• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于含量測定和化學(xué)計(jì)量法的地骨皮多指標(biāo)成分分析

    2022-09-28 02:31:50王亞飛楊平榮楊耘宋平順倪琳
    中國中醫(yī)藥信息雜志 2022年10期
    關(guān)鍵詞:肉桂酸二胺乙素

    王亞飛,楊平榮,,楊耘,宋平順,倪琳

    1.蘭州大學(xué)藥學(xué)院,甘肅 蘭州 730000;2.甘肅省藥品檢驗(yàn)研究院,國家食藥監(jiān)局中藥材中藥飲片質(zhì)量重點(diǎn)控制實(shí)驗(yàn)室,甘肅省中藏藥檢驗(yàn)檢測技術(shù)工程實(shí)驗(yàn)室,甘肅省中藥品質(zhì)與安全評(píng)價(jià)工程技術(shù)研究中心,甘肅 蘭州 730000;3.甘肅省婦幼保健院藥學(xué)部,甘肅 蘭州 730000

    地骨皮為茄科植物枸杞Mill.或?qū)幭蔫坭絃.的干燥根皮,主產(chǎn)于山西、河北、河南、甘肅、寧夏及華北等地,味甘、性寒,歸肺、肝、腎經(jīng),有涼血除蒸、清肺降火功效,主要用于陰虛潮熱、骨蒸盜汗、肺熱咳嗽、咯血及內(nèi)熱消渴等?,F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn),地骨皮具有降低血糖、降血壓、解熱鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、抗菌等作用。地骨皮的主要成分包括黃酮、有機(jī)酸、多肽類、甾醇、香豆素和揮發(fā)油,然而地骨皮的有效成分尚不明確,2020年版《中華人民共和國藥典》(一部)未規(guī)定含量測定項(xiàng)。

    地骨皮甲素和地骨皮乙素為精胺生物堿,具有糾正免疫紊亂、降血壓、保護(hù)NMDA誘導(dǎo)的原代神經(jīng)元損傷等作用。阿魏酸、咖啡酰丁二胺、N-反式阿魏酰酪胺、綠原酸和肉桂酸等為酚酰胺類和酚酸類化合物。酚酰胺類和酚酸類化合物具有降血壓、抗炎、抗氧化和保護(hù)小膠質(zhì)細(xì)胞等藥理活性。東莨菪亭為香豆素類化合物,香豆素類化合物具有廣泛的藥理活性,如抗炎、退熱、鎮(zhèn)靜等。本研究采用HPLC對(duì)不同產(chǎn)地的42批地骨皮進(jìn)行研究,建立地骨皮中8種化學(xué)成分含量測定的方法,并采用主成分分析、聚類分析和偏最小二乘判別分析等化學(xué)計(jì)量學(xué)方法進(jìn)行分析,為地骨皮的質(zhì)量控制提供參考。

    1 儀器與試藥

    高效液相色譜儀(美國Waters公司,型號(hào)ACQUITYARC),電子天平(德國賽多利斯公司,型號(hào)QUINTIX224-1CN、secura125-1cn),Synergi 4u Hydro-RP80A色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)。

    地骨皮甲素(批號(hào)W01N9Z73848),上海源葉生物科技有限公司,含量≥98%;地骨皮乙素(批號(hào)P25F11F108939),上海源葉生物科技有限公司,含量≥98%;咖啡酰丁二胺(批號(hào)DST200512-015),成都德思特生物技術(shù)有限公司,含量≥98%;綠原酸(批號(hào)110753-201817),中國食品藥品檢定研究院,含量以96.8%計(jì);東莨菪亭(批號(hào)BP1275),成都瑞芬思生物科技有限公司,純度>98%;阿魏酸(批號(hào)110773-201915),中國食品藥品檢定研究院,含量以99.4%計(jì);N-反式阿魏酰酪胺(批號(hào)WK920033108),四川省維克奇生物科技有限公司,含量≥98%;肉桂酸(批號(hào)110786-201604),中國食品藥品檢定研究院,含量以98.8%計(jì)。乙腈(批號(hào)JA106730),美國supelco公司,色譜純;三氟乙酸(批號(hào)G2023076),阿拉丁試劑(上海)有限公司,色譜純;超純水(批號(hào)SC10613102200012),屈臣氏。

    地骨皮樣品共42批,本實(shí)驗(yàn)室于2019-2021年采集,經(jīng)甘肅省藥品檢驗(yàn)研究院馬瀟主任鑒定為茄科植物枸杞Mill.或?qū)幭蔫坭絃.的干燥根皮,產(chǎn)地信息見表1。

