升陽益胃湯對慢性胃炎小鼠胃組織病理變化及血清IL-2、IL-6的影響

周永麒，周文龍，錢詩維，周佳欣，孫祝美，郭春榮，鄭小宇，董 璐，陳 丹

(上海中醫(yī)藥大學(xué)教學(xué)實驗中心·上海 201203)

升陽益胃湯來源于李東垣《脾胃論》，適用于脾胃虛弱、陽氣不升、濕郁之胃痞病。該方具有健脾益氣、升陽祛濕的功效，臨床使用升陽益胃湯治療慢性胃炎具有較好的療效[1]。實驗研究也發(fā)現(xiàn)，該方對慢性胃炎大鼠Bcl-2、Bax等蛋白具有調(diào)節(jié)作用，從而對胃炎具有治療作用[2]。本項目擬在以往研究的基礎(chǔ)上，通過復(fù)制小鼠慢性胃炎模型，運用升陽益胃湯干預(yù)，觀察小鼠胃組織病理變化，ELISA檢測血清IL-2、IL-6水平，為該方治療慢性胃炎提供基礎(chǔ)實驗依據(jù)。

1 材料

1.1 動物 健康雄性ICR小鼠40只，9周齡，體質(zhì)量20～25 g，由上海中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供，實驗動物許可證號：SYXK(滬)2020-0009，飼養(yǎng)于屏障環(huán)境中，溫度控制在20～26 ℃，相對濕度控制在40%～70%。

1.2 藥物與試劑 升陽益胃湯(黃芪30 g，半夏9 g，黨參10 g，炙甘草10 g，獨活10 g，防風(fēng)10 g，白芍30 g，羌活10 g，橘皮12 g，茯苓30 g，柴胡10 g，澤瀉10 g，炒白術(shù)10 g，黃連6 g)，將中藥加水浸泡1 h，頭煎加水為總藥量的10倍，二煎加水為總藥量的4倍，取汁去渣，合并兩次藥汁，蒸發(fā)濃縮至含生藥1 g/mL，備用。 小鼠IL-2 ELISA試劑盒：博士德生物公司，貨號EK0399；小鼠IL-6 ELISA試劑盒：博士德生物公司，貨號EK/0411；2%水楊酸鈉：國藥集團有限公司；氫氧化鋁：國藥集團有限公司。

1.3 主要儀器 石蠟切片機：萊卡儀器有限公司；自動脫水機：萊卡儀器有限公司；自動包埋機：萊卡儀器有限公司；生物顯微鏡：麥克奧迪有限公司；酶標儀：Biotek公司。

2 方法

2.1 動物分組、造模及給藥 將小鼠40只隨機均分為4組，正常組(10只)、模型組(10只)、西藥組(10只)、升陽益胃湯組(10只)。除正常組外，每天予小鼠2%水楊酸鈉溶液2 mL灌胃進行造模，小鼠前3周予正常飲食，后3周予單日禁食，雙日足量進食，以結(jié)合饑餓飽餐因素，共6周[3]。第45天起，升陽益胃湯組及西藥組分別給予中藥湯劑(10 g/kg)、氫氧化鋁混懸液(0.33 mg/kg)，(給藥劑量由動物與人的等效劑量換算所得)[4]，每天灌胃1次，共30 d；正常組及模型組灌服等量生理鹽水，每天1次，共30 d。

2.2 觀察指標

2.2.1 胃組織病理形態(tài)學(xué)觀察 末次給藥后，禁食24 h，打開腹腔，取出全胃，沿胃大彎剪開后取胃組織，放入4%多聚甲醛，脫水、透明石蠟包埋，切片(5 μm)，常規(guī)HE染色，置于光鏡下觀察胃組織病理形態(tài)學(xué)變化。

