碳量子點(diǎn)酒對(duì)幽門螺旋桿菌藥效學(xué)研究及作用機(jī)制預(yù)測

張喜武，胡志欣，王雅泓，竇金金

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院，黑龍江哈爾濱 150040；2.哈爾濱成程生命與物質(zhì)研究所，黑龍江哈爾濱 150500；3.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，黑龍江哈爾濱 150040）

幽門螺旋桿菌（，Hp）是一類對(duì)生存環(huán)境較為苛刻的革蘭陰性細(xì)菌，菌株整體以螺旋狀存在，其作為一種流行的致病細(xì)菌，常在胃部匯集并復(fù)制感染。作為I 類致癌物，全球感染Hp的人口已占半數(shù)之多，有些國家甚至有90%的人口曾感染過此類細(xì)菌。Hp 在胃內(nèi)定植主要依靠此類細(xì)菌獨(dú)特的酸適應(yīng)機(jī)制，治療不及時(shí)常會(huì)誘發(fā)消化性潰瘍、胃腺癌等疾病，甚至與心血管、神經(jīng)、肝膽等系統(tǒng)疾病也息息相關(guān)?，F(xiàn)如今臨床上最常使用的治療方法即抗生素三聯(lián)療法，然而隨著耐藥菌株的出現(xiàn)其治療效果不盡人意，常常無法根治甚至出現(xiàn)反復(fù)感染的現(xiàn)象，且由于使用抗生素產(chǎn)生的不良反應(yīng)導(dǎo)致患者耐受性下降，對(duì)機(jī)體損害較大。因此，尋找治療及預(yù)防幽門螺桿菌感染的新方法具有必要性。

酒是中醫(yī)藥科學(xué)重要組成部分，其發(fā)展史源遠(yuǎn)流長，《本草求真》記載：“酒能升陽發(fā)散，若引經(jīng)用為向?qū)?，則其勢最速，辛則通身達(dá)表，引入至高顛頂”，祖國醫(yī)學(xué)常用酒配藥治療各種疾病。女性更年期綜合征如今呈現(xiàn)發(fā)病早、發(fā)病率高的趨勢，常伴焦慮、抑郁和睡眠障礙等癥狀，本研究者基于此研發(fā)了一款女士酒，主要成分為丁香、木瓜等8 味中藥，現(xiàn)已授權(quán)發(fā)明專利（ZL201910659190.0），其中丁香具有消炎抑菌及抗腫瘤護(hù)肝的作用，木瓜具有抗胃潰瘍、修護(hù)腸損傷、以及保肝抗炎加強(qiáng)機(jī)體免疫的功效。酒中有效成分為所添加8 味藥食同源中藥的醇溶性成分，因此同時(shí)具有藥食兩用性，近年來常以食補(bǔ)、藥膳等形式應(yīng)用于醫(yī)療保健。碳量子點(diǎn)采用超音速對(duì)撞粉碎及光電碳化技術(shù)制備碳量子點(diǎn)溶膠，為一種新興納米給藥技術(shù)，并采用科學(xué)吸附技術(shù)，將原酒中的氰化物、重金屬等有害物質(zhì)清除，將影響口感的雜醇、雜質(zhì)有效吸附，再通過高頻脈沖設(shè)備將酒中對(duì)人體有益物質(zhì)高度活化，女士酒和堿性白酒均采用此技術(shù)制備而成，不僅具有更好的吸收效果，還兼?zhèn)淞说投拘?、生物相容性等?yōu)點(diǎn)。酒精是性質(zhì)良好的有機(jī)溶劑，可使中藥中的有效成分更大程度溶出，近年來多有研究表明，適量、規(guī)律飲酒不僅對(duì)機(jī)體無損傷，而且對(duì)一些疾病甚至具有預(yù)防及治療作用。此外，在對(duì)服用女士酒、堿性酒的跟蹤調(diào)查中意外發(fā)現(xiàn)，感染幽門螺旋桿菌的人群中出現(xiàn)了不同程度的好轉(zhuǎn)甚至痊愈?；诖耍緦?shí)驗(yàn)針對(duì)女士酒、堿性酒對(duì)Hp 的抑制作用進(jìn)行研究，探討其對(duì)Hp 感染小鼠胃部病態(tài)變化的影響，并結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)，通過各數(shù)據(jù)平臺(tái)檢索篩選，對(duì)白酒中有效成分抑制Hp 作用靶點(diǎn)及相關(guān)通路進(jìn)行分析預(yù)測，探討其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

