Finkler超聲評分聯(lián)合LMTK2基因在診斷上皮性卵巢癌中的應(yīng)用

范方裕， 蒲英梅， 周柱玉， 辛艷芬， 夏紀(jì)筑

1. 西南醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院， 四川瀘州 646000； 2. 德陽市人民醫(yī)院超聲科， 四川 德陽 618000

卵巢癌(OC)是一種致命的婦科癌癥，全世界每年有23萬名婦女確診，15萬人死亡[1]。卵巢癌是世界上第7種最常見的確診癌癥，確診后5年存活率為46%[2]，造成高死亡率的主要因素之一是確診時(shí)疾病處于晚期。晚期患者的5年相對存活率為29%，而早期患者的相對存活率為92%[3]。上皮性卵巢癌(EOC)是主要的卵巢癌類型(85%)，上皮性卵巢癌的癥狀沒有特異性，包括腹脹、惡心、腸功能改變、尿路癥狀、背痛、疲勞和體重減輕，這些癥狀通常在確診前幾個(gè)月出現(xiàn)[4]。由于上皮性卵巢癌的無特異性癥狀性質(zhì)，大約75%的患者在晚期被診斷出來[5]。因此，制定有效的EOC早期診斷手段對患者的治療和預(yù)后改善具有重要意義。影像學(xué)檢查聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室血清腫瘤標(biāo)志物被腫瘤研究工作者關(guān)注。目前，由于超聲具有無創(chuàng)、易操作、可重復(fù)等優(yōu)勢已經(jīng)成為EOC的常規(guī)檢查方法[1]，基于超聲二維圖像制定的Finkler超聲評分在診斷EOC方面具有較高的價(jià)值[6,7]，而Finkler超聲評分與其他生物標(biāo)志物的聯(lián)合診斷可有效提高EOC的早期診斷準(zhǔn)確性[8]。多項(xiàng)研究報(bào)道，EOC的基因組易感性直接決定癌細(xì)胞功能，從而影響EOC的進(jìn)展。狐猴酪氨酸激酶2(LMTK2)屬于蛋白激酶和酪氨酸激酶家族，LMTK2調(diào)控細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)、神經(jīng)生長因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞凋亡等多種關(guān)鍵的細(xì)胞事件[9]。2019年，Lalremmawia等[10]曾報(bào)道LMTK2在卵巢癌中上調(diào)，并且可能與患者生存期相關(guān)。因此，本研究考察Finkler超聲評分聯(lián)合LMTK2基因在EOC診斷中的價(jià)值，旨在進(jìn)一步優(yōu)化EOC的早期診斷手段。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究共納入2019年1月至2022年1月期間在本院經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)且接受治療的EOC患者112例(EOC組)，年齡25～77歲，平均年齡(46.18±7.86)歲，其中包括黏液性癌36例、漿液性癌42例、透明細(xì)胞癌22例、混合上皮性癌12例。根據(jù)FICO病理分期標(biāo)準(zhǔn)對患者進(jìn)行分期：Ⅰ期32例、Ⅱ期36例、Ⅲ期27例、Ⅳ期17例。同時(shí)，將76例在本院經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)且接受治療的卵巢良性上皮性腫瘤患者納入良性組，年齡22～73歲，平均年齡(45.43±8.04)歲，其中，黏液性囊腺瘤25例、漿液性囊腺瘤21例、纖維瘤17例、炎性包塊13例。兩組患者基線資料具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)后病理證實(shí)病變類型；入院前未接受過婦科手術(shù)治療；病歷資料完整；患者知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他部位的惡性腫瘤；心肝腎功能障礙；病歷資料缺失。

1.2 方法

1.2.1超聲檢查及Finkler超聲評分

使用三星HS70A彩色多普勒超聲診斷儀，進(jìn)行經(jīng)腹部、陰道超聲檢查，探頭頻率分別為3.5 Hz(C5-1探頭)和7.5 Hz(C10-3探頭)。腹部檢查前囑咐患者飲水充盈膀胱，取平臥位對子宮附件進(jìn)行檢查，觀察腫瘤位置、形狀、大小、邊界、內(nèi)部回聲、盆腔積液等。陰道檢查時(shí)囑咐患者排空膀胱，取截石位觀察腫瘤周邊及內(nèi)部血管形態(tài)、血流分布。根據(jù)Finkler超聲評分法[11]對腫瘤進(jìn)行評分。

