莓茶多酚、黃酮、黃酮醇類組分含量及抑菌分析

馮湘沅，楊琦，謝純良，成莉鳳，鄭科，劉志遠(yuǎn)，段盛文，彭源德

（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院麻類研究所，湖南 長沙 410205）

金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和痢疾桿菌等細(xì)菌廣泛存在于自然環(huán)境中，是最常見的致病和腐敗微生物，食物一旦被這些細(xì)菌污染產(chǎn)生毒素，人類食用后將會引發(fā)中毒，所以在食品加工、儲藏過程中經(jīng)常要用到防腐劑[1-2]，防腐劑是一種用來抑制微生物生長和繁殖的物質(zhì)。目前，常用的防腐劑有苯甲酸、山梨酸、對羥基苯甲酸酯等，過量使用也會導(dǎo)致?lián)p害人類的身體健康。隨著我國科學(xué)技術(shù)水平的不斷提高，以安全性、綠色環(huán)保的植物提取物作為天然防腐劑得到許多研究與應(yīng)用[3-4]。據(jù)文獻(xiàn)資料顯示，植物存在抑菌活性且促進(jìn)健康作用的主要成分有多酚、黃酮、黃酮醇類物質(zhì)[5-7]。因此，尋找高含量抑菌有效成分植物具有重要意義。

莓茶為葡萄科蛇葡萄屬落葉藤本植物，葉片表面分布有零星白色類似“霉”點，口感先苦、回味甘甜，藥理學(xué)研究表明其具有抗氧化、抗菌、降血糖、降血壓、護(hù)肝等作用[8]。近年來，辛敏等[9]開展了對綠茶、黃茶、白茶、青茶、紅茶、黑茶中多酚含量測定及其抑菌活性的研究，陳然等[10]分析了烏龍茶、普洱生茶、普洱熟茶等不同種類茶葉多酚及生物堿含量特點，張?zhí)鹛鸬萚11]進(jìn)行了對茅巖莓茶中黃酮類化合物提取工藝的分析，但針對莓茶相關(guān)化合物及抑菌活性研究鮮見報道。

目前常見的多酚、黃酮、黃酮醇類物質(zhì)提取工藝有溶劑提取法、超聲輔助萃取法和高效液相色譜法等[12-14]，故本文對莓茶采用加入70%乙醇，超聲波輔助提取，再依次經(jīng)石油醚、乙酸乙酯萃取制成的醇提萃取液以及醇提剩余后的殘渣水解液進(jìn)行多酚、黃酮、黃酮醇類組分總含量測定，同時對醇提萃取液開展抑菌活性分析，旨在以莓茶開發(fā)為防腐劑及資源利用提供一定的基礎(chǔ)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

莓茶：湖南省張家界農(nóng)科所提供；金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大腸桿菌（Escherichia coli）、痢疾桿菌（Shigella dysenteroae）：北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究所；沒食子酸：美國Sigma公司；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

Dionex Ultimate 3000液相色譜儀、1510型全波長酶標(biāo)儀：賽默飛世爾科技公司；FZ102型粉碎機(jī)：天津泰斯特儀器有限公司；FE28型pH計：梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；KQ-500DB型數(shù)控超聲波儀：昆山超聲儀器有限公司；SW-CJ-2FD型超凈工作臺：蘇州凈化設(shè)備有限公司；ZQZY-A8型恒溫振蕩培養(yǎng)器：上海知楚儀器有限公司；3K15型高速冷凍離心機(jī)：德國Sigma公司；R1001-VN型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：鄭州長城科工貿(mào)有限公司；SPX-250B-Z型生化培養(yǎng)箱：上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠。

1.3 方法

1.3.1 樣品制備

1.3.1.1 醇提萃取液

莓茶經(jīng)50℃烘干、粉碎后，過20目篩；準(zhǔn)確稱取莓茶粉末5.0 g，加入150 mL 70%乙醇溶液[料液比為1 ∶30（g/mL）]，60℃恒溫超聲90min，冷卻至室溫（25℃）；之后移入離心管于9 000 r/min離心10 min，收集上清液，再經(jīng)蒸發(fā)濃縮，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取、干燥（40℃）后獲得萃取物，準(zhǔn)確稱取一定量的萃取物用40%丙酮溶液溶解，用于多酚、黃酮、黃酮醇類組分含量測定；同時將醇提萃取液分別稀釋成質(zhì)量濃度為2、4、6、8、10、20 mg/mL 溶液，用于抑菌性能測定。

