米泔水漂白術漂制過程中揮發(fā)性成分的動態(tài)變化研究Δ

楊丹陽，于 歡，吳曉瑩，朱盈徽，徐萬愛，吳靜雨，肖小林，龔千鋒（江西中醫(yī)藥大學藥學院，南昌 330004）

白術為菊科植物白術Atractylodes macrocephalaKoidz.的干燥根莖，味苦、甘，歸脾、胃經(jīng)，具有健脾益氣、燥濕利水、止汗、安胎之功效，臨床上常用于脾虛食少、腹脹泄瀉、痰飲眩悸、水腫、自汗、胎動不安等癥的治療[1]。傳統(tǒng)理論認為，白術生品富含揮發(fā)油，辛燥性太強，而通過炮制后，可以減其油，緩和其辛燥之偏性?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，揮發(fā)油是白術發(fā)揮藥效的關鍵物質(zhì)基礎之一，同時也是白術燥性的來源，在炮制過程中其組成和含量的變化與白術不同飲片的功效變化及其藥性改變密切相關[2]。

目前，臨床上常見的白術炮制品有清炒白術、麩炒白術、土炒白術、米泔水漂白術等[3]。其中，米泔水漂白術是江西特色炮制技術流派樟幫的特色炮制品種，白術經(jīng)米泔水漂制后，其燥性減弱，健脾之力提高[4－5]。查閱相關文獻發(fā)現(xiàn)，目前學者們主要集中研究了白術生品和清炒白術、麩炒白術、土炒白術這幾種炮制品，且炮制機制多與揮發(fā)性成分有關[2，6－8]；而對米泔水漂白術的揮發(fā)性成分研究較少，尤其是米泔水漂白術炮制過程中揮發(fā)性成分的動態(tài)變化更是未見報道。中藥炮制過程中化學成分所發(fā)生的變化及規(guī)律是科學闡明中藥炮制機制的關鍵。因此，本研究采用頂空氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法對江西樟幫米泔水漂白術炮制過程中揮發(fā)性成分的變化進行研究，為米泔水漂白術炮制工藝的確定及炮制機制的闡釋提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用的主要儀器有7890A型氣相色譜-5975C型質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Agilent公司，配備MassHunter質(zhì)譜工作站和NITS17.L標準譜圖庫）、YF-1118型高速中藥粉碎機（瑞安市永歷制藥機械有限公司）、GZX-9076MBE型鼓風干燥箱（上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠）、TY2001型電子天平（上海衡平儀器儀表有限公司）。

1.2 主要藥品與糯米

白術藥材采自浙江省天臺市石梁鎮(zhèn)（批號20211214），經(jīng)江西中醫(yī)藥大學藥學院龔千鋒教授鑒定為菊科植物白術A.macrocephalaKoidz.的干燥根莖；長糯米購自湖北省孝感市云夢縣，質(zhì)量等級為一級。

2 方法

2.1 米泔水的制備

取長糯米適量，粉碎，過五號篩，每2 kg糯米粉兌清水100 kg，攪拌均勻，制成米泔水混懸液[9]。

2.2 江西樟幫米泔水漂白術的制備

取白術藥材，除去雜質(zhì)，洗凈，浸泡2～4 h，撈起置于筐內(nèi)，上蓋濕麻布袋，經(jīng)常淋水，潤透，縱切厚片；切片先用米泔水漂24 h，再用清水漂48 h，撈起，烘干[4]。其中，米泔水和清水的用量均為白術藥材的9倍（g/mL）。

2.3 不同漂制階段白術漂制品的制備

除生品外，本研究制備了米泔水漂白術5個不同漂制階段的白術漂制品：第1階段漂制品為生品用9倍量米泔水漂12 h（漂洗溫度為26℃，下同），撈起，烘干；第2階段漂制品是在第1階段的基礎上，用米泔水再漂12 h，撈起，烘干；第3階段漂制品是在第2階段的基礎上，用清水再漂12 h，撈起，烘干；第4階段漂制品是在第3階段的基礎上，用清水再漂12 h，撈起，烘干；第5階段漂制品是在第4階段的基礎上，用清水再漂24 h，撈起，烘干。將白術生品及其5個不同漂制階段的漂制品烘干后，粉碎，過三號篩，備用。

