ICAM-1 在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及意義

結(jié)直腸癌（colorectal cancer，CRC）是常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，是全球第3 大常見(jiàn)男性癌癥，第2大常見(jiàn)女性癌癥

。隨著飲食結(jié)構(gòu)和生活習(xí)慣的變化，近年來(lái)我國(guó)城鄉(xiāng)居民CRC的發(fā)病率呈持續(xù)性升高，已成為我國(guó)發(fā)病率較高的惡性腫瘤之一

。截至2018 年，我國(guó)結(jié)直腸癌患者數(shù)量已上升至第2 位，占癌癥總病例數(shù)12.2%，發(fā)病率在我國(guó)惡性腫瘤中為第5位

。結(jié)直腸癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移是引起患者死亡的重要因素，其中黏附分子在腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。細(xì)胞間黏附分子1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）是免疫球蛋白超家族中的成員，是一種重要的黏附分子，主要參與腫瘤細(xì)胞之間以及腫瘤細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞之間的黏附，在腫瘤發(fā)生發(fā)展與轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用

。本研究采用免疫組化法研究ICAM-1 在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)狀況，并結(jié)合臨床資料探討其與患者臨床病理指標(biāo)的關(guān)系，以期為結(jié)直腸癌的診斷和治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020 年1 月-8 月濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科保存的手術(shù)切除的結(jié)直腸癌組織標(biāo)本30 例，患者術(shù)前未接受放化療，臨床資料完整，排除術(shù)后發(fā)生感染或腸瘺等并發(fā)癥的病例。其中，男18例，女12 例，年齡40～76 歲，中位年齡59 歲。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過(guò)。

1.2 方法 每例標(biāo)本同時(shí)取距癌組織邊緣2 cm 處的癌旁組織做對(duì)照。組織標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋后行連續(xù)切片，片厚4 μm。免疫組化檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京博奧森公司，小鼠抗人ICAM-1 單克隆抗體購(gòu)自CST 公司。組織切片常規(guī)脫蠟至水，于枸櫞酸鈉緩沖液（pH 6.0）中微波行抗原熱修復(fù)30 min，3%過(guò)氧化氫阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，山羊血清阻斷非特異性反應(yīng)，滴加小鼠抗人ICAM-1 單抗（稀釋度1∶200），4 ℃過(guò)夜，37 ℃復(fù)溫1 h 后滴加生物素標(biāo)記的二抗工作液，再滴加辣根酶標(biāo)記鏈酶卵白素工作液，DAB 顯色，自來(lái)水沖洗，蘇木素復(fù)染，梯度酒精脫水，二甲苯透明，最后中性樹(shù)脂封片并鏡檢。

1.3 結(jié)果判斷 所有切片均由病理科醫(yī)師閱片，按照標(biāo)本染色強(qiáng)度打分，其中0 分為無(wú)色，1 分為淡黃色，2 分為棕黃色，3 分為棕褐色；再按照陽(yáng)性細(xì)胞所占總細(xì)胞的百分比打分：陽(yáng)性細(xì)胞占0～24%為1分，陽(yáng)性細(xì)胞占25%～49%為2 分，陽(yáng)性細(xì)胞占50%～74%為3 分，陽(yáng)性細(xì)胞≥75%為4 分。將染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞百分比進(jìn)行相乘：＜2 分為陰性表達(dá)（-）；3～4 分為弱陽(yáng)性表達(dá)（+）；6～8 分為中等陽(yáng)性表達(dá)（++）；9～12 分為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)（+++）。在統(tǒng)計(jì)分析時(shí)將（-）與（+）歸為陰性表達(dá)，（++）及（+++）歸為陽(yáng)性表達(dá)。

蠻蠻剛?cè)胄W(xué)幾天，去接送時(shí)，遇到同學(xué)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)在停車場(chǎng)他們就會(huì)很熱情很自然地叫蠻蠻的名字，常常根本是相反回家方向，而不是走路面對(duì)面要碰上了才打招呼，對(duì)此我印象深刻。以后多接觸美國(guó)小朋友，發(fā)現(xiàn)他們的確是非常有禮貌，基本的問(wèn)候、“謝謝”之類不用說(shuō)，行為上也彬彬有禮。見(jiàn)大人站直正面打招呼，不失真誠(chéng)贊美別人，不認(rèn)識(shí)的同齡小男孩在游樂(lè)場(chǎng)爬天梯爬到一半都特意退回去讓給蠻蠻，到家里來(lái)玩從不亂翻東西，需要什么都會(huì)先問(wèn)：“我可以嗎？”有的東西給了，會(huì)說(shuō)，“我的媽媽不讓我吃這個(gè)，謝謝……”