1.3.1.2 殘渣水解液

參照程安瑋等[15]的方法并略作修改，取醇提后剩余的殘渣干燥，精確稱重，按1∶10（g/mL）料液比加入甲醇-硫酸（體積比9∶1）混合溶液，85℃回流水解4 h，3 000 r/min離心10 min，除去沉淀，收集上清液，用于多酚、黃酮、黃酮醇類組分含量測定。

1.3.2 多酚含量的測定

參照謝倩等[16]Folin－Ciocalteu法測定。

標(biāo)準(zhǔn)品的配制：精確稱取沒食子酸2.0 mg，溶解定容于10 mL容量瓶中，配成0.2 mg/mL沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液。并分別稀釋成 0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液用于標(biāo)準(zhǔn)曲線測定。

標(biāo)準(zhǔn)品溶液的測定：取2 mL超純水加入0.5 mL福林酚試劑，再加入0.1 mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液混勻，靜置3 min后加入0.9 mL 20%Na2CO3溶液，避光2 h，765 nm處測吸光度。

樣品多酚含量測定方法同標(biāo)準(zhǔn)品溶液的測定。

多酚質(zhì)量濃度ρ1（mg/mL）按沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線所得的線性回歸方程進(jìn)行計算；按公式（1）計算多酚含量（w1），以質(zhì)量分?jǐn)?shù)（mg/g）計。

式中：ρ1為多酚質(zhì)量濃度，mg/mL；n為樣品稀釋倍數(shù)；v 為總體積，mL；ρ1為粉末質(zhì)量，g。

1.3.3 黃酮含量的測定

參照Xu等[17]的方法并略作修改。

標(biāo)準(zhǔn)品的配制：精確稱取蘆丁10.0 mg，用甲醇溶液溶解定容于10 mL容量瓶中，配成1mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液。并分別稀釋成 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL 用于標(biāo)準(zhǔn)曲線測定。

標(biāo)準(zhǔn)品溶液的測定：取1 mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液加入1 mL 5%NaNO2溶液混勻反應(yīng)6 min，再加入1 mL 10%Al（NO3）3溶液混勻，反應(yīng)6min，最后加入3mL4%NaOH溶液混勻，靜置12 min，在510 nm處測吸光度。

樣品黃酮含量測定方法同標(biāo)準(zhǔn)品溶液的測定。

黃酮質(zhì)量濃度ρ2（mg/mL）按蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線所得的線性回歸方程進(jìn)行計算；按公式（2）計算黃酮含量（w2），以質(zhì)量分?jǐn)?shù)（mg/g）計。

式中：ρ2為黃酮質(zhì)量濃度，mg/mL；n為樣品稀釋倍數(shù)；v為總體積，mL；m表示粉末質(zhì)量，g。

1.3.4 黃酮醇類組分含量的測定

混合標(biāo)準(zhǔn)液配制：準(zhǔn)確稱取異槲皮素2.5 mg、楊梅素 96 mg、槲皮素 1.68 mg、山奈酚 1.4 mg、異鼠李素1.2 mg，混合、甲醇溶液超聲溶解，定容至100 mL，同時將溶液濃度進(jìn)行梯度稀釋，0.45 μm濾膜過濾，用于高效液相色譜檢測，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線建立線性回歸方程。

取2 mL樣品用0.45 μm濾膜過濾，用于高效液相色譜檢測。

組分質(zhì)量濃度ρ3（mg/mL）按組分標(biāo)準(zhǔn)曲線所得的線性回歸方程進(jìn)行計算；按公式（3）計算組分含量（w3），以質(zhì)量分?jǐn)?shù)（mg/g）計。

式中：ρ3為組分質(zhì)量濃度，mg/mL；v 為總體積，mL；m為粉末質(zhì)量，g。

1.3.5 高效液相色譜法檢測條件

色譜柱為Thermo Hypersil BDS C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇 ∶0.4%磷酸=55 ∶45（體積比）；紫外檢測波長為360 nm；流速為0.8 mL/min；柱溫為 25℃；進(jìn)樣量為20 μL。

