基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證探討薏苡附子敗醬散治療潰瘍性結(jié)腸炎作用機(jī)制

陳麗萍，季蓉，繆志偉

張家港市中醫(yī)醫(yī)院，江蘇 張家港215600

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）以反復(fù)發(fā)作的腹痛、腹瀉、里急后重、黏液膿血便為主要臨床表現(xiàn)。近年來(lái)，全球UC發(fā)病率逐漸升高，東亞地區(qū)平均年發(fā)病率約1.14/10萬(wàn)人。UC發(fā)病原因及機(jī)制復(fù)雜，可能與感染、遺傳、吸煙、飲食、藥物等因素有關(guān)。目前西醫(yī)治療UC采用氨基水楊酸制劑、糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑、微生態(tài)制劑及生物制劑等，效果確切，但長(zhǎng)期使用不良反應(yīng)大、易形成藥物依賴、價(jià)格高昂，限制其臨床應(yīng)用。

UC可歸屬中醫(yī)學(xué)“痢疾”“腸癰”范疇，病機(jī)為脾虛濕盛，寒熱互結(jié)，脾虛、濕盛兩者相互影響，互為因果，濕郁日久可蘊(yùn)毒化熱，壅滯腸腑，與氣血搏結(jié)，血敗肉腐成膿。該病病機(jī)復(fù)雜，為本虛標(biāo)實(shí)、寒熱錯(cuò)雜之證，治療頗為棘手。薏苡附子敗醬散出自《金匱要略》，由薏苡仁、附子、敗醬草組成，功效溫陽(yáng)健脾、清熱祛濕。研究顯示，薏苡附子敗醬散聯(lián)合西藥治療UC效果優(yōu)于單純西藥。薏苡附子敗醬散能通過(guò)修復(fù)腸黏膜、抗氧化應(yīng)激治療UC。目前對(duì)于該方治療UC的具體機(jī)制研究較少，藥效作用物質(zhì)基礎(chǔ)闡釋尚不全面。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)通過(guò)構(gòu)建藥物-疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，綜合分析藥物成分及作用機(jī)制，既能宏觀分析藥物的作用，又可獨(dú)立呈現(xiàn)某種特定疾病相關(guān)的靶點(diǎn)及通路，其系統(tǒng)性和整體性的研究思路與中醫(yī)藥整體觀及辨證論治的原則高度吻合。本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究方法，探究薏苡附子敗醬散治療UC的作用機(jī)制，并通過(guò)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行初步驗(yàn)證，為進(jìn)一步揭示該方的藥理作用和藥效物質(zhì)提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 藥物有效成分及靶點(diǎn)預(yù)測(cè)

利用TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)（https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php），以“薏苡仁”“附子”“敗醬草”為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索，對(duì)口服生物利用度（OB）＞30%和類藥性（DL）＞0.18的化學(xué)成分進(jìn)行篩選，并獲得相關(guān)靶點(diǎn)。通過(guò)中醫(yī)藥整合藥理學(xué)研究平臺(tái)（TCMIP，http://www.tcmip.cn/TCMIP/index.php/Home/Index/index.html）檢索“薏苡仁”“附子”的化學(xué)成分，將其成分結(jié)構(gòu)式導(dǎo)入SwissADME平臺(tái)（http://www.swissadme.ch/），篩選胃腸道吸收值（GA）為“High”及DL包含至少2個(gè)“YES”的活性成分，將篩選得到的有效成分通過(guò)TCMIP 及SwissTargrtPrediction 數(shù)據(jù)庫(kù)（http://www.swisstargetprediction.ch/）獲取相關(guān)靶基因（probability＞0），剔除重復(fù)項(xiàng)，得到薏苡附子敗醬散活性成分對(duì)應(yīng)的靶基因，利用UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)（https://sparql.uniprot.org/）規(guī)范靶基因命名。

1.2 疾病相關(guān)靶點(diǎn)及共同靶點(diǎn)獲取

通過(guò)GeneCards（https://www.genecards.org）、OMIM（https://omim.org/）、DrugBank（https://go.drugbank.com/）數(shù)據(jù)庫(kù)，以“Ulcerative Colitis”為檢索詞進(jìn)行檢索，獲得UC相關(guān)靶基因并刪除重復(fù)項(xiàng)，將其與薏苡附子敗醬散有效成分對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)基因映射，共同基因即薏苡附子敗醬散治療UC的靶基因。

