不同干制方式對新疆野生裂蓋馬鞍菌多糖含量的影響

石 越 努爾買買提* 瑪依拉 李文文

（1伊犁師范大學(xué)微生物資源保護與開發(fā)利用重點實驗室，新疆伊寧 835000；2伊犁師范大學(xué)生物與地理科學(xué)學(xué)院，新疆伊寧 835000）

馬鞍菌（Helvella）屬子囊菌門（Ascomyzcota）盤菌綱（Discomycetes）盤菌目（Pezizales）馬鞍菌科（Helvellaceae），分布于中國新疆、河北、山西、甘肅、四川、湖南、云南等地區(qū)。

在新疆，裂蓋馬鞍菌常見于塔里木盆地北的葉爾羌河及塔里木河周邊的胡楊林生態(tài)系統(tǒng)、新疆楊樹林以及庫爾勒香梨樹林生態(tài)系統(tǒng)中，在北疆的伊犁哈薩克自治州昭蘇縣也有發(fā)現(xiàn)[1]。因為人工培育裂蓋馬鞍菌難度過大，加上人們對該菌生物特性了解不全面，至今仍不能進行人工栽培[2]。在野生環(huán)境中，裂蓋馬鞍菌生長所需的水流量、環(huán)境溫度、濕度、土壤條件以及光照等生態(tài)因子不可控。隨著生態(tài)環(huán)境日益惡化，人為保護力度不足，野生裂蓋馬鞍菌處于滅絕邊緣[3]。

裂蓋馬鞍菌是由新疆獨有的生態(tài)環(huán)境孕育出的珍稀野生食用菌，質(zhì)嫩味美，營養(yǎng)豐富。長期食用裂蓋馬鞍菌，不僅可以提升免疫力、促進大腦發(fā)育、預(yù)防腦動脈硬化、促進副腎皮質(zhì)的激素分泌，還具有提高人體應(yīng)激能力和溶血栓、減少體內(nèi)膽固醇等多種保健功能[4]。裂蓋馬鞍菌含有的多糖類物質(zhì)是抵抗衰老的重要成分，其多糖含量高于其他食用菌，且健康無毒害。

不同的干制方式會對裂蓋馬鞍菌多糖含量產(chǎn)生一定的影響[5]，進而影響裂蓋馬鞍菌的營養(yǎng)價值和保健作用。本文研究了烘干、自然曬干和自然陰干3種干制方式下新疆野生裂蓋馬鞍菌多糖含量的差異，選擇了更有效的裂蓋馬鞍菌干制方式，以期為馬鞍菌多糖的開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料及儀器

1.1.1 供試材料。供試野生裂蓋馬鞍菌于2021年5月采摘自新疆昭蘇。

1.1.2 試驗儀器。供試儀器有電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（DHG-9140A，上海齊欣科學(xué)儀器有限公司）、數(shù)顯恒溫水浴鍋（HH-S6，江蘇金怡儀器科技有限公司）、可見分光光度計（722S，上海菁華科技儀器有限公司）、球形索氏提取器（QX-06，杭州匯爾儀器設(shè)備有限公司）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（R-300EL，瑞士步琦有限公司）、高速冷凍離心機（H1750R，湖南湘儀實驗儀器開發(fā)有限公司）、超純水機（UPR-Ⅱ-15TNZ，四川優(yōu)普超純科技有限公司）。

1.1.3 試驗試劑。主要試劑包括乙醚、果膠酶、三氯乙酸、95%乙醇、葡萄糖、苯酚、硫酸等，均為分析純。

1.2 試驗設(shè)計

試驗根據(jù)野生裂蓋馬鞍菌干制方式不同設(shè)3個處理，分別為自然曬干處理（A）、自然陰干處理（B）、烘箱80℃烘干處理（C）。對3個處理樣品中的多糖含量進行檢測、分析，比較不同干制方式對野生裂蓋馬鞍菌多糖含量的影響。

1.3 試驗方法

1.3.1 裂蓋馬鞍菌多糖的提取。使用小毛刷刷凈裂蓋馬鞍菌表面及根部的塵土，將其研磨成粉末之后準(zhǔn)確稱取20 g。用濾紙包包好放入索氏提取器中，緊貼抽提管內(nèi)壁，濾紙包高度低于虹吸管，加入乙醚抽提8 h左右，用玻璃棒蘸取抽提管中的乙醚滴于濾紙上，無脂肪殘留即為抽提終點。抽提結(jié)束取出濾紙包烘干，加入60 mL超純水、10 mg果膠酶，40℃保溫2 h，再加入100 mL超純水，沸水浸提2 h，使用布氏漏斗抽濾。第2次加入超純水100 mL，沸水浸提1 h，抽濾。第3次加入超純水50 mL，沸水浸提30 min，抽濾之后合并3次浸提液[6]。將浸提液減壓濃縮至原來體積的1/4左右，再加入濃縮后體積7%的2 mol/L三氯乙酸[7]，使溶液中的三氯乙酸達到一定的質(zhì)量濃度，然后振蕩25 min，4℃靜置過夜，將上清液于4℃、12 000 r/min條件下離心10 min，取上清液，加3倍體積的95%乙醇，4℃靜置過夜，分離沉淀，于60℃烘干，即可得到新疆野生裂蓋馬鞍菌粗多糖樣品。

