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    肺泡灌洗液中性粒細胞比例聯(lián)合革蘭染色對肺炎的診斷效能研究

    2022-10-19 03:06:12盛夢秋張玉張淇瑋張鑫強侯鐵英
    實用醫(yī)學(xué)雜志 2022年16期

    盛夢秋 張玉 張淇瑋 張鑫強 侯鐵英,

    1廣東省人民醫(yī)學(xué)院(廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院),廣東省心血管病研究所,廣東省臨床檢驗中心(廣州510120);廣東省人民醫(yī)院(廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)2檢驗科,3醫(yī)務(wù)處(廣州 510120)

    肺炎是指終末氣道、肺泡和肺間質(zhì)的炎癥,根據(jù)獲得環(huán)境,可分為社區(qū)獲得性肺炎(communityacquired pneumonia,CAP)和醫(yī)院獲得性肺炎(hospital-acquired pneumonia,HAP)[1]。HAP 是我國最常見的醫(yī)院獲得性感染,診斷治療較為困難,病死率高[2-3]。據(jù)世界衛(wèi)生組織報道,2010-2019年下呼吸道感染已成為感染性疾病中死亡人數(shù)最多的疾病,盡管死亡總?cè)藬?shù)有減少[4]。肺炎常用的微生物學(xué)檢驗方法為涂片革蘭染色鏡檢和病原微生物培養(yǎng)[5]。臨床上肺炎送檢標本多為痰標本,但痰標本的采集多出現(xiàn)被口腔內(nèi)細菌污染的情況,革蘭染色鏡檢無法區(qū)分病原體是定植或感染,培養(yǎng)所需時間較長,且二者陽性率均不高。支氣管肺泡灌洗液(broncho alveolar lavage fluid,BALF)污染率較低,并且病原菌檢出率高于痰液、血液[6-7]。WALTER 等[8]發(fā)現(xiàn)BALF 中性粒細胞比例下降50%對危重細菌性肺炎的患者陰性預(yù)測效能高達90%。也有研究發(fā)現(xiàn),呼吸道樣本革蘭染色(gram staining)有助于呼吸機相關(guān)性肺炎(ventilator-associated pneumonia,VAP)的早期診斷,指導(dǎo)抗生素使用[9-10]。但目前BALF 中性粒細胞比例對肺炎診斷尚無明確標準。本研究回顧性分析肺炎患者肺泡灌洗液中性粒細胞比例,聯(lián)合革蘭染色對肺炎進行診斷,并對其診斷效能進行評估。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 本研究納入2018年9月至2021年5月期間在廣東省人民醫(yī)院氣管鏡室送檢呼吸內(nèi)科BALF 標本的住院患者。共188 例患者納入研究,肺炎患者108 例為實驗組,非肺炎患者80 例為對照組,肺炎患者中CAP 74 例,HAP 34 例。通過醫(yī)院信息系統(tǒng)(hospital information system,HIS)、實驗室信息管理系統(tǒng)(laboratory information management system,LIS)對患者的人口學(xué)特征、臨床資料和實驗室檢查結(jié)果進行查詢,收集患者人口學(xué)特征、出入院診斷、抗生素使用、住院天數(shù)、臨床診斷、疾病轉(zhuǎn)歸、患者BALF 中性粒細胞比例、BALF革蘭染色等臨床信息和實驗室檢查結(jié)果。本研究經(jīng)廣東省人民醫(yī)院倫理委員會審批通過。

    1.2 分組和方法 入選標準:(1)年齡≥18 歲;(2)行支氣管鏡留取BALF 標本送檢的住院患者,(3)臨床診斷與實驗室結(jié)果一致。排除標準:(1)BALF 不合格標本≤5 mL;(2)患者病例資料不全。依據(jù)CAP 和HAP 診斷和治療指南[4,11],結(jié)合臨床診斷,將患者分為肺炎組和非肺炎組。肺炎組包括CAP 和HAP 患者,非肺炎包括非病原菌感染的肺部疾病,如肺癌、肺結(jié)節(jié)、慢性阻塞性肺病等行支氣管肺泡灌洗的患者。BALF 的實驗室預(yù)處理遵循中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會專家共識[12]。

