基于生物信息學(xué)和分子對(duì)接技術(shù)研究當(dāng)歸六黃湯治療潰瘍性結(jié)腸炎潛在活性成分及分子機(jī)制

李靜榮，梁冰宜，彭維，高永堅(jiān)，林碧珊，曾杉，湯春花，陳錦霞，蘇薇薇

(1.中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣東省中藥上市后質(zhì)量與藥效再評(píng)價(jià)工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州 510275；2.國(guó)藥集團(tuán)廣東環(huán)球制藥有限公司，廣東 佛山 528000)

潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是一種慢性、復(fù)發(fā)性結(jié)腸炎癥性疾病，其特征是反復(fù)發(fā)作的腹痛、腹瀉、血便、結(jié)腸運(yùn)動(dòng)功能障礙和永久性纖維化以及全身癥狀乃至癌變[2]。UC發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈上升趨勢(shì)，預(yù)計(jì)到2025年，全球患病將高達(dá)3 000萬(wàn)人以上。UC發(fā)病機(jī)制尚不清楚，可能與遺傳因素、超負(fù)荷的炎癥、免疫和微生物環(huán)境暴露有關(guān)。

目前，有關(guān)UC的治療主要有抗炎藥物(如氨基水楊酸和糖皮質(zhì)激素)、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶抑制劑和生物藥物(TNF-α抗體和α4β7整合素拮抗劑vedolizumab)等。但現(xiàn)有藥物的有效性和安全性仍達(dá)不到要求，且生物制品多為靜脈或皮下給藥，無(wú)法維持治療的持久性。因此，亟須進(jìn)一步探討UC的發(fā)病機(jī)制，為UC的治療提供新的安全、有效、耐受的治療藥物。

當(dāng)歸六黃湯(DGLHD)源于金代名醫(yī)李杲的《蘭室秘藏》，由當(dāng)歸、地黃、熟地黃、黃芩、黃柏、黃連，黃芪等七味草藥組成，功能主治“滋陰瀉火，固表止汗”?，F(xiàn)代藥理表明DGLHD復(fù)方[7]或方中單味中藥及其活性成分臨床已經(jīng)廣泛用于治療與炎癥相關(guān)的疾病。例如，黃芩湯已經(jīng)被廣泛用于潰瘍性結(jié)腸炎的治療[8]。干地黃和熟地黃水煎液和提取物均可明顯減少大鼠胃潰瘍的發(fā)生率[9]。黃柏中的黃柏堿、巴馬汀、小檗堿均呈現(xiàn)出很好的抗炎作用[10]。

雖然DGLHD復(fù)方或者其方中單味藥材治療UC已有較為豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)，但其治療UC的 “多成分”和“多靶點(diǎn)”的作用模式，尚未完全闡明。本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，通過(guò)高通量篩選、網(wǎng)絡(luò)可視化和拓?fù)鋵W(xué)分析，闡明藥物、靶點(diǎn)和疾病之間復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系，預(yù)測(cè)和分析中藥化合物的多靶點(diǎn)作用機(jī)制，為DGLHD治療UC提供新的理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 當(dāng)歸六黃湯(DGLHD)活性成分篩選 將“當(dāng)歸”“地黃”“黃芩”“黃芪”“黃柏”“黃連”輸入中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺(tái)(TCMSP，https：//tcmspw.com)，檢索當(dāng)歸六黃湯主要組成藥材的全部化學(xué)成分。同時(shí)，采用口服生物利用度(OB)、Caco-2 細(xì)胞滲透率和類藥性(DL)三項(xiàng)指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)所有成分的成藥性。確定OB≥30%，類藥性DL≥0.1，Caco-2 細(xì)胞滲透率≥0.4的預(yù)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)，以篩選DGLHD中可能的生物活性成分進(jìn)行后續(xù)的分析和研究。