    表1 42批地骨皮樣品產(chǎn)地信息

    2 方法與結(jié)果

    2.1 含量測定

    2.1.1 對(duì)照品溶液制備

    分別取咖啡酰丁二胺、綠原酸、地骨皮乙素、地骨皮甲素、東莨菪亭、阿魏酸、肉桂酸和N-反式阿魏酰酪胺對(duì)照品適量,精密稱定,加甲醇配制成每1 mL含咖啡酰丁二胺0.51 mg、綠原酸6.97 mg、地骨皮乙素10.68 mg、地骨皮甲素2.03 mg、東莨菪亭0.03 mg、阿魏酸0.03 mg、肉桂酸0.01 mg、N-反式阿魏酰酪胺0.01 mg的溶液,即得。

    2.1.2 供試品溶液制備

    取樣品粉末(過3號(hào)篩)約1.5 g,精密稱定,置錐形瓶中,加甲醇50 mL,加熱回流1 h,過濾后將濾液蒸干,殘留物用甲醇溶解,定容至2 mL,過0.45 μm微孔濾膜,即得。

    2.1.3 色譜條件

    采用Synergi 4u Hydro-RP80A色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流動(dòng)相為乙腈(A)-0.5%三氟乙酸水溶液(B),梯度洗脫(0~3 min,10%A;3~20 min,10%~11%A;20~30 min,11%~12%A;30~50 min,12%~14%A;50~60 min,14%~16%A;60~70 min,16%~18%A;70~80 min,18%~10%A),柱 溫30℃,流速1.0 mL/min,檢測波長278 nm。理論塔板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。色譜圖見圖1。

    圖1 地骨皮中8種成分HPLC圖

    2.1.4 線性關(guān)系考察

    精密取各對(duì)照品適量,加甲醇溶解,配制成每1 mL含咖啡酰丁二胺3.01 mg、綠原酸35.88 mg、地骨皮乙素20.15 mg、地骨皮甲素4.12 mg、東莨菪亭0.15 mg、阿魏酸0.13 mg、肉桂酸0.04 mg、N-反式阿魏酰酪胺0.04 mg的混合對(duì)照品貯備液,分別精密吸取上述混合對(duì)照品貯備液,用甲醇稀釋成1∶1、1∶5、1∶10、1∶20、1∶50的混合對(duì)照品溶液,按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣,以各對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,8種成分的回歸方程、相關(guān)系數(shù)及線性范圍見表2,表明各成分在各自線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

    表2 8種成分線性關(guān)系考察結(jié)果

    2.1.5 精密度試驗(yàn)

    分別吸取“2.1.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液,按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次,每次10 μL,測得咖啡酰丁二胺、綠原酸、地骨皮乙素、地骨皮甲素、東莨菪亭、阿魏酸、肉桂酸和N-反式阿魏酰酪胺峰面積RSD分別為0.78%、0.45%、0.67%、1.43%、0.97%、0.49%、1.78%、2.01%,表明儀器精密度良好。

    2.1.6 重復(fù)性試驗(yàn)

    精密稱取地骨皮藥材粉末,按“2.1.2”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液,按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣,測得咖啡酰丁二胺、綠原酸、地骨皮乙素、地骨皮甲素、東莨菪亭、阿魏酸、肉桂酸和N-反式阿魏酰酪胺含量的RSD分別為1.36%、1.75%、0.35%、0.78%、1.23%、1.66%、1.29%、1.37%,表明該方法重復(fù)性好。

    2.1.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

    取同一份供試品溶液,按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件,分別于制備后0、2、4、8、12 h進(jìn)樣10 μL,測得咖啡酰丁二胺、綠原酸、地骨皮乙素、地骨皮甲素、東莨菪亭、阿魏酸、肉桂酸和N-反式阿魏酰酪胺峰面積的RSD分別為1.28%、1.05%、1.92%、1.73%、0.29%、1.34%,表明供試品在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

    2.1.8 加樣回收率試驗(yàn)

    精密稱取各成分含量已知的樣品(22號(hào))粉末18份,每份約0.75 g(分別含咖啡酰丁二胺0.79 mg、綠原酸8.48 mg、地骨皮乙素13.47 mg、地骨皮甲素3.00 mg、東莨菪亭0.035 mg、阿魏酸0.031 mg、肉桂酸0.006 mg和N-反式阿魏酰酪胺0.002 mg),分為3組,分別加入各成分含量已知的高(120%)、中(100%)、低(80%)濃度混合對(duì)照品溶液1 mL,按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣,計(jì)算加樣回收率,結(jié)果見表3。

    表3 8種成分加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

    2.1.9 樣品含量測定

    取不同產(chǎn)地樣品粉末(過3號(hào)篩)各約1.5 g,精密稱定,按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定,分別記錄8種成分的峰面積,以外標(biāo)法計(jì)算各成分含量,結(jié)果見表4??梢钥闯?,地骨皮樣品中8種成分的含量跨度均較大,故采用化學(xué)計(jì)量學(xué)方法對(duì)不同產(chǎn)地地骨皮樣品中8種成分含量數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

    表4 地骨皮樣品中8種成分含量測定結(jié)果(mg/g,n=3)