    1.3 診斷標準 依據(jù)2016年中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會修訂的《中國成人社區(qū)獲得性肺炎診斷和治療指南》。CAP 臨床診斷標準:(1)社區(qū)發(fā)??;(2)肺炎相關(guān)臨床表現(xiàn):新近出現(xiàn)的咳嗽咳痰或原有呼吸道疾病加重,伴或不伴膿痰、胸痛、呼吸困難及咯血;肺實變體征和(或)聞及濕啰音;發(fā)熱;外周血白細胞>109/L 或<4 × 109/L,伴或不伴細胞核左移;(3)胸部影像學(xué)檢查顯示新出現(xiàn)的斑片狀浸潤影、葉或段實變影、磨玻璃影或間質(zhì)性改變,伴或不伴胸腔積液。符合(1)(3)及(2)中任何一項,并除外其他肺部疾病后,可建立臨床診斷[4]。

    依據(jù)2018年中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會感染學(xué)組制定的《中國成人醫(yī)院獲得性肺炎與呼吸機相關(guān)性肺炎診斷和治療指南》。HAP 是指患者住院期間沒有接受有創(chuàng)機械通氣、未處于病原感染的潛伏期,而于入院48 h 后新發(fā)生的肺炎[11]。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 運用SPSS statistics 21.0 軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析,計量資料采用()表示。采用偏度-峰度檢驗法來檢驗各組數(shù)據(jù)的正態(tài)性,并采用分位數(shù)圖(Q-Q plot)來驗證。若該資料服從正態(tài)分布,則使用獨立樣本的t檢驗,非正態(tài)分布采用曼-惠特尼U檢驗(Mann-WhitneyUtest)。計數(shù)資料用χ2檢驗或者Fisher 確切概率法。制作ROC曲線,通過曲線下面積(area under curve,AUC)對指標診斷效能進行分析,采用logistic 回歸分析制作BALF 中性粒細胞計數(shù)聯(lián)合鏡下染色鑒別診斷肺炎和非肺炎的ROC 曲線,靈敏度和特異度。P<0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 患者基本情況 本次共收集肺炎患者108 例,非肺炎患者80 例。肺炎患者中CAP 74 例,HAP 34例;80 例革蘭染色鏡下可見病原菌。兩組患者的年齡、性別等資料進行比較,肺炎患者中男性比例較高(P<0.001),BALF 中性粒細胞比例肺炎組明顯高于非肺炎組(P<0.01),革蘭染色結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001),其余差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。見表1。

    表1 患者臨床特征Tab.1 Clinical characteristics of patients ±s

    表1 患者臨床特征Tab.1 Clinical characteristics of patients ±s

    注:a 鏡下可見病原菌

    年齡(歲)男性[例(%)]住院天數(shù)(d)使用抗生素[例(%)]BALF中性粒細胞比例(%)革蘭染色a(%)好轉(zhuǎn)[例(%)]肺炎(n=108例)64±15 83(76.9)13±10 92(85.2)73.75±42.05 80 87(80.6)非肺炎(n=80例)63±17 36(45.0)10±6 52(65.0)28.85±46.25 0 60(75.0)P值0.296 0.001 0.423 0.072<0.01 0.001 0.074

    2.2 BALF 中性粒細胞在CAP 患者及HAP 患者中的分布 本實驗CAP 患者74 例,HAP 患者34 例。CAP 組和HAP 組的數(shù)據(jù)不服從正態(tài)分布,二者方差不齊,因此采用Mann-WhitneyU檢驗對兩組樣本進行比較,得P>0.05,CAP 和HAP 患者中BALF中性粒細胞比例差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見表2。

    表2 CAP 患者及HAP 患者中BALF 中性粒細胞比例的分析結(jié)果Tab.2 The results of neutrophil ratio in BALF of patients with CAP and HAP ±s