SPF 級(jí)KM 小鼠 70 只，18～22 g，雌雄各半，購于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物許可證號(hào)（SCXK（黑）2018-003）；碳量子點(diǎn)女士酒（主要配方：每1 L 原酒中含丁香、木瓜、桑葚、天門冬及大棗各5 g，含熟地黃、刺五加、枸杞各2.5 g，加入冰糖將酒精度調(diào)至35°，含糖量50 g/L）、碳量子點(diǎn)堿性白酒（pH＞7，酒精度58°） 黑龍江沃生生命波團(tuán)簇酒業(yè)有限公司；哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基、圓底立式厭氧培養(yǎng)袋、2.5 L 微需氧產(chǎn)氣包 青島海博生物；幽門螺旋桿菌試紙 廣州貝思奇診斷試劑有限公司；幽門螺桿菌國際標(biāo)準(zhǔn)菌株（ATCC 43504） 上海北諾生物科技有限公司。

37 ℃恒溫培養(yǎng)箱 上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司；超凈工作臺(tái) 蘇州凈化設(shè)備有限公司；高速冷凍離心機(jī) 安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分組及給藥 本實(shí)驗(yàn)中包含的動(dòng)物試驗(yàn)均符合相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)過程中嚴(yán)格遵守本校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)所制定的動(dòng)物倫理學(xué)規(guī)范，相關(guān)操作均得到委員會(huì)批準(zhǔn)。將實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽性藥物組（抗生素三聯(lián)：甲硝唑14.2 mg/kg+克拉霉素7.15 mg/kg+奧美拉唑400 nmol/kg）、女士酒高劑量組（49.4 mL/kg）、低劑量組（24.7 mL/kg）及堿性酒高劑量（49.4 mL/kg）、堿性酒低劑量組（24.7 mL/kg），10 只小鼠為一組，共7 組。各給藥組給藥劑量參照人類臨床常用劑量并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)設(shè)計(jì)定量，并依據(jù)人與動(dòng)物體表面積計(jì)算法換算得到各組小鼠灌胃劑量。每天定量給予實(shí)驗(yàn)小鼠專用鼠糧，自由飲水，保持環(huán)境溫度濕度恒定，飼養(yǎng)7 d 以適應(yīng)周圍環(huán)境，之后開始造模。按

1.2.2 項(xiàng)下步驟進(jìn)行模型復(fù)制，造模結(jié)束后，將各組對(duì)應(yīng)藥物配制成相應(yīng)濃度，均以每日0.2 mL/10 g 灌胃，空白組及模型組給予等量生理鹽水，連續(xù)給藥20 d。藥物干預(yù)期間各組小鼠保持飼養(yǎng)條件一致，正常攝食飲水。

1.2.2 模型復(fù)制及評(píng)價(jià)

1.2.2.1 ATCC 43504 細(xì)菌培養(yǎng) 在超凈工作臺(tái)上吸取100 μL 復(fù)蘇后的Hp 菌懸液，接種于哥倫比亞血瓊脂平板上，待培菌液吸干倒置放入含有微需氧產(chǎn)氣包的厭氧培養(yǎng)袋中，密封后置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中。待細(xì)菌長滿平板，如圖1a，用接種環(huán)輕輕挑取菌落，涂于Hp 試紙上，試紙顏色由黃變紫。用生理鹽水洗下菌落，于600 nm 條件下測量菌液OD 值，并調(diào)節(jié)濃度至1×10CFU/mL，收集于試管中，上下翻倒輕輕搖勻后立即灌胃。

1.2.2.2 模型復(fù)制 采用上述留存的ATCC 43504菌懸液，濃度為1×10CFU/mL。造模前禁食24 h，除空白對(duì)照組，其余組小鼠均先用5%碳酸氫鈉灌胃0.2 mL/只，30 min 再灌胃Hp 菌液0.2 mL/只，而后繼續(xù)禁食禁水3 h，之后恢復(fù)正常飼養(yǎng)。隔天感染一次，共8 次?？瞻讓?duì)照組給以等量生理鹽水。

