日糧添加白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物對斷奶仔豬生長和腸道結(jié)構(gòu)及功能的影響

張大城，洪玲玲，劉碧凡，蘇云，李斌，曹立紅，馮澤猛，印遇龍

日糧添加白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物對斷奶仔豬生長和腸道結(jié)構(gòu)及功能的影響

張大城1,5，洪玲玲1,2，劉碧凡1,2，蘇云1,3，李斌4，曹立紅4，馮澤猛1*，印遇龍1

(1.中國科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所，湖南 長沙 410125；2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，湖南 長沙 410128；3.湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，湖南 長沙 410081；4.安徽東方新新生物技術(shù)有限公司，安徽 亳州 236800；5.中國科學(xué)院大學(xué)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科學(xué)學(xué)院，北京 100049)

選取12頭體質(zhì)量相近的健康斷奶仔豬隨機(jī)分為2組，對照組(CON組)和試驗組(SDGS組)分別飼喂依據(jù)NRC(2012)仔豬營養(yǎng)需要標(biāo)準(zhǔn)配制的等氮等能基礎(chǔ)日糧與4%白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物添加日糧，每組6個重復(fù)，預(yù)飼7 d后試驗28 d，探索日糧添加白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物對斷奶仔豬生長性能、器官指數(shù)、血清生化指標(biāo)及腸道形態(tài)、腸黏膜緊密連接蛋白(TJ)和細(xì)胞因子mRNA相對表達(dá)量的影響，綜合評價日糧添加白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物在斷奶仔豬上的飼喂效果。結(jié)果表明：SDGS組的平均日增質(zhì)量顯著(<0.05)高于CON組的，平均日采食量和料重比則無顯著(>0.05)變化；SDGS組的肝臟指數(shù)顯著(<0.05)低于CON組的，脾臟、心臟、胰臟、腎臟的器官指數(shù)則無顯著(>0.05)變化；血清生化指標(biāo)(總蛋白、尿素、葡萄糖、免疫球蛋白M、免疫球蛋白G)在兩組間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(>0.05)；與CON組相比，SDGS組的腸道形態(tài)更完整、排列整齊，但空腸和回腸隱窩深度顯著(<0.05)增加，空腸絨毛高度顯著(<0.05)降低，空腸和回腸絨毛高度與隱窩深度比值均顯著(<0.01)降低，十二指腸隱窩深度有增加趨勢(=0.081)，十二指腸絨毛高度、絨毛高度與隱窩深度比值則無顯著(>0.05)變化；SDGS組空腸黏膜TJ蛋白中閉合蛋白–3(Claudin–3)的mRNA相對表達(dá)量有降低趨勢(=0.091)，空腸黏膜TJ蛋白中閉合小環(huán)蛋白–1(ZO–1)、閉鎖蛋白(occludin)與十二指腸和回腸黏膜TJ蛋白Claudin–3、occludin、ZO–1的mRNA相對表達(dá)量則均無顯著(>0.05)變化；SDGS組十二指腸和回腸黏膜細(xì)胞因子白細(xì)胞介素–6(IL–6)的mRNA相對表達(dá)量顯著(<0.05)降低，回腸黏膜細(xì)胞因子白細(xì)胞介素–10(IL–10)的mRNA相對表達(dá)量有降低趨勢(=0.068)，十二指腸黏膜細(xì)胞因子白細(xì)胞介素–1β(IL–1β)、IL–10，空腸黏膜細(xì)胞因子IL–6、IL–1β、IL–10和回腸黏膜細(xì)胞因子IL–1β的mRNA相對表達(dá)量則無顯著(>0.05)變化。總之，依照NRC(2012)仔豬營養(yǎng)需要標(biāo)準(zhǔn)，添加4%白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物配制的等氮等能日糧可顯著提高斷奶仔豬平均日增質(zhì)量，顯著降低肝臟指數(shù)，改善腸道的免疫功能，且不會破壞腸道屏障結(jié)構(gòu)，腸黏膜結(jié)構(gòu)更完整，但腸道形態(tài)卻向消化吸收能力降低的方向發(fā)展?？梢姡拙圃汜劸平湍概囵B(yǎng)物可作為斷奶仔豬配合日糧的原料，但使用時需要注意腸道健康的保護(hù)。