2.4 儀器分析條件

2.4.1 頂空進樣條件 精密稱取白術生品及其5個不同漂制階段漂制品的樣品粉末各3 g，置于20 mL頂空瓶中，密封后依次置于樣品盤上，根據(jù)以下條件頂空進樣：樣品瓶加熱溫度為120℃，定量環(huán)溫度為140℃，傳輸線溫度為160℃，樣品瓶平衡時間為15 min。

2.4.2 氣相色譜分析條件 色譜柱為DB-1701毛細管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm），采用程序升溫（起始柱溫為60℃，以20℃/min升溫至140℃，維持5 min；再以4℃/min升溫至240℃），進樣口溫度為280℃，流速為1 mL/min，分流比為10∶1，進樣量為1 μL，載氣為高純氦氣（99.99%），溶劑延遲時間為3 min。

2.4.3 質(zhì)譜檢測器分析條件 離子源為電子轟擊離子源，電子碰撞能量為70 eV，接口溫度為280℃，離子源溫度為230℃，采集方式為全掃描模式，掃描范圍為質(zhì)荷比（m/z）29～650。

2.5 白術生品及其5個不同漂制階段漂制品中揮發(fā)性成分分析

取白術生品及其5個不同漂制階段漂制品的樣品粉末，按“2.4”項下條件進樣分析。將檢測所得數(shù)據(jù)導入DataAnalysis 2013軟件中，使用質(zhì)譜工作站積分器進行積分，與美國國家標準與技術研究院（National Institute of Standards and Technology，NIST）17.L標準譜圖庫進行比對，篩選出匹配度≥90%的化合物。結(jié)合相關文獻[6－8，10－12]及物質(zhì)的CAS號對揮發(fā)性成分進行定性分析，并利用峰面積歸一化法計算各揮發(fā)性成分的相對百分含量。

3 結(jié)果

3.1 白術生品及其漂制品中揮發(fā)性成分的基本情況

按“2.4”項下條件分析后所得的總離子流疊加圖見圖1。從圖1可知，在所建立的條件下，各色譜峰的分離度良好。從白術生品及其5個不同漂制階段的漂制品中共定性鑒別出49個揮發(fā)性成分，其中分別從白術生品、第1～5階段漂制品中鑒別出了33、31、28、30、28、29種成分，其總相對百分含量分別為66.218%、64.711%、79.410%、65.419%、67.101%、66.818%，這些成分主要為倍半萜類、單帖類、酚類、醛類、酮類、酯類、醇類、烷烴類、芳烴類化合物。白術生品及其5個不同漂制階段漂制品的揮發(fā)性成分及相對百分含量見表1。

圖1 白術生品及其5個不同漂制階段漂制品揮發(fā)性成分的總離子流疊加圖

3.2 白術生品及其漂制品中共有揮發(fā)性成分的變化趨勢分析

由表1可知，在白術生品及其5個不同漂制階段漂制品中有20個共有揮發(fā)性成分（化合物1～20），其在白術生品及其5個不同漂制階段漂制品中的總相對百分含量依次為65.619%、62.605%、62.901%、61.715%、64.967%、64.239%。在炮制過程中各成分的相對百分含量均發(fā)生了不同變化。其中，大根香葉烯B的相對百分含量隨著炮制時間的延長基本呈上升趨勢；萜品油烯和β-瑟林烯這2個成分的相對百分含量隨著炮制時間的延長呈先下降后上升的趨勢；隨著炮制時間的延長，（4S，7S，9R）-silphiperfol-5-ene、（－）-silphinene、modhephene和β-石竹烯這4個揮發(fā)性成分相對百分含量的變化趨勢都是先上升后下降再上升，且含量都是生品中最低（分別為0.114%、0.272%、0.558%、3.859%），第3階段漂制品中最高（分別為0.449%、1.110%、2.015%、4.735%）；1，3-cyclohexadiene，1-（1，5-dimethyl-4-hexenyl）-4-methyl-和Β-倍半水芹烯這2個揮發(fā)性成分的相對百分含量都是生品中最高（分別為1.736%、2.118%），第1階段漂制品中最低（分別為1.056%、1.329%）；而作為白術的主要燥性成分——蒼術酮，其相對百分含量在整個炮制過程呈先下降后上升再下降的動態(tài)變化，并且在第4階段漂制品中最高（41.206%），在第3階段漂制品中最低（35.926%）。

