不同稱重法對飼料粗脂肪測定效果的影響

陳睿智，袁 玖*，楊默晗，旦增久美，張鴻鑫，萬欣杰

(1.甘肅農業(yè)大學動物科學技術學院，甘肅 蘭州 730070；2.甘肅正合生物科技有限公司)

傳統(tǒng)的概略養(yǎng)分分析法測定飼料粗脂肪采用索氏浸提法，通過無水乙醚反復浸提飼料樣品，最后稱量脂肪瓶的增重量或濾紙包的減重量，即為飼料中粗脂肪含量。使用脂肪瓶增重法(又稱油重法)，一套索氏提取器一次只能測定一個樣品，而且浸提后脂肪瓶中的脂肪遇空氣易發(fā)生氧化，脂肪瓶不易恒重；使用濾紙包減重法 (又稱殘余法)， 濾紙包的空隙大，會快速吸收空氣中的水分。為探索兩種方法是否對飼料粗脂肪測定結果有影響，本研究選用11種飼料樣品，同時進行了油重法和殘余法測定，為實驗室中粗脂肪的測定工作提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

待測定粗脂肪的飼料樣品包括玉米皮、油渣、玉米、豆粕、棉籽粕、麩皮6種單一飼料和育肥豬濃縮料、乳豬膨化顆粒料、母豬濃縮料、肉羊濃縮料、青年雞育肥料5種混合飼料,共11種飼料樣品。各樣品干燥、粉碎，通過40目樣品分級篩。11種飼料樣品均由蘭州聯(lián)邦飼料有限公司提供。

1.2 儀器設備

分析天平(感量0.000 1 g)，電熱式恒溫水浴鍋(室溫～100 ℃)，電熱式恒溫烘箱，鋁盒，干燥器(用變色硅膠或氯化鈣作干燥劑)，定性濾紙(中速，12.5 cm，脫脂)，索氏脂肪提取器(100或150 mL)等。

1.3 試劑

石油醚，分析純。

1.4 試驗方法設計

采用對比試驗,分為脂肪瓶增重法和濾紙包減重法。為避免不同批次試驗對試驗數據造成誤差，本研究將脂肪瓶增重法和濾紙包減重法同時進行，即對每個飼料樣品測定粗脂肪時，既要稱量濾紙包在浸提前后的減少的重量，同時也稱量脂肪瓶在浸提前后增加的重量。試驗全程所有樣品使用同一臺分析天平稱重。

1.5 測定步驟

1.5.1 樣品的稱量及烘干 飼料樣品粉碎，通過40目(0.45 mm孔徑)分級篩。每種樣品3個重復，同時進行兩種粗脂肪方法的測定。分析天平準確稱取 2 g(W)左右(準確至0.0001 g)樣品，置于105 ℃烘箱中半開蓋烘6 h，取出，蓋好鋁盒蓋，干燥器中冷卻30 min，稱重。再置烘箱105 ℃烘干1 h，冷卻30 min，稱重，直至兩次稱重之差小于0.001 g為恒重。

1.5.2 脂肪瓶的恒重 洗凈脂肪瓶，置于105 ℃烘箱中烘30 min，干燥器中冷卻30 min，稱重。再同樣烘干15 min，冷卻，稱重，直至兩次稱重之差小于0.001 g為恒重，取最小值為W1，記錄。

1.5.3 濾紙包的準備 選用中速定性脫脂濾紙。洗凈雙手，按正規(guī)方法折疊好濾紙包。

1.5.4 樣品的浸泡 將上述鋁盒中的樣品無損失移入濾紙包中折疊好，保證不會漏料。用鉛筆在濾紙包上編號，分析天平稱重W1’(濾紙+脫水樣品)，記錄。濾紙包放入浸提管，其長度要低于虹吸管高度。在浸提管中加入適量無水乙醚至淹沒濾紙包，但不超過虹吸管。浸泡過夜。

