2016-2021年新疆青河縣牛羊布魯氏菌病血清學(xué)監(jiān)測(cè)

鄭汝蕓，羅鵬飛，舒 展*，葉勒肯·托留根，古麗孜亞·卡肯，呂雙燕

（1 阿勒泰地區(qū)動(dòng)物疾病控制與診斷中心，新疆 阿勒泰 836500；2 阿勒泰地區(qū)畜牧工作站，新疆 阿勒泰 836500）

布魯氏菌病（Brucellosis）是由布魯氏菌屬（Brucella）細(xì)菌侵入機(jī)體引起的一種以流產(chǎn)和繁殖障礙為特征的慢性人畜共患病[1]。該病在世界各國均有發(fā)生[2]，英國、日本、海峽群島、挪威和芬蘭等多個(gè)國家和地區(qū)已經(jīng)向全世界宣告徹底根除了布魯氏菌病[3]，而我國至今未能得到完全控制，仍以小范圍、點(diǎn)狀、分散形式流行[4]。人的布魯氏菌病主要是通過直接接觸病畜及其產(chǎn)品而感染，出現(xiàn)身體乏力、持續(xù)發(fā)熱、多汗、關(guān)節(jié)疼痛及反應(yīng)遲鈍等明顯癥狀且病程慢復(fù)發(fā)率很高[5-7]。公畜感染后會(huì)出現(xiàn)睪丸炎癥，造成不育以及神經(jīng)損傷，母畜感染后會(huì)導(dǎo)致不孕、流產(chǎn)及死胎等癥狀。OIE將該病定為必須報(bào)告的B類傳染病，我國將其列為二類動(dòng)物疫病[8，9]，該病一旦出現(xiàn)會(huì)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失[10]。

目前，布魯氏菌發(fā)現(xiàn)的有6個(gè)生物種19個(gè)生物型，其中大多數(shù)種型對(duì)人和動(dòng)物都有致病性，臨床上羊種、牛種、豬種毒力最強(qiáng)[11]，已知能被感染的布魯氏菌病動(dòng)物已超過200種，不同動(dòng)物間還可出現(xiàn)交叉感染，傳染力極強(qiáng)[12]，全世界每年約有50萬例人感染布魯氏菌病，特別是在地中海、非洲和拉丁美洲部分國家以及西亞、南亞和東亞國家[13-15]。家畜中牛、羊和豬是最為易感的動(dòng)物，傳染源主要是母畜的流產(chǎn)物、分泌物以及公畜交配通過體液傳播等途徑，污染飼料和環(huán)境后再通過消化道、皮膚傷口接觸傳染，還能產(chǎn)生氣溶膠，通過呼吸道傳染[16-18]。布魯氏菌病對(duì)畜牧業(yè)影響嚴(yán)重，尤其是在最近幾年國內(nèi)外疫情出現(xiàn)抬頭上升的趨勢(shì)并發(fā)現(xiàn)新的流行特征[19]。目前，疫苗免疫和檢疫撲殺是預(yù)防和控制布魯氏菌病的主要手段[20]。該病在青河縣近年來發(fā)病情況不詳，采用平板凝集試驗(yàn)（RBT）初篩，試管凝集試驗(yàn)（SAT）進(jìn)行復(fù)測(cè)的方法，以青河縣8個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)和1個(gè)種羊場(chǎng)作為調(diào)查單位，對(duì)2016-2021年采集的牛羊血清進(jìn)行布魯氏菌病監(jiān)測(cè)，為防控該病提供相關(guān)參數(shù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

樣品來源：2016-2021年，以青河縣8個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（A、B、C-H）牛（包括荷斯坦奶牛、新疆褐牛、西蒙塔爾牛）羊（包括阿勒泰羊、湖羊等品種）和1個(gè)種羊場(chǎng)（I，湖羊?yàn)橹鳎檎{(diào)查對(duì)象，共采集牛血清樣品10 733頭份（詳見表1），采集羊血清樣品49 671頭份（詳見表2）。

表1 2016-2021年青河縣牛布魯氏菌病檢測(cè)樣品采集明細(xì)