1.2.2.3 模型評(píng)價(jià) 末次灌胃菌液2 h 后采用脫頸法處死小鼠，所有操作均按照動(dòng)物倫理學(xué)規(guī)定進(jìn)行，快速完整取胃，觀察胃部形態(tài)變化。沿胃大彎剖開胃，清理干凈后小心刮取胃黏膜組織進(jìn)行尿素酶試紙檢測。造模成功后按上述給藥方式分組給藥。

1.2.3 藥效檢測指標(biāo)及方法

1.2.3.1 一般體征觀察 各組小鼠在實(shí)驗(yàn)期間均定量給食，自由飲水，密切觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般情況，如靈活程度、精神狀況、毛發(fā)狀態(tài)、情緒變化及進(jìn)食進(jìn)水情況，定期稱量體重。

1.2.3.2 胃部大體形態(tài)學(xué)觀察 末次給藥后將小鼠脫頸處死，沿腹部剖開，剝離其他組織，完整取出小鼠全胃。用生理鹽水清洗胃標(biāo)本，然后用吸水紙輕輕吸干，觀察胃部大體形態(tài)學(xué)變化。

1.2.3.3 胃竇部粘膜組織尿素酶檢測 將小鼠胃組織沿胃大彎剪開，除去胃中殘留食物等雜質(zhì)，用生理鹽水清洗干凈后輕輕刮取胃竇部粘膜組織，用Hp 試紙進(jìn)行尿素酶檢測，按以下標(biāo)準(zhǔn)記錄結(jié)果：強(qiáng)陽性：試紙 1 min 內(nèi)變紅；弱陽性：試紙3 min 內(nèi)變紅；陰性：試紙不變色。

1.2.3.4 胃組織病理學(xué)HE 染色 將小鼠胃部剖開平展，放入裝滿生理鹽水的燒杯中，反復(fù)涮洗至附著的血漬及雜質(zhì)全部去除，然后浸泡于4%多聚甲醛溶液中，使用不同濃度的乙醇沖洗以去除組織中的水分，之后使用石蠟將組織包裹，按需切成一定厚度的薄片，染色后倍鏡下觀察，分析小鼠胃黏膜處是否出現(xiàn)炎癥及胃部微觀病理變化。

1.2.3.5 肝組織病理學(xué)HE 染色 取胃后繼續(xù)分離出肝臟，按1.2.3.4 所示步驟染色處理，觀察肝組織變化。

1.2.4 碳量子酒對(duì)Hp 抑制作用的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究

1.2.4.1 白酒微量化學(xué)成分收集及靶點(diǎn)預(yù)測 查閱白酒相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)其中主要健康成分進(jìn)行初步篩選。然后在化源網(wǎng)及Pub Chem 網(wǎng)站對(duì)其進(jìn)行檢索，采集2D 結(jié)構(gòu)的sdf.文件，并通過SwissADME 對(duì)化學(xué)成分進(jìn)行性質(zhì)篩選，選取并記錄“GI absorption”值為High 且“Druglikeness”項(xiàng)下不少于三個(gè)Yes 的成分。借助TCMSP 數(shù)據(jù)平臺(tái)檢索化學(xué)成分的潛在作用靶點(diǎn)，通過UniProt 數(shù)據(jù)庫得到物種分類為“Human”且已證實(shí)的與作用靶點(diǎn)對(duì)應(yīng)的基因名。

1.2.4.2 疾病相關(guān)靶點(diǎn)預(yù)測收集 以“H.pylori”為關(guān)鍵詞，物種設(shè)置為“Homo sapiens”，在GeneCards 數(shù)據(jù)庫進(jìn)行疾病靶點(diǎn)的搜索預(yù)測。

1.2.4.3 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將收集的酒中健康成分相關(guān)靶點(diǎn)與篩選到的疾病相關(guān)靶點(diǎn)導(dǎo)入Draw Venny Diagram 獲取交集。通過cytoscape 3.7.1 對(duì)交集靶點(diǎn)分析并構(gòu)建蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖，利用“Network analysis”插件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，獲取核心靶點(diǎn)。

