慢性免疫性血小板減少癥患兒機體免疫功能變化情況研究

張 晴，高長俊，李 旭，任 蓉，韓 靜

（唐山市婦幼保健院小兒血液科，河北 唐山 063003）

慢性免疫性血小板減少癥患兒臨床主要表現(xiàn)為血小板（PLT）水平反復(fù)降低、自發(fā)性皮膚和黏膜出血且出血時間較長、血塊收縮不良等，容易合并感染或其他并發(fā)癥，對患兒生活質(zhì)量和生命安全造成嚴(yán)重威脅[1]。臨床認(rèn)為慢性免疫性血小板減少癥發(fā)病可能與患兒機體免疫功能異常，導(dǎo)致抗PLT抗體大量產(chǎn)生引起PLT降低有關(guān)[2]。體液免疫、細胞免疫及T細胞相關(guān)因子水平是機體免疫系統(tǒng)重要組成部分，其相關(guān)指標(biāo)水平失衡可導(dǎo)致機體免疫功能異常，可能與慢性免疫性血小板減少癥的發(fā)生有關(guān)[3-4]。本研究通過分析慢性免疫性血小板減少癥患兒體液免疫、細胞免疫及T細胞相關(guān)因子水平變化，探究慢性免疫性血小板減少癥發(fā)生的機制，以期為臨床治療慢性免疫性血小板減少癥提供參考和依據(jù)，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性收集2019年1月－2021年2月我院收治的49例慢性免疫性血小板減少癥患兒臨床資料作為觀察組，收集同期來我院進行體檢的33例健康兒童體檢資料作為健康對照組。觀察組，男25例，女24例，平均年齡（8.35±1.11）歲，患兒外周血PLT水平（14.24±7.52）×109·L-1；健康對照組，男18例，女15例，平均年齡（8.28±1.13）歲，患兒外周血PLT水平（189.17±39.65）×109·L-1。觀察組與對照組年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），觀察組患兒外周血PLT水平低于健康對照組（P＜0.05）。本研究獲本院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：慢性免疫性血小板減少癥診斷標(biāo)準(zhǔn)符合《臨床兒科學(xué)》[5]中的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)者；臨床資料完整者；年齡5～12歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并先天性免疫功能障礙者；合并其他原因引起的造血功能障礙者；合并嚴(yán)重器官功能障礙者；合并惡性腫瘤者等。

1.3 方法與觀察指標(biāo)

1.3.1 一般資料 根據(jù)2組臨床資料，對患兒性別、年齡、外周血PLT水平等進行統(tǒng)計。PLT檢測方法：抽取患兒清晨空腹靜脈血5 mL，采用流式細胞儀（CytoFLEX型，美國貝克曼庫爾特公司）檢測患兒外周PLT水平。

1.3.2 體液免疫 血液采集同1.3.1，離心收集血清，3 500 rpm，10 min，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測患兒血清免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、補體C3、補體C4水平。

1.3.3 細胞免疫 血液采集同1.3.1，采用流式細胞儀檢測患兒外周血自然殺傷細胞（NK）、調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）、B細胞、CD3+、CD4+、CD8+水平，并計算CD4+/CD8+。

1.3.4 T淋巴細胞相關(guān)因子 血清制備同1.3.2，采用ELISA檢測患兒血清白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）、腫瘤壞死因子（TNF）、干擾素-γ（IFN-γ）、白介素-17A（IL-17A）水平。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

使用SPSS 22.0進行數(shù)據(jù)分析，計量資料使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗進行比較。計數(shù)資料使用例（%）表示，χ2檢驗進行比較。以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組體液免疫比較

見表1。

表1 2組體液免疫比較（±s） g·L-1

表1 2組體液免疫比較（±s） g·L-1

注：與健康對照組比較，# P＜0.05

組別 例數(shù) IgG IgA IgM 補體C3 補體C4觀察組 49 16.61±8.28# 1.12±0.61 1.16±0.47 1.09±0.29 0.23±0.11健康對照組 33 9.66±3.19 0.98±0.26 1.14±0.38 1.17±0.33 0.25±0.08

2.2 2組細胞免疫比較

見表2。

表2 2組細胞免疫比較（±s）

表2 2組細胞免疫比較（±s）

注：與健康對照組比較，# P＜0.05

組別 例數(shù) NK細胞/% Treg細胞/% B細胞/% CD3+/% CD4+/% CD8+/% CD4+/CD8+觀察組 49 9.21±4.86# 4.23±1.68# 8.86±5.62# 72.22±8.26# 31.82±8.22# 33.62±4.62 0.95±0.31#健康對照組 33 13.26±5.63 5.26±0.83 4.39±1.82 76.12±8.26 39.26±6.28 32.22±4.25 1.22±0.33