1.3 藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將藥物活性成分及藥物與疾病共同基因數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape3.7.2軟件，構(gòu)建藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)圖。

1.4 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

在STRING數(shù)據(jù)庫(kù)（https://string-db.org/）中選擇“multiple proteins”（多蛋白），導(dǎo)入藥物與疾病共同靶基因名，物種（species）選擇“Homo sapiens”（人類）進(jìn)行檢索，得到蛋白相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)，設(shè)置最低互作分?jǐn)?shù)為“high confidence（0.7）”，導(dǎo)出TSV 文件，使用R語(yǔ)言計(jì)算核心靶點(diǎn)交互次數(shù)并進(jìn)行排序，制作柱形圖。

1.5 GO和KEGG通路富集分析

使用OmicShare（基迪奧）在線平臺(tái)（https://www.omicshare.com/）對(duì)薏苡附子敗醬散治療UC核心靶點(diǎn)進(jìn)行GO功能富集分析，得到二級(jí)分類柱狀圖，使用R語(yǔ)言進(jìn)行KEGG通路富集分析，根據(jù)調(diào)整后的值進(jìn)行排序，選擇前20項(xiàng)分別制作柱形圖。

1.6 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

1.6.1 動(dòng)物、試藥與儀器

C57BL/6小鼠，SPF級(jí)，雄性，40只，體質(zhì)量18～20 g，購(gòu)自蘇州新藥研究中心有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SYXK（蘇）2017-0001。飼養(yǎng)于溫度（24±1）℃、濕度40%～60%環(huán)境，自然晝夜節(jié)律，自由攝食飲水。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)由張家港市中醫(yī)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過(guò)（AF-SOP-38-1.0）。

薏苡仁、黑順片、敗醬草，購(gòu)自北京同仁堂藥店。將薏苡仁30 g、黑順片6 g、敗醬草15 g浸泡30 min，以10倍量水將黑順片先煎30 min，加入其他藥物，再煎30 min，紗布過(guò)濾，取濾液，再加8倍量水將所有藥物煎煮30 min后過(guò)濾。2次濾液合并，凝縮成1.05 g/mL的藥液，置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ａ沁拎つc溶片（批號(hào)09180811），上海信誼天平藥業(yè)有限公司。將柳氮磺吡啶腸溶片研磨成粉末狀，溶解于含0.5%CMC-Na的蒸餾水中，即得終濃度為10 mg/mL的藥液。葡聚糖硫酸鈉（MW 36 000～5 000，批號(hào)S0221，MP 公司），表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）一抗（批號(hào)ab52894，Abcam公司），p-AKT一抗（批號(hào)4060S，CST公司），AKT一抗（批號(hào)4691S，CST公司），GAPDH一抗（批號(hào)ab9485，Abcam公司），半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase3）一抗（批號(hào)9662S，CST 公司），Alexa Fluor488偶聯(lián)二抗（批號(hào)ab150077，Abcam公司），山羊抗兔IgG H&L（批號(hào)ab205718，Abcam公司）。

CUT 4062 石蠟切片機(jī)（德國(guó)SLEE 公司），URFL-T熒光顯微鏡（日本Olympus公司），LAS 500凝膠成像分析系統(tǒng)（GE Healthcare Bio-Sciences公司），PO Box 998 酶標(biāo)儀（BioTek 公司），F(xiàn)resco21 高速冷凍離心機(jī)（ThermoFisher Scientific 公司），Mini PROTEANTetra Cell蛋白電泳儀（Bio-Rad公司）。

1.6.2 分組、造模、給藥及取材

將小鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、柳氮磺吡啶組、薏苡附子敗醬散組，每組10只。適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后，模型組、柳氮磺吡啶組、薏苡附子敗醬散組予2.5%葡聚糖硫酸鈉自由飲用，7 d后替換為蒸餾水，正常組予蒸餾水自由飲用。根據(jù)藥物等效劑量換算，柳氮磺吡啶組每日予100 mg/kg柳氮磺吡啶腸溶片藥液灌胃，薏苡附子敗醬散組每日予10.5 g/kg薏苡附子敗醬散藥液灌胃，正常組與模型組每日予蒸餾水灌胃，灌胃體積均為0.2 mL，連續(xù)10 d。給藥結(jié)束后頸椎脫臼處死小鼠，剖取結(jié)腸，用PBS沖洗干凈，取遠(yuǎn)端結(jié)腸組織。