斷奶仔豬；白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物；生長性能；血清生化指標(biāo)；器官指數(shù)；腸道形態(tài)；緊密連接蛋白；細(xì)胞因子

中國是白酒生產(chǎn)大國。據(jù)國家統(tǒng)計局?jǐn)?shù)據(jù)，2019年全國規(guī)?；拙破髽I(yè)的釀酒總量達(dá)7.86×107L，并產(chǎn)生大量白酒糟。白酒糟的主要營養(yǎng)成分為粗蛋白、粗脂肪及殘留的淀粉，檢測發(fā)現(xiàn)其粗蛋白含量為13%～30%，粗脂肪含量為2.5%～8.0%，粗纖維含量為14%～35%，此外還含有微生物自溶產(chǎn)生的各類嘧啶、嘌呤、酵母菌細(xì)胞壁多糖、類脂化合物等物質(zhì)[1]。中國飼料原料資源短缺，開發(fā)白酒糟為飼料原料可彌補(bǔ)缺口，但鮮白酒糟中水和中性洗滌纖維含量均較高，難于保存和利用，其中的鞣酸、草酸、植酸等抗?fàn)I養(yǎng)因子還會降低適口性和營養(yǎng)物質(zhì)利用率[2]。酵母發(fā)酵可提升飼料原料品質(zhì)。酵母培養(yǎng)物是農(nóng)業(yè)部飼料添加劑品種目錄(2008)中列出的飼料添加劑，能為牲畜提供豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，同時也具有增強(qiáng)牲畜免疫力、保持牲畜健康狀態(tài)的功效[3]。鮮白酒糟經(jīng)酵母發(fā)酵后能提高總能和粗蛋白、氨基酸、細(xì)胞壁多糖、B族維生素含量及干物質(zhì)、粗蛋白、粗纖維的消化率，且氨基酸的種類更豐富[4–5]。發(fā)酵白酒糟已廣泛應(yīng)用于豬、牛、羊、產(chǎn)蛋雞和肉雞的日糧中，用于制作高蛋白和高必需氨基酸含量的菌體飼料，具有提高動物生產(chǎn)性能和免疫能力、改善動物健康狀態(tài)、增強(qiáng)動物腸道消化吸收能力的功效[6]。

現(xiàn)代生豬養(yǎng)殖普遍采用早期斷奶技術(shù)，斷奶期營養(yǎng)、環(huán)境和生理狀態(tài)的突變造成的應(yīng)激反應(yīng)更為嚴(yán)重[7]。斷奶應(yīng)激會損壞腸道黏膜屏障結(jié)構(gòu)，引起腸道形態(tài)變化和通透性增加，對豬的生長性能和健康狀態(tài)不利[8–9]。發(fā)酵白酒糟豐富的營養(yǎng)物質(zhì)和微生物產(chǎn)物有利于斷奶仔豬的生長、降低斷奶應(yīng)激的負(fù)面影響，此外它還有特殊的芳香，能誘導(dǎo)采食。研究[10–11]表明，日糧中添加2%的發(fā)酵白酒糟可促進(jìn)斷奶仔豬的生長，且不影響飼料干物質(zhì)、粗灰分、粗脂肪和多數(shù)氨基酸的表觀消化率，日糧中添加25%發(fā)酵白酒糟不影響斷奶仔豬的整體生長性能。目前，白酒糟及其深加工產(chǎn)物在畜禽日糧中的營養(yǎng)價值綜合評估鮮見報道，也缺少其對畜禽腸道形態(tài)、腸黏膜屏障結(jié)構(gòu)和免疫功能的影響研究。本研究中，設(shè)計符合NRC(2012)仔豬營養(yǎng)需要標(biāo)準(zhǔn)的等氮等消化能基礎(chǔ)日糧和4%白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物添加日糧，探索日糧添加白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物對斷奶仔豬生長性能、血清生化指標(biāo)、器官指數(shù)、腸道形態(tài)、腸黏膜屏障結(jié)構(gòu)和免疫功能的影響，綜合評價其對斷奶仔豬的飼喂效果，旨在為白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物在斷奶仔豬日糧中的應(yīng)用提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1　供試材料