表2 2016-2021年青河縣羊布魯氏菌病檢測(cè)樣品采集明細(xì)

1.2 試劑及器材

布魯氏菌虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原、陰陽性血清（哈爾濱國生生物科技有限公司生產(chǎn)）；布魯氏菌試管凝集試驗(yàn)抗原、陰陽性血清（青島易邦生物工程有限公司生產(chǎn)）。

1.3 方法

方法參照國標(biāo)《動(dòng)物布魯氏菌診斷技術(shù)》（GB/T18646-2018）[21]。

1.4 結(jié)果判定

虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）：在陰陽性對(duì)照成立的條件下，4 min內(nèi)被檢血清出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象判定為布病陽性（+）；若混合后顏色均勻無凝集顆粒且無凝集現(xiàn)象判定為布病陰性（-）。

試管凝集試驗(yàn)（SAT）：在試驗(yàn)陰陽性成立且抗原對(duì)照無自凝的條件下，牛1∶100血清稀釋度，羊1∶50血清稀釋度，出現(xiàn)“++”及以上凝集現(xiàn)象時(shí)，判定為陽性；牛1∶50血清稀釋度，羊1∶25血清稀釋度，出現(xiàn)“++”以上凝集現(xiàn)象時(shí)，判定為可疑。試驗(yàn)結(jié)果可疑的家畜經(jīng)30 d后采血復(fù)檢，如果仍為可疑直接判定為陽性。

2 結(jié)果與分析

2.1 牛羊布魯氏菌檢測(cè)結(jié)果

2016-2021 年，6年間在青河縣共采集牛血清10 733頭份，RBT初篩檢測(cè)結(jié)果顯示，檢疫陽性306份，SAT進(jìn)行復(fù)測(cè)，陽性282份，復(fù)測(cè)檢疫牛布魯氏菌病總陽性率為2.63%，與RBT初篩結(jié)果陽性符合率為92.16%。共計(jì)采集羊血清49 671頭份，RBT初篩檢測(cè)結(jié)果顯示，陽性118份，SAT進(jìn)行復(fù)測(cè)，陽性100份，復(fù)測(cè)檢疫羊布魯氏菌病總陽性率為0.20%，與RBT初篩結(jié)果陽性符合率為84.75%。詳見表3。

表3 2016-2021年青河縣牛羊布魯氏菌病檢測(cè)結(jié)果

2.2 不同年份牛羊布魯氏菌病檢疫情況

由圖1可以看出，牛布魯氏菌病總陽性率為2.63%。其中，2016年牛布魯氏菌病檢疫陽性率為2.37%，各年份間牛布魯氏菌病檢疫陽性率呈現(xiàn)先上升后下降趨勢(shì)，2019年至2020年期間下降了1.04個(gè)百分點(diǎn)。共采集羊血清49 671頭份，羊布魯氏菌病檢疫總陽性率為0.20%，各年份間檢疫陽性率呈現(xiàn)先下降后上升趨勢(shì)。

圖1 2016-2021年青河縣不同年份間牛羊布魯氏菌病檢測(cè)結(jié)果

2.3 不同區(qū)域間牛羊布魯氏菌病檢疫情況

由表4可以看出，9個(gè)區(qū)域間牛羊牛布魯氏菌病檢測(cè)感染率不同，其中牛布魯氏菌病感染率為0.00%～3.34%不等；羊布魯氏菌病感染率為0.00%～0.50%不等，除H區(qū)域?yàn)檫吘晨诎秴^(qū)域牛羊養(yǎng)殖數(shù)量極少，I區(qū)域?yàn)榉N羊場(chǎng)且凈化效果好以外，E區(qū)域牛羊感染率均最低。結(jié)果表明，不同區(qū)域內(nèi)布魯氏菌病防控效果存在明顯差異。

