亮氨酸重復(fù)序列和免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域1、存活蛋白在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及對患者遠(yuǎn)期預(yù)后的影響

曹亮，謝軍，曾海燕，嚴(yán)億軍，梁珂

銅川市人民醫(yī)院神經(jīng)外科，陜西 銅川 727000

膠質(zhì)瘤是由神經(jīng)外胚葉衍化來的膠質(zhì)細(xì)胞腫瘤，是顱內(nèi)最常見的一種原發(fā)性惡性腫瘤，多由腦部或髓膠質(zhì)細(xì)胞惡變引起，起源于神經(jīng)上皮，稱為神經(jīng)上皮腫瘤[1-2]。相關(guān)資料顯示，近年來，原發(fā)性惡性膠質(zhì)瘤發(fā)生率逐年遞增，年增長率約為1.2%，中老年人群尤為明顯[3]。手術(shù)為目前膠質(zhì)瘤的首選治療方式，可明顯改善患者的病情，但患者的預(yù)后相對較差，易復(fù)發(fā)且總生存期較短。目前，隨著腫瘤免疫治療的進(jìn)展，多靶點(diǎn)的分子免疫治療已逐漸成為臨床研究的焦點(diǎn)[4]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，亮氨酸重復(fù)序列和免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域1（leucine rich repeats and immunoglobulin like domains 1，LRIG1）在肺癌、膀胱癌、腎透明細(xì)胞癌中表達(dá)下調(diào)，是一種潛在抑癌基因；存活蛋白（survivin）是目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的凋亡抑制因子，屬于凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein，IAP）家族成員，具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長并抑制凋亡的作用，與腫瘤患者的預(yù)后密切相關(guān)[5]。基于此，本研究探討LRIG1、survivin在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及對患者遠(yuǎn)期預(yù)后的影響，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年2月至2019年2月銅川市人民醫(yī)院收治的膠質(zhì)瘤患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《中國腦膠質(zhì)瘤分子診療指南》[6]中膠質(zhì)瘤的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)病理學(xué)檢查確診；②無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；③原發(fā)腦膠質(zhì)瘤且未行放化療；④病歷資料、隨訪資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并血液系統(tǒng)疾病、免疫功能障礙；②存在其他惡性腫瘤；③哺乳期或妊娠期女性；④合并心、肝、腎等功能障礙；⑤合并結(jié)締組織病變；⑥存在腦膿腫等顱內(nèi)感染性疾病。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入77例膠質(zhì)瘤患者，其中男43例，女34例；年齡22~78歲，平均（54.42±6.08）歲；腫瘤分級[7]：低級別膠質(zhì)瘤37例（其中Ⅰ級21例，Ⅱ級16例），高級別膠質(zhì)瘤40例（其中Ⅲ級28例，Ⅳ級12例）。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 免疫組化法檢測LRIG1、survivin的表達(dá)情況

取77例膠質(zhì)瘤患者的膠質(zhì)瘤組織及相應(yīng)癌旁組織，組織切片后脫蠟、水化。將標(biāo)本浸泡于3%過氧化氫中20 min，封閉其內(nèi)源性過氧化物酶活性。高壓枸櫞酸鹽抗原修復(fù)，溫水清洗后使用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）清洗3次，每次5 min，同時在其中滴加10%血清以阻斷非特異性結(jié)合，放入37℃孵育箱10 min。滴加山羊抗人survivin多克隆抗體、兔抗人LRIG1多克隆抗體，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色5 min；蘇木素復(fù)染，梯度乙醇脫水，二甲苯浸泡，中性樹脂封片，觀察染色情況。

根據(jù)陽性細(xì)胞所占比例及染色強(qiáng)度進(jìn)行結(jié)果判定[8]：無陽性細(xì)胞計0分，陽性細(xì)胞所占比例為1%~25%計1分，陽性細(xì)胞所占比例為26%~50%計2分，陽性細(xì)胞所占比例＞50%計3分；無著色計0分，淡黃色染色計1分，棕黃色染色計2分，棕褐色染色計3分。將陽性細(xì)胞所占比例評分與染色強(qiáng)度評分相乘，≤3分為陰性，≥4分為陽性。

1.3 隨訪

采用回院復(fù)查、電話隨訪的方法對患者進(jìn)行為期3年的隨訪，以患者死亡或隨訪結(jié)束為隨訪終點(diǎn)，記錄患者的預(yù)后情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件對所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的影響因素采用多因素Logistic回歸分析；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 LRIG1、survivin表達(dá)情況的比較

膠質(zhì)瘤組織中LRIG1陽性表達(dá)率明顯低于癌旁組織，survivin陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 膠質(zhì)瘤組織和癌旁組織中LRIG1、survivin表達(dá)情況的比較[n（%）]

2.2 不同預(yù)后情況膠質(zhì)瘤患者膠質(zhì)瘤組織中LRIG1、survivin表達(dá)情況的比較

隨訪3年，77例膠質(zhì)瘤患者中死亡25例，生存52例。預(yù)后死亡膠質(zhì)瘤患者膠質(zhì)瘤組織中LRIG1陽性表達(dá)率低于生存患者，survivin陽性表達(dá)率高于生存患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。（表2）