1.2.4.4 GO 生物功能注釋和KEGG 通路富集 借助生信自學(xué)網(wǎng)對(duì)＜0.05 的交集靶點(diǎn)進(jìn)行GO 及KEGG通路富集分析，其中GO 分析包括生物過程（BP）、細(xì)胞組分（CC）、分子功能（MF）三個(gè)部分。

1.2.4.5 靶點(diǎn)-信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將1.2.4.4 項(xiàng)下通過KEGG 富集分析得到的排名前20 的通路進(jìn)一步篩選，去除其中有關(guān)癌癥、病毒的信息，得到與疾病關(guān)聯(lián)緊密的通路。而后將各通路及通路上富集的靶點(diǎn)制成network 文件上傳至cytoscpe 3.7.1，繪制出靶點(diǎn)-信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)圖。

1.3 數(shù)據(jù)處理

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 26.0 軟件進(jìn)行。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x ˉ±s）表示，各組間比較采用單因素方差分析，其中＜0.05 表明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 模型評(píng)價(jià)結(jié)果

結(jié)果如圖1 所示，模型小鼠尿素酶試紙于1 min內(nèi)由黃變紫，結(jié)果呈陽性，如圖1b；空白組小鼠試紙檢測未變色呈陰性，如圖1c?？瞻仔∈笪覆考t潤光澤，整體完整無變形，如圖1d；而模型組小鼠見圖1e，外部暗紅發(fā)紫，表面出現(xiàn)很多黑色凸起，整體皺縮，病變明顯。將胃沿胃大彎展開后，模型組與空白組胃部對(duì)比如圖1f，可見模型組組織上出現(xiàn)點(diǎn)星狀出血。綜上所述，可判斷模型復(fù)制成功。

圖1 模型評(píng)價(jià)結(jié)果Fig.1 Results of model evaluation

2.2 藥效學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果

2.2.1 一般體征觀察及體重變化曲線 實(shí)驗(yàn)期間，空白組小鼠精神情況良好，日常活潑好動(dòng)，飲食積極；模型組小鼠整體狀態(tài)逐漸轉(zhuǎn)差，較呆滯，抓取時(shí)易受驚嚇，掉毛嚴(yán)重，小鼠體質(zhì)量在后期增加緩慢，與其他組差異逐漸明顯；給藥組與模型組相比，整體狀態(tài)逐漸恢復(fù)，鼠毛由粗糙干燥逐漸恢復(fù)干凈順滑，攝入排泄均正常。

體重變化見表1，實(shí)驗(yàn)前期由于灌胃反復(fù)抓取導(dǎo)致所有組別小鼠體重均有所下降，適應(yīng)后恢復(fù)正常。相比于空白組，模型組小鼠體重增長緩慢，實(shí)驗(yàn)后期兩組間差距明顯；與模型組相比，給藥組小鼠體重在實(shí)驗(yàn)后期恢復(fù)正常，穩(wěn)定增長。其中女士酒高、低劑量組相比于堿性酒組體重增長幅度小，這可能與女士酒中添加的中藥成分具有改善腸道菌群，促進(jìn)消化的功效有關(guān)。

表1 小鼠體重變化Table 1 Body weight changes of mice

2.2.2 胃部大體形態(tài)學(xué)觀察 結(jié)果如圖2 所示，空白組小鼠胃部顏色紅潤，外部平整；模型組小鼠胃部呈現(xiàn)暗紫色，表面凹凸皺縮，出現(xiàn)明顯病變，并可見表面存在點(diǎn)星狀充血；抗生素三聯(lián)治療組小鼠胃部顏色淡紅，外部平展，與空白組較為接近；供試藥組上述情況均出現(xiàn)明顯好轉(zhuǎn)，且女士酒、堿性酒高劑量組相比低劑量組效果更佳。

圖2 酒對(duì)幽門螺桿菌感染小鼠胃部大體形態(tài)影響Fig.2 Influence of alcohol on the general morphology of stomach in mice infected by Hp