12頭初始體質(zhì)量為(5.29±0.61) kg的21日齡健康杜×長×大斷奶仔豬，購買自湖南正虹科技發(fā)展股份有限公司。供試白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物由安徽東方新新生物技術(shù)有限公司提供。其加工方法為：利用選育的釀酒酵母(, 2.3×108cfu/g)固體發(fā)酵安徽古井集團(tuán)生產(chǎn)的白酒糟，待白酒糟的pH提高到適宜枯草芽孢桿菌生長的水平時，繼續(xù)通過枯草芽孢桿菌(2.8×109cfu/g)固體發(fā)酵白酒糟生成酵母培養(yǎng)物，發(fā)酵結(jié)束后低溫烘干并去除稻殼，最終得到白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物。該培養(yǎng)物的總能為19.53 MJ/kg，粗蛋白質(zhì)、粗灰分、粗纖維、粗脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為31.12%、13.46%、11.00%、5.00%[4]。

1.2　試驗設(shè)計

試驗在中國科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所動物實驗室進(jìn)行。將試驗豬隨機(jī)分為2組(CON組、SDGS組)，每組6個重復(fù)。試驗豬的初始體質(zhì)量組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(>0.05)。參照文獻(xiàn)[5]測定的白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物營養(yǎng)成分和消化率，依據(jù)NRC(2012)仔豬營養(yǎng)需要標(biāo)準(zhǔn)配制等氮等消化能基礎(chǔ)日糧(CON組)和4%白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物添加日糧(SDGS組)，分別飼喂2組試驗豬。試驗日糧的組成及營養(yǎng)成分列于表1。預(yù)試期7 d，正試期28 d。斷奶仔豬于經(jīng)過清洗和消毒的全漏糞豬舍中單欄飼養(yǎng)，其間每日對試驗豬舍進(jìn)行清掃，自然通風(fēng)，并按照豬場標(biāo)準(zhǔn)管理程序?qū)嗄套胸i驅(qū)蟲和免疫。試驗期間自由飲水和采食。

表1　試驗日糧組成與營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

多維為每kg日糧提供核黃素12 mg、煙酸40 mg、泛酸25 mg、生物素0.25 mg、葉酸1.6 mg、硫胺素3.0 mg、V–B62.25 mg、V–A 10 000 IU、V–D31000 IU、V–E 80 IU、V–K32.0 mg、V–B120.03 mg；微量元素預(yù)混料為每kg日糧提供Fe (FeSO4) 150 mg、Zn (ZnO) 100 mg、Mn (MnSO4) 30 mg，Cu (CuSO4) 25 mg，I (KIO3) 0.5 mg，Co (CoSO4) 0.3 mg，Se (Na2SeO3) 0.3 mg，抗氧化劑4.0 mg；CON和SDGS組日糧的消化能分別為15 073.4、15 105.33 kJ/kg(計算值)。

1.3　測定指標(biāo)及方法

1.3.1生長性能指標(biāo)的計算

斷奶仔豬在試驗第1天和第29天08:00于空腹?fàn)顟B(tài)下逐頭稱取體質(zhì)量，計算試驗期的總增質(zhì)量及平均日增質(zhì)量(ADG)。每日記錄單欄的喂料量和剩余料量，其差值為單欄斷奶仔豬的日采食量，并結(jié)合試驗天數(shù)計算平均日采食量(ADFI)。料重比(/)由ADG和ADFI的比值計算得出。

1.3.2器官指數(shù)的測定

屠宰、解剖試驗豬后立即采集心臟、脾臟、胰臟、肝臟和腎臟，并使用吸水紙吸干臟器的表面水分，然后稱取器官鮮質(zhì)量，結(jié)合仔豬質(zhì)量計算器官指數(shù)。