1.3.6 抑菌試驗

1.3.6.1 培養(yǎng)基配制

液態(tài)培養(yǎng)基：蛋白胨10.0 g/L、酵母提取物5.0 g/L、氯化鈉10.0g/L混合，分裝，121℃高壓蒸汽滅菌20min；固態(tài)培養(yǎng)基：在液態(tài)培養(yǎng)基配方中加入瓊脂20.0 g/L，121℃滅菌20 min后，取適當(dāng)體積倒入無菌平皿，冷卻，備用。

1.3.6.2 菌種活化

將金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、痢疾桿菌分別接入裝有5 mL液體培養(yǎng)基試管中，于37℃恒溫振蕩培養(yǎng)器培養(yǎng)20 h后，再取培養(yǎng)液稀釋涂布于固態(tài)培養(yǎng)基平皿，然后將平皿倒置于37℃生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)，直至出現(xiàn)菌落。

1.3.6.3 菌液制備

取1個菌落接入盛有5 mL液體培養(yǎng)基的試管中，搖勻，置于37℃、150 r/min恒溫振蕩培養(yǎng)器培養(yǎng)6 h后，全部倒入至盛有100 mL液體培養(yǎng)基的三角瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)6 h后，再取6 mL接入300 mL液體培養(yǎng)基的三角瓶中培養(yǎng)12 h。采用稀釋分離法，將菌液濃度調(diào)節(jié)約為107CFU/mL。

1.3.6.4 紙片制備

將普通定性濾紙用打孔機(jī)制成直徑為6 mm圓形紙片，經(jīng)121℃高壓滅菌20 min后，干燥（60℃）備用。

1.3.6.5 紙片擴(kuò)散法測定抑菌透明圈直徑

在無菌條件下，取0.2 mL菌液，均勻涂布于固態(tài)培養(yǎng)基表面，接著用無菌鑷子夾取紙片貼于此固態(tài)培養(yǎng)基表面，然后取20 μL樣品放入紙片上，37℃培養(yǎng)18 h，觀察并準(zhǔn)確測量透明圈直徑。同時設(shè)置CK（40%丙酮溶液）陰性、鏈霉素陽性對照。

透明圈直徑＞7 mm，判定為有抑菌效果；透明圈直徑≤7 mm，判定為無抑菌效果[18]，直徑越大抑菌效果越強(qiáng)。

1.3.6.6 最小抑菌濃度測定

接種培養(yǎng)法測定最小抑菌濃度：取0.1 mL樣品加入到盛有0.8 mL液體培養(yǎng)基的試管中，接入0.1 mL菌懸液，搖勻，37℃培養(yǎng)18 h后，觀察試管中液體培養(yǎng)基菌生長情況，以樣品能抑制細(xì)菌生長的最低濃度作為最小抑菌濃度，同時設(shè)置空白陰性、鏈霉素陽性對照。

1.3.7 抑菌穩(wěn)定性檢測

1.3.7.1 紫外線照射時間對醇提萃取液的抑菌穩(wěn)定性影響

參照羅曉東等[19]的方法進(jìn)行測定。將醇提萃取液（質(zhì)量濃度為20 mg/mL）于紫外燈（波長為253.7 nm）下分別照射10、20、30、60 min后，采用紙片擴(kuò)散法測定其抑菌透明圈直徑。

1.3.7.2 pH值對醇提萃取液的抑菌穩(wěn)定性影響

參照任先偉等[20]的方法，略作修改。用0.1 mol/L NaOH和0.1 mol/L HCl將醇提萃取液（質(zhì)量濃度為20 mg/mL）的 pH 值分別調(diào)節(jié)為 3、5、7、9、11，采用紙片擴(kuò)散法測定其抑菌透明圈直徑。

1.3.7.3 溫度對醇提萃取液的抑菌穩(wěn)定性影響

參照陳佳佳等[21]的方法，略作修改。將醇提萃取液（質(zhì)量濃度為 20 mg/mL）分別于 40、60、80、100、120℃條件下處理30 min后，采用紙片擴(kuò)散法測定其抑菌透明圈直徑。

