莫西沙星氯化鈉注射液溶液顏色控制方法研究

張 超 ，劉美平，尚麗霞，陶秀梅，廖廷秀，張 宇

（1. 沈陽藥科大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 沈陽 110016；2. 北京諾康達(dá)醫(yī)藥科技股份有限公司，北京 100176；3. 海南愛科制藥有限公司，海南 ?？?570100）

鹽酸莫西沙星是具有廣譜活性和殺菌作用的 8-甲氧基氟喹諾酮類藥物[1-2]，由于其吸收快，體內(nèi)分布廣，臨床上對(duì)絕大多數(shù)致病菌的綜合療效已達(dá)到或超過 β-內(nèi)酰胺類。溶液顏色檢查法是控制原料及制劑中有色雜質(zhì)限量的方法。藥品顏色的變化是藥品內(nèi)在質(zhì)量改變最直觀的表現(xiàn)，往往意味著降解物的產(chǎn)生。目前國(guó)內(nèi)外藥典收載的品種中，溶液顏色檢查大部分仍采用目視比色法，一少部分會(huì)采用紫外—可見分光光度法，色差計(jì)法相對(duì)應(yīng)用較少?！吨袊?guó)藥品進(jìn)口注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)》（JX20120211）[3]采用目視比色法測(cè)定鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液的溶液顏色，溶液的顏色應(yīng)在黃綠色 6 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液和黃綠色 10 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液之間。原料藥鹽酸莫西沙星在 EP10.0[4]中的溶液顏色檢查項(xiàng)也采用目視比色法?！吨袊?guó)藥典》2020 年版二部乳酸環(huán)丙沙星注射液[5]、氧氟沙星氯化鈉注射液[6]采用紫外—可見分光光度法檢查溶液顏色。由于喹諾酮類類藥品本身帶有顏色，對(duì)其溶液顏色變化的判定帶來難度，有必要對(duì)其科學(xué)的控制方法進(jìn)行研究探討，以指導(dǎo)產(chǎn)品科學(xué)的質(zhì)控。

本文采用不同的方法（目視比色法、紫外—可見分光光度法、色差計(jì)法[7-10]）對(duì)鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液的溶液顏色進(jìn)行對(duì)比研究，同時(shí)測(cè)定有關(guān)物質(zhì)，探索溶液顏色與雜質(zhì)含量的相關(guān)性，討論科學(xué)準(zhǔn)確的溶液顏色的質(zhì)控方法。

1 儀器與試劑、試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀（島津，SPD-20A）；紫外—可見分光光度計(jì)（島津，UV2600）；藥物溶液顏色測(cè)定儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司，SY-1）；分析天平（梅特勒—托利多國(guó)際貿(mào)易（上海）有限公司，XSE-105DU）。

1.2 試藥

四丁基硫酸氫銨（分析純）；磷酸二氫鉀（分析純）；磷酸（分析純）；甲醇（HPLC級(jí)）；無水亞硫酸鈉（分析純）；鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液（海南愛科制藥有限公司），參比制劑商品名：拜復(fù)樂（Bayer Pharma AG）。

1 供試品的光照破壞處理

將參比制劑和自制制劑于光照（5 000 ± 500）lx 條件下放置 0、5、10、30、40、50 d。

2 檢查方法與結(jié)果

采用目視比色法、分光光度法和色差計(jì)法檢查不同光照時(shí)間樣品的顏色。采用 HPLC-PDA 法檢查不同光照時(shí)間樣品的有關(guān)物質(zhì)。

3.1 溶液顏色檢查

3.1.1 目視比色法

取于光照（5 000 ± 500）lx 條件下放置不同天數(shù)（0、5、10、30、40、50 d）的參比制劑和自制制劑適量，采用目視比色法與標(biāo)準(zhǔn)比色液（黃綠色調(diào) 1 號(hào)～10 號(hào)）比較。結(jié)果表明，溶液的顏色均在黃綠色 6 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液至黃綠色 9 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液之間，符合《進(jìn)口藥品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)》JX20120211 的規(guī)定。但本品溶液顏色較深，且于光照（5 000 ± 500）lx 條件下放置不同天數(shù)的供試品間及供試品與標(biāo)準(zhǔn)比色液間的顏色較為接近，無法分辨出顏色的區(qū)別。例如，無法判斷光照50 d 的自制制劑的溶液顏色淺于黃綠色 7 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液還是黃綠色 8 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液（見圖 1）。

Fig. 1 Comparison of the solution color with the standard colorimetric solution after 50 d illumination conditions 圖 1 自制制劑光照 50 d 后與標(biāo)準(zhǔn)比色液的溶液顏色的比較