1.2.2RT-PCR法檢測血清LMTK2水平

術(shù)前抽取患者空腹靜脈血5 mL于試管中，室溫下靜置30 min后4 ℃離心(3000 r/min，15 min)。使用RNeasy Mini試劑盒(貨號74104，美國Qiagen)分離總RNA，并使用High Capacity RNA-to-cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑(貨號4489328C，美國Thermo Fisher Scientific)將其轉(zhuǎn)化為互補(bǔ)DNA(cDNA)。使用含有引物的PowerUp SYBR Green Master Mix(貨號A25742，美國Applied Biosystems)在ABI Quantstudio 6 Real-Time PCR System上進(jìn)行RT-PCR。引物序列如下：LMTK2：正向5′-CCGAACACAAACAGCAGAGA-3′，反向5′-GCCTCCCAGACATACTCGAA-3′；GAPDH：正向5′-CCATCTTCCAGGAGCGAGATC-3′，反向5′-GCCTTCTCCATGGTGGTGAA-3′。PCR擴(kuò)增程序如下：95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，40個(gè)循環(huán)。甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)用作內(nèi)部對照。使用Quantity One軟件對凝膠條帶進(jìn)行半定量分析，LMTKmRNA的相對表達(dá)量=LMTK的灰度值/GAPDH的灰度值。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果

2.1 良性組及EOC組的Finkler超聲評分和血清LMTK2 mRNA相對表達(dá)量比較

表1顯示，EOC組的Finkler超聲評分和血清LMTK2mRNA相對表達(dá)量顯著高于良性組(P<0.001)。

表1 良性組和EOC組的Finkler超聲評分和血清LMTK2 mRNA相對表達(dá)量結(jié)果

2.2 Finkler超聲評分和血清LMTK2 mRNA相對表達(dá)量之間的相關(guān)性

相關(guān)性分析顯示(圖1)，F(xiàn)inkler超聲評分和血清LMTK2mRNA相對表達(dá)量顯著正相關(guān)(r=0.563，P<0.001)。

圖1 Finkler超聲評分和血清LMTK2 mRNA相對表達(dá)量之間的相關(guān)性

2.3 Finkler超聲評分聯(lián)合血清LMTK2診斷EOC的價(jià)值

ROC曲線見圖2。Finkler超聲評分診斷EOC的曲線下面積(AUC)為0.964，敏感性為83.93%，特異性為98.68%；血清LMTK2mRNA相對表達(dá)量診斷EOC的AUC為0.907，敏感性為84.82%，特異性為90.79%。二者聯(lián)合診斷EOC的AUC為0.986，敏感性為94.64%，特異性為97.37%(P<0.001)。

圖2 Finkler超聲評分、血清LMTK2及二者聯(lián)合診斷EOC的ROC曲線

2.4 Ⅰ～Ⅱ期組和Ⅲ～Ⅳ期組的Finkler超聲評分與血清LMTK2比較

Ⅲ～Ⅳ期組的Finkler超聲評分和血清LMTK2mRNA相對表達(dá)量顯著高于Ⅰ～Ⅱ期組(P<0.05)。見表2。

表2 Ⅰ～Ⅱ期組和Ⅲ～Ⅳ期組的Finkler超聲評分和血清LMTK2 mRNA相對表達(dá)量結(jié)果

2.5 Finkler超聲評分聯(lián)合血清LMTK2診斷Ⅲ～Ⅳ期的價(jià)值分析

ROC曲線見圖3。Finkler超聲評分診斷Ⅲ～Ⅳ期的AUC為0.643，敏感性為61.36%，特異性為61.76%；血清LMTK2mRNA診斷Ⅲ～Ⅳ期的AUC為0.850，敏感性為72.73%，特異性為91.18%。二者聯(lián)合診斷Ⅲ～Ⅳ期的AUC為0.851，敏感性為68.18%，特異性為91.18%。