1.5.5 粗脂肪的浸提、分離 打開水浴鍋，溫度調至60～75 ℃，浸提管中添加無水乙醚至超過虹吸管高度，使之回流到脂肪瓶中。此條件下，反復浸提6～8 h左右，檢測是否浸提干凈(當浸提管中的乙醚超過虹吸管高度開始流入脂肪瓶時，用干凈的表面皿在浸提管下端口接最后1滴乙醚，若液滴周圍無油漬證明已浸提干凈，否則繼續(xù)浸提)。

工作原理：乙醚的沸點為35 ℃左右，水浴條件下，乙醚在脂肪瓶中蒸發(fā)，乙醚蒸氣至冷凝管處冷凝為液體，再次流入浸提管中，浸提、溶解飼料樣品中的脂溶性物質，當浸提管中乙醚達到相當高度后，即由虹吸管回流入脂肪瓶中。水浴加熱后，乙醚又揮發(fā)，脂溶性物質則留在了脂肪瓶中。如此，反復回流、浸提，直至樣品中粗脂肪浸提干凈。粗脂肪浸提時間為4～16 h(樣品不同，粗脂肪含量不同)。乙醚易燃燒，實驗室嚴格禁煙，禁明火。

1.5.6 浸提后處理 浸提干凈后，取出濾紙包至干凈的瓷盤中，讓乙醚空回流一次，以沖洗浸提管中余留的脂肪，然后繼續(xù)蒸餾?；厥找颐阎猎噭┢恐?。脂肪瓶中只有粗脂肪及少量乙醚。

1.5.7 濾紙包和脂肪瓶的烘干和恒重 ①脂肪瓶增重法：用蒸餾水洗瓶洗凈脂肪瓶的瓶底、瓶壁，濾紙擦干。用坩堝鉗或墊干凈濾紙移動脂肪瓶，置105 ℃烘箱烘1～2 h(剛放入烘箱時，將烘箱門半開，以免乙醚蒸氣燃燒起火)。干燥器冷卻30 min，稱重。再烘干30 min，冷卻，稱重，直至兩次稱重之差小于0.001 g為恒重，取最小值為W2。②濾紙包減重法：樣本濾紙包經乙醚浸提后，放入干凈的已知重量的鋁盒中，置105 ℃烘箱中，鋁盒半開蓋烘1～2 h，干燥器中鋁盒蓋好蓋冷卻30 min后，迅速稱重。再同樣烘干30 min，冷卻，稱重，直至兩次稱重之差小于0.001 g為恒重，取最小值為W2’。

1.6 結果計算

①脂肪瓶增重法：粗脂肪=(W2-W1)/W*100%，式中：W1為空脂肪瓶重(g)；W2為脂肪瓶和脫水樣品粗脂肪重(g)；W為風干飼料樣品重(g)。

②濾紙包減重法：粗脂肪=(W1’-W2’)/W*100%，式中：W1’為濾紙包和脫水飼料樣品重，W2’為濾紙包和脫水脫脂后飼料樣品重；W為風干飼料樣品重(g)。

1.7 試驗數據處理

用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件中配對樣本t檢驗法對試驗數據進行統(tǒng)計分析。P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著，P>0.05為差異不顯著。

2 結果與分析

各種飼料樣品使用濾紙包減重法和脂肪瓶增重法測定測出的粗脂肪值見表1。

表1 不同稱重方法對各種飼料粗脂肪測定的影響 %

當飼料樣品的脂肪含量分別在8%以上、4%～8%、0%～4%時，其三個平行的相對偏差依次均應低于0.5%、1%、5%。由表1可見，本試驗所有粗脂肪數據的相對偏差均在有效范圍內，為有效數據，可以進行統(tǒng)計分析。

表1可見，青年雞育肥料、麩皮的t值分別為4.891和7.13，均小于學生氏t值表中的t0.01(2)=9.925, 大于t0.05(2)=4.303，即濾紙包減重法測得粗脂肪值顯著高于脂肪瓶增重法(P<0.05)；玉米、棉粕、肉羊濃縮料的t值分別是10.881、16.692和10.15，均大于t0.01(2)=9.925，即濾紙包減重法測得粗脂肪值極顯著高于脂肪瓶增重法(P<0.01)；育肥豬濃縮料、玉米皮、油渣、乳豬膨化顆粒料、豆粕、母豬濃縮料6種樣品的t值，均小于t0.05(2)=4.303，即脂肪瓶增重法和濾紙包減重法測得的粗脂肪值差異不顯著(P>0.05)。