細(xì)胞黏附分子是眾多介導(dǎo)細(xì)胞間或細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間相互接觸和結(jié)合分子的統(tǒng)稱，以受體-配體結(jié)合的形式發(fā)揮作用，不但參與腫瘤細(xì)胞之間的黏附，也參與腫瘤細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞之間的黏附，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。另外，黏附分子也是機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答的重要參與分子，在免疫細(xì)胞殺傷腫瘤的過(guò)程中發(fā)揮重要作用，深入研究黏附分子與腫瘤的關(guān)系具有重要意義

。

2.2 ICAM-1 表達(dá)與患者臨床病理學(xué)的關(guān)系 ICAM-1在腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)率高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

＜0.05），但不同性別、年齡、組織學(xué)類型、病理分級(jí)以及TNM 分期間ICAM-1 表達(dá)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

＞0.05），見(jiàn)表2。

夏冰下了車，聽(tīng)到身后壓抑已久的抱怨聲終于爆發(fā)出來(lái)：“太沒(méi)有素質(zhì)了！”“一看就知道不是好人！”“垃圾！”夏冰冷笑一聲，走向十字路口一家報(bào)亭。他趴在報(bào)攤上翻了翻，要了一份《成都市民報(bào)》，一瓶綠茶和一個(gè)面包，還要了一張IC卡。

2 結(jié)果

2.1 ICAM-1 在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá) ICAM-1 呈散在分布的淡黃色或棕黃色顆粒，主要定位于細(xì)胞膜上，在胞漿和間質(zhì)中也有表達(dá)，陰性對(duì)照片中未見(jiàn)黃色顆粒。ICAM-1 在結(jié)直腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為70.00%（21/30），在癌旁組織中陽(yáng)性率為33.33%（10/30），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

=9.365，

=0.025），見(jiàn)表1、圖1。

神圣理智與人類理性。 使得意志自由難以成立的主要原因在于：神所預(yù)見(jiàn)的未來(lái)事物，如果既可能發(fā)生也可能不發(fā)生，那么這樣的預(yù)見(jiàn)就不是真知，從而也不能擔(dān)當(dāng)預(yù)見(jiàn)之名；真知之所以稱為“真”的原因在于事物必然與知識(shí)對(duì)他的掌握相一致，若未來(lái)事情發(fā)生與否不能確定，那怎么可能有對(duì)這種事情的真知；神的預(yù)見(jiàn)必然是真知，所以未來(lái)事物必按其預(yù)見(jiàn)發(fā)生或否。主要的疑問(wèn)便集中在必然性上面?！笆挛镆坏┍活A(yù)知，就順理成章地具有必然性，因?yàn)橐菦](méi)有了必然性，它們就根本不可能被預(yù)知(因?yàn)橹皇撬軌虬盐盏臒o(wú)非是確然的東西)”。如何能確保神意的預(yù)知，同時(shí)又不把必然性完全束縛在事物之上。

3 討論

ICAM-1 是一種細(xì)胞表面糖蛋白，屬于免疫球蛋白超家族成員，配體是淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原1和巨噬細(xì)胞分化抗原1，受炎癥刺激而表達(dá)上調(diào)，廣泛參與細(xì)胞遷移、免疫細(xì)胞的活化等生物學(xué)活動(dòng)，在組織結(jié)構(gòu)的維持、炎癥反應(yīng)、傷口修復(fù)等方面發(fā)揮重要作用。ICAM-1 與配體結(jié)合后，通過(guò)其胞漿結(jié)構(gòu)域激活下游接頭蛋白分子，傳遞細(xì)胞信號(hào)。ICAM-1 還可通過(guò)激活Rho-GTP 酶、Src 激酶以及PKC 調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)Ca

水平，維持細(xì)胞屏障的作用。此外，ICAM-1可調(diào)節(jié)不同狀態(tài)下細(xì)胞的通透性，正常狀態(tài)下，ICAM-1 通過(guò)PKC 來(lái)控制內(nèi)皮細(xì)胞的通透性，而在炎癥狀態(tài)下，ICAM-1 激活Src 激酶增加內(nèi)皮細(xì)胞通透性。另ICAM-1 可通過(guò)細(xì)胞因子調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1 可刺激IL-8和CCL5的釋放，降低內(nèi)皮細(xì)胞的通透性。郎平平等