    表2 CAP 患者及HAP 患者中BALF 中性粒細胞比例的分析結(jié)果Tab.2 The results of neutrophil ratio in BALF of patients with CAP and HAP ±s

    項目中性粒細胞(%)CAP(n=74例)71.55±41.78 HAP(n=34例)75.25±50.88 Z值-0.443 P值>0.05

    2.3 ROC 曲線分析

    2.3.1 BALF 中性粒細胞比例鑒別診斷肺炎的ROC 曲線及分析 在鑒別診斷肺炎與非肺炎中,BALF 中性粒細胞比例AUC 分別是0.728,Cut-off值為41.45,靈敏度為0.750,特異度為0.675。見圖1。

    圖1 BALF 中性粒細胞診斷肺炎ROC 曲線Fig.1 The ROC curve of BALF neutrophils ratio in diagnosis of pneumonia

    2.3.2 BALF 中性粒細胞比例聯(lián)合革蘭染色鑒別診斷肺炎的ROC 曲線及分析 對兩組數(shù)據(jù)進行l(wèi)ogistic 回歸分析,使用二元logistic 回歸分析,得到logistic 回歸方程的常數(shù)項以及各項系數(shù),可得回歸方程logit(P)=1.128+0.064 革蘭染色-0.031 中性粒,可得聯(lián)合預(yù)測因子=革蘭染色-中性粒*0.031/0.064。構(gòu)建聯(lián)合因子鑒別診斷肺炎與非肺炎的ROC 曲線,如圖2,AUC 為0.731,Cut-off 值為22.09,靈敏度分別是0.724,特異度為0.703。

    圖2 BALF 中性粒細胞比例聯(lián)合革蘭染色診斷肺炎的ROC 曲線Fig.2 The ROC curve of BALF neutrophil ratio combined with gram stain in diagnosis of pneumonia

    2.3.3 BALF 中性粒細胞不同比例對肺炎的診斷靈敏度、特異度特征 評價肺炎患者中不同中性粒細胞比例靈敏度、特異度特點,中性粒細胞比例≥20%,特異度為25%,陰性預(yù)測值較高為75%;中性粒細胞比例≥80%的時候靈敏度最高為97.4%,特異度最低為11.3%,陽性預(yù)測值較高為80.5%。如表3。

    表3 BALF 中性粒細胞比例對肺炎的診斷靈敏度、特異度特征Tab.3 Sensitivity and specificity of BALF neutrophil ratio in diagnosis of pneumonia

    3 討論

    肺炎已成為全球感染性疾病死亡的主要原因之一[2]。我國目前尚無成人CAP 發(fā)病率數(shù)據(jù),僅有年齡構(gòu)成比的研究[3],CAP 和HAP 的發(fā)病率和死亡率均隨著年齡的增加而升高[4,8]。我國一項大規(guī)模醫(yī)院感染橫斷面研究[11]結(jié)果表明,住院患者醫(yī)院獲得性感染的發(fā)生率為3.22% ~5.22%,其中醫(yī)院獲得性下呼吸道感染率為1.76% ~1.94%。ANGUS 等發(fā)現(xiàn),肺炎是重癥監(jiān)護室(intensive care unit,ICU)和非重癥監(jiān)護室(non-intensive care unit,non-ICU)患者主要的住院死亡原因[13]。我國不同地區(qū)HAP 和CAP 的致病菌分布和耐藥性有很大的區(qū)別,不同程度病原菌耐藥給CAP 和HAP 的治療帶來困難[11],肺炎診斷的不確定和病因不明易導(dǎo)致未感染患者抗生素的過度使用,增加抗生素的耐藥性。因此,找到快速、有效的肺炎早期診斷指標,減少抗生素的過度使用是非常有必要的。