    2.2 化學(xué)計(jì)量學(xué)分析

    2.2.1 聚類分析

    運(yùn)用SPSS25.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)不同產(chǎn)地地骨皮8種成分含量進(jìn)行聚類分析。以平方歐氏距離計(jì)算,連接方法為平均聯(lián)接,不同產(chǎn)地地骨皮中8種成分含量的系統(tǒng)聚類分析結(jié)果見圖2。可以看出,不同產(chǎn)地的地骨皮可以被較好地分開。當(dāng)類間距離為12~25時(shí),樣品可分為兩類:一類為甘肅、寧夏、河北樣品,一類為安徽、湖北樣品。當(dāng)類間距離為5時(shí),樣品可分為4類:一類為甘肅樣品,一類為安徽樣品,一類為湖北樣品,最后一類包含甘肅、寧夏和河北樣品;當(dāng)類間距離為2時(shí),該類樣品可獨(dú)立分為甘肅、寧夏、河北樣品。除6號(hào)和36號(hào)樣品外,其余40批樣品的聚類結(jié)果均與產(chǎn)地具有良好相關(guān)性。

    圖2 不同產(chǎn)地地骨皮樣品8種成分含量系統(tǒng)聚類分析

    2.2.2 各成分含量散點(diǎn)

    運(yùn)用Graphpad Prism 8軟件繪制不同產(chǎn)地地骨皮樣品中8種成分含量的散點(diǎn)圖,結(jié)果見圖3。可直觀看出不同產(chǎn)地地骨皮各成分含量的差異。其中,咖啡酰丁二胺、綠原酸、地骨皮乙素和地骨皮甲素4種成分的含量隨產(chǎn)地的變化較為明顯:甘肅、寧夏和河北的樣品含量相近且較低,安徽的樣品含量高于甘肅、寧夏和河北,湖北的樣品含量最高。東莨菪亭、阿魏酸、肉桂酸和N-反式阿魏酰酪胺4種成分含量的產(chǎn)地差異不明顯,除個(gè)別樣品外,其余含量均較在小范圍內(nèi)波動(dòng)。表明在本試驗(yàn)所測定的8種成分中,前4種成分與產(chǎn)地相關(guān)性較強(qiáng)。

    圖3 不同產(chǎn)地地骨皮樣品8種成分含量散點(diǎn)(mg/g)

    2.2.3 主成分分析

    運(yùn)用SPSS25.0和SIMCA13.0軟件進(jìn)行主成分分析(PCA),結(jié)果見圖4??梢钥闯?,除寧夏和湖北的樣品有部分重疊之外,其他幾個(gè)產(chǎn)地的地骨皮可較好分開。采用最大方差法對(duì)特征值及因子載荷矩陣進(jìn)行旋轉(zhuǎn)解輸出,結(jié)果見表5、表6。依據(jù)表5的特征值和貢獻(xiàn)率分析,前3個(gè)特征值均大于1,且分別代表了變量總方差的45.329%、17.868%、13.586%,累計(jì)貢獻(xiàn)率達(dá)76.782%,可以代表地骨皮的整體信息,客觀反映了樣品的內(nèi)在質(zhì)量,故選擇前3個(gè)主成分因子進(jìn)行分析。由表6可知,主成分1中咖啡酰丁二胺、綠原酸和地骨皮乙素的貢獻(xiàn)值較大,主成分2中肉桂酸的貢獻(xiàn)值較大,主成分3中阿魏酸的貢獻(xiàn)值較大。

    圖4 不同產(chǎn)地地骨皮樣品PCA散點(diǎn)

    表5 不同產(chǎn)地地骨皮樣品PCA特征值和貢獻(xiàn)率

    表6 不同產(chǎn)地地骨皮樣品PCA旋轉(zhuǎn)變換后的因子載荷矩陣

    2.2.4 偏最小二乘判別分析

    運(yùn)用SIMCA13.0軟件進(jìn)行偏最小二乘判別分析(PLS-DA),建立監(jiān)督模式識(shí)別方法的PLS-DA模型。模型共提取3個(gè)主成分,X矩陣解釋率RX為0.717,模型穩(wěn)定性參數(shù)RY為0.384,模型預(yù)測能力參數(shù)Q為0.15,表明所建的PLS-DA模型解釋率和預(yù)測率一般。設(shè)置分類Y矩陣變量隨機(jī)排列200次做置換檢驗(yàn),結(jié)果見圖5。R擬合直線在Y軸的截距為0.0735<0.3,Q擬合直線在Y軸的截距為-0.211<0.05,說明所建模型可靠,不存在過度擬合現(xiàn)象。PLS-DA散點(diǎn)見圖6??梢钥闯觯?2批樣品僅有3批不在95%置信區(qū)間內(nèi),除寧夏和河北樣品有部分重疊外,其余產(chǎn)地樣品均可明顯區(qū)分。變量重要性投影(VIP)可直觀體現(xiàn)各元素引起樣品差異的權(quán)重大小,元素VIP值>1表明其對(duì)樣品分類結(jié)果權(quán)重影響率>50%,即對(duì)分類結(jié)果影響具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,為差異標(biāo)志物。8種成分VIP見圖7。42批地骨皮的差異標(biāo)志成分為綠原酸、地骨皮甲素、咖啡酰丁二胺、地骨皮乙素和東莨菪亭。