3.3 漂制過程中新增揮發(fā)性成分的變化趨勢分析

由表1可知，與白術生品比較，米泔水漂制過程中新增了16個揮發(fā)性成分（化合物21～36）。其中，第1～5階段漂制品中分別新增了6、4、9、5、7個揮發(fā)性成分，新增揮發(fā)性成分的總相對百分含量分別為1.890%、16.335%、3.674%、2.049%、2.470%。且有些新增的揮發(fā)性成分只在特定的漂制時間點才能檢測到，如γ-elemene只在第2階段漂制品中才能檢測到，而pethylbrene、anthracene，1，2，3，4，5，6，7，8-octahydro-9-methyl-、桉油烯醇和3，5，11-eudesmatriene這4個揮發(fā)性成分只在第3階段漂制品中才能檢測到。

3.4 漂制過程中消失不見及消失后又出現(xiàn)揮發(fā)性成分的變化趨勢分析

由表1可知，與生品比較，米泔水漂制過程中有8個揮發(fā)性成分（化合物37～44）消失不見，其在生品中的總相對百分含量為0.382%。其中，除了化合物41在經(jīng)歷至第3漂制階段后才消失外，其他幾個成分都是漂制后就消失了。此外，在米泔水漂白術漂制過程中有5個揮發(fā)性成分（化合物45～49）呈現(xiàn)出消失-出現(xiàn)或者消失-出現(xiàn)-消失的動態(tài)變化，其在生品中的總相對百分含量為0.217%。

表1 白術生品及其5個不同漂制階段漂制品的揮發(fā)性成分及相對百分含量（%%）

4 討論

江西樟幫作為我國著名的四大傳統(tǒng)炮制技術流派之一，其中藥炮制自成體系，炮制風格獨特。米泔水漂白術是江西樟幫獨具特色的傳統(tǒng)炮制品種，在江西地區(qū)的藥用歷史也較為悠久。在漂制米泔水漂白術時，都是取原藥材，去除雜質(zhì)，按大小分檔后再進行漂制，以使藥材在浸潤過程中的浸潤程度保持一致。由于江西樟幫米泔水漂白術漂制方法中米泔水和清水的用量一般僅憑經(jīng)驗，無相關標準，故本研究在文獻[13]的基礎上，將米泔水和清水的用量都設為白術原藥材的9倍。

本研究發(fā)現(xiàn)，在米泔水漂制過程中既有新的揮發(fā)性成分產(chǎn)生，也存在已有揮發(fā)性成分消失，同時各揮發(fā)性成分的相對百分含量也發(fā)生了變化。在白術生品及其5個不同漂制階段漂制品中揮發(fā)性成分的總相對百分含量分別為66.218%、64.711%、79.410%、65.419%、67.101%、66.818%，可見第1、3階段漂制品中揮發(fā)性成分的總相對百分含量較白術生品有所降低，其燥性減弱。此外，蒼術酮作為白術的主要燥性成分和質(zhì)量標志物，其含量變化對米泔水漂白術飲片的質(zhì)量控制有著重要的參考價值[14]?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，蒼術酮除了具有抗腫瘤、降血壓、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗氧化、保肝、抗流感病毒等廣泛的藥理作用外，還會與水發(fā)生氧化反應，生成白術內(nèi)酯Ⅰ～Ⅲ、表白術內(nèi)酯Ⅰ、雙白術內(nèi)酯5種成分。其中，白術內(nèi)酯Ⅰ具有健脾作用[15－16]，白術內(nèi)酯Ⅰ、Ⅲ具有抗炎、抗腫瘤、調(diào)節(jié)胃腸功能作用[16]，白術內(nèi)酯Ⅱ、Ⅲ具有抗血小板作用[17－18]，雙白術內(nèi)酯具有提高記憶力、改善老年癡呆等作用[19－20]。本研究發(fā)現(xiàn)，蒼術酮的相對百分含量在整個炮制過程中呈先下降后上升再下降的動態(tài)變化，且在第4階段漂制品中最高（41.206%），在第3階段漂制品中最低（35.926%）。

綜上所述，本研究通過采用頂空氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術分析后發(fā)現(xiàn)，在第3漂制階段漂制品中揮發(fā)性成分的總相對百分含量和主要代表性燥性成分蒼術酮的相對百分含量均最低，因此可得到緩解白術燥性的米泔水漂制工藝為白術生品用9倍量米泔水漂24 h，再用9倍量清水漂12 h?？紤]到不同產(chǎn)地、不同批次白術之間的化學成分存在一定差異[10]，為減少因藥材個體差異而可能引起的分析誤差，本研究僅采用了一個產(chǎn)地、一個批次的白術藥材，存在藥材批次單一的問題，后期應增加樣品批次進行進一步驗證。