HIV/AIDS 合并 CM 患者 IL-10 與 T 淋巴細(xì)胞亞群、病毒載量及主要生化指標(biāo)的相關(guān)性分析

磨立達(dá)，羅曉璐，黃宛虹 ，劉澤端 ，蘇國生

1.南寧市第四人民醫(yī)院[廣西艾滋病臨床治療中心(南寧)、廣西醫(yī)科大學(xué)附屬南寧市傳染病醫(yī)院]檢驗(yàn)科，廣西南寧 530023；2.廣西東盟經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)人民醫(yī)院（南寧市第十人民醫(yī)院）檢驗(yàn)科，廣西南寧 530105

人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）/艾滋?。╝cquired immune-deficiency syndrome,AIDS）合并新型隱球菌性腦膜炎（cryptococcal men-ingitis,CM）病情較為嚴(yán)重，且臨床治療難度較大，預(yù)后較差，病死率也隨之升高，成為危害機(jī)體健康的主要疾病[1]。相關(guān)報(bào)道顯示，HIV 感染死因構(gòu)成比例中，以合并CM 的致死率較高，約占10%～20%，成為HIV/AIDS 死亡的主要因素[2]。隨著醫(yī)療水平的不斷進(jìn)步發(fā)展，抗真菌藥物被廣泛運(yùn)用于臨床，雖然能夠有效控制HIV/AIDS 合并CM 患者的病情，但仍存在部分患者治療失敗的現(xiàn)象[3-4]。因此若能夠?qū)IV/AIDS 合并CM 的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行深入探究，可為后續(xù)治療方案的選擇及預(yù)后評估提供前提保障。有研究指出，白介素-10（interleukin-10，IL-10）與HIV/AIDS 合并CM 的發(fā)生發(fā)展存在一定關(guān)聯(lián)，但相關(guān)報(bào)道較少[5-6]。因此本文選擇2019 年1月—2020 年9 月南寧市第四人民醫(yī)院收治的40 例單純 HIV/AIDS 感染患者作為 A 組，40 例 HIV/AIDS合并結(jié)核感染者作為B 組，另40 例HIV/AIDS 合并CM 感 染 患 者 作 為 C 組 ，40 例 CM 感 染 患 者 作 為 D組，研究 HIV/AIDS 合并 CM 患者 IL-10 與 T 淋巴細(xì)胞亞群、病毒載量及主要生化指標(biāo)的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇本院收治的40 例單純HIV/AIDS 感染患者作為A 組，40 例HIV/AIDS 合并結(jié)核感染者作為B組，另 40 例 HIV/AIDS 合并 CM 感染患者作為 C 組，40 例 CM 感 染 患 者 作 為 D 組 。C 組 中 男 33 例 、女 7例；年齡19～85 歲，平均（45.85±17.95）歲。B 組中男34 例、女 6 例；年齡 20～76 歲，平均（49.48±14.00）歲。A 組 中 男 30 例 、女 10 例 ；年 齡 20～79 歲 ，平 均（50.68±16.82）歲。D 組中男 29 例、女 11 例；年齡19～81 歲，平均（52.53±15.78）歲。4 組一般資料對比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核通過。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)[7]：①患者與家屬簽訂知情書；②符合疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室檢查確診；③病歷資料完整，且中途未退出。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重感染、肝腎疾病、精神類疾病、嚴(yán)重心腦血管疾病者；②研究前接受抗病毒治療者；③交流或者聽力障礙者。

1.3 方法

（1）檢測前標(biāo)本準(zhǔn)備。入院后，在未使用抗病毒或抗真菌藥物前抽取血液及腦脊液。

①血液準(zhǔn)備：收集空腹外周靜脈血（8～10 mL），分裝于兩支含EDTA-K3 抗凝采血管及一支無抗凝采血管，部分抗凝血液用于血常規(guī)和T 淋巴細(xì)胞亞群分析，血漿部分于-80℃保存，供病毒載量及細(xì)胞因子檢測備用，無抗凝血液離心后取血清用于生化指標(biāo)檢測。②腦脊液準(zhǔn)備：在腰2 至骶1 的椎間隙穿刺抽取腦脊液（4～6 mL），分裝于一支含EDTAK3 抗凝試管及一支無抗凝試管，抗凝腦脊液用于細(xì)胞學(xué)分類，無抗凝腦脊液用于生化指標(biāo)檢測，剩余部分于-80℃保存，供細(xì)胞因子檢測備用。