    圖5 不同產(chǎn)地地骨皮樣品PLS-DA置換檢驗(yàn)

    圖6 不同產(chǎn)地地骨皮樣品PLS-DA散點(diǎn)

    圖7 不同產(chǎn)地地骨皮樣品8種成分VIP

    3 討論

    本試驗(yàn)比較了不同類型的C18柱對(duì)地骨皮成分的分離效果,普通的C18柱對(duì)地骨皮甲素、地骨皮乙素等成分分離效果較差,飛諾美的C18端基封尾柱對(duì)地骨皮中各成分分離效果較好。此外,本試驗(yàn)采用不同比例的甲醇為提取溶劑在同一提取方法下進(jìn)行提取,發(fā)現(xiàn)甲醇提取的樣品中各峰面積相對(duì)較高;比較了不同提取方法(超聲法、熱回流法、冷浸法)下的提取率和色譜峰情況,發(fā)現(xiàn)熱回流法提取的色譜峰基線較平穩(wěn)且峰面積相對(duì)較高;比較了不同波長下各物質(zhì)的吸收峰,發(fā)現(xiàn)在278 nm波長處各物質(zhì)均具有較強(qiáng)的吸收。所以采用上述各項(xiàng)最佳條件作為最終試驗(yàn)條件。

    在本試驗(yàn)的提取條件和色譜條件下,咖啡酸和香草酸均有較好的提取率和紫外吸收,但因?yàn)榭Х人岷拖悴菟嵩诖艘合鄺l件下出峰時(shí)間幾乎相同,故試驗(yàn)中將這2種成分刪去。今后可通過優(yōu)化液相條件,將咖啡酸和香草酸作為檢測指標(biāo)。

    本研究建立PLS-DA模型對(duì)不同產(chǎn)地地骨皮樣品進(jìn)行分析,模型預(yù)測參數(shù)<0.5,但依據(jù)散點(diǎn)圖可知,除寧夏和河北兩地樣品有重疊外,甘肅、湖北和安徽的樣品均能被較好地判別,所以該模型仍可在本試驗(yàn)涵蓋范圍內(nèi)被用于未來地骨皮樣品產(chǎn)地的初步判別或依據(jù)產(chǎn)地初步估算地骨皮中多種成分的大致含量。

    趙曉玲等測定了不同來源地骨皮中地骨皮甲素、地骨皮乙素以及阿魏酸的含量,但因?yàn)閷?duì)照品濃度以及測定條件等原因,作者將地骨皮甲素和地骨皮乙素作為同一指標(biāo)進(jìn)行了檢測。蘇磊等測定了地骨皮中咖啡酰丁二胺、地骨皮乙素和綠原酸的含量。張華磊等測定了地骨皮中東莨菪內(nèi)酯的含量。本試驗(yàn)在相關(guān)研究基礎(chǔ)上,對(duì)試驗(yàn)條件進(jìn)行了探索和優(yōu)化,建立了同時(shí)測定地骨皮中8種化學(xué)成分含量的方法,選取5個(gè)省份的樣品進(jìn)行檢測,并對(duì)結(jié)果進(jìn)行了多種化學(xué)計(jì)量學(xué)分析,結(jié)果表明對(duì)產(chǎn)地影響較大的主成分為咖啡酰丁二胺、綠原酸、地骨皮乙素、肉桂酸和阿魏酸5種;42批地骨皮樣品依據(jù)產(chǎn)地分類,其差異標(biāo)志成分為綠原酸、地骨皮甲素、咖啡酰丁二胺、地骨皮乙素和東莨菪亭5種。在PCA和PLS-DA中,除寧夏和河北兩地的樣品有部分重疊外,其余產(chǎn)地的地骨皮樣品分類效果均較好。

    本試驗(yàn)建立HPLC方法同時(shí)對(duì)地骨皮中8種成分的含量進(jìn)行測定,該方法可用于地骨皮藥材質(zhì)量的全面評(píng)價(jià)。結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)分析可知不同產(chǎn)地的地骨皮藥材存在較明顯質(zhì)量差異,所以地骨皮藥材的產(chǎn)地溯源是必要的。但本試驗(yàn)收集的地骨皮樣品產(chǎn)地僅有5個(gè)省份,而對(duì)河南、山西等主要產(chǎn)區(qū)未涉及,今后需進(jìn)一步拓寬樣品產(chǎn)地。本試驗(yàn)對(duì)甘肅、安徽和湖北三地的樣品分類效果較好,寧夏和河北樣品存在部分重疊,提示所測定的8種成分并非不同產(chǎn)地樣品的全部差異性數(shù)據(jù),對(duì)于不能較好區(qū)分產(chǎn)地的樣品,可進(jìn)一步研究其無機(jī)元素含量、紅外光譜等以進(jìn)行區(qū)分。