1.3.3血清生化指標(biāo)的測定

飼養(yǎng)試驗最后1日禁食過夜，并在結(jié)束當(dāng)日08:00以前腔靜脈采血的方式采集血樣10 mL，肝素鈉抗凝，4 ℃靜置過夜，再離心(4 ℃、3000、10 min)取上清液(血清)于–20 ℃保存，待測。按照試劑盒(Roche)說明書的步驟，采用全自動生化分析儀(Cobas，C311)檢測血清總蛋白(TP)、尿素(Urea)、葡萄糖(GLU)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)的濃度。

1.3.4腸道形態(tài)觀察及其指標(biāo)的測定

解剖試驗豬后采集十二指腸、空腸、回腸腸段，并立即使用福爾馬林溶液固定，用石蠟包埋再切片(5 μm)，然后選用蘇木精–伊紅(HE)染色，中性樹脂玻片封片后在計算機(jī)輔助顯微鏡(Micrometrics TM，Nikon Eclipse E200)下觀察，測定絨毛高度和隱窩深度，計算絨毛高度與隱窩深度比值(/)。

1.3.5腸道黏膜緊密連接蛋白和細(xì)胞因子mRNA相對表達(dá)量的測定

主要測定黏膜緊密連接(TJ)蛋白中閉合蛋白–3 (Claudin–3)、閉合小環(huán)蛋白–1(ZO–1)、閉鎖蛋白(occludin)和黏膜細(xì)胞因子中白細(xì)胞介素–1β (IL–1β)、白細(xì)胞介素–6(IL–6)、白細(xì)胞介素–10 (IL–10)的mRNA相對表達(dá)量。解剖試驗豬后用載玻片輕輕刮取十二指腸、空腸和回腸的腸黏膜，并立即用液氮速凍后轉(zhuǎn)–80℃保存。使用試劑盒(TRIZol)提取十二指腸、空腸和回腸的黏膜總RNA，并溶解于焦碳酸二乙酯(DEPC)溶液中，再運用微量分光光度計(NanoDrop ND2000)測定RNA的純度和濃度。按照試劑盒(Prime–Script TM RT Reagent Kit with gDNA Eraser，TaKa–Ra)的操作步驟，取1 μg樣品反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。按照試劑盒(SYBR Premix ExII)的說明構(gòu)建反應(yīng)體系。熒光定量PCR的反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃變性10 s，60 ℃退火延伸30 s，共進(jìn)行40次循環(huán)。熔解曲線的制作嚴(yán)格依照熒光定量PCR儀(Roche 480 II)的操作說明書進(jìn)行。以–肌蛋白為內(nèi)參基因()，引物列于表2。引物序列從美國國家生物技術(shù)信息中心(Bethesda，MD)下載并由上海生工生物工程有限公司合成。

表2　引物序列信息

1.4　數(shù)據(jù)統(tǒng)計與處理

采用Excel 2016對所有試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行歸納整理，運用SPSS 22.0中的獨立樣本檢驗進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2　結(jié)果與分析

2.1　白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物對斷奶仔豬生長性能的影響

由表3可知，SDGS組斷奶仔豬的ADG顯著(<0.05)高于CON組的；ADFI和/兩組間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(>0.05)，但與CON組相比，SDGS組斷奶仔豬的ADFI增加，/降低?？梢姡琒DGS組斷奶仔豬的生長性能得到提升。

表3　供試斷奶仔豬的生長性能

2.2　白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物對斷奶仔豬器官指數(shù)的影響

由表4可知，SDGS組斷奶仔豬的肝臟指數(shù)顯著(<0.05)低于CON組的；脾臟指數(shù)、心臟指數(shù)、腎臟指數(shù)、胰臟指數(shù)則無顯著(>0.05)變化。

表4　供試斷奶仔豬的器官指數(shù)

2.3　白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物對斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響

由表5可知，斷奶仔豬血清Urea、GLU濃度和TP、IgG、IgM質(zhì)量濃度在兩組間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(>0.05)。