（2）檢測方法。①血漿病毒載量(HIV-1RNA)檢測：選擇擴(kuò)增儀及配套試劑對HIV-1RNA 進(jìn)行檢測。②血液T 淋巴細(xì)胞亞群分類：選擇流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀及配套熒光標(biāo)記單克隆抗體試劑盒測定外周血 CD3+、CD4+、CD8+T 淋巴細(xì)胞。③血漿及腦脊液細(xì)胞因子檢測：按雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)及配套試劑盒，測定血漿及腦脊液的IL-10。④血清及腦脊液生化檢測：選擇全自動生化儀及配套試劑盒，對腦脊液乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）、腦脊液腺苷脫氨酶（adenosine deaminase, ADA）、腦脊液總蛋白（total protein, TP）、腦脊液葡萄糖（glucose, GIU）、腦脊液氯離子（CL-）、血清LDH、血清ADA、血清TP、血清GIU、血清CL-、血清免疫球蛋白M（immunoglobulin M,IgM）、血清免疫球蛋白G（immunoglobulin G, IgG）、血清免疫球蛋白A（immunoglobulin A, IgA）進(jìn)行檢測。⑤血液及腦脊液白細(xì)胞（white blood count, WBC）檢測：選擇全自動血球儀及配套試劑盒，測定血液WBC 及腦脊液WBC。

1.4 觀察指標(biāo)

比較C 組各指標(biāo)與其他組的差異，同時分析血液中、腦脊液中IL-10 與其他指標(biāo)的相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料符合正態(tài)分布，以()表示，組間差異比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)和百分率（%）表示，組間差異比較采用χ2檢驗(yàn)。指標(biāo)之間的相關(guān)性分析采用Pearson 秩相關(guān)分析。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 C 組各指標(biāo)與其他組比較

C 組血漿及腦脊液IL-10 的含量與其他3 組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。腦脊液中，C 組LDH 含量低于 B 組和 D 組，ADA 含量高于 A 組，TP含量低于 B 組和 D 組，GIU、CL-、WBC 含量低于 A組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；血液中，C 組WBC含量低于 D 組，CD3+含量低于 A 組，CD4+含量低于A 組和 D 組，CD8+含量低于 A 組，而高于 D 組，GIU含 量 低 于 D 組 ，ADA 含 量 高 于 A 組 和 D 組 ，HIVRNA 含量高于 A 組，IgA 含量高于 A 組和 D 組，IgG低于B 組，而高于D 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 C 組各指標(biāo)與其他組比較()

表1 C 組各指標(biāo)與其他組比較()