2.2.3 女士酒、堿性酒對(duì)Hp 感染小鼠胃竇部粘膜組織尿素酶的影響 由表2 可知，與空白組相比，模型組尿素酶檢測強(qiáng)陽性率及總陽性率均顯著升高（＜0.05），可判斷小鼠感染模型復(fù)制成功；給予抗生素三聯(lián)、女士酒及堿性酒灌胃治療后，陽性對(duì)照組、女士酒高、低劑量組及堿性酒高劑量組強(qiáng)陽性率、總陽性率均極顯著降低（＜0.01），說明女士酒及堿性酒對(duì)Hp 在胃竇部的定植、生長存在抑制作用，且女士酒抑制作用較強(qiáng)，女士酒高劑量組作用效果與抗生素三聯(lián)組較相近；各給藥組抑菌能力呈現(xiàn)劑量依賴性。

表2 酒對(duì)Hp 感染小鼠胃竇部粘膜組織尿素酶的影響Table 2 Effect of alcohol on the urease of gastric antrum mucosa in mice infected by Hp

2.2.4 胃組織標(biāo)本HE 染色 如圖3 所示，空白組小鼠胃黏膜處細(xì)胞分布均勻，規(guī)則排列，未見炎癥、損壞等病變；模型組胃標(biāo)本切片明顯可見胃腺細(xì)胞缺失，排列凌亂，出現(xiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤現(xiàn)象；給藥后上述情況出現(xiàn)好轉(zhuǎn)，女士酒、堿性酒低劑量組炎性細(xì)胞明顯減少，炎癥程度明顯降低；女士酒、堿性酒高劑量組幾乎不可見炎癥反應(yīng)，胃腺細(xì)胞分布較清晰工整；與陽性對(duì)照組及空白組切片情況較為接近。

圖3 酒對(duì)Hp 感染小鼠胃組織標(biāo)本影響（HE 染色，200×）Fig.3 Influence of alcohol on gastric tissue specimens of mice infected by Hp (HE staining,200×)

2.2.5 肝組織標(biāo)本HE 染色 如圖4 所示，各組之間切片差異較小，并未產(chǎn)生病理性病變，細(xì)胞整體均勻緊湊，細(xì)胞核完整，無腫脹壞死，模型組泛紅充血處有少量炎性細(xì)胞，其余各組未見炎癥發(fā)生，說明此飲用量對(duì)肝臟無損傷。圖4b、圖4d 左上角泛紅充血為取材導(dǎo)致的血管淤血，圖4e 顏色較淺為切片較薄所致。

圖4 肝組織標(biāo)本（HE 染色400×）Fig.4 Liver tissue specimen (HE staining 400×)

2.3 碳量子酒對(duì)Hp 抑制作用的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究

2.3.1 白酒微量化學(xué)成分靶點(diǎn)預(yù)測 如表3，通過文獻(xiàn)查閱及篩選共得到21 個(gè)滿足要求的所需化學(xué)成分。將化學(xué)成分及對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)蛋白名導(dǎo)入cytoscape 3.7.1 中繪制化學(xué)成分-靶點(diǎn)作用網(wǎng)絡(luò)圖，圖中共有個(gè)330 節(jié)點(diǎn)、546 條邊，詳見圖5。

圖5 白酒化學(xué)成分-靶點(diǎn)作用網(wǎng)絡(luò)圖Fig.5 Liquor chemical composition-target interaction network diagram

表3 白酒中化學(xué)成分對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)Table 3 Corresponding targets of chemical components in liquor

2.3.2 Hp 關(guān)聯(lián)靶點(diǎn)預(yù)測 在1.2.4.2 所述數(shù)據(jù)庫中共得到1789 個(gè)疾病靶點(diǎn)，根據(jù)“Relevance score”值計(jì)算中位數(shù)，去除小于中位數(shù)的靶點(diǎn)，最后得到疾病相關(guān)靶點(diǎn)905 個(gè)。

