液質(zhì)聯(lián)用快速檢測豬肉中的甲氧氯普胺

黃 霞，周春紅，蔣 雨，楊麗平

（1.宜賓市敘州區(qū)食品檢驗檢測中心，四川宜賓 644699；2.重慶市黔江食品藥品檢驗所，重慶 409000； 3.宜賓市食品藥品檢驗檢測中心，四川宜賓 644002）

甲氧氯普胺，又名滅吐寧、氯普胺、滅吐靈和胃復(fù)安等，CAS號為364-62-5，英文名稱為4-Amino-5-chloro-N-(2-(diethylamino)ethyl)-2-methoxybenzamide。分子式為C14H22ClN3O2，分子量為299.8，化學(xué)結(jié)構(gòu)式見圖1。甲氧氯普胺因有止吐鎮(zhèn)靜的作用，在臨床上主要用于治療惡心和嘔吐，可協(xié)助胃排空障礙的患者排空胃部，并治療胃食道逆流。本品也可用于治療偏頭痛，并可治療胃輕癱[1-4]。

圖1 甲氧氯普胺化學(xué)結(jié)構(gòu)式

《中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第560號》指出，人用胃腸道藥品用于動物源性食品缺乏殘留檢測實驗數(shù)據(jù)，會增加動物源性食品中藥物殘留危害，因此明確規(guī)定動物源性食品中甲氧氯普胺為禁用獸藥。國內(nèi)外的研究大都集中在甲氧氯普胺作為人用胃腸道藥物的檢測以及血液中的含量。對于動物源性食品中的殘留檢測文獻(xiàn)發(fā)表較少。甲氧氯普胺的檢測有多種儀器，如紫外分光光度計、液相色譜儀、氣相色譜儀、氣質(zhì)聯(lián)用和液質(zhì)聯(lián)用等。本文采用液質(zhì)聯(lián)用電噴霧離子檢測器快速檢測豬肉中甲氧氯普胺的殘留量，具有簡便、快速、回收率高的特點[5-8]。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

甲氧氯普胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（中國食品藥品檢定研究院）；乙腈、甲醇、正己烷均為色譜純（山東大禹）；無水乙酸鈉為分析純（成都科?。粚嶒炗盟疄槌兯ㄊ婊钊?。

AB4500Q液質(zhì)聯(lián)用儀（配有電噴霧離子源和大氣壓化學(xué)源，美國AB公司)；CP225D電子天平（賽多利斯）；LD4-2C離心機(jī)（北京京立離心機(jī)有限公司）。

1.2 實驗方法

1.2.1 對照品溶液的配制

精密稱取甲氧氯普胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)10.0 mg于10 mL 容量瓶中，甲醇溶解定容至10 mL，搖勻，得到 1 000 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)貯備液（4 ℃冰箱避光保存可使用3個月）。精密吸取100 μL甲氧氯普胺標(biāo)準(zhǔn)貯備液于10 mL容量瓶中，甲醇稀釋至10 mL，搖勻，得到10 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)中間液（4 ℃冰箱避光保存可使用1個月）。再精密吸取100 μL甲氧氯普胺標(biāo)準(zhǔn)中間液于10 mL容量瓶中，初始流動相稀釋至10 mL，搖勻，得到100 ng·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)中間液（現(xiàn)用現(xiàn)配）。分別精密 吸 取0.020 mL、0.050 mL、0.100 mL、0.200 mL 和0.400 mL于進(jìn)樣瓶中，陰性樣品提取液定容至 1.00 mL，得 到 濃 度 為2 ng·mL-1、5 ng·mL-1、 10 ng·mL-1、20 ng·mL-1和40 ng·mL-1標(biāo) 準(zhǔn) 曲 線 工 作液（現(xiàn)用現(xiàn)配）。

1.2.2 樣品前處理方法

選取未含甲氧氯普胺的陰性豬肉樣品，充分打碎混勻，稱取5 g置于50 mL離心管中，加入20 mL乙腈，渦旋1 min，超聲波提取30 min，加入2 g無水硫酸鈉，充分混勻，3 000 r·min-1離心5 min。精密吸取上清液10.0 mL，加入3 mL乙腈飽和的正己烷，充分混勻，渦旋1 min，3 000 r·min-1離心5 min，去除上層正己烷，乙腈層，氮氣吹干濃縮，精密吸取初始流動相1.0 mL充分溶解，過0.22 μm有機(jī)相濾膜，上機(jī)檢測。