表5　供試斷奶仔豬的血清生化指標(biāo)

2.4　白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物對斷奶仔豬腸道形態(tài)的影響

從圖1可以看出，CON組的腸道絨毛排列雜亂、變形扭曲、頂端呈平頂狀且上皮細(xì)胞有脫落現(xiàn)象；SDGS組的腸道絨毛完整、排列整齊，更加密集。由表6可知，與CON組相比，SDGS組斷奶仔豬的十二指腸隱窩深度有降低趨勢(=0.081)，空腸和回腸的隱窩深度顯著(<0.05)增加；空腸的絨毛高度顯著(<0.05)降低；空腸和回腸的/均顯著(<0.05)降低；十二指腸的絨毛高度、/和回腸絨毛的高度均無顯著(>0.05)變化。

表6　供試斷奶仔豬的腸道形態(tài)指標(biāo)

2.5　白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物對斷奶仔豬腸道黏膜緊密連接蛋白mRNA相對表達(dá)量的影響

由表7可知，與CON組相比，SDGS組斷奶仔豬空腸黏膜緊密連接蛋白claudin–3的mRNA相對表達(dá)量有降低趨勢(=0.091)；其他所測黏膜緊密連接蛋白的mRNA相對表達(dá)量則無顯著(>0.05)變化。

表7　供試斷奶仔豬腸道黏膜緊密連接蛋白的mRNA相對表達(dá)量

2.6　白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物對斷奶仔豬腸道黏膜細(xì)胞因子mRNA相對表達(dá)量的影響

由表8可知，與CON組相比，SDGS組斷奶仔豬十二指腸和回腸黏膜的細(xì)胞因子IL–6的mRNA相對表達(dá)量顯著(<0.05)降低；回腸黏膜細(xì)胞因子IL–10的mRNA相對表達(dá)量有降低趨勢(=0.068)；其他所測黏膜細(xì)胞因子的mRNA的相對表達(dá)量則無顯著(>0.05)變化。

表8　供試斷奶仔豬腸道黏膜細(xì)胞因子的mRNA相對表達(dá)量

3　結(jié)論與討論

發(fā)酵能改善飼料營養(yǎng)成分并提高消化率，生成益生元、有益菌及其代謝產(chǎn)物[12–13]。釀酒酵母發(fā)酵白酒糟后，發(fā)酵白酒糟的粗纖維含量下降，蛋白質(zhì)、氨基酸、酵母菌代謝物含量升高，產(chǎn)生豐富的具有改善腸道微生物菌群、增強(qiáng)免疫力作用的甘露寡糖和–葡聚糖，同時纖維素酶等活性增強(qiáng)，更利于消化吸收[4,14–16]。周建民等[17]研究顯示，肉仔雞日糧添加1%白酒糟酵母培養(yǎng)物可顯著降低生長后期的料重比，同時平均日增質(zhì)量也有增高趨勢。本研究中，與CON組相比，SDGS組斷奶仔豬的ADG顯著增加，ADFI和/則無顯著變化，生長性能得到提升。其原因可能是白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物中高活性的纖維素酶和能夠優(yōu)化腸道微生物菌群與提升免疫力的甘露寡糖、–葡聚糖共同作用，使得飼料營養(yǎng)成分利用率增高，帶動生長性能提升。

血清TP含量與機(jī)體的肝臟蛋白質(zhì)合成能力相關(guān)[18]。Urea含量越低，代表氮利用率越高[19]。血清GLU含量一般是穩(wěn)定的，只在應(yīng)激或病理狀態(tài)下出現(xiàn)大幅波動[20]。IgM是免疫反應(yīng)最先產(chǎn)生的抗體，IgG是介導(dǎo)體液免疫的抗體，具有抗細(xì)菌和病毒的作用，兩者都能反映體液免疫能力[21]。本研究中，2組斷奶仔豬血清的GLU、Urea濃度和TP、IgG、IgM質(zhì)量濃度的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，表明日糧中添加4%白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物不會對斷奶仔豬機(jī)體蛋白質(zhì)合成、氮利用率和病理及應(yīng)激狀態(tài)產(chǎn)生負(fù)面影響，也不會影響斷奶仔豬的體液免疫能力。

