多發(fā)性骨髓瘤患者外周血中TrxR-1表達(dá)水平與預(yù)后的相關(guān)性

李曉冉

河南省新鄉(xiāng)市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 453003

多發(fā)性骨髓瘤(Multiple myeloma，MM)是一種B淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的液系統(tǒng)惡性腫瘤，也為一種克隆性漿細(xì)胞惡性增殖性疾病，多發(fā)于老年人，當(dāng)前在人群中的發(fā)病率逐年增加[1]。多發(fā)性骨髓瘤的病理特征是漿細(xì)胞發(fā)生惡性增殖，導(dǎo)致正常骨髓阻滯被惡性腫瘤細(xì)胞增生浸潤(rùn)，使得患者在臨床上出現(xiàn)貧血、腎臟損害、感染、高鈣血癥等癥狀[2]。現(xiàn)代研究表明多發(fā)性骨髓瘤是體液免疫及細(xì)胞免疫存在缺陷的疾病，但是具體的發(fā)病機(jī)制還不明確，不過(guò)體內(nèi)外各種因素在多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)病過(guò)程中共同發(fā)揮作用[3]。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，當(dāng)前已有多種治療方法應(yīng)用于多發(fā)性骨髓瘤的治療，包括中藥治療、化療、放療、靶向治療、造血干細(xì)胞移植等，但是都存在一定的不足，很難持續(xù)提高患者生存率，很多患者的中位生存時(shí)間為3～5年，為此尋找合適的預(yù)后因素是當(dāng)前臨床研究的重點(diǎn)[4]。硫氧還蛋白還原酶-1(Thioredoxin reductase-1，TrxR-1)可與硫氧還蛋白還原型煙酰腺嘌呤二核苷磷酸(Reduced form of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH)、硫氧還蛋白過(guò)氧化物酶(thioredoxin peroxidase)共同組成硫氧還蛋白系統(tǒng)，為調(diào)節(jié)細(xì)胞氧化還原狀態(tài)的含硒酶，在調(diào)節(jié)機(jī)體抗氧化應(yīng)激防御中發(fā)揮重要作用[5]。TrxR-1的高表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲與化療耐藥性存在相關(guān)性，可導(dǎo)致線粒體氧化還原環(huán)境失衡，降低血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)，從而可抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡率，能夠促進(jìn)癌癥的進(jìn)展[6-7]。本文具體探討了多發(fā)性骨髓瘤患者外周血中TrxR-1表達(dá)水平與預(yù)后的相關(guān)性，希望明確TrxR-1在多發(fā)性骨髓瘤發(fā)生和發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2016年2月—2021年1月在我院血液科診治的多發(fā)性骨髓瘤患者58例作為MM組，同期選擇在本院的非多發(fā)性骨髓瘤患者58例作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：MM組經(jīng)臨床確診為多發(fā)性骨髓瘤；對(duì)照組經(jīng)臨床確診為造血系統(tǒng)無(wú)明顯異常；年齡20～75歲；本次檢驗(yàn)前未經(jīng)歷任何治療；初診患者；我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)了此次研究；一般臨床基線資料和病理資料完整；患者或家屬簽署了知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠與哺乳期婦女；電話隨訪失聯(lián)的患者；臨床標(biāo)本丟失的患者；合并其他部位惡性腫瘤者。兩組一般資料對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。在MM組中，ISS分期：Ⅰ期32例，Ⅱ期18例，Ⅲ期8例；M蛋白分型：IgA型28例，IgG型24例，輕鏈型6例。

表1 兩組一般資料對(duì)比

1.2 外周血TrxR-1檢測(cè) 抽取所有患者的空腹靜脈血2～3ml，4℃靜置30min，1 000r/min離心10min，取上層血清。采用德國(guó)Qiagen公司的QIAamp Viral RNA Mini Kit試劑盒提取總RNA，使用Invitrogen公司的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后，采用qPCR擴(kuò)增檢測(cè)TrxR-1表達(dá)水平。取2μl cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)體系共20μl，擴(kuò)增條件為：預(yù)變性：95℃，15min；變性：95℃，10s；退火/延伸：55℃，60s，共40個(gè)循環(huán)，檢測(cè)TrxR-1的相對(duì)表達(dá)水平。檢測(cè)引物由上海生工公司設(shè)計(jì)合成，引物序列：正鏈5’-TTTAAGCGGCGCTCAGTCAATTCC-3’，反鏈5’-GGGGCCCTAGCGGTCTGTTCCCTTAGG-3’。

1.3 預(yù)后調(diào)查 所有患者都給予含硼替佐米的綜合方案進(jìn)行連續(xù)治療，電話、微信與門診隨訪追蹤入組多發(fā)性骨髓瘤患者的結(jié)局，隨訪截止時(shí)間至2021年7月1日，追蹤的終點(diǎn)事件為患者死亡，排除非原發(fā)病所致的死亡，比如心肌梗死、車禍意外等。同時(shí)調(diào)查所有患者的一般資料、血常規(guī)指標(biāo)與骨髓瘤患者的病理特征等。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用Microsoft Excel和SPSS22.00軟件對(duì)本研究所有數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，對(duì)比用t檢驗(yàn)或方差檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)以百分比表示，對(duì)比用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman分析，使用Cox回歸分析檢測(cè)多因素狀況，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。P<0.05時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組外周血TrxR-1表達(dá)水平對(duì)比 MM組的外周血TrxR-1相對(duì)表達(dá)水平(2.78±0.33)高于對(duì)照組(1.04±0.14)(t=13.742，P=0.000)。

2.2 不同病理特征多發(fā)性骨髓瘤患者的外周血TrxR-1表達(dá)水平對(duì)比 不同ISS分期與M蛋白分型的多發(fā)性骨髓瘤患者外周血TrxR-1表達(dá)水平對(duì)比差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同病理特征多發(fā)性骨髓瘤患者外周血TrxR-1表達(dá)水平對(duì)比

