PRiME HLB結(jié)合氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定平菇中 9種農(nóng)藥及基質(zhì)效應(yīng)評價

李 斌

（貴陽市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗測試中心，貴州貴陽 550081）

食用菌味道鮮美，具有保健功能，經(jīng)常食用食用菌可以抑制腫瘤的發(fā)生、減少尿糖改善糖尿病癥，并且還可以延緩衰老，因此在生活中越來越受到人們的喜愛[1-2]。食用菌在生長過程中容易遭到病蟲害影響使其產(chǎn)量和質(zhì)量下降，有機磷和菊酯類農(nóng)藥因具有高效殺蟲滅菌和殺蟲譜比較廣的優(yōu)點，在實際生產(chǎn)生活中廣泛用于食用菌病蟲害防治[3-5]。但是不科學(xué)使用農(nóng)藥，會造成食用菌中農(nóng)藥殘留，并通過食物鏈進入人體內(nèi)，對人們的身體健康造成嚴(yán)重的影響和危害[6-9]。因此，食用菌中農(nóng)藥殘留量的監(jiān)督檢測引起了人們重視。

國內(nèi)外檢測農(nóng)藥殘留主要儀器方法有氣相色譜 （Gas Chromatography，GC）、液相色譜（Liquid Chro- matography，LC）、液質(zhì)聯(lián)用（Liquid Chromatography- Triple Quadrupole Tandem Mass Spectrometry，LCMS/MS）[10]和氣質(zhì)聯(lián)用（Gas Chromatography-Triple Quadrupole Tandem Mass Spectrometry，GC-MS/MS）[11-13]，其中氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)具有掃描快速和定性、定量準(zhǔn)確等優(yōu)勢，被研究者廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥殘留檢測。在農(nóng)藥殘留檢測前處理方法中，QuEChERS、液液萃取、固相萃取等廣泛應(yīng)用。與傳統(tǒng)固相萃取相比，通過式固相萃取不需要活化、平衡和洗脫步驟，因此操作更加快速，試劑使用量更少，該方法在農(nóng)藥殘留檢測中應(yīng)用比較少，特別在檢測食用菌中農(nóng)藥殘留鮮有報道。農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)中，基質(zhì)效應(yīng)是造成分析結(jié)果不準(zhǔn)確的主要因素之 一[14-15]。食用菌中基質(zhì)成分復(fù)雜，嚴(yán)重影響農(nóng)藥殘留分析的準(zhǔn)確性。因此，本文使用PRiME HLB小柱的通過式固相萃取方式，結(jié)合氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用對食用菌中有機磷和菊酯進行檢測分析并評價基質(zhì)效應(yīng)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

平菇樣品購買于市場，按照NY/T 3304—2018 進行制樣和保存；平菇空白基質(zhì)樣品經(jīng)國標(biāo) GB 23200.113—2018分析測定不含9種目標(biāo)分析物。

乙腈和丙酮均為色譜純，購自美國Fisher公司；PRiME HLB小柱（3 cc，150 mg），購自美國Waters公司；乙硫磷、二嗪磷、治螟磷、嘧啶磷、滅線磷、聯(lián)苯菊酯、氯菊酯、三唑酮和腐霉利，濃度均為 1000 μg/mL，購自北京壇墨公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 7890B-7000C三重四極桿氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Agilent公司）；HC-3515高速離心機（安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司）；AX204電子天平（梅特勒-托利多）；Milli-Q純水儀（美國Millipore 公司）。

1.3 樣品前處理

稱取2 g（±0.01）平菇陰性空白樣品，加入10 mL 的乙腈，搖勻旋渦震蕩，離心6000 r/min，離心 5 min，取2 mL上清液過PRiME HLB小柱，收集濾液40 ℃氮吹至近干，丙酮定容至1 mL，過0.22 μm濾膜，GC-MS/MS測定。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)品1.00 mL于10.00 mL容量瓶中，丙酮稀釋濃度為100.0 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液，于-20 ℃避光保存。使用時取適量的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，丙酮分別配制100 ng/mL、200 ng/mL、 300 ng/mL、400 ng/mL和500 ng/mL系列溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液。空白基質(zhì)按照1.3樣品前處理，提取凈化后的溶液配制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度為100 ng/mL、200 ng/mL、300 ng/mL、400 ng/mL和500 ng/mL系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.5 色譜條件