    猜你喜歡
    肉桂酸二胺乙素
    國內(nèi)首臺(tái)套!中國化學(xué)天辰齊翔公司2-甲基戊二胺裝置一次開車成功
    燈盞乙素在抑制冠脈搭橋術(shù)后靜脈橋再狹窄中的應(yīng)用
    燈盞乙素對(duì)OX-LDL損傷的RAW264.7細(xì)胞中PKC和TNF-α表達(dá)的影響
    分子動(dòng)力學(xué)模擬三乙烯二胺準(zhǔn)晶體的可控晶體生長
    肉桂酸對(duì)db/db小鼠肝臟PI3K/AKT/FoxO1信號(hào)通路的影響
    基于配體鄰菲啰啉和肉桂酸構(gòu)筑的銅配合物的合成、電化學(xué)性質(zhì)及與DNA的相互作用
    N,N,N′,N′-四甲基-1,4-丁二胺作為冠狀層的Fe3 O4無溶劑納米流體
    脂肪二胺橋聯(lián)受阻酚的橋聯(lián)基與抗氧化性能的關(guān)系研究
    中國塑料(2014年8期)2014-10-17 03:05:05
    五味子乙素對(duì)MDR1介導(dǎo)的人骨肉瘤細(xì)胞U-2OS/ADR所致多藥耐藥性的逆轉(zhuǎn)研究
    HPLC法測定三香健脾膠囊中延胡索乙素的含量
    秋霞伦理黄片| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产高清国产精品国产三级 | 国产日韩欧美在线精品| 成人二区视频| 亚洲成人一二三区av| 国产单亲对白刺激| 亚洲精品国产av蜜桃| 特大巨黑吊av在线直播| 国产69精品久久久久777片| 成人鲁丝片一二三区免费| 99久国产av精品| 极品少妇高潮喷水抽搐| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 亚洲av成人精品一区久久| 国产免费又黄又爽又色| 国产精品不卡视频一区二区| 插逼视频在线观看| 亚洲精品aⅴ在线观看| 热99在线观看视频| 亚洲国产欧美人成| 2018国产大陆天天弄谢| 国产黄a三级三级三级人| 国产精品精品国产色婷婷| 国产精品三级大全| 国产 亚洲一区二区三区 | 国产高潮美女av| 老司机影院毛片| 身体一侧抽搐| 一区二区三区高清视频在线| 亚洲怡红院男人天堂| 黑人高潮一二区| 舔av片在线| 欧美成人一区二区免费高清观看| 99久国产av精品国产电影| 日韩一区二区三区影片| 国产v大片淫在线免费观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 观看免费一级毛片| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 中文字幕av成人在线电影| 国产一区亚洲一区在线观看| 水蜜桃什么品种好| 精品一区二区三卡| 一个人看视频在线观看www免费| 99久久精品一区二区三区| 国产成人精品福利久久| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 免费看av在线观看网站| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产精品无大码| 欧美一区二区亚洲| 美女高潮的动态| 久久亚洲国产成人精品v| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 夜夜爽夜夜爽视频| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产精品日韩av在线免费观看| 久99久视频精品免费| 成人综合一区亚洲| 午夜日本视频在线| 嫩草影院新地址| 晚上一个人看的免费电影| 免费大片黄手机在线观看| 免费观看a级毛片全部| 日本爱情动作片www.在线观看| 又爽又黄无遮挡网站| 麻豆成人av视频| 国产精品无大码| 免费观看性生交大片5| 中文字幕亚洲精品专区| 日本免费在线观看一区| 丰满乱子伦码专区| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 青春草国产在线视频| 97超碰精品成人国产| 久久99精品国语久久久| 91久久精品国产一区二区成人| 特大巨黑吊av在线直播| 成年女人看的毛片在线观看| 嫩草影院精品99| 麻豆av噜噜一区二区三区| 亚洲在久久综合| 日韩中字成人| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 九草在线视频观看| 亚洲怡红院男人天堂| 精品久久久精品久久久| 可以在线观看毛片的网站| 在线观看av片永久免费下载| 日本免费a在线| 嘟嘟电影网在线观看| www.av在线官网国产| 精品熟女少妇av免费看| 一级片'在线观看视频| 一二三四中文在线观看免费高清| 啦啦啦啦在线视频资源| 国产男女超爽视频在线观看| 色哟哟·www| 午夜激情福利司机影院| 免费无遮挡裸体视频| 亚洲伊人久久精品综合| 在线 av 中文字幕| 国产精品99久久久久久久久| 丰满人妻一区二区三区视频av| 在现免费观看毛片| 在线播放无遮挡| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 日日啪夜夜爽| 久久久亚洲精品成人影院| av一本久久久久| 美女高潮的动态| 欧美不卡视频在线免费观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 免费电影在线观看免费观看| 一级a做视频免费观看| 国产一区亚洲一区在线观看| 观看美女的网站| 美女cb高潮喷水在线观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲18禁久久av| 久久精品夜色国产| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产成人精品婷婷| 国产精品伦人一区二区| 国产av码专区亚洲av| 有码 亚洲区| 