1.2 藥物-活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 通過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)尋找當(dāng)歸大黃湯的藥物活性成分的相應(yīng)蛋白靶點(diǎn)，并將靶點(diǎn)數(shù)據(jù)輸入U(xiǎn)niProt 數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//www.uniprot.org/)，選擇物種為人，進(jìn)行歸一化和標(biāo)準(zhǔn)化命名，刪除沒(méi)有相應(yīng)基因名稱的目標(biāo)蛋白。將獲得的藥物活性成分和對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)，通過(guò)Cytoscape 3.7.2 軟件建立藥物-活性成分-靶標(biāo)關(guān)系圖，并采用軟件中的“Networkanalyze”功能進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治?，篩選出核心活性成分。

1.3 蛋白質(zhì)相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及拓?fù)浞治?從DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.disgenet.org/)、Genecards數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.genecards.org/)和DrugBank數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.drugbank.ca/)中檢索與UC相關(guān)的基因。將獲得的UC靶基因和當(dāng)歸大黃湯的活性成分的靶基因通過(guò)http://www.bioinformatics.com.cn(生物在線工具)進(jìn)行Venn圖映射交集處理，得到活性成分靶點(diǎn)-潰瘍性結(jié)腸炎的交集靶基因。

通過(guò)在線String數(shù)據(jù)庫(kù)，選擇“Multiple proteins”選項(xiàng)，種屬設(shè)置為“Homo sapiens”，置信度設(shè)為“0.9”，并選擇隱藏散在的節(jié)點(diǎn)，獲取交集靶基因的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)。將結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape軟件中進(jìn)行可視化分析，通過(guò) “cytohubba”插件，篩選Hub基因。用 “CytoNCA”插件進(jìn)行拓?fù)鋵W(xué)分析，分別以介數(shù)中心性(BC)、接近中心性(CC)、度中心性(degree)、特征向量中心性(EC)、局部平均連通度(LAC)、網(wǎng)絡(luò)中心性(NC)等參數(shù)的中位值為篩選條件，確定核心靶點(diǎn)。

1.4 交集靶基因的GO功能注釋和KEGG通路富集 通過(guò)Metascape在線數(shù)據(jù)庫(kù)(https://metascape.org/)對(duì)交集靶點(diǎn)進(jìn)行基因本體(GO)功能注釋和KEGG通路富集分析。其中，GO富集分析用于通過(guò)三維維度來(lái)解釋和注釋基因，包括細(xì)胞成分(CC)、分子功能(MF)和生物過(guò)程(BP)分析；而KEGG通路富集主要進(jìn)行路徑分析。分析物種為“Human(智人)”，至少包含3個(gè)基因，P值小于0.05以下具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義。結(jié)果保留q值(即校正后的P值)小于0.05的富集條目，并按照q值大小進(jìn)行排序，輸出柱狀圖。

1.5 “藥物成分-核心靶點(diǎn)”分子對(duì)接驗(yàn)證 利用Discovery Studio 2016軟件(中山大學(xué)藥學(xué)院所購(gòu))對(duì)DGLHD關(guān)鍵活性成分與核心靶點(diǎn)的結(jié)合能力進(jìn)行對(duì)接預(yù)測(cè)。DGLHD關(guān)鍵活性成分的Mol2格式文件和蛋白質(zhì)的“PDB”格式分別從TCMSP平臺(tái)和PDB 數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//www.rcsb.org/)下載。目標(biāo)蛋白導(dǎo)入后，將目標(biāo)蛋白的所有晶體水分子清除，采用軟件中的“prepare protein”模塊對(duì)蛋白受體進(jìn)行去除原配體、水分子及添加氫原子等預(yù)處理并尋找活性口袋。對(duì)小分子配體進(jìn)行能量最小化處理，并將小分子配體的所有柔性鍵設(shè)置為可旋轉(zhuǎn)；應(yīng)用軟件中的CDOCKER功能對(duì)核心靶點(diǎn)蛋白受體和活性成分小分子配體進(jìn)行分子對(duì)接，CDOCKER是基于格點(diǎn)和CHARMm力場(chǎng)的分子對(duì)接方法。以目標(biāo)蛋白與配體之間的氫鍵、靜電相互作用、π-π鍵或范德華力等各種鍵能來(lái)計(jì)算兩者的結(jié)合能。結(jié)合能表示為負(fù)數(shù)(-CDOCKER_INTERACTION_ENERGY)，數(shù)值越高表示結(jié)合能力越強(qiáng)，結(jié)合越穩(wěn)定。受體蛋白和小分子之間相互作用以2D結(jié)構(gòu)表示。