研究表明，ICAM-1 還可通過(guò)肌球蛋白輕鏈激酶下調(diào)F-actin的表達(dá)，顯著增加腸上皮的通透性，而腸上皮細(xì)胞表面的ICAM-1 可通過(guò)CD44 激活ERK1/2 激酶，調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架，激活金屬蛋白酶破壞上皮屏障功能，增加上皮細(xì)胞通透性，促進(jìn)炎癥反應(yīng)發(fā)生。

目前對(duì)ICAM-1 在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用尚存在爭(zhēng)議。有觀點(diǎn)認(rèn)為

，ICAM-1 有助于腫瘤細(xì)胞吸附于血管內(nèi)皮細(xì)胞表面，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移，在腫瘤發(fā)生過(guò)程中起到促進(jìn)作用。例如，ICAM-1 可以促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移

；阻斷ICAM-1的信號(hào)通路，可以降低膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞和乳腺癌細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移能力

。但也有觀點(diǎn)認(rèn)為，ICAM-1 可以促進(jìn)免疫細(xì)胞殺死腫瘤細(xì)胞，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。Budinsky AC等

研究證實(shí)，乳腺癌細(xì)胞中的ICAM-1的表達(dá)水平明顯低于正常乳腺上皮細(xì)胞，且ICAM-1 在乳腺癌細(xì)胞中呈低水平表達(dá)。另有研究證實(shí)

，ICMA-1 可通過(guò)激活NK 細(xì)胞的ADCC 作用，殺傷骨髓瘤細(xì)胞。單核細(xì)胞可上調(diào)尤文肉瘤表面ICAM-1 和MHCI 類分子的表達(dá)水平，增強(qiáng)細(xì)胞毒性T 細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別和殺傷

。國(guó)內(nèi)外關(guān)于ICAM-1 在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用報(bào)道較少。課題組前期通過(guò)RNAi 技術(shù)構(gòu)建ICAM-1 慢病毒干擾載體，可顯著下調(diào)乳腺癌細(xì)胞中ICAM-1的表達(dá)水平，進(jìn)一步研究證實(shí)下調(diào)ICAM-1 表達(dá)可顯著抑制乳腺癌MCF-7 細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力

。本研究采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)結(jié)直腸癌組織中ICAM-1的表達(dá)狀況，結(jié)果顯示ICAM-1 呈散在分布的淡黃色或棕黃色顆粒，主要定位于細(xì)胞膜上，在胞漿和間質(zhì)中也有表達(dá)，陰性對(duì)照片中未見(jiàn)黃色顆粒。ICAM-1 在結(jié)直腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為70.00%（21/30），在癌旁組織中陽(yáng)性率為33.33%（10/30），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

＜0.05），與既往研究結(jié)果一致

。此外，ICAM-1 在腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)率高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

＜0.05），但不同性別、年齡、組織學(xué)類型、病理分級(jí)以及TNM 分期間ICAM-1 表達(dá)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

＞0.05），提示ICAM-1 可能參與結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，檢測(cè)ICAM-1 可能對(duì)早期發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌以及預(yù)測(cè)腫瘤細(xì)胞有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有重要作用。有研究發(fā)現(xiàn)

，ICAM-1 表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者TNM 分期呈正相關(guān)，而本研究發(fā)現(xiàn)ICAM-1 與腫瘤患者的TNM 分期無(wú)相關(guān)性，這可能與不同課題組所采用不同的抗體檢測(cè)ICAM-1 不同抗原肽段有關(guān)，或與本課題組織樣本量偏小有關(guān)。

綜上所述，ICAM-1 在結(jié)直腸癌組織中高表達(dá)，且與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示ICAM-1 可能在結(jié)直腸癌的發(fā)生與發(fā)展過(guò)程中起重要作用。

[1] Pilleron S,Soto-Perez-De-Celis E,Vignat J,et al.Estimated global cancer incidence in the oldest adults in 2018 and projections to 2050[J].Int J Cancer,2021,148(3):601-608.

[2] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化內(nèi)鏡學(xué)分會(huì),中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)腫瘤內(nèi)鏡學(xué)專業(yè)委員會(huì).中國(guó)早期結(jié)直腸癌篩查及內(nèi)鏡診治指南(2014 年,北京)[J].中華消化內(nèi)鏡雜志,2015,32(6):341-360.

[3] 褚鋒,楊侃侃,李啟信.青年結(jié)直腸癌患者的臨床病理特征及預(yù)后分析[J].醫(yī)學(xué)信息,2021,34(2):5-7.