欧美3d第一页| 欧美不卡视频在线免费观看| 亚洲内射少妇av| 久久人人爽人人片av| 伊人久久精品亚洲午夜| 成人国产麻豆网| 国产亚洲av嫩草精品影院| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 在线观看一区二区三区| 午夜爱爱视频在线播放| 色综合色国产| 亚洲av福利一区| 久久人人爽人人片av| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 黑人高潮一二区| 99热6这里只有精品| 欧美激情国产日韩精品一区| 久久人人爽人人爽人人片va| 18禁动态无遮挡网站| 国产精品一区二区在线观看99 | 内地一区二区视频在线| 久久久亚洲精品成人影院| 搡老妇女老女人老熟妇| 联通29元200g的流量卡| 亚洲欧洲国产日韩| 一级黄片播放器| 欧美激情久久久久久爽电影| 有码 亚洲区| 一级av片app| 大陆偷拍与自拍| 麻豆国产97在线/欧美| 美女高潮的动态| 在线a可以看的网站| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产精品一二三区在线看| 国产黄片美女视频| 淫秽高清视频在线观看| 中文在线观看免费www的网站| 成人毛片60女人毛片免费| 青春草亚洲视频在线观看| 午夜福利成人在线免费观看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 国产精品精品国产色婷婷| 青春草国产在线视频| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产高清三级在线| www.av在线官网国产| 午夜日本视频在线| 国产成年人精品一区二区| 最近中文字幕高清免费大全6| 51国产日韩欧美| 天堂网av新在线| 在线天堂最新版资源| 国产不卡一卡二| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲丝袜综合中文字幕| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 亚洲av成人精品一二三区| 久久99热这里只频精品6学生| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 18禁在线无遮挡免费观看视频| 亚洲精品国产av蜜桃| 国产成人精品福利久久| 亚洲精品国产成人久久av| 丝瓜视频免费看黄片| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲精品久久午夜乱码| 少妇的逼水好多| 又大又黄又爽视频免费| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 黄色日韩在线| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 男女边摸边吃奶| 天天躁日日操中文字幕| 国产精品不卡视频一区二区| 一边亲一边摸免费视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| eeuss影院久久| 亚洲精品日本国产第一区| 搞女人的毛片| 亚洲av福利一区| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲欧美日韩无卡精品| 日日摸夜夜添夜夜爱| 别揉我奶头 嗯啊视频| 少妇的逼水好多| 99视频精品全部免费 在线| 亚洲成人精品中文字幕电影| xxx大片免费视频| 99久国产av精品国产电影| 99久久精品一区二区三区| 久久这里只有精品中国| 国产精品国产三级国产专区5o| 国产av码专区亚洲av| 久久综合国产亚洲精品| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 亚洲图色成人| 久久久午夜欧美精品| av国产久精品久网站免费入址| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 久久精品综合一区二区三区| 在线免费十八禁| 亚洲,欧美,日韩| 久久99热这里只有精品18| 插阴视频在线观看视频| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 久久99蜜桃精品久久| 青青草视频在线视频观看| 精品一区二区三区视频在线| 又黄又爽又刺激的免费视频.| www.av在线官网国产| 亚洲精品自拍成人| 国国产精品蜜臀av免费| 国产人妻一区二区三区在| 日韩 亚洲 欧美在线| 可以在线观看毛片的网站| 国产精品综合久久久久久久免费| 搡老乐熟女国产| 亚洲成人久久爱视频| 亚洲三级黄色毛片| 久久久午夜欧美精品| 天天躁日日操中文字幕| 联通29元200g的流量卡| 人妻夜夜爽99麻豆av| 久久久精品94久久精品| 久久99热6这里只有精品| 黄色一级大片看看| 婷婷六月久久综合丁香| 日本欧美国产在线视频| 久久久久免费精品人妻一区二区| 国产免费一级a男人的天堂| 精品一区在线观看国产| 少妇熟女欧美另类| 少妇熟女aⅴ在线视频| 天堂√8在线中文| 国产精品国产三级国产专区5o| 免费无遮挡裸体视频| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 欧美xxxx性猛交bbbb| 麻豆成人av视频| 美女国产视频在线观看| 熟女人妻精品中文字幕| 欧美人与善性xxx| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲自拍偷在线| 性色avwww在线观看| 日韩电影二区| 国产亚洲5aaaaa淫片| 日韩av在线大香蕉| 国产成人a区在线观看| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 精品人妻熟女av久视频| 一级爰片在线观看| 