2 結(jié)果

2.1 當(dāng)歸六黃湯(DGLHD)活性成分的篩選和靶點(diǎn)識(shí)別結(jié)果 通過(guò) TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)共檢索到395個(gè)化學(xué)成分，其中當(dāng)歸125個(gè)，熟地黃 76個(gè)，黃芩143個(gè)，黃芪87個(gè)，黃柏140個(gè)、黃連48個(gè)成分，未檢索到生地黃的化學(xué)成分，但通過(guò)文獻(xiàn)檢索以及對(duì)當(dāng)歸六黃湯水煎液的高分辨質(zhì)譜結(jié)果分析，獲得7種生地黃化學(xué)成分。

根據(jù)預(yù)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步從中篩選得到82個(gè)潛在有效活性成分，其中當(dāng)歸4個(gè)，黃柏25個(gè)，黃連9個(gè)，黃芪15個(gè)(黃芪多糖和黃芪皂苷來(lái)源于文獻(xiàn)報(bào)道黃芪的活性成分)，黃芩36個(gè)，熟地黃4個(gè)(見(jiàn)表1)，其中生地黃6個(gè)活性成分來(lái)自文獻(xiàn)報(bào)道，并未按照預(yù)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選。

表1 當(dāng)歸六黃湯活性成分信息

2.2 當(dāng)歸六黃湯-活性成分-靶標(biāo)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建和分析 82個(gè)活性化合物最終輸出407個(gè)對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)基因名，將結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2軟件，構(gòu)建當(dāng)歸六黃湯-活性成分-靶基因網(wǎng)絡(luò)。該網(wǎng)絡(luò)有494個(gè)節(jié)點(diǎn)，包括7個(gè)藥物節(jié)點(diǎn)，80個(gè)活性成分節(jié)點(diǎn)，407個(gè)靶基因節(jié)點(diǎn)，共1 870條邊(見(jiàn)圖1)。通過(guò)分析網(wǎng)絡(luò)中活性成分節(jié)點(diǎn)和目標(biāo)基因節(jié)點(diǎn)的度值和BC值，獲得前10位活性成分，分別為β-谷甾醇、豆甾醇、油酸、小檗堿、巴馬汀、腺苷、黃芩素、芒柄花黃素、7-O-methylisomucronulatol、地黃素A。

圖1 “DGLHD-活性成分-靶基因”網(wǎng)絡(luò)：網(wǎng)絡(luò)中的方塊代表DGLHD中的藥物，多邊形代表活性成分，菱形代表靶基因

2.3 PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及核心靶點(diǎn)基因篩選結(jié)果 共篩選出UC疾病相關(guān)靶基因1 203個(gè)(至少存在于兩個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)中)，活性成分-潰瘍性結(jié)腸炎的交集靶基因132個(gè)，這些基因被認(rèn)為是當(dāng)歸六黃湯治療UC的潛在作用靶點(diǎn)。

通過(guò)在線String網(wǎng)站構(gòu)建蛋白-蛋白相互作用(PPI)，如圖2所示PPI 網(wǎng)絡(luò)中共包含節(jié)點(diǎn)112個(gè)、522條邊。利用 “cytoHubba”篩選出前6位的核心靶基因，分別為：STAT3、TP53、AKT1、MAPK1、JUN、VEGFA。利用“CytoNCA”對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)鋵W(xué)分析和計(jì)算，得到BC、CC、degree、EC、LAC、NC等參數(shù)，第一輪篩選degree值>11(兩次中位值)的基因，得到含有40個(gè)節(jié)點(diǎn)，254條邊的網(wǎng)絡(luò)圖，第二輪篩選degree>21，BC>136，CC>0.415，EC>0.098，LAC>5.067，NC>6.33的基因，得到含有12個(gè)節(jié)點(diǎn)，45條邊的網(wǎng)絡(luò)，兩次篩選后最終得到 12個(gè)核心靶點(diǎn)基因，同cytoHubba結(jié)果一致，同樣包含STAT3、TP53、AKT1、MAPK1、JUN、VEGFA等基因。