注：t1/P1值（A 組與C 組比較）；t2/P2值（B 組與C 組比較）；t3/P3值（D 組與C 組比較）

項(xiàng)目腦脊液IL-10（pg/mL）血漿 IL-10（pg/mL）血液WBC(×109/L)血液CD3+(×106/L)血液CD4+(×106/L)血液CD8+(×106/L)血清Cl-(mmol/L)血清GIU(mmol/lL)血清ADA(U/L)血清TP(g/L)血清LDH(U/L)腦脊液LDH(U/L)腦脊液ADA(U/L)腦脊液TP(mg/L)腦脊液GIU(mmol/L)腦脊液Cl-(mmol/l)腦脊液WBC(×106/L)血漿HIV-RNA(lgcopies/mL)血清IgA(mg/L)血清IgM(mg/L)血清IgG(mg/L)D 組（n=40）24.62±12.41 77.94±74.87 10.93±8.51 836.32±498.66 438.15±264.86 350.05±229.02 94.98±14.84 6.49±1.38 12.47±4.69 66.61±8.79 220.37±89.73 63.14±54.91 3.07±2.35 1320.22±978.11 1.76±1.18 116.53±6.91 190.05±181.82 t3/P3值0.953/0.343 0.697/0.788 3.718/0.001 1.901/0.061 8.360/0.001 2.266/0.026 1.501/0.138 3.865/0.001 4.714/0.001 1.790/0.077 1.932/0.057 3.439/0.001 1.728/0.088 4.115/0.001 1.601/0.113 1.751/0.084 2.391/0.019 6.876/0.001 1.972/0.052 4.019/0.001 A 組（n=40）20.39±12.15 86.05±84.71 6.34±2.58 1210.22±824.13 330.55±180.08 835.42±779.86 99.95±16.18 5.59±1.10 18.79±8.79 72.01±7.98 221.51±100.39 26.35±17.38 1.28±1.13 504.53±258.51 3.18±0.48 124.70±2.75 15.37±22.15 3.97±1.55 3.12±1.75 1.31±1.06 17.74±6.03 B 組（n=40）20.91±14.42 85.42±83.04 6.82±4.74 526.09±366.98 89.47±45.01 411.22±284.95 97.75±5.60 5.93±1.35 24.73±11.19 70.00±10.45 280.38±113.83 62.44±55.59 3.27±3.22 1113.35±1013.18 2.68±1.42 117.95±7.49 71.15±66.36 5.61±1.43 4.41±2.53 1.45±0.88 21.48±6.28 C 組（n=40）21.65±15.30 90.24±83.18 5.69±2.65 622.92±505.36 82.12±48.91 511.17±387.09 98.82±6.46 5.40±1.13 24.97±16.10 70.68±11.38 285.53±193.55 30.41±24.65 2.29±1.62 629.40±413.27 2.15±0.99 119.13±6.36 112.45±95.18 5.73±1.59 4.89±2.19 1.82±1.73 17.84±5.74 2.32±0.89 1.25±0.59 13.35±4.12 t1/P1值0.408/0.684 0.223/0.824 1.112/0.270 3.842/0.001 8.420/0.001 2.355/0.021 0.410/0.683 0.224/0.448 2.131/0.036 0.605/0.547 1.857/0.067 0.844/0.401 3.234/0.002 1.620/0.109 5.921/0.001 5.084/0.001 6.283/0.001 5.013/0.001 3.993/0.001 1.590/0.116 0.076/0.940 t2/P2值0.223/0.824 0.259/0.796 1.316/0.192 0.981/0.330 0.699/0.486 1.315/0.192 0.792/0.431 1.904/0.061 0.077/0.938 0.278/0.781 0.145/0.885 3.331/0.001 1.720/0.089 2.983/0.004 1.936/0.056 0.760/0.450 2.251/0.027 0.355/0.724 0.907/0.367 1.206/0.232 2.706/0.008

2.2 血液中IL-10 與其他指標(biāo)相關(guān)性分析

血液中，對于 C、B、A、D 組，IL-10 與 WBC、CD3+、CD4+、CD8+、Cl-、GIU、ADA、TP、LDH、HIVRNA、IgA、IgM、IgG 均無相關(guān)性（P＞0.05）。見表2。

表2 血液中IL-10 與其他指標(biāo)的相關(guān)性分析

2.3 腦脊液中IL-10 與其他指標(biāo)相關(guān)性分析

腦脊液中，C 組 IL-10 與 WBC、ADA、TP 呈正相關(guān)（P＜0.05）；B 組 IL-10 與 LDH、ADA 呈正相關(guān)（P＜0.05）。見表3。