3.1.2 紫外—可見分光光度法

取于光照（5 000 ± 500）lx 條件下放置不同天數(shù)（0、5、10、30、40、50 d）的參比制劑和自制制劑適量，用紫外—可見分光光度計(jì)于 450 nm 的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（見表 1和圖 2）。結(jié)果表明，光照（5 000 ± 500）lx 條件下放置不同天數(shù)的供試品的吸光度值均無明顯區(qū)別，不能準(zhǔn)確區(qū)分溶液顏色的變化。

3.1.3 色差計(jì)法

色差計(jì)法是通過測(cè)定供試品溶液與水的色差值（ΔE*）從而對(duì)顏色進(jìn)行定量表述和分析的方法。色差值（ΔE*）越大，表明顏色越深。取于光照（5 000 ± 500）lx 條件下放置不同天數(shù)（0～50 d）的參比制劑和自制制劑適量，采用藥物溶液顏色測(cè)定儀測(cè)定色差（見表 1和圖 3）。結(jié)果表明，光照（5 000 ± 500）lx 條件下放置不同天數(shù)的供試品的色差值（ΔE*）隨放置天數(shù)的延長(zhǎng)而變大，該方法良好的反映了溶液顏色的變化趨勢(shì)，具有區(qū)分力。

Table 1 Results of color difference meter and absorbance method for different illumination time 表 1 不同光照時(shí)間色差計(jì)法與吸光度法檢查結(jié)果

3.2 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定

3.2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB Phenyl（4.6 mm × 250 mm, 5 μm）；檢測(cè)波長(zhǎng) 293 nm；柱溫 45 ℃；進(jìn)樣量：50 μL；流速：1.0 mL/min；磷酸鹽緩沖液：取 0.5 g 四丁基硫酸氫銨和 1.0 g 磷酸二氫鉀，加水適量溶解后用水稀釋至 1 000 mL，加磷酸 2 mL，混勻，濾過；流動(dòng)相 A 為磷酸鹽緩沖液甲醇（72∶28）；流動(dòng)相 B 為磷酸鹽緩沖液—甲醇（30∶70）；稀釋劑：稱取無水亞硫酸鈉 20 mg，溶于 1 000 mL 緩沖鹽溶液中，混勻。按表 2進(jìn)行梯度洗脫。

Fig. 2 The relationship between absorbance and placement time of the sample under light condition 圖 2 供試品于光照條件下吸光度與放置時(shí)間的關(guān)系

Fig. 3 The relationship between color difference (ΔE＊) and placement time under illumination 圖 3 供試品于光照條件下色差值（ΔE＊）與放置時(shí)間的關(guān)系

Table 2 Gradient elution conditions 表 2 梯度洗脫條件

3.2.2 供試品溶液的制備與測(cè)定

精密量取于光照（5 000 ± 500）lx 條件下放置不同天數(shù)（0、5、10、30、40、50 d）的參比制劑和自制制劑各 5.0 mL，分別置 10 mL 量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密量取各供試品溶液 50 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖（見表 3～表 4，圖 4～圖 5）。

Table 3 Results of different light time related substances of reference preparation 表 3 參比制劑不同光照時(shí)間有關(guān)物質(zhì)結(jié)果

Fig. 4 Reference preparations related to different light time 圖 4 參比制劑不同光照時(shí)間有關(guān)物質(zhì)

Fig. 5 Self-made preparations related to different light time 圖 5 自制制劑不同光照時(shí)間有關(guān)物質(zhì)

Table 4 Results of different light time related substances in self-made preparations 表 4 自制制劑不同光照時(shí)間有關(guān)物質(zhì)結(jié)果

結(jié)果表明，參比制劑與自制制劑于光照（5 000 ± 500）lx 條件下放置不同天數(shù)產(chǎn)生的雜質(zhì)基本一致，雜質(zhì)的增長(zhǎng)趨勢(shì)基本一致；光照 50 d 時(shí)，最大單個(gè)雜質(zhì)均低于 0.1%；光照 40 d 時(shí)，有關(guān)物質(zhì)總雜質(zhì)為 0.191%，與限度（0.2%）接近，50 d 時(shí)超過限度；光照條件下均未檢出 USP43和 BP2020 各國(guó)藥典收載的已知雜質(zhì)（雜質(zhì) A、雜質(zhì) B、雜質(zhì) C、雜質(zhì) D、雜質(zhì) E、雜質(zhì) F、雜質(zhì) G、雜質(zhì) H），主要光降解雜質(zhì)為 7-胺基莫西沙星（化學(xué)結(jié)構(gòu)式見圖 6），RRT0.6 雜質(zhì)、RRT2.0 雜質(zhì)，RRT0.6 雜質(zhì)、RRT2.0 雜質(zhì)待進(jìn)一步確定其化學(xué)結(jié)構(gòu)式。