1.6.3 結(jié)腸HE染色及病理評(píng)分

取結(jié)腸組織，多聚甲醛固定，石蠟切片后行HE染色，光鏡下觀察腸黏膜形態(tài)、腺體結(jié)構(gòu)及炎細(xì)胞浸潤(rùn)情況等病理變化。參照Dieleman標(biāo)準(zhǔn)對(duì)結(jié)腸組織進(jìn)行病理評(píng)分，組織學(xué)損傷程度用炎癥、病變深度、隱窩破壞評(píng)分與病變范圍評(píng)分之和表示。

1.6.4 免疫熒光染色

取結(jié)腸組織石蠟切片，在100 ℃檸檬酸鈉中浸泡20 min，PBS洗玻片，5 min×3次，置于0.2%Triton穿孔2 min，放入5%牛血清中封閉1 h，加入Caspase3一抗（1∶1 000），4 ℃過(guò)夜，PBS洗玻片，5 min×3次，于黑暗中敷相應(yīng)的熒光二抗（1∶500）50 min，PBS洗5 min×3次，加DAPI封片劑封片，熒光顯微鏡觀察。

1.6.5 蛋白印跡法

取30 mg結(jié)腸組織，加入適量裂解液、蛋白酶抑制劑和去磷酸化酶抑制劑，于研磨機(jī)中研碎后，4 ℃、12 000×離心10 min 后取上清，定量后加入loading buffer，100 ℃加熱5 min，8%SDS-PAGE，400 mA恒流轉(zhuǎn)膜1 h，封閉液中封閉1 h，分別加入EGFR一抗（1∶5 000）、p-AKT一抗（1∶1 000）、AKT一抗（1∶1 000）、GAPDH一抗（1∶2 500），4 ℃過(guò)夜，TBST洗8 min×3次，二抗（1∶5 000）室溫孵育1 h，TBST洗8 min×3次，ECL顯影，計(jì)算EGFR、p-AKT、AKT表達(dá)量。

1.6.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 薏苡附子敗醬散活性成分和潛在靶點(diǎn)

基于TCMSP、TCMIP數(shù)據(jù)庫(kù)及SwissADME平臺(tái)檢索并篩選出薏苡附子敗醬散活性成分66種，其中薏苡仁成分10種、附子成分43種、敗醬草成分13種。通過(guò)TCMSP、TCMIP、SwissTargrtPrediction 數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行靶點(diǎn)預(yù)測(cè)，使用UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)規(guī)范命名并排除重復(fù)靶點(diǎn)，共獲得193個(gè)靶點(diǎn)。

2.2 潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)基因

使用GeneCards、OMIM、DrugBank數(shù)據(jù)庫(kù)檢索獲得UC相關(guān)基因4 215個(gè)，將其與薏苡附子敗醬散活性成分對(duì)應(yīng)的靶基因進(jìn)行比對(duì)，得到100個(gè)共同靶點(diǎn)。

2.3 藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)

將藥物活性成分和共同靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape3.7.2軟件，藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)見(jiàn)圖1。該網(wǎng)絡(luò)包括100個(gè)靶點(diǎn)及薏苡附子敗醬散與這些基因相關(guān)的32個(gè)有效成分，見(jiàn)表1。

表1 薏苡附子敗醬散有效成分

圖1 薏苡附子敗醬散治療UC藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)

2.4 共同靶點(diǎn)相互作用網(wǎng)絡(luò)

將藥物與疾病的共同靶點(diǎn)100個(gè)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行分析和可視化處理，得到薏苡附子敗醬散治療UC靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)，結(jié)果見(jiàn)圖2。使用R語(yǔ)言計(jì)算靶點(diǎn)的交互次數(shù)，選取排名前30位的靶點(diǎn)作為薏苡附子敗醬散治療UC的核心靶點(diǎn)，制作條形圖，結(jié)果見(jiàn)圖3?？梢钥闯觯诵陌悬c(diǎn)包括JUN、MYC、ESR1、CCND1、EGFR、RELA（NF-κB）、CASP3、HIF1A、IL-6、HDAC1等。