1.3.7.4 金屬離子對醇提萃取液的抑菌穩(wěn)定性影響

參照張媛媛[22]的方法，略作修改。以醇提萃取液（質(zhì)量濃度為20 mg/mL）為溶劑分別配制成0.05 mol/L的 NaCl、KCl、CaCl2、FeCl3、MgSO4溶液，靜置 3 h，采用紙片擴(kuò)散法測定其抑菌透明圈直徑，并以CK（未經(jīng)處理的醇提萃取液）作對照。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)均取平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，同時采用Excel 2016、Origin 2020b和SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理并分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 多酚含量測定

采用Folin-Ciocalteu法對各濃度沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液測定得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

圖1 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of gallic acid

由圖1可知，沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程為y=2.975 4x+0.050 2（R2=0.999 9），其中：y為吸光度；x為沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度（mg/mL）。根據(jù)沒食子酸線性回歸方程和公式（1）計算得出表1莓茶中多酚含量。

表1 莓茶中多酚含量測定Table 1 Content of polyphenols in Mei-tea（Ampelopsis grossedentata）

由表1可知，莓茶醇提萃取液、殘渣水解液中多酚含量分別為293.38、174.84 mg/g，多酚總含量達(dá)到468.22 mg/g。

2.2 黃酮含量測定

利用Al（NO3）3顯色法對各濃度蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液測定得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2。

圖2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2 Standard curve of rutin

由圖2可知，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程為y=1.186 2x+0.091 1（R2=0.999 1），其中：y為吸光度；x為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度（mg/mL）。根據(jù)蘆丁線性回歸方程和公式（2）計算得出表2莓茶中黃酮含量。

表2 莓茶中黃酮含量測定Table 2 Content of flavonoids in Mei-tea（Ampelopsis grossedentata）

由表2可知，莓茶醇提萃取液、殘渣水解液中黃酮含量分別為154.13、112.05 mg/g，黃酮總含量達(dá)到266.18 mg/g。

2.3 黃酮醇類組分及含量測定

采用高效液相色譜檢測分析標(biāo)準(zhǔn)品溶液，以濃度（x，mg/mL）與檢測得到的峰面積（y）所制作的線性回歸方程分別為異槲皮素y=691.28x+0.711，R2=0.998 3；楊梅素 y=651.99x+14.635，R2=0.999 3；槲皮素 y=1 221.7x-4.216 8，R2=0.997 0；山奈酚 y=1 155.5x-3.037 9，R2=0.996 3。

通過高效液相色譜儀檢測得出的莓茶中黃酮醇類組分色譜圖見圖3，含量測定見表3。

圖3 莓茶中黃酮醇類組分色譜圖Fig.3 Chromatograms of flavonols in residue hydrolysates of Meitea（Ampelopsis grossedentata）

根據(jù)各組分線性回歸方程及公式（3）計算，對照黃酮醇類組分標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖（圖3）分析可知，莓茶醇提萃取液、殘渣水解液中均含有異槲皮素、楊梅素、槲皮素、山奈酚等黃酮醇類組分，各組分總含量分別為異槲皮素 0.34 mg/g、楊梅素 45.14 mg/g、槲皮素 1.86 mg/g、山奈酚0.21 mg/g，兩者提取液組分含量均以楊梅素最高，其次為槲皮素，結(jié)果表明，莓茶均含有黃酮醇類物質(zhì)，且各組分的含量差異明顯。

2.4 抑菌測定

通過紙片擴(kuò)散法測得抑菌透明圈直徑統(tǒng)計結(jié)果見表4。

表4 莓茶醇提萃取液抑菌活性測定Table 4 Antibacterial effect of alcohol extract of Mei-tea（Ampelopsis grossedentata）

由表4可知，隨著莓茶醇提萃取液質(zhì)量濃度的升高，對3個菌株的抑菌透明圈直徑逐漸變大。當(dāng)莓茶醇提萃取液質(zhì)量濃度為20 mg/mL時，對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、痢疾桿菌的抑菌透明圈直徑分別達(dá)到20.30、14.10、11.10 mm，與對照相比，莓茶醇提萃取液對3個菌株能發(fā)揮抑制作用，其中對金黃色葡萄球菌的抑制能力最強(qiáng)。