2.3.3 PPI 網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 通過Draw Venny Diagram得到74 個(gè)成分-疾病交集靶點(diǎn)，如圖6 所示，其中藍(lán)色代表成分靶點(diǎn)，粉色代表疾病靶點(diǎn)，中間交集即共有靶點(diǎn)。利用cytoscape 3.7.1 對(duì)交集靶點(diǎn)分析并構(gòu)建蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖，通過“Network analysis”插件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，得到蛋白靶點(diǎn)各參數(shù)，分別計(jì)算“Degree”、“Betweenness”、“Closeness”、“LAC”和“NeighborhoodConnectivity”值的中位數(shù)，舍棄小于中位數(shù)的靶點(diǎn)，最后得到HNRNPU、HNRNPA1、U2AF2、CUL4B、ACTB、PARP1、NEDD8 等53 個(gè)核心靶點(diǎn)，該網(wǎng)絡(luò)包括151 個(gè)節(jié)點(diǎn)，1060 條邊，如圖7所示。

圖6 交集靶點(diǎn)韋恩圖Fig.6 Wayne diagram of common target

圖7 PPI 網(wǎng)絡(luò)圖Fig.7 PPI network diagram

2.3.4 GO 及KEGG 富集分析 選取KEGG 分析排名前20 且＜0.05 的通路途經(jīng)，繪制氣泡圖，如圖8。此外，對(duì)生物過程（biological process，BP）、細(xì)胞組成（cellular component，CC）及分子功能（molecular function，MF）進(jìn)行GO 分析，選取排名前15 且＜0.05 的功能信息作圖。

圖8 KEGG 和GO 富集分析氣泡圖Fig.8 Enrichment analysis of key KEGG and GO pathways

2.3.5 靶點(diǎn)-信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 篩選結(jié)束最終得到8 條與Hp 疾病相關(guān)聯(lián)的通路，分別為IL-17 信號(hào)通路、脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化、細(xì)胞凋亡、TNF 信號(hào)通、致病性大腸桿菌感染、MAPK 信號(hào)通路、T 細(xì)胞受體信號(hào)通路以及PI3K-Akt 信號(hào)通路。然后采集通路上富集的靶點(diǎn)，根據(jù)所需制成network 文件，通過cytoscape 3.7.1 繪制出靶點(diǎn)-信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)圖（圖9）。

圖9 靶點(diǎn)-信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)圖Fig.9 Target-signal pathway network diagram

3 討論與結(jié)論

根據(jù)國家保健食品相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，女士酒、堿性酒作為補(bǔ)養(yǎng)型保健酒類產(chǎn)品，通過調(diào)節(jié)人體機(jī)能，進(jìn)而發(fā)揮增強(qiáng)人體免疫力，調(diào)節(jié)腸道菌群及對(duì)胃黏膜損傷有輔助保護(hù)功能，日常均可合理飲用，酒中含有的微量成分，不僅對(duì)白酒的口感及質(zhì)量有不同程度的影響，還可促進(jìn)機(jī)體循環(huán)、緩解疲乏，舒緩身心。由藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，合理飲酒可阻礙Hp 在體內(nèi)的定植及增殖，發(fā)揮抑菌作用，其中女士酒作用更強(qiáng)，這主要是因?yàn)榕烤浦泻心竟?、丁香? 味中藥，酒-藥相互協(xié)作，增強(qiáng)了抑菌效果。中醫(yī)認(rèn)為，幽門螺桿菌感染屬于陽明胃熱類疾病，而丁香、木瓜具有溫中降逆、和胃化濕之功效且均有較好的抗炎殺菌功能。已有研究表明，丁香揮發(fā)油中的主要成分丁香酚可與Hp 通過特定方式結(jié)合，從而影響其活性，達(dá)到理想抑菌作用；并且在體外抑制幽門螺桿菌實(shí)驗(yàn)中丁香醇提物也顯現(xiàn)出了更強(qiáng)的抑制作用。覃慧林等發(fā)現(xiàn)木瓜乙酸乙酯萃取部位對(duì)急性胃潰瘍引起的胃粘膜損傷具有保護(hù)作用，此外，亦有實(shí)驗(yàn)證實(shí)木瓜總?cè)瓶梢种茩C(jī)體炎癥小體信號(hào)通路，進(jìn)而對(duì)Hp 引起的胃炎發(fā)揮抑制作用。本研究通過建立Hp 小鼠感染模型，證實(shí)了女士酒、堿性酒能夠影響Hp 在小鼠體內(nèi)的定植及活性，提高了對(duì)胃黏膜處Hp 的清除率且呈現(xiàn)劑量依賴性，同時(shí)能夠減輕胃竇部由于細(xì)菌感染引起的炎癥。根據(jù)肝臟病理切片可知此給藥量對(duì)肝臟不會(huì)造成損傷，且酒中所含有效成分具有低毒性、低耐藥性的優(yōu)點(diǎn)，因此女士酒、堿性酒在抑制幽門螺旋桿菌方面具有廣大的研究及應(yīng)用前景。