2.2.2 血清IL-2、IL-6檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)?？瞻卓准訕藴势泛蜆吮鞠♂屢?，其余相應(yīng)孔中加小鼠血清標本(100 uL/孔)。將其置于36 ℃孵箱孵育90 min，洗板5次。空白孔加生物素化抗體稀釋液，其余孔加入生物素化抗體工作液(100 uL/孔)。用新封板膠紙封住反應(yīng)孔，置于36 ℃孵箱孵育60 min，洗板5次。空白孔加酶結(jié)合物稀釋液，其余孔加入酶結(jié)合物工作液(100 uL/孔)。用新封板膠紙封住反應(yīng)孔，置于36 ℃孵箱，避光孵育30 min。打開酶標儀電源，預(yù)熱儀器，設(shè)置好檢測程序，洗板5次。加顯色底物100 uL/孔，避光36 ℃孵箱，避光孵育15 min。加入終止液100 uL/孔, 混勻后即刻測量細胞因子IL-2、IL-6各自 OD450 值。

3 結(jié)果

3.1 各組小鼠胃組織病理形態(tài)學(xué)變化 胃組織HE染色病理結(jié)果顯示:正常組胃黏膜完整，未見明顯炎性病理改變。模型組胃黏膜有較多炎性細胞浸潤，黏膜及腺體數(shù)量減少，黏膜形態(tài)改變。升陽益胃湯組及西藥組炎癥程度明顯減輕。見圖1。

圖1 各組大鼠胃黏膜組織病理觀察(HE，×400)

3.2 各組小鼠血清IL-2、IL-6檢測結(jié)果 見表1。

表1 各組小鼠血清IL-2、IL-6水平比較

4 討論

慢性胃炎是消化系統(tǒng)的常見疾病，其發(fā)病率逐年升高，在各種慢性疾病中占首位[5]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認為慢性胃炎是由多種病因引起的胃黏膜慢性炎癥。由于其病因復(fù)雜，西醫(yī)學(xué)在其治療方案上僅以針對病因的治療為原則，遠期效果不理想。中醫(yī)藥在緩解慢性胃炎患者臨床癥狀及改善胃黏膜病理形態(tài)方面具有顯著優(yōu)勢[6-7]。中醫(yī)認為慢性胃炎歸屬于“胃脘痛”“胃痞”等范疇，脾胃虛弱是基本病機[8]，所以補益脾胃是中醫(yī)治療慢性胃炎的基本治法。脾主運化，脾虛運化失職，痰濕內(nèi)生，日久化熱，痰濕或濕熱內(nèi)蘊，中焦氣機升降失常，表現(xiàn)為納差、脘腹脹滿、噯氣、惡心、反酸等癥狀，本虛標實、虛實夾雜是慢性胃炎的病機特點[9]。升陽益胃湯來源于李東垣《脾胃論》，適用于脾胃虛弱、陽氣不升、濕郁生熱之證。其補中有散，發(fā)中有收，是使氣足陽升，正旺邪退之良方。經(jīng)臨床使用，對于治療慢性胃炎患者具有良好的臨床療效[10]。方中使用人參、白術(shù)、甘草補脾養(yǎng)胃；柴胡、防風(fēng)、羌活、獨活升脾胃清陽；半夏、陳皮、茯苓、澤瀉、黃連瀉濕熱而降濁陰；從而達到補益脾胃、益氣升陽的功效[11]。

本實驗病理結(jié)果顯示升陽益胃湯組胃黏膜炎性細胞浸潤明顯減少，黏膜及腺體數(shù)量較模型組增加，黏膜形態(tài)較完整。表明升陽益胃湯可以有效保護胃炎小鼠的胃黏膜，減少胃部充血、水腫。

IL-2主要由Th1細胞產(chǎn)生,是引起T細胞增殖的主要細胞因子，可提高T細胞的數(shù)量和功能，增強機體的免疫功能[12]。本實驗中慢性胃炎小鼠IL-2 的表達與正常組相比明顯降低(P<0.05)，表明模型小鼠免疫功能下降；升陽益胃湯組小鼠血清IL-2 的表達上升，表明升陽益胃湯可以提高慢性胃炎小鼠免疫功能。

IL-6在慢性胃炎的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用，是一種多效促炎細胞因子，參與多種生物學(xué)過程[13]。本實驗中慢性胃炎小鼠模型組血清IL-6水平與正常組相比提高(P<0.05)，升陽益胃湯組小鼠血清IL-6表達下降。

綜上，升陽益胃湯能有效地改善慢性胃炎小鼠胃組織病理變化，減輕胃部炎癥反應(yīng)，并通過調(diào)節(jié)IL-2和IL-6等炎癥因子而改善胃部病變達到治療作用。