日本午夜av视频| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 日韩精品青青久久久久久| 午夜福利在线观看吧| 97超碰精品成人国产| 亚洲国产精品专区欧美| 男插女下体视频免费在线播放| 久久久久久久亚洲中文字幕| av免费观看日本| 国产老妇伦熟女老妇高清| 又爽又黄a免费视频| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 免费看不卡的av| 亚洲欧美精品专区久久| 卡戴珊不雅视频在线播放| 丝袜喷水一区| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 国产精品久久久久久久久免| 99视频精品全部免费 在线| 成人特级av手机在线观看| 亚洲精品456在线播放app| a级一级毛片免费在线观看| 美女大奶头视频| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| av在线蜜桃| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 亚洲色图av天堂| 午夜亚洲福利在线播放| 国产伦在线观看视频一区| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产色婷婷99| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 在线免费观看的www视频| 亚洲美女搞黄在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 日韩欧美国产在线观看| 日韩大片免费观看网站| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲国产av新网站| 亚洲精品一区蜜桃| 精品久久久久久电影网| 国产乱人偷精品视频| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 九九爱精品视频在线观看| eeuss影院久久| 国产精品伦人一区二区| eeuss影院久久| 亚洲精品456在线播放app| 久久99蜜桃精品久久| 国产乱来视频区| 久久精品人妻少妇| 免费在线观看成人毛片| av播播在线观看一区| 三级国产精品片| 日日啪夜夜撸| 99热这里只有是精品在线观看| 男女啪啪激烈高潮av片| 国产精品一区www在线观看| 成人毛片60女人毛片免费| 男人和女人高潮做爰伦理| 日本免费在线观看一区| 午夜福利视频1000在线观看| 免费观看在线日韩| 精品久久久精品久久久| 天堂中文最新版在线下载 | 久久精品国产亚洲网站| 2021天堂中文幕一二区在线观| 久久久久性生活片| 日韩欧美精品v在线| 久久99热6这里只有精品| 国产亚洲5aaaaa淫片| 国产乱来视频区| 人人妻人人澡欧美一区二区| 超碰97精品在线观看| 黄片无遮挡物在线观看| 99热这里只有是精品在线观看| 九草在线视频观看| 午夜福利在线观看吧| 成人亚洲欧美一区二区av| 男女视频在线观看网站免费| 搞女人的毛片| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 毛片一级片免费看久久久久| 人体艺术视频欧美日本| 99久国产av精品国产电影| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲最大成人手机在线| 午夜福利高清视频| 韩国av在线不卡| 只有这里有精品99| 国产精品久久久久久久久免| 热99在线观看视频| 最近最新中文字幕大全电影3| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 黄色欧美视频在线观看| 久久人人爽人人爽人人片va| 中文字幕av在线有码专区| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 18+在线观看网站| av在线天堂中文字幕| 欧美+日韩+精品| 听说在线观看完整版免费高清| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲国产精品成人综合色| 波野结衣二区三区在线| 亚洲精品影视一区二区三区av| 成人亚洲精品一区在线观看 | 亚洲伊人久久精品综合| 天堂网av新在线| 床上黄色一级片| 欧美97在线视频| 久久久久久国产a免费观看| a级一级毛片免费在线观看| 国产亚洲最大av| 国产欧美日韩精品一区二区| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 搞女人的毛片| 久久午夜福利片| 亚洲国产高清在线一区二区三| 久久国内精品自在自线图片| 国产乱人视频| 国产单亲对白刺激| 精品久久久久久电影网| 精品一区二区三卡| 最近视频中文字幕2019在线8| 国产精品99久久久久久久久| av卡一久久| 插逼视频在线观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 亚洲乱码一区二区免费版| 免费看av在线观看网站| 国产伦精品一区二区三区视频9| 亚洲av在线观看美女高潮| 日韩欧美三级三区| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 天美传媒精品一区二区| 黄色配什么色好看| 婷婷色综合www| 欧美精品一区二区大全| 国产精品国产三级国产专区5o| 国产亚洲5aaaaa淫片| 午夜激情福利司机影院| 午夜福利网站1000一区二区三区| 日本av手机在线免费观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 街头女战士在线观看网站| 亚洲四区av| 特级一级黄色大片| 男女国产视频网站| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 成人午夜高清在线视频| av.