表3 腦脊液中IL-10 與其他指標(biāo)的相關(guān)性分析

3 討論

AIDS 通常是由HIV 感染引起，使患者免疫系統(tǒng)出現(xiàn)不同程度的功能缺陷，成為危害性較高的傳染性疾病。而CM 的發(fā)生是由新型隱球菌感染患者腦膜或腦實(shí)質(zhì)造成，其早期癥狀并不典型，極易被忽視，隨著疾病持續(xù)發(fā)展后，頭痛不斷加重，甚至增加精神異常、躁動不安、意識障礙等現(xiàn)象[8-9]。一旦與HIV/AIDS 合并后，加重病情，直接危及患者生命安全。因此臨床迫切需要對HIV/AIDS 合并CM 的發(fā)生機(jī)制進(jìn)行探究，選擇更為科學(xué)可靠的檢測指標(biāo)以及理論依據(jù)，為早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療提供有利依據(jù)。

IL-10 基因前體中包含178 個氨基酸殘基，一旦產(chǎn)生后可清除18 個氨基酸信號肽，因此成熟后的IL-10 中包含 160 個氨基酸殘基[10]。另外 IL-10 是從單核細(xì)胞以及Th2 細(xì)胞中產(chǎn)生，主要出現(xiàn)在免疫反應(yīng)相對晚期，尤其是細(xì)胞激活以及抗炎細(xì)胞因子產(chǎn)生后。且IL-10 具備一定免疫刺激以及免疫抑制功效，可對細(xì)胞生長及分化進(jìn)行調(diào)控，可發(fā)揮出抗炎、免疫抑制的作用。

在吳亮等[11]的研究中，其對艾滋病伴新型隱球菌腦膜炎患者開展實(shí)驗(yàn)室檢查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)患者腦脊液 Cl-水平為（116.55±7.65）mmol/L，相較于單純艾滋病患者水平明顯下降。而在本研究中，腦脊液中，C 組 LDH 低于 B 組和 D 組，ADA 高于 A 組，TP 低于 B 組和 D 組，GIU、WBC 低于 A 組(P＜0.05)，其中 C組的 CL-水平為（119.13±6.36）mmol/L，明顯低于 A組 的（124.70±2.75）mmol/L(P＜0.05)；血 液 中，C 組WBC 低于 D 組，CD3+低于 A 組，CD4+低于 A 組和 D組，CD8+低于 A 組，而高于 D 組，GIU 低于 D 組，ADA高于 A 組和 D 組，HIV-RNA 高于 A 組，IgA 高于 A 組和 D 組，IgG 低于 B 組，而高于 D 組(P＜0.05)。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，IL-10 作為成熟/未成熟 T 細(xì)胞、胸腺中 T 細(xì)胞發(fā)育的輔助生長因子，從單核細(xì)胞上看，其可對抗原特異性CD4+T 細(xì)胞增殖、Th1 型細(xì)胞因子進(jìn)行抑制。而內(nèi)源性IL-10 可影響mRNA 表達(dá)，并阻礙其自身產(chǎn)物的表達(dá)，進(jìn)而防止抗原遞呈能力。ADA 作為與機(jī)體細(xì)胞免疫活性相關(guān)的核酸代謝酶，可對腺嘌呤核苷進(jìn)行催化，使其成為黃嘌呤核苷。一旦發(fā)生CM 后，患者機(jī)體的細(xì)胞免疫受到刺激，導(dǎo)致淋巴細(xì)胞增加，細(xì)胞中ADA 進(jìn)入腦脊液內(nèi)，因此其在CM患者腦脊液中呈現(xiàn)升高趨勢，可成為診斷CM 的主要指標(biāo)[12]。TP 是由球蛋白與白蛋白構(gòu)成，其水平可展現(xiàn)肝合成功能及腎病變引發(fā)的蛋白質(zhì)丟失現(xiàn)象，成為了解機(jī)體營養(yǎng)狀況的主要指標(biāo)[13]。而腦膜炎患者通常伴有中樞神經(jīng)病變，正常情況下，TP 在腦脊液內(nèi)含量較少，但在中樞神經(jīng)病變時，導(dǎo)致分子量較低或者含量較大的白蛋白進(jìn)入血腦屏障，從而提升TP 的表達(dá)水平[14]。LDH 作為葡萄糖無氧酵解、糖異生的關(guān)鍵酶，廣泛存在于機(jī)體各類組織細(xì)胞上，正常情況難以穿過血腦屏障，因此在腦脊液中濃度較低，僅占血清的10%左右[15]。相關(guān)研究表示，IL-10 水平不斷升高后，極易破壞患者血腦屏障，導(dǎo)致大量WBC 經(jīng)過受損的血腦屏障進(jìn)入腦脊液，進(jìn)而促進(jìn)腦脊液中WBC 水平升高[16]。IL-10 可避免細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ，對CD40 抗體進(jìn)行刺激，促進(jìn)B 細(xì)胞迅速生長、分化，并改善體液免疫高反應(yīng)狀態(tài)，分泌較多IgM、IgG、IgA，因此IL-10 與 IgM、IgG、IgA 呈正相關(guān)[17]。研究顯示，HIV 感染中通常侵犯機(jī)體CD4+T 細(xì)胞，從而導(dǎo)致其數(shù)量明顯減低，并造成免疫系統(tǒng)失去抵抗能力，最終引發(fā)各類細(xì)菌以及病毒的感染，甚至增加腫瘤發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。