1.3.2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液配制。稱取葡萄糖10 mg，加超純水定容至 100 mL，分別取 0、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mL加入試管中，再補超純水至1.0 mL，后向各試管中加入6%1.0 mL苯酚溶液，混勻后迅速加入5.0 mL濃硫酸，振蕩混勻，靜置10 min后沸水浴15 min，取出冷卻至室溫，靜置20 min。用可見分光光度計在490 nm波長下測定吸光度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.3 貯備液配制。準(zhǔn)確稱取新疆野生裂蓋馬鞍菌多糖樣品10 mg，加超純水定容至100 mL，配制成濃度為0.1 mg/mL的貯備液，吸取溶液1 mL，同1.3.2操作，利用苯酚-硫酸法[8]測定樣品在490 nm波長下的吸光度，根據(jù)上述葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中的總糖含量，從而計算換算因子。

1.3.4 樣品提取液配制。分別準(zhǔn)確稱取自然曬干、自然陰干及80℃烘干的新疆野生馬鞍菌粉末樣品0.5 g，用三氯乙酸法除去蛋白質(zhì)后，離心，將濾液分別加超純水定容至100 mL，分別取3種溶液1 mL，再用苯酚-硫酸法分別測定吸光度，然后代入回歸方程，求得3種樣品提取液的多糖含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1，回歸方程為y=0.043 7x+0.085 1。

圖1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 換算因子計算

換算因子計算公式如下：

式中：W1為多糖重量（mg），C1為多糖溶液中葡萄糖濃度（mg/mL），D為稀釋倍數(shù)。貯備液的吸光度為0.386，葡萄糖濃度為6.89，稀釋倍數(shù)為100，按照式（1）計算 f=1.45。

2.3 多糖含量測定

裂蓋馬鞍菌多糖含量計算公式如下：

式中：C2為樣品提取液中葡萄糖濃度（mg/mL），D為稀釋倍數(shù)，f為換算因子，W2為樣品重量（mg）。

由表1可知，不同處理的馬鞍菌多糖含量按照從大到小的順序為處理C＞處理A＞處理B。處理C為新疆野生裂蓋馬鞍菌的最佳干制方式，即用烘箱80℃烘干，可最大限度地保留裂蓋馬鞍菌多糖。

表1 不同處理對裂蓋馬鞍菌多糖含量的影響

3 結(jié)論與討論

3.1 結(jié)論

經(jīng)烘箱80℃烘干的裂蓋馬鞍菌多糖含量高于自然陰干和自然曬干的裂蓋馬鞍菌多糖含量，不同干制方式的馬鞍菌多糖含量具體表現(xiàn)為烘干＞曬干＞陰干。因此，新疆野生裂蓋馬鞍菌采用烘干的方式能盡可能地保留其中的多糖。

3.2 討論

烘干的裂蓋馬鞍菌多糖含量大于曬干的裂蓋馬鞍菌，這可能與曬干時的環(huán)境因素有關(guān)[9]，較長的干制時間導(dǎo)致裂蓋馬鞍菌糖分流失嚴重，因而多糖含量降低；曬干的裂蓋馬鞍菌多糖含量大于陰干的裂蓋馬鞍菌，這可能與曬干和陰干時的溫度、濕度或光照的差異有關(guān)，或是裂蓋馬鞍菌內(nèi)部多糖結(jié)構(gòu)產(chǎn)生了變化，從而影響了多糖含量，具體原因還有待研究。

本試驗采用熱水浸提法提取新疆野生裂蓋馬鞍菌多糖，此方法操作簡單，不會破壞多糖結(jié)構(gòu)，能把多糖損耗降到最低，且工藝不復(fù)雜，成本不高，但需要較長的提取時間和較高的提取溫度。采用乙醚脫脂，與其他溶劑相比效果較好。采用三氯乙酸法去除裂蓋馬鞍菌蛋白，反應(yīng)溫和、效果好，多糖的損失率低。采用苯酚-硫酸法測定裂蓋馬鞍菌多糖含量，方便快速、靈敏度較好。經(jīng)恒溫電熱鼓風(fēng)干燥箱烘干的裂蓋馬鞍菌多糖可以更好地保留，為新疆野生裂蓋馬鞍菌多糖的進一步研究奠定了基礎(chǔ)。