2.3 2組T淋巴細胞相關(guān)因子比較

見表3。

表3 2組T淋巴細胞相關(guān)因子比較（±s） ng·L-1

表3 2組T淋巴細胞相關(guān)因子比較（±s） ng·L-1

注：與健康對照組比較，# P＜0.05

組別 例數(shù) IL-6 IL-10 TNF IFN-γ IL-17A觀察組 49 7.21±6.35 1.81±1.26# 3.26±2.61 5.59±4.22 10.26±7.26#健康對照組 33 5.33±4.39 4.56±2.33 2.57±0.37 4.92±4.62 2.97±1.04

3 討論

慢性免疫性血小板減少癥主要發(fā)生于2～5歲兒童，是一種常見的獲得性自身免疫性出血性疾病[6-8]，可引發(fā)患兒重要臟器及顱內(nèi)出血，甚至導(dǎo)致患兒死亡[9]，研究[10]發(fā)現(xiàn)，重癥慢性免疫性血小板減少癥患兒年病死率為1%～3%。慢性免疫性血小板減少癥的發(fā)生與機體體液免疫和細胞免疫異常引起的PLT破壞增多或生成減少有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，觀察組外周血PLT水平低于健康對照組，說明與健康兒童相比，慢性免疫性血小板減少癥患兒機體PLT水平顯著降低，與研究[11]結(jié)果一致。

本研究結(jié)果顯示，觀察組血清IgG水平及外周血B細胞水平高于健康對照組，而外周血NK細胞、Treg細胞、CD3+、CD4+水平及CD4+/CD8+低于健康對照組，說明慢性免疫性血小板減少癥患兒存在體液免疫和細胞免疫異常。B細胞可合成分泌抗PLT抗體IgG與PLT表面糖蛋白結(jié)合而促進PLT裂解，可通過調(diào)節(jié)補體的細胞毒作用等方式溶解PLT，導(dǎo)致慢性免疫性血小板減少癥患兒機體PLT水平降低[12]。Treg細胞可通過合成免疫抑制因子導(dǎo)致機體免疫抑制發(fā)生，可通過分泌細胞表面免疫抑制分子、顆粒酶、穿孔素等使得效應(yīng)T淋巴細胞失活，導(dǎo)致機體免疫功能異常，促進PLT被免疫西包或免疫因子破壞，此外，其還可與CD4+競爭抗原呈遞細胞的結(jié)合位點進一步影響機體免疫功能[13-14]。CD3+、CD4+水平及CD4+/CD8+是重要的T淋巴細胞亞群[15-17]，其水平變化受Treg細胞及體液免疫的多重影響，水平降低可引起機體免疫功能異常，導(dǎo)致患兒PLT水平降低；NK細胞作為人體固有的免疫細胞，對機體體液免疫和細胞免疫均有較好的調(diào)節(jié)作用，可在一定程度上緩解體液免疫和細胞免疫異常引起的PLT水平降低[18-20]。

T淋巴細胞相關(guān)因子IL-10、TNF、IFN-7、IL-17A與機體免疫功能異常的發(fā)生密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，觀察組血清IL-10水平低于健康對照組，血清IL-17A水平高于健康對照組，說明IL-10、IL-17A與患兒慢性免疫性血小板減少癥的發(fā)生密切相關(guān)[21-23]。IL-17A主要來自Th17細胞[24-25]，其參與了樹突狀細胞、中性粒細胞的增殖分化過程，促進固有免疫和獲得性免疫之間的聯(lián)系加強，介導(dǎo)炎性細胞對局部的浸潤及組織損傷，對機體免疫功能異常引起的PLT水平降低具有促進作用[26]。IL-10可抑制單核巨噬細胞釋放炎癥介質(zhì)，促進抗炎性因子釋放，并具有抑制單核巨噬細胞活性的功能，增強機體細胞的免疫耐受功能，在緩解PLT水平降低方面具有一定作用效果[27]。研究[28]結(jié)果顯示，慢性免疫性血小板減少癥患兒經(jīng)治療后血清IL-10水平顯著升高，進一步說明IL-10具有降低機體PLT損傷的作用。

綜上所述，慢性免疫性血小板減少癥患兒機體存在體液免疫、細胞免疫及T淋巴細胞相關(guān)因子水平異常，這可能與慢性免疫性血小板減少癥的發(fā)病有關(guān)。本研究納入的病例數(shù)較少，使得部分指標(biāo)檢測結(jié)果可能存在偏倚，后續(xù)可擴大病例數(shù)進一步研究慢性免疫性血小板減少癥患兒體液免疫、細胞免疫及T淋巴細胞相關(guān)因子水平變化與疾病發(fā)生的關(guān)系。