圖2 薏苡附子敗醬散治療UC靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)

圖3 薏苡附子敗醬散治療UC核心靶點(diǎn)

2.5 GO和KEGG通路富集分析結(jié)果

對(duì)薏苡附子敗醬散治療UC核心靶點(diǎn)進(jìn)行GO功能富集分析，得到二級(jí)分類柱狀圖，見(jiàn)圖4。生物過(guò)程（Biological Process）主要富集條目為細(xì)胞進(jìn)程、代謝過(guò)程、生物調(diào)節(jié)、刺激反應(yīng)等，分子功能（Molecular Function）主要富集條目為連接、催化活性、分子功能調(diào)控等，細(xì)胞組分（Cellular Component）主要富集條目為細(xì)胞、細(xì)胞組分、細(xì)胞器等。使用R 軟件進(jìn)行KEGG通路富集分析，根據(jù)調(diào)整后的值進(jìn)行排序，排名前20位的通路見(jiàn)圖5。薏苡附子敗醬散治療UC的藥理作用可能涉及肝炎、病毒感染、癌癥、AGE-RAGE、細(xì)胞凋亡、TNF、p53、PI3K/Akt等信號(hào)通路。

圖4 薏苡附子敗醬散治療UC核心靶點(diǎn)GO富集分析

圖5 薏苡附子敗醬散治療UC核心靶點(diǎn)KEGG富集分析

2.6 靶點(diǎn)驗(yàn)證

2.6.1 薏苡附子敗醬散對(duì)模型小鼠結(jié)腸組織病理形態(tài)的影響

模型組結(jié)腸黏膜不完整，大部分腺體被破壞，結(jié)構(gòu)紊亂，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，可見(jiàn)黏膜下水腫及多灶性潰瘍形成。柳氮磺吡啶組有部分腺體被破壞，黏膜結(jié)構(gòu)尚完整，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況較模型組改善。薏苡附子敗醬散組黏膜結(jié)構(gòu)接近正常，腺體破壞較少，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況顯著改善。組織病理評(píng)分模型組明顯高于正常組（＜0.01），柳氮磺吡啶組和薏苡附子敗醬散組均低于模型組（＜0.01），見(jiàn)圖6。

圖6 各組小鼠結(jié)腸組織病理形態(tài)（HE染色，×100）及病理評(píng)分（，每組10只）

2.6.2 薏苡附子敗醬散對(duì)模型小鼠結(jié)腸組織EGFR、p-AKT表達(dá)的影響

Western blot 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組結(jié)腸組織EGFR、p-AKT 的表達(dá)水平較正常組顯著升高（＜0.01），柳氮磺吡啶組和薏苡附子敗醬散組較模型組顯著降低（＜0.01），見(jiàn)圖7、表2。

圖7 各組小鼠結(jié)腸組織p-AKT及EGFR表達(dá)免疫印跡

表2 各組小鼠結(jié)腸組織p-AKT及EGFR表達(dá)比較（）

2.6.3 薏苡附子敗醬散對(duì)模型小鼠結(jié)腸組織Caspase3表達(dá)的影響

免疫熒光染色結(jié)果顯示，模型組小鼠結(jié)腸組織Caspase3的熒光強(qiáng)度較正常組明顯增強(qiáng)，經(jīng)柳氮磺吡啶及薏苡附子敗醬散治療后，Caspase3的熒光強(qiáng)度均有不同程度減弱，見(jiàn)圖8。