1.2.3 色譜檢測條件

色譜柱：C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；進(jìn)樣體積：5 μL；流速：1.0 mL·min-1；流動相：0.1%甲酸/水（A）和乙腈（B）；梯度洗脫程序：0～5.0 min，95%～5%A，5.1～10.0 min，5%A，10.1～15.0 min，95%A。

1.2.4 質(zhì)譜檢測條件

離子源：電噴霧離子源（ESI）；采集模式：多反應(yīng)離子監(jiān)測（MRM）；掃描模式：正離子掃描；離子源溫度：600 ℃；電噴霧電壓：5 500 V；氣簾氣壓力：35 psi；噴霧氣壓力：60 psi；輔助氣壓力：70 psi；其余質(zhì)譜條件如表1所示。

表1 待測組分質(zhì)譜條件

2 結(jié)果與分析

2.1 基質(zhì)效應(yīng)

化學(xué)分析中，基質(zhì)是指樣品中除分析物以外的組分。基質(zhì)常對分析物的分析過程有顯著干擾，并影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。本實驗中豬肉樣品提取液中的離子強(qiáng)度會對分析物活度系數(shù)有影響，這些影響和干擾被稱為基質(zhì)效應(yīng)。

目前最常用的去除機(jī)制效應(yīng)的方法是盡可能地保持標(biāo)準(zhǔn)曲線的基質(zhì)和待測組分基質(zhì)一致。本實驗采用未含有待測組分的空白豬肉提取液作為標(biāo)準(zhǔn)工作液的稀釋劑，能有效地去除基質(zhì)干擾。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線、相關(guān)系數(shù)

本實驗以待測組分的濃度和色譜峰面積作為X、Y軸繪制線性回歸方程。標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為2～ 40 ng·mL-1，相關(guān)系數(shù)R2為0.999 5（標(biāo)準(zhǔn)曲線見 圖2）。

圖2 甲氧氯普胺標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3 檢出限、定量限

信噪比為3（S/N=3）時為方法檢出限，信噪比為10（S/N=10）時為方法定量限?？瞻谆|(zhì)配標(biāo)最低點St1濃度為2 ng·mL-1（譜圖見圖3、圖4），信噪比為S/N=10.9。根據(jù)公式1得到方法檢出限為 0.220 μg·kg-1，定量限為0.734 μg·kg-1。

式中：X為方法檢出限，μg·kg-1；S/N為信噪比；Cst1為st1濃度，ng·mL-1；n為稀釋倍數(shù)；V為定容體積，mL；m為樣品質(zhì)量，g。

圖3 標(biāo)準(zhǔn)品ST3定量離子圖譜

圖4 標(biāo)準(zhǔn)品ST3定性離子圖譜

2.4 回收率、RSD

選用陰性鮮豬肉樣品，分別在0.8 μg·kg-1、 4.0 μg·kg-1、16.0 μg·kg-1低中高3個加標(biāo)水平對待測組分進(jìn)行加標(biāo)回收，高中低3個濃度各測定6次，結(jié)果見表2。16.0 μg·kg-1加標(biāo)回收色譜圖見圖5、圖6。

表2 回收率和RSD

圖5 16.0 μg·kg-1加標(biāo)回收定量離子圖譜

圖6 16.0 μg·kg-1加標(biāo)回收定性離子圖譜

3 結(jié)論

本實驗通過液質(zhì)聯(lián)用檢測豬肉中的甲氧氯普胺，在儀器的響應(yīng)值、方法的回收率上都能滿足檢測需要。在后續(xù)的工作中應(yīng)在此基礎(chǔ)上進(jìn)行更深入的多殘留組分、多種基質(zhì)類型檢測的研究驗證。在樣品前處理上力求以更環(huán)保、更高效率、更準(zhǔn)確的提取方法為目的，開展檢測研究。