HPLC測(cè)定安神類中成藥和保健食品中非法添加佐匹克隆的研究

林鳳屏，翁 嘉，李惠敏，劉麗婷，李錦妹，陳霞飛，歐陽珠

（惠州市食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 惠州 516003）

睡眠不足已成為困擾很多人的現(xiàn)代文明病，純植物或純中藥的健康產(chǎn)品因其溫和持久、副作用較小的優(yōu)點(diǎn)被越來越多失眠患者選擇。一些不法分子利用西藥成分起效快、效果強(qiáng)等特點(diǎn)，擅自在保健食品中添加未標(biāo)明的化學(xué)成分，提高產(chǎn)品功效以提高銷售量，謀取不正當(dāng)利益。在保健食品相關(guān)檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)安神類保健食品中添加苯二氮?類藥物（BDZ）的現(xiàn)象[1-4]。佐匹克隆在臨床上用于各種原因引起的失眠癥，其選擇性比BDZ更強(qiáng)，有更好的療效和更少的不良反應(yīng)[5-7]；但作為精神類藥物，仍需在醫(yī)生的指導(dǎo)下服用，濫用或長(zhǎng)期使用均會(huì)對(duì)身體造成不同程度傷害[8-11]。本文建立了高效液相色譜法（HPLC）檢測(cè)安神類中成藥和保健食品中非法添加佐匹克隆的方法，為拓展安神類中成藥和保健食品非法添加化學(xué)藥物的篩查提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-20A高效液相色譜儀（DAD陣列檢測(cè)器，日本島津公司）；XS-205電子分析天平（梅特勒-托利多）；KQ-250超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；YB-Z真空恒溫干燥箱（天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠）。

1.2 試藥

60家生產(chǎn)廠家共64批樣品（市購(gòu)），其中安神類中成藥10批，保健食品54批；劑型有片劑14批、膠囊劑50批；佐匹克隆對(duì)照品（批號(hào)：100870-200801，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；佐匹克隆原料（批號(hào)：20101201，測(cè)得含量：94.1 %，廣東順峰藥業(yè)有限公司）；乙腈為色譜純，水為純凈水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜柱：辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的phenomenex Luna C8（2）柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀1.36 g，加水適量溶解至1000 ml，用磷酸調(diào)pH為2.5±0.1）（17:83，v/v）；檢測(cè)波長(zhǎng)：303 nm（如有與對(duì)照品保留時(shí)間一致的色譜峰，用DAD檢測(cè)）；流速：1.0 ml/min；進(jìn)樣量20 μl；柱溫30 ℃。理論板數(shù)按佐匹克隆峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 取佐匹克隆對(duì)照品10 mg，精密稱定，置入100 ml量瓶，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取3 ml，置入20 ml量瓶，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液 膠囊劑：取10粒內(nèi)容物，混勻（片劑：取10片，研勻），精密稱定，研勻，取一次服用量的1/2，精密稱定，置入具塞錐形瓶，精密加入乙腈100 ml，密塞，稱定重量，超聲處理10 min，放冷，再稱定重量，用乙腈補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液 取不含佐匹克隆的樣品，按2.2.2項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.2.4 對(duì)照品貯備液制備 精密稱取佐匹克隆原料（含量：94.1 %），加乙腈制成每1 ml含佐匹克隆0.7502 mg的溶液，作為佐匹克隆對(duì)照品貯備液。

2.3 專屬性

取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液，依法測(cè)定。結(jié)果表明：陰性對(duì)照溶液對(duì)試驗(yàn)無干擾，見圖1。

圖1 HPLC色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取佐匹克隆對(duì)照品加乙腈溶解并稀釋至不同濃度，取不同濃度的對(duì)照品溶液各20 μl注入液相色譜儀，以峰面積為縱坐標(biāo)、佐匹克隆濃度（μg/ml）為橫坐標(biāo)，得回歸方程為：y=43.0405 x+0.2649，r=0.9999。結(jié)果表明，佐匹克隆在17.982～1998 ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，按2.1項(xiàng)下的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積的RSD為0.4 %，表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取棗仁安睡樂寧康膠囊，精密稱取8份，按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，結(jié)果表明，平均含量為1.61 mg/粒，RSD為1.2 %，表明方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，分別在0，1，2，4，6，8，10 h分別進(jìn)樣，記錄峰面積，測(cè)定RSD為0.1 %，結(jié)果表明，被測(cè)溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 檢出限和定量限測(cè)定

采用信噪比法，當(dāng)對(duì)照品溶液濃度為0.5466 μg/ml，精密吸取對(duì)照品溶液5 μl注入液相色譜儀，信噪比約為3:1，即方法的最低檢測(cè)限為2.7 ng。當(dāng)對(duì)照品溶液濃度為1.2422 μg/ml，精密吸取對(duì)照品溶液5 μl注入液相色譜儀，信噪比約為10:1，即方法的定量限為6.2 ng。

2.9 回收率試驗(yàn)

取棗仁安睡樂寧康膠囊（平均裝量0.1855 g，含佐匹克隆1.61 mg/粒）6份，每份0.09 g，精密加入對(duì)照品貯備液1 ml，按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為100.64 %，RSD為0.7 %。表明本方法回收率良好，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.10 耐用性試驗(yàn)

取同一供試品（棗仁安睡樂寧康膠囊） 0.18 g，精密稱定，共2份，按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè)定含量，考察不同品牌的同類型色譜柱[phenomenex Luna C8（2）（250 mm×4.60 mm，5 μm），Lichrospher C810 nm（200 mm×4.6 mm，5 μm），Thermo Syncronis C8（250 mm×4.0 mm，5 μm）]、同一色譜柱不同柱溫（20，30，40 ℃）和流動(dòng)相不同pH值（2.2，2.5，2.8）的3種情況下，佐匹克隆含量測(cè)定結(jié)果受影響程度，結(jié)果RSD分別為0.8 %，0.4 %，0.2 %，表明方法耐用性良好。

2.11 樣品測(cè)定

取64批樣品，按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果有3批樣品檢出佐匹克隆，61批樣品未檢出。結(jié)果見表2。

表2 添加佐匹克隆的樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

通過HPLC對(duì)市售的64批安神類中成藥和保健食品進(jìn)行篩查，發(fā)現(xiàn)3批次添加了佐匹克隆（用二級(jí)管陣列檢測(cè)器比較相應(yīng)色譜峰的紫外-可見吸收光譜，吸收光譜與佐匹克隆一致），采用液質(zhì)聯(lián)用儀分析驗(yàn)證，結(jié)果所得質(zhì)譜圖與佐匹克隆質(zhì)譜圖一致，表明HPLC與液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)結(jié)果一致。因此，本法可快速、準(zhǔn)確檢測(cè)安神類保健食品中佐匹克隆成分，可作為檢測(cè)安神類中成藥和保健食品非法添加佐匹克隆的有效方法，為更好地打擊不法行為提供技術(shù)支持。