圖8 各組小鼠結(jié)腸組織Caspase3表達(dá)（免疫熒光染色，×100）

3 討論

薏苡附子敗醬散出自《金匱要略·瘡癰腸癰浸淫病脈證并治》“腸癰之為病，其身甲錯(cuò)，腹皮急，按之濡，如腫狀，腹無(wú)積聚，身無(wú)熱，脈數(shù)，此為腸內(nèi)有癰膿，薏苡附子敗醬散主之”。其組方精煉，具有溫陽(yáng)健脾、清熱祛濕功效，臨床常用于UC的治療?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，薏苡附子敗醬散具有良好的調(diào)節(jié)免疫、鎮(zhèn)痛消炎、抗氧化、抗腫瘤的療效。另有研究發(fā)現(xiàn)，薏苡附子敗醬散能夠通過(guò)上調(diào)核因子E2 相關(guān)因子2（Nrf2）及其下游抗氧化蛋白血紅素氧合酶1（HO-1）表達(dá)、增加Nrf2 mRNA表達(dá)從而達(dá)到治療UC目的。以上研究在一定程度上揭示了薏苡附子敗醬散治療UC的相關(guān)機(jī)制。本研究基于多成分、多靶點(diǎn)作用的研究思路，應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對(duì)薏苡附子敗醬散的有效成分進(jìn)行篩選，預(yù)測(cè)其治療UC的關(guān)鍵靶點(diǎn)和信號(hào)通路，并采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)關(guān)鍵靶點(diǎn)及相關(guān)通路進(jìn)行驗(yàn)證，為薏苡附子敗醬散治療UC的機(jī)制研究奠定相關(guān)基礎(chǔ)。

本研究篩選出薏苡附子敗醬散治療UC活性成分32個(gè)，其中對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)較多的活性成分有槲皮黃素、木犀草素、山柰酚、薏苡素、刺槐素、β-谷甾醇等，其中大多數(shù)均具有良好的口服生物利用度及類藥性。有研究表明，敗醬草含有多種黃酮類化合物，經(jīng)水解后其苷元主要是槲皮素與山柰酚，由于產(chǎn)地、批次的差異，槲皮素與山柰酚的含量分別在0.061～1.046 mg/g 與0.045～0.701 mg/g。張珊珊等通過(guò)構(gòu)建體內(nèi)外腹瀉模型發(fā)現(xiàn)敗醬草中提取的總黃酮可以抑制腸蠕動(dòng)，具有潛在的抗腹瀉活性。槲皮素能通過(guò)AhR調(diào)控的炎癥機(jī)制修復(fù)腸炎小鼠缺失的上皮結(jié)構(gòu)，緩解腸炎小鼠癥狀。薏苡素最早從薏苡根提取，黃克俊等用浸泡超聲法進(jìn)行前處理，采用高效液相法測(cè)定薏苡素在薏苡仁中的含量為0.8 mg/100 g。薏苡素具有抗炎特性，能抑制NF-κB、MAPK信號(hào)通路及NLRP3炎性小體，下調(diào)IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α 等炎性因子表達(dá)。β-谷甾醇存在于敗醬草中，彭金詠等從6 kg白花敗醬草粗粉中提取到β-谷甾醇50 mg。有研究表明，β-谷甾醇能抑制腫瘤細(xì)胞的增殖與分化，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡。同時(shí)，其具有良好的抗炎活性，能有效改善葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)的小鼠腸炎，降低結(jié)腸組織中炎癥因子如IL-1β、IL-6、MCP-1 及COX-2 的mRNA表達(dá)。因此，推測(cè)槲皮素、山柰酚、薏苡素、β-谷甾醇可能為薏苡附子敗醬散治療UC的關(guān)鍵成分。

藥物活性成分相關(guān)靶基因與UC相關(guān)靶基因取交集得到100個(gè)共同靶點(diǎn)，即薏苡附子敗醬散治療UC的靶點(diǎn)?；赟TRING數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建薏苡附子敗醬散治療UC靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)，篩選出的核心基因有JUN、MYC、ESR1、CCND1、EGFR、RELA（NF-κB）、CASP3、HIF1A、IL-6、HDAC1 等。JUN、MYC、ESR1、CCND1與腫瘤的形成密切相關(guān)，共同參與細(xì)胞的增殖、分化、凋亡、惡性轉(zhuǎn)變等過(guò)程。EGFR能誘導(dǎo)細(xì)胞增殖，可通過(guò)作用于下游的炎癥通路而誘發(fā)炎癥反應(yīng)，同時(shí)參與腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移。以上基因的富集在一定程度上闡釋了UC易于癌變的特性。NF-κB參與UC促炎因子的表達(dá)，UC患者及腸炎模型的結(jié)腸組織均可見(jiàn)NF-κB活化。Caspase3是引起細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵酶，異常的細(xì)胞凋亡參與UC潰瘍形成，有研究顯示Caspase3在UC小鼠表達(dá)較正常組多。IL-6在急性炎癥反應(yīng)中占據(jù)中心地位，其在腸炎小鼠中呈現(xiàn)高表達(dá)，并且IL-6血清水平對(duì)UC的緩解及復(fù)發(fā)具有預(yù)測(cè)作用。由此，可以推測(cè)薏苡附子敗醬散對(duì)UC的治療作用與其多靶點(diǎn)協(xié)同合作有關(guān)，具體體現(xiàn)在薏苡附子敗醬散能調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、凋亡、炎癥反應(yīng)等。