    目前常見肺部病原微生物檢測方法有涂片染色鏡檢、培養(yǎng)基培養(yǎng)、血清檢測、核酸檢測和宏基因組二代測序計數(shù)(metagenomics next generation sequencing,mNGS)等,涂片鏡檢存在一定的漏檢率,培養(yǎng)、核酸檢測和mNGS 的報告時間至少需要24 h[14],都不是快速有效的肺炎診斷治療相關(guān)指標,尤其是在重癥患者中,無法快速指導(dǎo)治療方案。有研究者提示細胞學(xué)檢查在感染性疾病診斷中的重要性[15]在肺部急性炎癥反應(yīng)中,中性粒細胞(neutrophils)是最先進入肺損傷部位的反應(yīng)細胞[16],對鑒別感染有較好的臨床效能[17],且BALF中3%感染細胞對肺炎有較高的預(yù)測價值[18]。有學(xué)者建議肺泡灌洗液檢查與細胞特殊染色相結(jié)合,可以快速識別微生物病原體引起的肺炎,及時指導(dǎo)抗生素治療,降低死亡率[19]。

    有研究表明,BALF 中性粒細胞比例與肺結(jié)節(jié)病、彌漫性肺泡損傷、特發(fā)性肺纖維化、硬皮病等疾病有關(guān),這些非病原體感染肺部炎癥反應(yīng)疾病均會導(dǎo)致BALF 中性粒細胞比例升高[20-21],由表1可見兩組患者抗生素使用率較高,抗生素的經(jīng)驗性使用對BALF 中性粒細胞比例也有一定的影響,因此BALF 中性粒細胞比例升高并不能作為診斷肺炎的唯一標準。由表3 可知,肺炎患者中BALF中性粒細胞比例越高,診斷肺炎的靈敏度越高,陽性預(yù)測值也越高,對肺炎的早期診斷、早期治療、改善預(yù)后有更大的意義。

    本研究回顧性納入了188 例呼吸內(nèi)科住院患者,其中肺炎診斷108 例,非肺炎診斷80 例,肺炎患者中CAP 74 例,HAP 34 例,分析發(fā)現(xiàn)肺炎組患者BALF 中性粒細胞計數(shù)明顯高于非肺炎患者(P<0.01),但在CAP 和HAP 患者中差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。通過ROC 曲線分析,BALF 中性粒細胞比例鑒別診斷肺炎和非肺炎的AUC 為0.728,Cut-off 值為41.45,靈 敏度0.750 和特異度0.675,有一定的診斷效能。BALF 中性粒細胞比例聯(lián)合鏡下革蘭染色鑒別診斷肺炎和非肺炎患者的AUC 為0.731。聯(lián)合診斷效能稍高于單一BALF 中性粒細胞比例的診斷效能,BALF 中性粒細胞比例Cut-off 值為22.09,表明在得知革蘭染色結(jié)果的情況下,BALF 中性粒細胞比例高于22.09%,提示肺炎的可能性大,且其特異度明顯高于單一使用BALF 中興粒細胞比例鑒別診斷肺炎和非肺炎患者,對肺炎的診斷更具有準確性。

    本研究同時也具有一定的局限性,SONG 等[22]發(fā)現(xiàn)流式細胞儀可提高BALF 中細胞檢測的敏感性,我院BALF 中性粒細胞計數(shù)是依靠人工鏡檢來檢測,具有一定的誤差性,對結(jié)果有一定的影響。BALF 在采樣過程中灌洗的部位和灌洗液回收量、標本的預(yù)處理都有可能影響到BALF 細胞分類計數(shù)[12,23]。在對肺炎患者的分析中并未對感染病原菌進行分類分析,可進一步對BALF 中性粒細胞比例在細菌和真菌性肺炎中的診斷效能進行研究。并且,本研究為單中心回顧性研究,多中心前瞻性研究是有必要的。

    綜上所述,BALF 中性粒細胞比例對肺炎具有較高的診斷效能,對重癥患者早期治療有提示意義。BALF 中性粒細胞比例聯(lián)合革蘭染色對肺炎患者有一定的早期診斷效能,對患者個體化治療和抗生素方案有一定指導(dǎo)作用,但需結(jié)合患者的臨床癥狀和影像結(jié)果等進行多方位評估。

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