圖3 Finkler超聲評分、血清LMTK2及二者聯(lián)合診斷Ⅲ～Ⅳ期的ROC曲線

3 討論

近年來，隨著癌癥治療手段的進(jìn)步，患者的存活率也在不斷提高[12]。然而，OC患者的存活率幾十年來變化不大，確診后5年仍保持在46%[13]。目前，OC已成為第七大常見癌癥，第八大女性癌癥死亡原因，以及第二大婦科癌癥死亡原因(僅次于宮頸癌)[14]，每6名女性中就有1人在確診后的前90 d內(nèi)死亡[13]。這些令人沮喪的數(shù)字部分是由于缺乏OC早期有效篩查方案[15,16]。目前，超聲已經(jīng)廣泛應(yīng)用于EOC的早期篩查中，并且因其無創(chuàng)、經(jīng)濟(jì)、對腫瘤特征、血流特征、腹腔積液的有效顯現(xiàn)使其成為EOC篩查的主要影像學(xué)設(shè)備。錢林華等[17]報(bào)道，F(xiàn)inkler超聲評分診斷早期OC的敏感性和特異性分別為88.1%和87.9%，李海鵬等[8]報(bào)道，F(xiàn)inkler超聲評分診斷EOC的敏感性和特異性分別為78.13%和80.00%，這些研究結(jié)果證實(shí)了Finkler超聲評分在OC中的診斷價(jià)值。本研究中，當(dāng)Finkler超聲評分>5時(shí)，診斷EOC的敏感性和特異性分別為83.93%和98.68%，不同文獻(xiàn)之間的差異可能與患者樣本數(shù)及主觀判斷差異有關(guān)。

本研究檢測了卵巢良性上皮性腫瘤患者(良性組)和EOC患者的血清LMTK2mRNA水平。多項(xiàng)研究顯示，LMTK2在某些癌癥中發(fā)生突變[18]。前列腺癌組織中的LMTK2mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著降低，在前列腺癌細(xì)胞系LNCaP中敲除LMTK2增加了雄激素反應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄。此外，LMTK2敲除導(dǎo)致LNCaP細(xì)胞中前列腺癌干細(xì)胞群和致瘤性增加[19]。LMTK2正向調(diào)控NF-κB的活力，可促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖[20]。最近的文獻(xiàn)研究表明LMTK2在OC組織中異常高表達(dá)，并且可能用于預(yù)測患者的生存期[10]。本研究顯示，EOC患者的血清LMTK2mRNA水平顯著高于卵巢良性上皮性腫瘤患者，并且Finkler超聲評分和血清LMTK2mRNA相對表達(dá)量顯著正相關(guān)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，血清LMTK2mRNA診斷EOC的AUC為0.907、敏感性為84.82%、特異性為90.79%，表明其對EOC具有較高的診斷價(jià)值。

為了進(jìn)一步提高EOC的早期診斷準(zhǔn)確性，本研究考察了Finkler超聲評分聯(lián)合血清LMTK2診斷EOC的價(jià)值，結(jié)果顯示，F(xiàn)inkler超聲評分聯(lián)合血清LMTK2診斷EOC的AUC和敏感性高于單獨(dú)診斷，表明聯(lián)合診斷可提高EOC診斷的敏感性，然而，臨床應(yīng)用中還應(yīng)該結(jié)合超聲影像特征來綜合作出診斷。本研究進(jìn)一步考察了Finkler超聲評分和血清LMTK2與病理分期的關(guān)系，研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)inkler超聲評分和血清LMTK2mRNA相對表達(dá)量隨著病理分期的升高而升高。當(dāng)Finkler超聲評分>7時(shí)，診斷Ⅲ～Ⅳ期的價(jià)值較低，AUC僅為0.643。然而，當(dāng)血清LMTK2mRNA相對表達(dá)量>0.692時(shí)，診斷Ⅲ～Ⅳ期的AUC為0.850，敏感度和特異度均高于Finkler超聲評分，血清LMTK2對病理分期的診斷價(jià)值可能高于Finkler超聲評分，這可能與LMTK2對癌細(xì)胞的增殖、致瘤性及癌癥發(fā)生相關(guān)信號通路的調(diào)節(jié)有關(guān)[19,20]。此外，二者聯(lián)合診斷并未顯著提高對Ⅲ～Ⅳ期的診斷價(jià)值。

綜上所述，在EOC的早期診斷中，與單獨(dú)診斷相比，F(xiàn)inkler超聲評分聯(lián)合血清LMTK2可有效提高診斷靈敏度，并且血清LMTK2對病理分期的診斷價(jià)值可能高于Finkler超聲評分。因此，F(xiàn)inkler超聲評分聯(lián)合血清LMTK2在EOC的早期診斷中有較高的潛在臨床應(yīng)用前景。