圖2 交集靶基因PPI網(wǎng)絡(luò)

2.4 GO功能注釋和KEGG 通路富集分析的結(jié)果 對(duì)132個(gè)交集靶點(diǎn)的GO功能注釋分析共得到2 484個(gè)條目(q值< 0.05)，包括生物過(guò)程2 209個(gè)、細(xì)胞組成100個(gè)、分子功能175個(gè)。其中生物過(guò)程主要涉及對(duì)炎癥的反應(yīng)、凋亡信號(hào)反應(yīng)、細(xì)胞對(duì)化學(xué)應(yīng)激、氧化應(yīng)激的反應(yīng)等；細(xì)胞組成涉及膜筏、細(xì)胞外基質(zhì)、細(xì)胞質(zhì)核周區(qū)等；分子功能主要集中于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、血紅素結(jié)合、蛋白激酶結(jié)合、受體調(diào)節(jié)活性等(見(jiàn)圖3A)。

KEGG富集分析主要集中在“腫瘤通路”“糖尿病并發(fā)癥中晚期糖基化終產(chǎn)物及其受體(AGE-RAGE)信號(hào)通路”“內(nèi)分泌抵抗”“NF-κB信號(hào)通路”“Th17細(xì)胞分化”等。KEGG信號(hào)通路氣泡圖如圖3B所示。這些發(fā)現(xiàn)表明，炎癥和免疫力的調(diào)節(jié)可能是DGLHD治療UC的主要機(jī)制。

A.GO功能分析TOP10，BP-生物過(guò)程，CC-細(xì)胞組成，MF-分子功能；B.KEGG富集通路氣泡圖

2.5 當(dāng)歸六黃湯主要活性成分與核心靶點(diǎn)蛋白的分子對(duì)接結(jié)果 選擇“2.2”項(xiàng)下結(jié)果中前10個(gè)活性分子(β-谷甾醇MOL000358、豆甾醇MOL000449、小檗堿MOL001454、油酸MOL000675、腺苷MOL001630、漢黃芩素MOL000173、芒柄花黃素MOL000392、7-O-methylisomucronulatol MOL000378、地黃素A MOL003731和黃芩素MOL002714)和“2.3”項(xiàng)下結(jié)果中前6個(gè)潛在核心靶基因(STAT3、TP53、AKT1、MAPK1、JUN、VEGFA)進(jìn)行分子對(duì)接驗(yàn)證，并通過(guò)Discovery Studio計(jì)算配體與受體的結(jié)合能。結(jié)果顯示當(dāng)歸六黃湯活性成分與不同核心靶基因活性口袋中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基結(jié)合，形成氫鍵、π-π鍵或范德華力等，從而形成穩(wěn)定的對(duì)接模式，各化合物與核心靶基因結(jié)合能見(jiàn)表2。我們選擇結(jié)合能最低的構(gòu)象(-CDOCKER_INTERACTION_ENERGY得分最好)對(duì)接結(jié)果進(jìn)行2D可視化展示(見(jiàn)圖4)。

A.腺苷和AKT-1(4GV1)；B.腺苷和TP53(6VIP)；C.油酸和JUN(2G01)；D.腺苷和STAT3(1BG1)；E.腺苷和VEGFA(4ZFF)；F.腺苷和MAPK1(6G54)；氫鍵；鹽橋；碳?xì)滏I；疏水鍵

表2 DGLHD活性化合物與核心靶基因結(jié)合能

3 討論

本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和生物信息學(xué)結(jié)合方法，構(gòu)建了DGLHD多成分-多靶點(diǎn)相互作用的可視化網(wǎng)絡(luò)，分析DGLHD治療UC的潛在有效活性成分、分子靶點(diǎn)和作用途徑。通過(guò)對(duì)當(dāng)歸、地黃、熟地黃、黃芪、黃芩、黃連、黃柏化學(xué)成分的分析，確定了當(dāng)歸六黃湯中主要活性成分：β-谷甾醇、豆甾醇、油酸、小檗堿、巴馬汀、腺苷、黃芩素、芒柄花黃素、7-O-methylisomucronulatol、地黃素A。分子對(duì)接結(jié)果也證明，他們與大多數(shù)核心靶基因可以形成很好的對(duì)接模式。