3 討論

目前，飼料中粗脂肪含量的測定普遍使用國家標準《GB/T6433—2006 飼料中粗脂肪的測定》，采用索氏(Soxhlet)抽提原理進行測定。采用傳統(tǒng)脂肪瓶增重法測定粗脂肪時，將試樣在索氏抽提管中反復抽提，直至脂肪抽提干凈，抽提瓶的增重即為樣品所含粗脂肪重量。該方法能夠完全被抽提瓶回收樣品含有的粗脂肪，可進一步分析樣品脂肪酸組成及脂肪酸品質。但是抽提結束后對抽提瓶進行烘干時，粗脂肪有可能發(fā)生氧化而增重，使抽提瓶不易達到恒重狀態(tài)，或經過長時間烘干，會在恒重之后又增重。而且，在試驗過程中，脂肪瓶增重法測定粗脂肪，若一次進行多個樣品的測定或做多組重復時，需要的提取器相應增多，不利于同時進行。濾紙包減重法是試樣在索氏抽提管中反復抽提，直到粗脂肪抽提干凈，濾紙包的減重即為樣品所含粗脂肪重量。采用濾紙包減重法，一個抽提管可同時盛放多個濾紙包(需在濾紙包上用鉛筆標號)同時進行浸提。

本研究結果表明，5種飼料樣品采用濾紙包減重法測定的粗脂肪值顯著或極顯著高于脂肪瓶增重法，分析本次試驗過程的操作細節(jié)得出，導致濾紙包減重法數值顯著大的原因如下：

3.1 濾紙包試驗前后的處理法不同導致系統(tǒng)誤差

浸提前對空濾紙包和脫水樣品進行稱重時，濾紙包沒有跟飼料樣品同時進行烘干脫水、干燥器冷卻30 min等處理步驟；而脂肪浸提結束后，卻事先考慮了為防止濾紙包從干燥器移出會快速吸收空氣中的水分導致稱重數據偏大，所以采用了將濾紙包放在已經恒重的鋁盒里一起稱重的方法，致使浸提前后稱量脂肪包的條件不一致，浸提前濾紙包中水分含量與空氣中一致，濾紙包的稱重值偏大，浸提后濾紙包烘干、冷卻都是在加蓋的鋁盒內，稱重值比浸提前偏小，代入公式，濾紙包減重法(是偏大的值-偏小的值)，計算粗脂肪值偏大。

3.2 選擇分析的飼料樣品數據時間節(jié)點不同導致的系統(tǒng)誤差

脂肪瓶增重法中，飼料樣品脫水后從鋁盒往濾紙包轉移時，樣品或多或少肯定會有損失，但代入公式計算粗脂肪時，卻是按照飼料樣品脫水前的原來稱重進行計算，致使脂肪瓶增重法最后的粗脂肪結果比實際值偏小。

3.3 分析純試劑存放和重復使用造成的誤差

浸提試驗使用的無水乙醚不是新的，而是重復利用乙醚，可能對飼料中粗脂肪的浸提不徹底，導致濾紙包減重法測定值比實際值偏大。

3.4 未恒重容量瓶導致誤差

脂肪瓶增重法測定過程中沒有對空脂肪瓶進行恒重，浸提結束后對脂肪瓶進行烘干時，粗脂肪有可能發(fā)生氧化而增重，使脂肪瓶不要達到恒重狀態(tài)，導致結果不準確。

鑒于本研究結果，脂肪瓶增重法和濾紙包減重法測定的粗脂肪值差異為顯著或極顯著，為求證是否是試驗過程中操作不當或乙醚試劑不純等造成的，還是兩種試驗方法的差異，本研究需要進行后續(xù)研究。

4 結論

11種飼料樣品中，5種飼料用濾紙包減重法測定的粗脂肪值顯著或極顯著高于脂肪瓶增重法。