2.3 預(yù)后情況 所有患者隨訪到2021年7月1日，平均隨訪時(shí)間為(29.38±1.58)個(gè)月，死亡18例，死亡率為31.0%，死亡患者的外周血TrxR-1表達(dá)水平(4.19±0.22)高于生存患者(2.01±0.32)(t=14.204，P=0.000<0.05)。

2.4 相關(guān)性分析 在MM組中，Spearman分析顯示外周血TrxR-1表達(dá)水平與預(yù)后死亡存在正相關(guān)性(r=0.682，P=0.000)，Cox回歸分析顯示外周血TrxR-1表達(dá)水平為影響多發(fā)性骨髓瘤患者預(yù)后死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 多發(fā)性骨髓瘤患者外周血中TrxR-1表達(dá)水平與預(yù)后的相關(guān)性(n=58)

3 討論

多發(fā)性骨髓瘤約占血液系統(tǒng)惡性腫瘤的10.0%，在我國(guó)的發(fā)病率低于西方國(guó)家與非洲國(guó)家，多發(fā)生于老年人，發(fā)病的中位年齡是65歲左右[8]。多發(fā)性骨髓瘤的主要治療方法為化療，主要治療藥物為硼替佐米。但是該病患者仍然是不可治愈的，患者最終將死于多發(fā)性骨髓瘤或者多發(fā)性骨髓瘤的一系列治療并發(fā)癥[9]?，F(xiàn)代研究表明多發(fā)性骨髓瘤的臨床表現(xiàn)差異性較大，但是其預(yù)后存在明顯差異，這幾種差異性可能來(lái)源于機(jī)體骨髓瘤細(xì)胞生物學(xué)、骨髓微環(huán)境等異常狀況，也為早期預(yù)測(cè)患者的預(yù)后提供重要價(jià)值[10]。

TrxR-1是維持細(xì)胞內(nèi)氧化還原平衡的重要因子，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞氧化還原作用。TrxR-1在多數(shù)惡性腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)狀況，其表達(dá)程度與患者的病理特征、局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性[11]。TrxR-1主要分布在細(xì)胞質(zhì)，TrxR-1缺乏可導(dǎo)致線粒體氧化還原環(huán)境失衡，造成缺氧誘導(dǎo)因子1信號(hào)通路受損，能抑制自身的抗氧化作用，降低血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)，能抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡[12]。本研究顯示，MM組的外周血TrxR-1相對(duì)表達(dá)水平高于對(duì)照組(P<0.05)；不同ISS分期與M蛋白分型的多發(fā)性骨髓瘤患者外周血TrxR-1表達(dá)水平對(duì)比差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明多發(fā)性骨髓瘤患者多伴隨有外周血TrxR-1的高表達(dá)，且與患者的病理特征存在相關(guān)性。當(dāng)前也有研究表明，TrxR-1在惡性黑色素瘤、結(jié)直腸癌、甲狀腺癌中都呈現(xiàn)高表達(dá)，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖與侵襲[13-14]。

近年來(lái)隨著免疫調(diào)節(jié)劑，蛋白酶體抑制劑在臨床上的應(yīng)用，多發(fā)性骨髓瘤患者的生存期有所延長(zhǎng)，但是3年生存率一直在70.0%左右，5年生存率在50.0%左右，其中細(xì)胞遺傳學(xué)異常對(duì)生存具有重要意義[15]。本研究顯示，所有患者隨訪到2021年7月1日，平均隨訪時(shí)間為(29.38±1.58)個(gè)月，死亡18例，死亡率為31.0%，死亡患者的外周血TrxR-1表達(dá)水平高于生存患者(P<0.05)。TrxR-1有促癌作用，其過(guò)表達(dá)能夠促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，也可以作為判斷進(jìn)展期惡性腫瘤預(yù)后的指標(biāo)。抑制TrxR-1表達(dá)能夠誘導(dǎo)惡性腫瘤細(xì)胞凋亡增加。當(dāng)前也有研究表明TrxR-1介導(dǎo)了惡性腫瘤細(xì)胞的治療效應(yīng)，可降低腫瘤細(xì)胞的放射治療敏感性[16]。

隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，多發(fā)性骨髓瘤患者的生存期有所延長(zhǎng)，但是治愈率一直比較低，為此在臨床上還需要探索新的治療靶標(biāo)與方法[17]。本研究Spearman分析顯示多發(fā)性骨髓瘤外周血TrxR-1表達(dá)水平與預(yù)后死亡存在正相關(guān)性(r=0.682，P=0.000)，Cox回歸分析顯示外周血TrxR-1表達(dá)水平為影響多發(fā)性骨髓瘤患者預(yù)后死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。從機(jī)制上分析，Trx系統(tǒng)是抗氧化應(yīng)激的重要防御機(jī)制，參與了多發(fā)性骨髓瘤中的氧化還原與氧化應(yīng)激損傷過(guò)程，檢測(cè)多發(fā)性骨髓瘤中TrxR-1表達(dá)水平可作為預(yù)測(cè)預(yù)后的重要指標(biāo)之一，也可反映患者的病情程度[18]。本研究也存在一定的不足，隨訪時(shí)間較短，納入患者樣本數(shù)量較少，相關(guān)性分析比較淺，將在后續(xù)研究中進(jìn)行探討。

綜上所述，TrxR-1在多發(fā)性骨髓瘤外周血表達(dá)明顯升高，其高表達(dá)促進(jìn)了多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)生、發(fā)展，可作為預(yù)測(cè)多發(fā)性骨髓瘤預(yù)后的重要指標(biāo)之一。