2.5 最小抑菌濃度測定

由接種培養(yǎng)法觀察得到莓茶醇提萃取液能抑制細(xì)菌生長，統(tǒng)計結(jié)果見表5。

表5 莓茶醇提萃取液最小抑菌濃度測定Table 5 Minimum inhibitory concentration of alcohol extract of Mei-tea（Ampelopsis grossedentata）

由表5可知，莓茶醇提萃取液對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、痢疾桿菌的最小抑制濃度分別為6、8、10 mg/mL。

2.6 抑菌穩(wěn)定性檢測

2.6.1 紫外線照射時間對醇提萃取液的抑菌穩(wěn)定性影響

經(jīng)不同時間紫外線照射的抑菌透明圈直徑統(tǒng)計結(jié)果見圖4。

圖4 紫外線對莓茶醇提萃取液抑菌穩(wěn)定性影響Fig.4 Influence of UV on antibacterial stability of alcohol extract of Mei-tea（Ampelopsis grossedentata）

由圖4可知，莓茶醇提萃取液（質(zhì)量濃度為20mg/mL）紫外線照射0～60 min，對金黃色葡萄球菌的抑菌透明圈直徑由20.30 mm下降到18 mm；對大腸桿菌的抑菌透明圈直徑由14.10 mm下降到8.80 mm；對痢疾桿菌的抑菌透明圈直徑由11.10 mm下降到10 mm。結(jié)果表明，莓茶醇提萃取液隨著紫外線照射時間的延長，對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑菌透明圈直徑呈現(xiàn)持續(xù)減小的趨勢，而對痢疾桿菌抑菌透明圈直徑影響不明顯。說明莓茶醇提萃取液經(jīng)紫外線照射下對3個菌株均有抑制作用，特別對痢疾桿菌的抑制穩(wěn)定性較強(qiáng)。

2.6.2 pH值對醇提萃取液的抑菌穩(wěn)定性影響

不同pH值處理對醇提萃取液的抑菌透明圈直徑統(tǒng)計結(jié)果見圖5。

圖5 pH值對莓茶醇提萃取液抑菌穩(wěn)定性影響Fig.5 Influence of pH on antibacterial stability of alcohol extract of Mei-tea（Ampelopsis grossedentata）

由圖5可知，莓茶醇提萃取液（質(zhì)量濃度為20 mg/mL）對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、痢疾桿菌抑制效果較強(qiáng)的pH值分別為5、9、7，抑菌透明圈直徑分別為19.9、13.1、10.7 mm。當(dāng)pH值為11時，其對3個菌株的抑制效果均已出現(xiàn)減弱現(xiàn)象，但抑菌透明圈直徑均保持在7 mm以上。表明pH值處理對莓茶醇提萃取液有一定的影響，但不會使抑菌活性消失。

2.6.3 溫度對醇提萃取液的抑菌穩(wěn)定性影響

不同溫度處理對醇提萃取液的抑菌透明圈直徑統(tǒng)計結(jié)果見圖6。

圖6 溫度對莓茶醇提萃取液抑菌穩(wěn)定性影響Fig.6 Influence of temperature on antibacterial stability of alcohol extract of Mei-tea（Ampelopsis grossedentata）

由圖6可知，莓茶醇提萃取液（質(zhì)量濃度為20 mg/mL）對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、痢疾桿菌的抑制效果變化規(guī)律均為處于40℃～80℃時抑菌效果平穩(wěn)，之后隨著溫度的升高，抑制效果持續(xù)減弱。當(dāng)經(jīng)溫度40、120℃分別處理后，莓茶醇提萃取液分別對金黃色葡萄球菌抑菌透明圈直徑由19.0 mm（40℃）減小到15.0 mm（120℃）；對大腸桿菌抑菌透明圈直徑由11.1mm（40℃）下降到8.0 mm（120℃）；而對痢疾桿菌抑菌透明圈直徑由10.7 mm（40℃）減小到 9.5 mm（120℃），變化幅度較小。通過結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在溫度低于80℃時，莓茶醇提萃取液對3個菌株的抑制效果均較強(qiáng)，之后隨著溫度的升高，抑菌透明圈直徑逐漸變小，但直徑均大于7 mm，表示莓茶醇提萃取液在高溫處理下仍能保持一定的抑菌效果。