另外HIV/AIDS 與糖尿病存在一定關(guān)系，可能是因?yàn)榛颊呓邮芨咝Э共《局委熎陂g，部分藥物可能導(dǎo)致血糖水平升高，如蛋白酶抑制劑，非糖尿病患者服用后可導(dǎo)致血糖升高，甚至出現(xiàn)2 型糖尿病相似的癥狀，因此HIV/AIDS 患者的空腹血糖較高，糖耐量減低，胰島負(fù)荷加重。而腦脊液的含糖量較血糖降低，完全依靠血糖濃度以及脈絡(luò)膜的滲透性以及糖的分解速度等，因此血糖水平變化，可直接導(dǎo)致腦脊液中含糖量明顯減少[18]。而結(jié)核感染與GIU 也存在一定關(guān)系，主要是因?yàn)楦哐菭顟B(tài)或者組織內(nèi)葡萄糖濃度較高，可加重蛋白質(zhì)、糖以及脂肪代謝的紊亂程度，最終引發(fā)的營養(yǎng)不良環(huán)境極易促進(jìn)結(jié)核桿菌生長，而高膽固醇也可刺激結(jié)核菌生長[19]。若長時間GIU 水平升高，不僅降低患者的補(bǔ)體與抗體，同時可降低細(xì)胞免疫功能，使細(xì)胞趨化性、吞噬能力、殺菌能力改變，進(jìn)一步增加結(jié)核感染的風(fēng)險(xiǎn)，因此結(jié)核感染患者的GIU 水平出現(xiàn)異常[20]。另外CM 患者腦脊液中大量白細(xì)胞消耗糖，從而提升致病菌對糖的分解以及細(xì)菌毒素致炎性代謝產(chǎn)物，抑制細(xì)胞膜葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)能力，最終使腦脊液內(nèi)糖含量降低[21]。研究發(fā)現(xiàn)IL-10 在尿毒癥、腎小球腎炎、系統(tǒng)性狼瘡腎炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎上存在重要意義，而HIV/AIDS 作為獲得性免疫缺陷綜合征，IL-10 濃度可能與HIV/AIDS 進(jìn)展存在一定相關(guān)性，其可防止單核細(xì)胞活性、巨噬細(xì)胞活性、T 淋巴細(xì)胞增殖、NK 細(xì)胞活性，并阻礙HIV 在機(jī)體中進(jìn)行復(fù)制，因此IL-10 可成為HIV/AIDS 合并CM 診斷評估中的重要標(biāo)志物，為后續(xù)治療方案的選擇及預(yù)后判斷提供參考依據(jù)[22]。

綜上所述，IL-10 在 HIV/AIDS 合并 CM 的發(fā)生與發(fā)展中存在重要作用，其與患者其他檢測指標(biāo)具有密切相關(guān)性，可成為患者診斷、療效及預(yù)后評估的主要指標(biāo)，值得推廣。