色譜柱：VF-1701（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；升溫程序：40 ℃保持1 min，然后以40 ℃/min程序升溫至120 ℃，再以5 ℃/min升溫至240 ℃，再以12 ℃/min升溫至300 ℃，保持8 min；再以100 ℃/min 降溫至280 ℃，保持1.8 min；載氣：氦氣，純度≥99.999%；流速：1.2 mL/min；進樣口溫度：280 ℃；進樣量：2 μL；進樣方式：脈沖不分流進樣；溶劑延遲：9 min。

1.6 質(zhì)譜條件

離子源：電子轟擊（EI）源，電子能量70 eV；離子源溫度：280 ℃；GC-MS接口溫度：280 ℃；其他質(zhì)譜參數(shù)，包括保留時間、定量與定性離子對、碰撞能量見表1。

表1 9種農(nóng)藥的保留時間和質(zhì)譜參數(shù)

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜質(zhì)譜條件的選擇

本實驗選擇毛細(xì)管色譜柱VF-1701，通過Scan模式掃描0.4 μg/mL濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，比較不同升溫速率對分離效果的影響，最終確定了合適的升溫程序及各農(nóng)藥的保留時間。之后選擇各農(nóng)藥的定量定性離子建立MRM離子監(jiān)測方法，每種農(nóng)藥選擇1個定量離子和1個定性離子。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性

按照1.3的方法配制溶劑和基質(zhì)系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)GC-MS/MS測定，以相對濃度為橫坐標(biāo)，相對響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。農(nóng)藥在100～500 ng/mL 線性關(guān)系良好。9種農(nóng)藥在丙酮溶劑中標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)（r）均≥0.9925，而在基質(zhì)溶劑中標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)比前者更加接近1，均≥0.9982。表2說明基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量更加準(zhǔn)確。

表2 9種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3 基質(zhì)效應(yīng)的評價

由于平菇基質(zhì)復(fù)雜，干擾物質(zhì)多，基質(zhì)干擾造成氣相串聯(lián)質(zhì)譜定量分析不準(zhǔn)確，因此需要評價基質(zhì)效應(yīng)（Matrix Effect，ME），按公式（1）進行計算，結(jié)果見表2。

式中：A為基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率；B為純?nèi)軇?biāo)準(zhǔn)曲線斜率。若ME＞1，則表示為基質(zhì)增強效應(yīng)；若ME＜1則表示為基質(zhì)抑制效應(yīng)；當(dāng)ME介于0.80～1.20時，基質(zhì)干擾程度較弱；當(dāng)0.5＜ME＜0.8或1.2＜ME＜1.5，中等基質(zhì)效應(yīng)；當(dāng)ME＜0.5或ME＞1.5時，強烈的基質(zhì)干擾。

表2結(jié)果顯示，PRiME HLB小柱凈化后，在平菇中治螟磷為基質(zhì)增強效應(yīng)，ME值在0.80～1.20，基質(zhì)干擾程度較弱；乙硫磷、二嗪磷和腐霉利為基質(zhì)減弱效應(yīng)，ME值在0.80～1.20，基質(zhì)干擾程度較弱；嘧啶磷、滅線磷、聯(lián)苯菊酯、氯菊酯和三唑酮的ME值＜1，并且ME值在0.50～0.80，5種農(nóng)藥表現(xiàn)為中等基質(zhì)抑制效應(yīng)。因此，治螟磷、乙硫磷、二嗪磷和腐霉利可以用溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線定量，而嘧啶磷、滅線磷、聯(lián)苯菊酯、氯菊酯和三唑酮必須用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。

3 結(jié)論

PRiME HLB結(jié)合氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法中線性相關(guān)系數(shù)滿足實驗要求，且方法操作簡單、耗時少。本實驗中研究了平菇基質(zhì)中9種農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)，結(jié)果表明，基質(zhì)效應(yīng)在平菇中普遍存在，大多數(shù)農(nóng)藥基質(zhì)效應(yīng)較明顯，因此在測定平菇農(nóng)藥殘留實驗過程中考慮基質(zhì)配標(biāo)，消除基質(zhì)干擾，保證數(shù)據(jù)準(zhǔn)確。