此外，通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)進(jìn)一步探究了堿性酒、女士酒抑制幽門螺桿菌的作用機(jī)制。查閱白酒相關(guān)文獻(xiàn)收集白酒中含有的微量健康成分，主要包含萜烯類化合物：-石竹烯、香葉基丙酮等；芳香族類化合物：香蘭素、4-甲基愈創(chuàng)木酚、阿魏酸等；吡嗪類化合物：四甲基吡嗪等諸多化學(xué)成分。根據(jù)PPI 網(wǎng)絡(luò)分析，篩選得到度值排名靠前的潛在靶點(diǎn)，最終得到CUL4B、ACTB、PARP1、U2AF2 等53 個(gè)核心靶點(diǎn)，CUL4B是一類與胃部疾病關(guān)聯(lián)密切的骨架蛋白，在胃癌、食管癌中均存在高度表達(dá)，通過調(diào)控Wnt/-catenin 信號(hào)通路影響細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程。PARP1、U2AF2 及ACTB 影響機(jī)體炎癥因子的表達(dá)，且ACTB 在炎癥性腸病中的表達(dá)與炎癥、血管新生程度正向相關(guān)。所得到的核心蛋白總體上與機(jī)體炎癥、細(xì)胞增殖、血管、癌癥及凋亡等有關(guān)，以往研究顯示，Hp 定植于胃部后，常先引起局部炎癥，繼而產(chǎn)生病變擴(kuò)散，最終惡化至胃癌等各種惡性疾病。因此，白酒中的健康成分極有可能通過影響這些蛋白靶點(diǎn)從而抑制Hp 的定植生存，發(fā)揮抑制作用。

GO 分析中主要涉及對(duì)細(xì)菌來源分子的反應(yīng)、對(duì)細(xì)菌的反應(yīng)、凋亡信號(hào)通路的負(fù)調(diào)控以及防御反應(yīng)的調(diào)節(jié)等BP 過程，溶酶體、膜筏、細(xì)胞外基質(zhì)等CC 過程，氧化還原酶活性、血紅素結(jié)合、裂解酶活性等MF 過程，進(jìn)一步表明了這些微量成分與抑菌、抗炎等生物過程有著緊密聯(lián)系。KEGG 通路富集分析結(jié)果顯示，抑制Hp 主要通過調(diào)控IL-17 信號(hào)通路、TNF 信號(hào)通路、致病性大腸桿菌感染、MAPK 信號(hào)通路及PI3K-Akt 信號(hào)通路等發(fā)揮作用。IL-17、TNF 是常見的炎癥因子，其在胃癌組織中過度表達(dá)并能促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖、遷移，加重炎癥在體內(nèi)的擴(kuò)張，如今臨床中常將IL-17、TNF 體內(nèi)水平作為評(píng)價(jià)Hp 感染程度及所導(dǎo)致的慢性胃炎炎癥程度的評(píng)價(jià)指標(biāo)。MAPK 信號(hào)通路對(duì)炎癥、應(yīng)激、凋亡、細(xì)胞生長和分化等諸多重要生理過程發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，羅強(qiáng)等實(shí)驗(yàn)證實(shí)，酒中含有的吡嗪類物質(zhì)發(fā)揮作用于MAPK 通路從而降低HpM 誘導(dǎo)的炎癥因子分泌，進(jìn)而抑制由Hp 代謝物誘導(dǎo)的炎癥。綜上所述，白酒中微量健康因子主要通過調(diào)控多條通路作用于多個(gè)靶點(diǎn)，控制炎癥因子的產(chǎn)生及傳遞，最終達(dá)到抑制幽門螺桿菌的作用，可為日后研究提供參考。