Fig. 6 Chemical structure of impurity 7-amino moxifloxacin by light degradation 圖 6 光照降解雜質(zhì) 7-胺基莫西沙星化學(xué)結(jié)構(gòu)式

3.3 顏色與光照降解雜質(zhì)關(guān)系研究

上文已表明本品顏色采用色差計(jì)法具有區(qū)分力，以參比制劑為例進(jìn)一步研究色差值與主要光照降解雜質(zhì)的關(guān)系（見表 5和圖 7）。

Table 5 Results of the study on the correlation between color difference and related substances 表 5 色差值與有關(guān)物質(zhì)相關(guān)性研究結(jié)果

Fig. 7 Linear relationship between light impurity degradation and chromatic aberration 圖 7 光照降解雜質(zhì)與色差值線性關(guān)系

結(jié)果表明，鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液光照條件下，主要光照降解雜質(zhì)（7-胺基莫西沙星）、RRT0.6及RRT2.0雜質(zhì)和總雜質(zhì)與色差值之間呈正相關(guān)。

3 討論

鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液本身具有一定顏色，由于人眼在深色區(qū)對(duì)顏色變化的分辨能力遠(yuǎn)低于淺色區(qū)，采用此方法檢查本品溶液的顏色，增加了結(jié)果判定的難度甚至無法判定。紫外-可見分光光度法是通過測(cè)定藥品在某一波長(zhǎng)處的吸光度來測(cè)定溶液顏色，測(cè)定本品溶液顏色時(shí)，吸光度值無明顯變化。這是由于藥品顏色往往不是單一波長(zhǎng)所能表現(xiàn)的，在單一波長(zhǎng)處的吸光度值不能完全反映藥品顏色的全部特征。因此，紫外-可見分光光度法適用于特定的有色雜質(zhì)導(dǎo)致溶液顏色發(fā)生變化的情況。此外，紫外—可見分光光度法測(cè)定的吸光度值一般均較小，準(zhǔn)確度略差。采用色差計(jì)法測(cè)定本品的溶液顏色，對(duì)溶液顏色采用具體數(shù)值進(jìn)行定量表述，準(zhǔn)確、客觀的反映了溶液顏色隨放置時(shí)間的變化趨勢(shì)，具有區(qū)分力，且色差計(jì)法更具科學(xué)性、準(zhǔn)確性和客觀性，可避免目視法的主觀誤差。

參比制劑和自制制劑分別于光照（5 000 ± 500）lx 條件下放置不同時(shí)間，隨放置時(shí)間延長(zhǎng)，溶液的色差值逐漸變大，溶液顏色逐漸加深，雜質(zhì)含量逐漸增大，溶液顏色與雜質(zhì)含量呈正相關(guān)趨勢(shì)，說明采用經(jīng)濟(jì)、快速的色差計(jì)法可間接反饋有關(guān)物質(zhì)的變化，在處方及工藝篩選過程中有一定的指導(dǎo)意義。

由于有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)僅是在一定的色譜條件下和特定的檢測(cè)波長(zhǎng)處測(cè)得雜質(zhì)情況，理論上并不能包含藥品中可能包含的所有雜質(zhì)，而溶液顏色的檢查可以簡(jiǎn)易、直觀和快速的判斷溶液中有色雜質(zhì)的含量，且測(cè)得的結(jié)果為藥品中所含的有色雜質(zhì)的總和。因此，溶液顏色檢查通常與有關(guān)物質(zhì)檢查相結(jié)合，從不同角度來控制藥品的質(zhì)量，兩者相互補(bǔ)充，且不可相互替代。因此，為更好的控制藥品的質(zhì)量，篩選科學(xué)、準(zhǔn)確且具有區(qū)分力的溶液顏色檢查方法具有重要的意義。

本研究采用色差計(jì)法測(cè)定溶液顏色，對(duì)藥品中有色雜質(zhì)的質(zhì)量控制具有指導(dǎo)意義。喹諾酮類藥物研發(fā)過程中可參考本研究結(jié)果考察雜質(zhì)與色差值之間的關(guān)系，采用經(jīng)濟(jì)、快速的色差計(jì)法考察藥品的質(zhì)量。