[4] Benedicto A,Romayor I,Arteta B.Role of liver ICAM-1 in metastasis[J].Oncol Lett,2017,14(4):3883-3892.

[5] Gupta A,Rosato AJ,Cui F.Vaccine candidate designed against carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecules using immunoinformatics tools [J].J Biomol Struct Dyn,2021,39(16):6084-6098.

[6] 郎平平,林秋月,白潔,等.ICAM-1 在心血管疾病中的作用[J].生理科學(xué)進(jìn)展,2020,51(1):57-60.

[7] Shi M,Li ZY,Zhang LM,et al.Hsa_circ_0007456 regulates the natural killer cell-mediated cytotoxicity toward hepatocellular carcinoma via the miR-6852-3p/ICAM-1 axis [J].Cell Death Dis,2021,12(1):94.

[8] Kusmardi K,Wiyarta E,Rusdi NK,et al.The potential of lunasin extract for the prevention of breast cancer progression by upregulating E-Cadherin and inhibiting ICAM-1[J].F1000Res,2021,10:902.

[9] Naito K,Suzuki S,Ohwada C,et al.ICAM1 -Negative Intravascular Large B-Cell Lymphoma of the Pituitary Gland: A Case Report and Literature Review [J].AACE Clin Case Rep,2021,7(4):249-255.

[10] Lin YM,Chang ZL,Liao YY,et al.IL-6 promotes ICAM-1 expression and cell motility in human osteosarcoma[J].Cancer Lett,2013,328(1):135-143.

[11] Yoo KC,Kang JH,Choi MY,et al.Soluble ICAM-1 a Pivotal Communicator between Tumors and Macrophages,Pro-motes Mesenchymal Shift of Glioblastoma [J].Adv Sci (Weinh),2021.Epub 2021 Nov 23.

[12] Bui TM,Wiesolek HL,Sumagin R.ICAM-1: A master regulator of cellular responses in inflammation,injury resolution,and tumorigenesis[J].J Leukoc Biol,2020,108(3):787-799.

[13] Budinsky AC,Brodowicz T,Wiltschke C,et al.Decreased expression of ICAM-1 and its induction by tumor necrosis factor on breast-cancer cells in vitro[J].Int J Cancer,1997,71(6):1086-1090.

[14] Klausz K,Cieker M,Kellner C,et al.Fc-engineering significantly improves the recruitment of immune effector cells by anti-ICAM-1 antibody MSH-TP15 for myeloma therapy[J].Haematologica,2021,106(7):1857-1866.

[15] Biele E,Schober SJ,Prexler C,et al.Monocyte Maturation Mediators Upregulate CD83,ICAM-1 and MHC Class 1 Expression on Ewing's Sarcoma,Enhancing T Cell Cytotoxicity[J].Cells,2021,10(11):3070.

[16] Lo HC,Xu Z,Kim IS,et al.Resistance to natural killer cell immunosurveillance confers a selective advantage to polyclonal metastasis[J].Nat Cancer,2020,1(7):709-722.

[17] Di D,Chen L,Wang L,et al.Downregulation of human intercellular adhesion molecule-1 attenuates the metastatic ability in human breast cancer cell lines[J].Oncol Rep,2016,35(3):1541-1548.

[18] 邸大琳,陳蕾,王麗娜,等.人細(xì)胞間黏附分子1 基因慢病毒干擾載體感染MCF-7 細(xì)胞下調(diào)靶基因表達(dá)[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2015,31(8):1048-1052.

[19] 陳蕾,李泉,高文風(fēng),等.ICAM-1 基因沉默對(duì)人淋巴瘤細(xì)胞遷移及侵襲的影響[J].山東醫(yī)藥,2019,59(13):19-22.

[20] Yilmaz C,Koksoy S,Ceker T,et al.Diclofenac down-regulates COX-2 induced expression of CD44 and ICAM-1 in human HT29 colorectal cancer cells [J].Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol,2021,394(11):2259-2272.

[21] Lenz HJ,Argiles G,Yoshino T,et al.Association of Consensus Molecular Subtypes and Molecular Markers With Clinical Outcomes in Patients With Metastatic Colorectal Cancer: Biomarker Analyses From LUME-Colon 1 [J].Clin Colorectal Cancer,2021,20(1):84-95.

[22] 李兆德,段升軍,王立國(guó),等.結(jié)腸癌患者腫瘤組織及外周血ICAM-1 和VCAM-1 表達(dá)的研究[J].中國(guó)現(xiàn)代普通外科進(jìn)展,2007,10(5):412-415.