肝臟是機(jī)體代謝的中樞，在脂肪合成與分解代謝、糖異生上有著重要作用，是機(jī)體健康狀況的反映器官[22]。MATUR等[23]研究表明，酵母培養(yǎng)物能提高種雞肝臟消化酶的活性。本研究中，SDGS組的斷奶仔豬肝臟指數(shù)較CON組的顯著降低，這可能得益于白酒糟釀酒酵母中的豐富纖維素及半纖維素等非淀粉多糖成分，能夠促進(jìn)肝臟脂肪排除，同時釀酒酵母培養(yǎng)物本身能增強(qiáng)肝臟消化酶的活性，兩者共同作用下肝臟負(fù)擔(dān)減輕，從而使得肝臟指數(shù)降低[14]。此外，日糧中添加4%白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物不會對斷奶仔豬心臟、胰臟、脾臟等器官指數(shù)產(chǎn)生顯著影響。

小腸黏膜表皮有大量絨毛，每個絨毛都是營養(yǎng)物質(zhì)消化、吸收和轉(zhuǎn)運的基本單位，絨毛高度、隱窩深度及其比值是衡量小腸消化吸收功能的主要指標(biāo)[24]。絨毛高度下降會導(dǎo)致絨毛表面積變小，消化吸收功能受損；隱窩深度反映細(xì)胞生成率，隱窩深度變小，表示細(xì)胞成熟度更好，分泌功能更強(qiáng)；小腸功能可由/綜合評價，其下降意味著絨毛高度降低或者隱窩深度增高，伴隨著腸道形態(tài)和功能受損，消化吸收功能變差[25]。周建民等[17]研究表明，日糧中添加1%白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物可顯著提高產(chǎn)蛋雞空腸的絨毛高度和隱窩深度，空腸/有增加趨勢，但添加2%白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物則對產(chǎn)蛋雞空腸的絨毛高度、隱窩深度及/均無顯著影響。KUMAR等[26]研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加活性釀酒酵母可顯著提高仔豬小腸腸道的絨毛高度和/。本研究中，日糧中添加4%白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物會影響斷奶仔豬空腸和回腸的腸道形態(tài)，空腸絨毛高度顯著降低、隱窩深度顯著增加、/顯著降低；回腸隱窩深度顯著增加，/顯著降低；十二指腸的隱窩深度有增加趨勢，但腸道黏膜完整性卻得到改善。腸黏膜細(xì)胞增殖會使隱窩深度增加，腸黏膜細(xì)胞凋亡則導(dǎo)致絨毛高度下降；膳食纖維具有誘導(dǎo)腸黏膜細(xì)胞增殖和凋亡的作用，導(dǎo)致腸黏膜細(xì)胞更新速度變快，引起/下降[27]。白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物中大量的纖維素和半纖維素等膳食纖維，可能是引起斷奶仔豬空腸和回腸腸黏膜/降低的原因。SDGS組更加完整的腸黏膜結(jié)構(gòu)則可能與日糧中豐富的甘露寡糖和–葡聚糖有關(guān)，這2種糖類物質(zhì)具有改善腸道微生物菌群的功效，可減輕斷奶期間腸道微生物菌群的紊亂對腸黏膜的破壞作用[15]。

腸道上皮細(xì)胞之間的緊密連接在腸道機(jī)械屏障中發(fā)揮著重要作用，它以箍狀形式緊緊地包圍小腸上皮細(xì)胞，由50多種結(jié)構(gòu)和功能蛋白構(gòu)成，結(jié)構(gòu)蛋白claudin、occludin用于構(gòu)成緊密連接的結(jié)構(gòu)骨架，功能蛋白ZO–1連接細(xì)胞及膜蛋白并傳遞信號[28]。本研究中，十二指腸、空腸、回腸黏膜的緊密連接蛋白claudin–3、occludin、ZO–1相對表達(dá)量在兩組間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，表明日糧中添加4%白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物不會對斷奶仔豬腸道屏障產(chǎn)生不良影響。