表4 2016-2021年青河縣不同區(qū)域間牛羊布魯氏菌病檢測(cè)結(jié)果

2.4 不同年齡段牛羊布魯氏菌病檢疫情況

由表5可以看出，牛布魯氏菌病的感染年齡段最高的為2≤X＜3，最低為6≤X；羊布魯氏菌病的感染年齡段最高為3≤X＜6。以上不同年齡段牛羊布魯氏菌病感染率存在明顯差異，其中，2≤X＜3階段牛羊布魯氏菌病的感染率都比較高，應(yīng)加強(qiáng)監(jiān)測(cè)頻次和加強(qiáng)凈化淘汰力度、疫苗免疫保護(hù)。

表5 2016-2021年青河縣不同年齡段牛羊布魯氏菌病檢測(cè)結(jié)果

3 討 論

3.1 檢疫方法的選擇

2016-2021 年，青河縣用6年時(shí)間采用RBT對(duì)初篩檢測(cè)陽性的牛羊血清通過SAT進(jìn)行復(fù)測(cè)，結(jié)果顯示2種試驗(yàn)方法所得到的檢疫陽性率基本一致。按照《動(dòng)物布魯氏菌診斷技術(shù)》（GB/T18646-2018）標(biāo)準(zhǔn)[21]，開展牛羊布魯氏菌血清學(xué)大批次的檢測(cè)可以采用RBT初篩，其具有操作簡(jiǎn)便、快速的優(yōu)點(diǎn)，但缺點(diǎn)是受非特異性抗體的干擾，有時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)非特異性凝集[22]，造成人為肉眼觀察失誤或判斷出弱陽性樣品[23]。因此還需要對(duì)RBT初步篩選處理的陽性血清使用SAT進(jìn)行復(fù)檢[24]。SAT具有特異性高、敏感性高的優(yōu)點(diǎn)，通常在布魯氏菌病的診斷中作為檢測(cè)布魯氏菌抗體的確診試驗(yàn)被廣泛應(yīng)用[25，26]。

3.2 不同年份間的差異

從不同年份間牛羊布魯氏菌病感染情況來看，2016-2017年牛羊布魯氏菌病陽性率增加，尤其是牛布魯氏菌病發(fā)病率呈直線型增長(zhǎng)趨勢(shì)，之后各年份間逐漸下降，表明強(qiáng)制免疫措施和凈化策略取得實(shí)效。從2017年起青河縣開始執(zhí)行《國家布魯氏菌病防治計(jì)劃（2016-2020年）》《新疆維吾爾自治區(qū)布魯氏菌病防治計(jì)劃（2017-2020年）》以及阿勒泰地區(qū)《草畜平衡監(jiān)督管理辦法》，有計(jì)劃、有步驟的落實(shí)牛羊布魯氏菌病檢測(cè)、檢疫、消毒、撲殺和無害化處理等綜合防控措施[28]，牛布魯氏菌病感染率明顯開始下降，羊布魯氏菌病防控效果高于牛，2018年羊布魯氏菌病感染率為0，說明防控措施實(shí)施比較到位。

3.3 不同區(qū)域間的差異

從不同區(qū)域間牛羊布魯氏菌病感染情況來看，各區(qū)域間牛羊布魯氏菌病呈現(xiàn)出由縣城周邊向四周擴(kuò)大的趨勢(shì)，這與牧民定居城區(qū)不愿上山放牧，養(yǎng)殖方式由傳統(tǒng)放牧向集中飼養(yǎng)有關(guān)。一方面集中飼養(yǎng)量的增加造成引種數(shù)量多，加之牲畜交易頻繁，而交通監(jiān)管、檢疫等工作相對(duì)滯后都是引起牛羊布魯氏菌病感染的主要因素[29]。除H區(qū)域?yàn)檫吘晨诎秴^(qū)域牛羊養(yǎng)殖數(shù)量極少，I區(qū)域?yàn)榉N羊場(chǎng)凈化防控效果好以外，E區(qū)域牛羊感染率最低，是因?yàn)镋區(qū)域地理位置比較偏遠(yuǎn)，基本屬于丘陵溝壑或山峰地帶，本身傳入動(dòng)物疫情的風(fēng)險(xiǎn)就低。且牲畜流通極其不方便，大多都是牧區(qū)每次銷售牛羊都需要等收購廠家或牛羊販賣人員1～2月才進(jìn)山一次，進(jìn)入該區(qū)域的牛羊大多都是先經(jīng)過A、B區(qū)域后最后進(jìn)入E、F區(qū)域，傳入疫病的風(fēng)險(xiǎn)自然很低，I區(qū)域?yàn)榉N羊場(chǎng)，羊布魯氏菌病感染率為0%，是因?yàn)槠洳徽搹酿B(yǎng)殖環(huán)境、從業(yè)人員管理、飼養(yǎng)方面或引種把關(guān)方面都相當(dāng)嚴(yán)格，說明防控效果好。A-D區(qū)域靠近縣城，因散養(yǎng)放牧地段少，大多都是散養(yǎng)殖場(chǎng)（戶），飼養(yǎng)密度、飼養(yǎng)方式、繁育方式以及檢疫凈化不扎實(shí)等都是造成牛布魯氏菌病感染率高的主要因素。D區(qū)域緊鄰縣城，布魯氏菌病感染率最高，要作為重點(diǎn)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