2.6.4 金屬離子對醇提萃取液的抑菌穩(wěn)定性影響

不同金屬離子處理對醇提萃取液的抑菌透明圈直徑統(tǒng)計結(jié)果見圖7。

圖7 金屬離子對莓茶醇提萃取液抑菌穩(wěn)定性影響Fig.7 Influence of metal ions on antibacterial stability of alcohol extract of Mei-tea（Ampelopsis grossedentata）

由圖7可知，莓茶醇提萃取液（質(zhì)量濃度為20 mg/mL）在一定濃度金屬離子處理下，對金黃色葡萄球菌抑菌透明圈直徑大小表現(xiàn)為 Ca2+＞Mg2+＞K+＞Na+＞Fe3+，對大腸桿菌抑菌透明圈直徑大小表現(xiàn)為 Ca2+＞K+＞Mg2+＞Na+＞Fe3+，對痢疾桿菌抑菌透明圈直徑大小表現(xiàn)為Ca2+＞K+＞Mg2+＞Na+＞Fe3+。通過對金屬離子處理與 CK（未作處理樣品）的抑菌透明圈直徑相比，發(fā)現(xiàn)經(jīng)金屬離子處理的莓茶醇提萃取液抑菌活性均有所下降，其中受Fe3+影響最為明顯，但抑菌透明圈直徑均在7 mm以上。結(jié)果表明，在 Na+、Ca2+、K+、Fe3+、Mg2+金屬離子處理下莓茶醇提萃取液均能對此3個菌株發(fā)揮不同程度抑制作用。

3 討論與結(jié)論

本研究是對莓茶采用加入70%乙醇溶液、60℃恒溫超聲90 min條件下收集上清液，再經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，然后依次經(jīng)石油醚、乙酸乙酯萃取制成的醇提萃取液以及殘渣干燥的水解液通過Folin-Ciocalteu法、Al（NO3）3顯色法測得莓茶中多酚、黃酮總含量分別為468.22、266.18 mg/g；高效液相色譜檢測出黃酮醇類組分——異槲皮素、楊梅素、槲皮素、山奈酚，相應(yīng)總含量分別為 0.34、45.14、1.86、0.21 mg/g。

據(jù)文獻(xiàn)報道，多酚、黃酮、黃酮醇類物質(zhì)具有廣譜的抑菌活性，如辛敏等[9]研究了黃茶、綠茶、青茶、紅茶、黑茶、白茶6種茶葉提取物多酚對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌的抑制效果，當(dāng)粗提物濃度為25 mg/mL時，6種茶葉提取物多酚對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑制效果最優(yōu)的均為綠茶，其對相應(yīng)菌種抑制透明圈直徑分別為16.7、13.3mm。而本研究結(jié)果顯示，莓茶醇提萃取液質(zhì)量濃度20 mg/mL時對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、痢疾桿菌的抑制透明圈直徑分別能達(dá)到20.30、14.10、11.10 mm，與辛敏等[9]的研究相比，莓茶醇提萃取液多酚對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑制效果要強(qiáng)于6種茶葉多酚；張子龍等[23]、范三紅等[3]分別研究指出了茉莉花茶、藜麥糠黃酮具有抑菌性；張楊等[24]、Sharma等[25]分別評價了黃酮醇類組分——楊梅素、槲皮素存在體內(nèi)抗菌、抗炎作用。

莓茶含有較豐富的抑菌有效成分——多酚、黃酮和黃酮醇類物質(zhì)，其中黃酮醇類是以楊梅素為主要組分；抑菌活性大小排序為抑制金黃色葡萄球菌效果＞抑制大腸桿菌效果＞抑制痢疾桿菌效果；對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、痢疾桿菌的最小抑菌濃度分別為6、8、10 mg/mL；經(jīng)不同的溫度、紫外線照射時間、pH 值和金屬離子處理下對3個菌株所產(chǎn)生的抑制透明圈直徑均大于7 mm，仍表現(xiàn)出較好的抑菌活性和穩(wěn)定性。這一結(jié)論與上述文獻(xiàn)研究中的多酚、黃酮和黃酮醇類物質(zhì)具有一定的抑菌作用相吻合。因此，莓茶是天然防腐劑開發(fā)利用的潛在資源。