在线天堂| 国产麻豆成人av免费视频| 久久99蜜桃精品久久| 亚洲人成网站在线播| 亚洲伊人久久精品综合| 亚洲丝袜综合中文字幕| 亚洲欧美精品专区久久| 内地一区二区视频在线| 爱豆传媒免费全集在线观看| kizo精华| 亚洲国产精品成人综合色| 高清午夜精品一区二区三区| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 久久国产乱子免费精品| 午夜久久久久精精品| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 尾随美女入室| 久久午夜福利片| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 成人亚洲欧美一区二区av| 精品一区二区三区视频在线| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲国产成人一精品久久久| 黑人高潮一二区| 人人妻人人看人人澡| 青春草亚洲视频在线观看| 99久久九九国产精品国产免费| 国模一区二区三区四区视频| 国产乱人视频| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 日韩欧美三级三区| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲高清免费不卡视频| 两个人的视频大全免费| 一级av片app| 国产成人91sexporn| 欧美潮喷喷水| 最近中文字幕高清免费大全6| 乱系列少妇在线播放| 少妇人妻一区二区三区视频| 丝袜喷水一区| 99九九线精品视频在线观看视频| 一个人看的www免费观看视频| 老司机影院成人| 国产亚洲5aaaaa淫片| 欧美成人午夜免费资源| 有码 亚洲区| 十八禁网站网址无遮挡 | 成人毛片a级毛片在线播放| 啦啦啦啦在线视频资源| 色吧在线观看| 久久亚洲国产成人精品v| 大片免费播放器 马上看| 日本黄大片高清| 麻豆av噜噜一区二区三区| www.色视频.com| 欧美变态另类bdsm刘玥| 男女视频在线观看网站免费| 久久热精品热| 内地一区二区视频在线| 国产精品日韩av在线免费观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 毛片女人毛片| 精品人妻视频免费看| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 久久久精品94久久精品| 国产黄片美女视频| 国产美女午夜福利| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 成人欧美大片| 色播亚洲综合网| 亚洲电影在线观看av| 国产精品一二三区在线看| 日日撸夜夜添| 国产伦理片在线播放av一区| 一本久久精品| 黄片无遮挡物在线观看| 亚洲人成网站高清观看| 欧美一区二区亚洲| 免费观看在线日韩| 成人二区视频| 欧美精品国产亚洲| 国产探花极品一区二区| 国产老妇伦熟女老妇高清| 哪个播放器可以免费观看大片| 日本一本二区三区精品| 天美传媒精品一区二区| 三级国产精品欧美在线观看| 特大巨黑吊av在线直播| 精品久久久久久久久av| 三级经典国产精品| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 久久这里有精品视频免费| 91久久精品国产一区二区成人| 国产精品综合久久久久久久免费| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 高清av免费在线| 少妇高潮的动态图| 成人性生交大片免费视频hd| 在线观看一区二区三区| 波多野结衣巨乳人妻| 好男人视频免费观看在线| 国产黄色免费在线视频| 天堂影院成人在线观看| 免费大片18禁| 麻豆久久精品国产亚洲av| 午夜福利成人在线免费观看| 国国产精品蜜臀av免费| 国产男女超爽视频在线观看| 99热这里只有是精品在线观看| av免费在线看不卡| 国产伦理片在线播放av一区| 国产亚洲精品久久久com| 91av网一区二区| 国产淫语在线视频| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国内精品美女久久久久久| 18禁动态无遮挡网站| 一级a做视频免费观看| 国产精品一区二区在线观看99 | 日韩欧美 国产精品| 内地一区二区视频在线| 国产高清国产精品国产三级 | h日本视频在线播放| 99热6这里只有精品| 国产 亚洲一区二区三区 | 欧美高清成人免费视频www| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 日本与韩国留学比较| 国产成人a区在线观看| 国精品久久久久久国模美| 久久久亚洲精品成人影院| 又爽又黄a免费视频| 一级毛片久久久久久久久女| 1000部很黄的大片| 日本三级黄在线观看| 成人漫画全彩无遮挡| 永久网站在线| 成人亚洲精品av一区二区| 色综合站精品国产| 人体艺术视频欧美日本| 一级av片app| 色哟哟·www| 欧美区成人在线视频| 嘟嘟电影网在线观看| 亚洲国产欧美人成| 国产av码专区亚洲av| 欧美 日韩 精品 国产| 丰满乱子伦码专区| 精品国产露脸久久av麻豆 | 亚洲精品日韩在线中文字幕| 丝袜喷水一区| 免费观看无遮挡的男女| 午夜福利在线在线| 黄色欧美视频在线观看| 嫩草影院入口| 2021天堂中文幕一二区在线观| 亚洲三级黄色毛片| 国产精品久久视频播放| 国产真实伦视频高清在线观看| 美女被艹到高潮喷水动态| 性色avwww在线观看| av国产免费在线观看| 99久久精品一区二区三区| 一本久久精品| 少妇丰满av| 国产伦理片在线播放av一区| 精品一区二区三区视频在线| 国产成人91sexporn| 少妇熟女aⅴ在线视频| 秋霞在线观看毛片| 精品午夜福利在线看|