3.4 不同年齡段之間的差異

從不同年齡段牛羊布魯氏菌病檢測(cè)情況來看，2≤X＜4階段牛布魯氏菌病的檢測(cè)陽性率高，3≤X＜6階段羊布魯氏菌病檢測(cè)陽性率高，主要是因?yàn)檫@個(gè)年齡段的成年牛羊多，很多都經(jīng)過市場(chǎng)頻繁交易，而當(dāng)日交易不成功的又回到養(yǎng)殖環(huán)節(jié)，自然增加了疫情風(fēng)險(xiǎn)[30]，說明A-G各區(qū)域之間在牛羊養(yǎng)殖、運(yùn)輸、交易方面存在漏洞，一方面可能是因?yàn)榍嗪涌h牛羊養(yǎng)殖主要還是以小規(guī)模為主，很多養(yǎng)殖戶或商販對(duì)布魯氏菌病的認(rèn)識(shí)不足，防控意識(shí)薄弱，造成養(yǎng)殖引入隨意頻繁，流通監(jiān)管困難。另一方面是隨著畜牧業(yè)的快速發(fā)展，養(yǎng)殖量不斷擴(kuò)大，但布魯氏菌病監(jiān)測(cè)經(jīng)費(fèi)無法滿足當(dāng)前工作需要[31]，造成監(jiān)測(cè)方面存在漏洞。另外，牲畜市場(chǎng)價(jià)格不斷提升但疫情撲殺補(bǔ)助資金卻常年不變[32]，造成撲殺起來養(yǎng)殖戶不配合，加大了防疫的工作難度。因此，要從政府管理層面和養(yǎng)殖層面上雙向發(fā)力，共同推進(jìn)布魯氏菌病的防控凈化工作[33]。

4 結(jié) 論

青河縣近6年牛布魯氏菌病流行率比較高，提示應(yīng)加強(qiáng)防控。羊布魯氏菌病流行率較低，在可控制范圍內(nèi)，總體防控效果較好，但仍存在疫情流行風(fēng)險(xiǎn)。因此，在組織管理層面上既要摸清底數(shù)，加強(qiáng)全面宣傳，提高全民防控意識(shí)，又要在經(jīng)費(fèi)上提供保障，檢測(cè)方法上挑選靈敏度高、結(jié)果可靠的檢測(cè)方法開展牛羊布魯氏菌病的篩查，強(qiáng)化產(chǎn)地檢疫和市場(chǎng)流通監(jiān)管，把好調(diào)運(yùn)關(guān)，采取檢疫、免疫、隔離、發(fā)現(xiàn)陽性畜立即撲殺無害化處理，加大保險(xiǎn)賠償力度等防控措施，爭(zhēng)取向國家凈化標(biāo)準(zhǔn)看齊。在養(yǎng)殖層面上，要采取自繁自養(yǎng)，定期開展“大清洗、大消毒”等防控措施，一旦發(fā)現(xiàn)患畜即撲殺，并配合相關(guān)部門進(jìn)行無害化處理，堅(jiān)決杜絕病害動(dòng)物流入市場(chǎng)。