炎性細(xì)胞因子是一類具有介導(dǎo)細(xì)胞免疫功能的內(nèi)源性多肽，主要包括腫瘤壞死因子(TNF–α)、IL–1β、IL–6、IL–10等[29]。IL–1β能刺激APC和T細(xì)胞活化，促進(jìn)B細(xì)胞合成分泌抗體，增強(qiáng)機(jī)體免疫力[30]。IL–6可使B細(xì)胞前體細(xì)胞產(chǎn)生合成抗體的能力，IL–10同時具有免疫抑制和刺激作用[31]。LI等[32]研究表明，日糧中添加釀酒酵母可降低斷奶仔豬血漿IL–6含量，提高IL–10水平，促炎細(xì)胞因子減少，抗炎細(xì)胞因子增加，提高了豬的體液免疫能力，調(diào)節(jié)了細(xì)胞免疫功能。ZANELLO等[33]研究發(fā)現(xiàn)，釀酒酵母可降低大腸埃希菌介導(dǎo)的小腸上皮細(xì)胞IL–1β和IL–6的mRNA相對表達(dá)量。本研究中，SDGS組斷奶仔豬十二指腸和回腸黏膜IL–6的mRNA相對表達(dá)量顯著降低，回腸黏膜IL–10的mRNA相對表達(dá)量有下降趨勢?？赡艿脑蚴前拙圃汜劸平湍概囵B(yǎng)物中含有豐富的β–葡聚糖，可促進(jìn)促炎因子受體拮抗劑的分泌，抑制促炎因子IL–6的mRNA表達(dá)，腸道體液免疫能力改善，防止了斷奶應(yīng)激下仔豬腸道過度產(chǎn)生促炎因子導(dǎo)致的炎癥，調(diào)節(jié)了腸道免疫能力，有益于斷奶仔豬腸道健康和生長性能的提升。

相對于基礎(chǔ)日糧，添加4%白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物替代部分原料制作的等氮等消化能日糧，可顯著提高斷奶仔豬平均日增質(zhì)量，顯著降低肝臟指數(shù)，調(diào)節(jié)腸道的免疫功能且不會對腸道屏障結(jié)構(gòu)造成破壞，但空腸和回腸的腸道形態(tài)有向著消化吸收能力降低的方向改變的趨勢。綜合考慮，4%白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物可替代部分飼料原料制作等氮等消化能的日糧，但要注意對腸道消化功能的保護(hù)。

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Effects of addingculture from distiller’s grains in diet on growth, intestinal structure and function of weaned piglets

ZHANG Dacheng1,5，HONG Lingling1,2，LIU Bifan1,2，SU Yun1,3， LI Bin4，CAO Lihong4，F(xiàn)ENG Zemeng1*，YIN Yulong1

(1.Institute of Subtropical Agricultural Ecology, Chinese Academy of Sciences, Changsha, Hunan 410125, China; 2.College of Animal Science and Technology, Hunan Agricultural University, Changsha, Hunan 410128, China; 3.College of Life Sciences, Hunan Normal University, Changsha, Hunan 410081; 4.Anhui Dongfang Xinxin Biotechnology Co. Ltd, Bozhou, Anhui 236800, China; 5.College of Advanced Agriculture Sciences, University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China)