β-谷甾醇和豆甾醇是常見(jiàn)的植物甾醇，它們可以模擬哺乳動(dòng)物體內(nèi)的類固醇激素和植物生長(zhǎng)激素，在UC治療中的抗炎優(yōu)勢(shì)已被各種體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)。油酸(18∶1 n-9)，因?yàn)槠淇拱?、抗氧化等療效被?bào)道用于多種免疫及炎癥疾病的治療。臨床試驗(yàn)結(jié)果表明，小檗堿(900 mg·d-1，連續(xù)3個(gè)月)顯著降低了結(jié)腸組織中的Geboes分級(jí)。和mesalamine聯(lián)合使用在中國(guó)人的潰瘍性結(jié)腸炎中耐受性良好，并增強(qiáng)mesalamine在結(jié)腸組織中的抗炎作用。巴馬汀，是當(dāng)歸六黃湯中另一種重要的生物堿，可以通過(guò)抑制色氨酸代謝和調(diào)節(jié)腸道微生物群來(lái)改善小鼠結(jié)腸炎。

黃芩素是黃芩中含量最高的化合物，進(jìn)入血液后迅速轉(zhuǎn)化為黃芩苷等代謝物，黃芩苷已被證實(shí)可顯著抑制TLR4誘導(dǎo)的NF-κBp65激活，從而顯著降低炎癥因子的產(chǎn)生，并調(diào)節(jié)Th17/Treg細(xì)胞的平衡。黃芩素作用效果較黃芩苷略弱，這可能是因?yàn)辄S芩苷的吸收慢，在體內(nèi)的保留時(shí)間更長(zhǎng)有關(guān)。腺苷可以調(diào)節(jié)腸道免疫系統(tǒng)，促進(jìn)乙酸誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎模型中結(jié)腸和直腸愈合。芒柄花黃素等系列異黃酮對(duì)PPARs表現(xiàn)出非常好的激活作用，而PPARG的激活可以抑制NF-κB通路的激活，從而在UC的治療過(guò)程中發(fā)揮重要作用。因此，DGLHD中有效活性成分可通過(guò)抑制NF-κB和MAPK等炎癥相關(guān)通路激活，進(jìn)而抑制炎癥因子的產(chǎn)生，同時(shí)調(diào)節(jié)腸道菌群，改善腸道脂類代謝，減緩潰瘍性結(jié)腸炎的黏膜病變發(fā)揮協(xié)同作用。

對(duì)DGLHD和UC的 132個(gè)交集靶基因進(jìn)行PPI分析，并確定了DGLHD治療UC的6個(gè)核心靶基因，即VEGFA、MAPK、STAT3、AKT1、JUN、TP53。

血管生成是UC發(fā)病機(jī)制的重要組成部分，由炎癥或者異常的免疫反應(yīng)觸發(fā)，影響疾病的進(jìn)展和嚴(yán)重程度[22]。研究表明，VEGFA在潰瘍性結(jié)腸炎患者的血清和組織中表達(dá)升高，介導(dǎo)炎癥細(xì)胞的募集，增強(qiáng)招募以及單核細(xì)胞共刺激分子的表達(dá)。因此，能夠靶向血管生成的分子有可能協(xié)同影響潰瘍性結(jié)腸炎的疾病進(jìn)程[22]。

