜爽夜夜爽视频| xxx大片免费视频| 亚洲人成网站高清观看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 日本三级黄在线观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产爽快片一区二区三区| 男女下面进入的视频免费午夜| 久久久久久久大尺度免费视频| 日本午夜av视频| 最近最新中文字幕大全电影3| 久久久精品欧美日韩精品| 黄色日韩在线| 久久久久网色| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国产成人aa在线观看| 五月开心婷婷网| 三级国产精品欧美在线观看| 六月丁香七月| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲av一区综合| 一个人看视频在线观看www免费| 综合色丁香网| 看黄色毛片网站| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产淫语在线视频| 九色成人免费人妻av| 联通29元200g的流量卡| 有码 亚洲区| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产视频首页在线观看| 国产成人午夜福利电影在线观看| 激情 狠狠 欧美| 特级一级黄色大片| 久久97久久精品| 看十八女毛片水多多多| 嫩草影院入口| 99精国产麻豆久久婷婷| 插阴视频在线观看视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 毛片女人毛片| 22中文网久久字幕| 欧美xxxx性猛交bbbb| 亚洲美女视频黄频| 欧美高清成人免费视频www| 亚洲精品影视一区二区三区av| 亚洲一区二区三区欧美精品 | 26uuu在线亚洲综合色| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲国产精品成人综合色| 午夜福利网站1000一区二区三区| 午夜精品国产一区二区电影 | 又爽又黄a免费视频| 在线观看国产h片| 亚洲成人av在线免费| 亚洲精品一区蜜桃| 国国产精品蜜臀av免费| 在线a可以看的网站| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 美女被艹到高潮喷水动态| 午夜福利视频精品| 亚洲av国产av综合av卡| 国产大屁股一区二区在线视频| 国产视频首页在线观看| 高清午夜精品一区二区三区| 一级av片app| 日韩av免费高清视频| 免费大片黄手机在线观看| 国产精品99久久99久久久不卡 | 老女人水多毛片| 国产精品女同一区二区软件| 欧美三级亚洲精品| 国产精品蜜桃在线观看| 97在线视频观看| 欧美区成人在线视频| 欧美3d第一页| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 网址你懂的国产日韩在线| 人妻系列 视频| 国产成年人精品一区二区| 免费大片黄手机在线观看| 最近的中文字幕免费完整| 色吧在线观看| 特级一级黄色大片| 国产精品一区www在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产又色又爽无遮挡免| 高清欧美精品videossex| eeuss影院久久| 国产成人午夜福利电影在线观看| 男插女下体视频免费在线播放| 美女主播在线视频| 久久久欧美国产精品| 久久国内精品自在自线图片| 日本色播在线视频| a级一级毛片免费在线观看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 91aial.com中文字幕在线观看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 一区二区三区免费毛片| 国产真实伦视频高清在线观看| 亚洲三级黄色毛片| 久久午夜福利片| 亚洲天堂av无毛| 国产伦精品一区二区三区四那| 日韩免费高清中文字幕av| av国产免费在线观看| 免费看不卡的av|