對(duì)核心基因進(jìn)行GO功能富集分析，結(jié)果顯示，生物過(guò)程主要富集條目為細(xì)胞進(jìn)程、代謝過(guò)程、生物調(diào)節(jié)、刺激反應(yīng)等，分子功能主要富集條目為連接、催化活性、分子功能調(diào)控等，細(xì)胞組分主要富集條目為細(xì)胞、細(xì)胞組分、細(xì)胞器等。核心基因GO功能富集分析結(jié)果的多樣性表明薏苡附子敗醬散能通過(guò)多種生理過(guò)程干預(yù)UC的發(fā)生發(fā)展，體現(xiàn)了中藥復(fù)方多成分、多靶點(diǎn)協(xié)同增效的優(yōu)勢(shì)。KEGG通路富集分析發(fā)現(xiàn)薏苡附子敗醬散治療UC的通路主要涉及肝炎、病毒感染、癌癥、AGE-RAGE、細(xì)胞凋亡、TNF、p53、PI3K/Akt等多條信號(hào)通路。TNF-α參與UC的發(fā)生發(fā)展，根據(jù)UC內(nèi)科處理國(guó)際指南（2015年多倫多共識(shí)），抗TNF單抗被推薦用于UC的治療，目前已獲得很好的療效。PI3K/Akt是參與細(xì)胞增殖、分化及凋亡的經(jīng)典通路，已有研究證實(shí)該通路與UC的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)，PI3K/Akt通路抑制劑能明顯緩解UC小鼠的疾病狀態(tài)及結(jié)腸鏡下表現(xiàn)。不斷復(fù)發(fā)的UC具有癌變傾向，薏苡附子敗醬散中多種有效成分均與抗腫瘤效應(yīng)相關(guān)，而KEGG結(jié)果顯示薏苡附子敗醬散治療UC還涉及多條癌癥通路，我們可以推測(cè)薏苡附子敗醬散能在一定程度上防止UC進(jìn)一步發(fā)展成為腸癌。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，薏苡附子敗醬散對(duì)UC小鼠的結(jié)腸病理具有改善作用，而且能降低p-AKT、Caspase3、EGFR在腸炎小鼠結(jié)腸表達(dá)，這與既往研究本方中敗醬草能抑制AKT有關(guān)通路一致。EGFR是PI3K/Akt的上游基因，調(diào)控著細(xì)胞增殖，同時(shí)能作用于下游基因參與炎癥反應(yīng)，而Caspase3與細(xì)胞凋亡有關(guān)，EGFR、p-AKT及Caspase3表達(dá)增加提示UC小鼠結(jié)腸上皮細(xì)胞的凋亡及增殖指數(shù)均高于正常小鼠。這可能是由于在炎癥活動(dòng)區(qū)域，黏膜上皮細(xì)胞凋亡速率明顯增加，為保持結(jié)腸黏膜正常功能，上皮細(xì)胞則會(huì)呈現(xiàn)代償性過(guò)度增殖。因此，我們推測(cè)薏苡附子敗醬散能通過(guò)作用于EGFR/PI3K/Akt通路及Caspase3調(diào)控細(xì)胞增殖及凋亡的平衡達(dá)到治療UC的目的。薏苡附子敗醬散成分復(fù)雜，其對(duì)UC治療作用的機(jī)制有待于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

綜上，本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究方法，從分子水平闡述了薏苡附子敗醬散治療UC的相關(guān)機(jī)制，為該方的治療效果提供理論支持，同時(shí)在動(dòng)物水平上驗(yàn)證了部分網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果，可為后續(xù)深入研究提供線索。