對(duì)UC樣本的微陣列數(shù)據(jù)集分析發(fā)現(xiàn)，MAPK可以作為UC診斷的生物標(biāo)記物。大多數(shù)關(guān)于MAPKs對(duì)IBD的作用的研究進(jìn)展主要集中在p38家族和JNK家族[25]。在UC腸道組織中，p38和JNK1/2的磷酸化水平顯著增加。P38抑制劑SB203580可以通過(guò)抑制p38MAPK通路的激活，緩解潰瘍性結(jié)腸炎的癥狀，并延緩病程進(jìn)展。在DSS誘導(dǎo)的小鼠急性潰瘍性結(jié)腸炎模型，JNK抑制劑SP600125可以使TNF-α、IL-6表達(dá)下調(diào)，并降低DAI、HI評(píng)分。Tofacitinib，一種泛jak抑制劑，在UC的2項(xiàng)Ⅲ期隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)中，與安慰劑相比，對(duì)UC患者的臨床、內(nèi)鏡和生活質(zhì)量結(jié)果是有效的[27]。P53在未確診癌癥的嚴(yán)重慢性UC患者中存在高頻突變，AKT1是PI3K-AKT信號(hào)通路的關(guān)鍵介質(zhì)，參與促炎細(xì)胞因子的調(diào)控和釋放。因此，上述核心靶點(diǎn)在UC發(fā)生和病程的發(fā)展中起著非常重要的作用，是DGLHD治療UC的潛在靶點(diǎn)。

對(duì)靶基因GO/KEGG的富集分析表明，“腫瘤通路”、“糖尿病并發(fā)癥中晚期糖基化終產(chǎn)物及其受體(AGE-RAGE)信號(hào)通路”“肝炎B”“內(nèi)分泌抵抗”“NF-κB信號(hào)通路”等可能是DGLHD治療UC的潛在途徑。以人群為基礎(chǔ)的最新證據(jù)表明，UC患者發(fā)生結(jié)腸直腸癌的風(fēng)險(xiǎn)明顯增加，在發(fā)病20年后約為7%[30]，在25年時(shí)的風(fēng)險(xiǎn)為7%～14%，在35年后高達(dá)30%。在IBD患者中發(fā)現(xiàn)了RAGE多態(tài)性和RAGE水平的升高，參與炎癥與NF-κB的激活及其對(duì)氧化應(yīng)激的反應(yīng)相關(guān)[32]。促炎細(xì)胞因子、腫瘤壞死因子(TNF)-α和白細(xì)胞介素(IL)-6與胰島素抵抗增加和糖耐量受損有關(guān)[33]。對(duì)980位IBD患者研究發(fā)現(xiàn)中國(guó)的IBD患者的HBV感染患病率高于歐洲、美國(guó)和中國(guó)的普通人群，特別是在年輕的克羅恩病患者中，應(yīng)加強(qiáng)HBV疫苗接種和有針對(duì)性的覆蓋率。在UC患者腸道中，腸道免疫平衡嚴(yán)重受損，效應(yīng)免疫細(xì)胞過(guò)度激活，產(chǎn)生高水平的促炎細(xì)胞因子，導(dǎo)致結(jié)腸組織損傷。核轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)被確定為這種免疫環(huán)境中的關(guān)鍵調(diào)控因子之一。目前多種免疫抑制藥物，如皮質(zhì)激素和抗TNF-α抗體，均至少部分通過(guò)抑制NF-κB活性介導(dǎo)其抗炎作用。

分子對(duì)接結(jié)果顯示，DGLHD的主要活性成分β-谷甾醇、豆甾醇、油酸、小檗堿、巴馬汀、腺苷、黃芩素、芒柄花黃素、7-O-methylisomucronulatol、地黃素對(duì)核心靶基因VEGFA、MAPK、STAT3、AKT1、JUN、TP53具有良好的親和力。其中腺苷可與AKT-1、TP53、STAT3以及MAPK靶點(diǎn)的晶體蛋白通過(guò)氫鍵結(jié)合等分子作用力發(fā)生相互作用；而油酸、β-谷甾醇、豆甾醇以及芒柄花黃素等可以與JUN蛋白晶體和MAPK1蛋白晶體形成穩(wěn)定的結(jié)合模式，提示DGLHD的關(guān)鍵活性成分主要通過(guò)干預(yù)炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激等關(guān)鍵信號(hào)靶點(diǎn)，在UC中發(fā)揮治療作用。

綜上所述，當(dāng)歸六黃湯在抗炎和免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮協(xié)同作用，通過(guò)“多成分、多靶點(diǎn)、多途徑”的特點(diǎn)達(dá)到治療潰瘍性結(jié)腸炎的目的。