Twelve healthy weaned piglets with similar body weight were randomly divided into two groups, the control group(CON group) and the experimental group(SDGS group), and fed with an isonitrogenous isoenergetic basal diet formulated according to the NRC(2012) nutritional requirements standard for piglets and the 4% distiller’s grainsculture-supplemented diet, respectively, with six replicates in each group, the last time of the experiment was conducted for 28 days after 7 days of pre-feeding. The effects of dietary supplementation ofculture containing distiller’s grains on growth performance, organ index, serum biochemical indexes, intestinal morphology, and relative mRNA expression levels of intestinal mucosa tight junction(TJ) proteins and cytokines of weaned piglets were collected to comprehensively evaluate the feeding effects of dietary supplementation ofculture containing distiller’s grains on weaned piglets. The results showed that the average daily gain weight of the SDGS group was significant(<0.05) higher than that of the CON group, and the average daily feed intake and feed/weight ratio had no significant(>0.05) changes. The liver index of the SDGS group was significantly(<0.05) lower than that of the CON group, while the organ indexes of spleen, heart, pancreas and kidney showed no significant(>0.05) changes. The differences of serum biochemical indexes(total protein, urea, glucose, immunoglobulin M and immunoglobulin G) between the two groups were not statistically significant(>0.05). Compared with CON group, the intestinal morphology of the SDGS group was more complete and aligned, but the jejunal and ileal crypt depth were significantly(<0.05) increased, and the jejunal villus height was significantly(<0.05) decreased. The ratios of jejunal and ileal villus height to crypt depth were all significantly(<0.05) decreased, while the duodenal crypt depth showed an increasing trend(=0.081), but the duodenal villus height, crypt depth and the ratio of villus height to crypt depth showed no significant(>0.05) changes. In the SDGS group, the mRNA relative expression levels of Claudin-3 in the TJ protein of jejunal mucosa were decreased(=0.091), while the relative mRNA expression levels of closed small loop protein-1(ZO-1) and occludin in the jejunal mucosa TJ protein and the mRNA expression levels of Claudin-3, occludin and ZO-1 in the duodenal and ileal mucosa TJ proteins were not significantly changed(>0.05). In the SDGS group, the mRNA relative expression levels of cytokine IL-6(IL-6) in duodenal and ileal mucosa were significantly(<0.05) decreased, while the mRNA relative expression level of cytokine IL-10 in ileal mucosa was decreased(=0.068), the mRNA relative expression levels of cytokine IL-1β(IL-1β), IL-10, IL-6, IL-1β, IL-10 and IL-1β in jejunum and IL-1β in ileal mucosa were not significant(>0.05). In conclusion, according to the NRC(2012) nutritional requirements standard for piglets, the isonitrogenous isoenergetic diet prepared with the addition of 4% distiller’s grainsculture could significantly improve the average daily gain weight of weaned piglets, significantly reduce liver index, improve intestinal immune function without the intestinal barrier structure damage and showing more complete intestinal mucosa structure, while the intestinal morphology development showed a trend towards the reduction of digestion and absorption capacity. It could be seen that theculture from distiller’s grains could be used as the raw material for the diets of weaned piglets, but attention should be paid to the protection of intestinal health during its usage.

weaned piglet;culture from distillers grain; growth performance; serum biochemistry index; organ index; intestinal morphology; tight junction protein; cytokine

S828.5

A

1007-1032(2022)04-0474-09

張大城，洪玲玲，劉碧凡，蘇云，李斌，曹立紅，馮澤猛，印遇龍．日糧添加白酒糟釀酒酵母培養(yǎng)物對斷奶仔豬生長和腸道結(jié)構(gòu)及功能的影響[J]．湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2022，48(4)：474–482．

ZHANG D C，HONG L L，LIU B F，SU Y，LI B，CAO L H，F(xiàn)ENG Z M，YIN Y L．Effects of addingculture from distiller’s grains in diet on growth, intestinal structure and function of weaned piglets[J]．Journal of Hunan Agricultural University(Natural Sciences)，2022，48(4)：474–482．

http://xb.hunau.edu.cn

2020–12–21

2022–07–20

廣西重點研發(fā)計劃項目(2019AB19003)；國家“十三五”重點研發(fā)計劃項目(2016YFD0700200)；安徽東方新新生物技術(shù)有限公司課題(Y640032100)

張大城(1995—)，男，四川綿陽人，碩士研究生，主要從事單胃動物營養(yǎng)與分子生物學(xué)研究，320493342@qq.com；*通信作者，馮澤猛，博士，副研究員，主要從事智能養(yǎng)殖研究，fengzemeng@isa.ac.cn

責(zé)任編輯：鄒慧玲

英文編輯：柳正