表2 不同預(yù)后情況膠質(zhì)瘤患者膠質(zhì)瘤組織中LRIG1、survivin表達(dá)情況的比較[n（%）]

2.3 膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的影響因素分析

單因素分析結(jié)果顯示，年齡、性別均可能與膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后無關(guān)（P＞0.05），腫瘤直徑、腫瘤分級、LRIG1表達(dá)情況、survivin表達(dá)情況均可能與膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后有關(guān)（P＜0.05）。多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，腫瘤直徑≥5 cm、高級別膠質(zhì)瘤、LRIG1陰性表達(dá)、survivin陽性表達(dá)均是膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的獨(dú)立危險因素（P＜0.05）。（表3）

表3 膠質(zhì)瘤患者預(yù)后影響因素的單因素和多因素分析

3 討論

膠質(zhì)瘤是常見的腦部惡性腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展是多種基因及細(xì)胞因子共同作用的結(jié)果，具有進(jìn)展快、侵襲性強(qiáng)、分化差等特點(diǎn)，也是臨床治療困難、患者預(yù)后差的主要原因[9]。研究表明，不同級別膠質(zhì)瘤的生物學(xué)行為均具有惡性表現(xiàn)，雖然目前臨床通過手術(shù)對膠質(zhì)瘤的治療取得了一定的效果，但腦膠質(zhì)瘤發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，與正常組織邊界不清，可明顯影響手術(shù)切除效果，影響患者的預(yù)后[10]。因此，尋找膠質(zhì)瘤的致病機(jī)制及靶點(diǎn)具有重要意義。研究證實，腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展是多種蛋白基因及細(xì)胞因子共同作用的結(jié)果，因此，尋找腦膠質(zhì)瘤的分子標(biāo)志物成為目前膠質(zhì)瘤的研究方向[11]。

LRIG1是近年發(fā)現(xiàn)的一種受體酪氨酸激酶（receptor tyrosine kinase，RTK）抑制劑，廣泛存在于人體腦、心臟、腎臟等組織中，且在腦組織中表達(dá)水平最高[12]。既往有學(xué)者分析了LRIG1在多種上皮源性腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，LRIG1在腫瘤組織中表達(dá)明顯缺失或下調(diào)，表明LRIG1可能是一種抑癌基因[13]。本研究結(jié)果顯示，膠質(zhì)瘤組織中LRIG1的陽性表達(dá)率明顯低于癌旁組織，表明LRIG1在病變組織中無表達(dá)或低表達(dá)，但在癌旁組織中高表達(dá)。進(jìn)一步比較發(fā)現(xiàn)，預(yù)后死亡膠質(zhì)瘤患者LRIG1陽性表達(dá)率低于生存組，提示LRIG1在膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。這可能是因為LRIG1的產(chǎn)物是單次跨膜蛋白，能夠通過促進(jìn)表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）泛素化來降解受體，其高表達(dá)狀態(tài)能夠抑制腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲，促進(jìn)其凋亡；同時，LRIG1表達(dá)缺失也是導(dǎo)致EGFR抑制信號消失及EGFR活化的重要原因，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。但LRIG1具體作用機(jī)制尚有待更深入的研究確認(rèn)。

IAP是重要的抗細(xì)胞凋亡因子，survivin作為其家族成員之一，具有強(qiáng)大的抗細(xì)胞凋亡及促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂的作用[14]。相關(guān)研究證實，survivin不僅在肺癌、結(jié)腸癌和非霍奇金淋巴瘤等腫瘤中高表達(dá)，還與膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長、侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)關(guān)系密切相關(guān)[15]。本研究結(jié)果顯示，膠質(zhì)瘤組織中survivin的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織，表明survivin在膠質(zhì)瘤中高表達(dá)，同時，預(yù)后死亡膠質(zhì)瘤患者膠質(zhì)瘤組織中survivin的陽性表達(dá)率高于生存患者，表明survivin高表達(dá)與患者的預(yù)后有關(guān)?？紤]survivin表達(dá)上調(diào)可能與腫瘤組織中抑癌基因突變、癌基因缺失有關(guān)，survivin高表達(dá)在腫瘤組織內(nèi)抑制細(xì)胞凋亡，抑制了細(xì)胞的生理性死亡，進(jìn)一步加重了膠質(zhì)瘤患者的病情，對膠質(zhì)瘤的診療及預(yù)后判斷有一定意義。

Logistic回歸分析結(jié)果顯示，腫瘤直徑≥5 cm、高級別膠質(zhì)瘤、LRIG1陰性表達(dá)、survivin陽性表達(dá)均是膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的獨(dú)立危險因素（P＜0.05）。提示臨床治療中需加強(qiáng)對伴隨高危因素患者的干預(yù)，在治療后對患者進(jìn)行針對性的預(yù)防有利于改善患者的預(yù)后，以延長患者的生存期。

綜上所述，膠質(zhì)瘤組織中LRIG1呈陰性表達(dá)，survivin呈陽性表達(dá)，且二者均是膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的獨(dú)立危險因素，臨床可通過檢測這兩種指標(biāo)為膠質(zhì)瘤患者的遠(yuǎn)期預(yù)后評估提供參考。