飼糧中添加蘆丁對湖羊肝臟抗氧化能力和腿肌營養(yǎng)成分的影響

王海波，占今舜，王麗媛，黃富萬，劉宇航，陳新鋒，趙生國，霍俊宏*

（1.江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，江西南昌 330200;2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，甘肅蘭州 730070；3.贛縣區(qū)教育科技體育局，江西贛州 341101；4.贛州綠林灣農(nóng)牧有限公司，江西贛州 341103）

萜類、酚類和生物堿等次生代謝物具有獨(dú)特的風(fēng)味、藥理作用和營養(yǎng)保健功效，在開發(fā)新型動物營養(yǎng)添加劑方面受到廣泛關(guān)注。在植物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)約有4 000 種類黃酮，黃酮類化合物在增強(qiáng)抗氧化，改善動物生長性能、肉質(zhì)品質(zhì)和防止風(fēng)味物質(zhì)的流失等方面發(fā)揮重要作用。黃酮類化合物能夠通過改變胃腸微生物種群結(jié)構(gòu)，促進(jìn)蛋白質(zhì)消化利用，并直接作用瘤胃產(chǎn)甲烷菌，抑制甲烷（CH）產(chǎn)生，提高能量利用率。

蘆?。ㄊ|香苷、維生素P）作為植物類黃酮提取物，具有抗炎、抗氧化、保護(hù)肝臟的功能。研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加蘆丁能夠促進(jìn)免疫器官發(fā)育，保護(hù)肝臟及胃腸道黏膜，并提高瘤胃代謝和消化能力，抑制大腸桿菌、變形桿菌等有害菌的生長繁殖，具有改善畜產(chǎn)品（蛋）品質(zhì)，提高動物生產(chǎn)性能的作用。本課題組前期研究表明，飼糧中添加蘆丁能夠改善湖羊生長性能，調(diào)控纖維素、蛋白質(zhì)降解效率影響瘤胃發(fā)酵。本文在前期的研究基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探究蘆丁對湖羊肝臟抗氧化能力和腿肌營養(yǎng)成分的影響，以期為蘆丁對在湖羊中的生產(chǎn)應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)所用蘆丁為寧波玉健醫(yī)藥有限公司（浙江，寧波），其提取于槐米，純度≥95%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選擇3 月齡左右、健康且體重相近（17.31±0.02）kg 的湖羊36 只，隨機(jī)分為3 個(gè)處理，每個(gè)處理12 只湖羊（公母各半，公母分欄飼養(yǎng)），對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加50和100 mg/kg BW 的蘆丁，預(yù)試期14 d，正試期56 d。

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)于2019 年8 月—2019 年10 月在江西省贛州市綠林灣農(nóng)牧有限公司湖羊養(yǎng)殖場進(jìn)行。飼養(yǎng)管理按照養(yǎng)殖場的規(guī)定執(zhí)行，每天在08:30 和17:30 進(jìn)行飼喂，羊只自由采食，飲水，隔天早上稱取剩料。

1.4 基礎(chǔ)飼糧 參考我國《肉羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY/T 816-2004）配制基礎(chǔ)飼糧。其中飼糧精粗比為60:40，飼糧精料組成及營養(yǎng)水平見表1。粗料為鍘碎的新鮮紫象草，紫象草干物質(zhì)中含10.98% 的粗蛋白質(zhì)、2.90%的粗脂肪、14.07%的粗灰分、61.23%的中性洗滌纖維和34.67%的酸性洗滌纖維。并將蘆丁與精料拌勻后先飼喂，然后再飼喂鍘碎的鮮草。

表1 飼糧精料組成及營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.5 指標(biāo)測定與方法 試驗(yàn)結(jié)束后，各處理組選擇湖羊（公羊）4 只，對照組、50 mg/kg 蘆丁組和100 mg/kg 蘆丁組的平均體重分別為（29.63±0.63）、（30.80±0.84）kg和（29.93±0.89）kg，快速屠宰（禁食12 h、禁水2 h），分別采集肝臟和腿?。ü啥^?。y定相關(guān)指標(biāo)。

1.5.1 抗氧化能力測定 屠宰后，快速采集肝臟組織，經(jīng)液氮速凍后，保存在-80℃的冰箱。隨后送北京華英生物技術(shù)研究所測定過氧化氫酶（CAT）、總超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽-過氧化物酶（GSH-Px）、總抗氧能力（T-AOC）。

1.5.2 腿肌基本營養(yǎng)成分的測定 稱取適量解凍后的股二頭肌試樣，其中水分含量按照《畜禽肉水分限量》（GB 18394—2001）的方法進(jìn)行測定，粗蛋白含量參照國家標(biāo)準(zhǔn)凱氏定氮法（GB 5009.5—2010）利用自動凱氏定氮儀測定，粗脂肪測定參照國家標(biāo)準(zhǔn)索氏提取法（GB/T 6433—2006）測定。

1.5.3 氨基酸含量的測定 取適量解凍后的股二頭肌于水解管中，加入20 mL 1:1 HCl（濃鹽酸和純水1:1 體積比混合），放入電熱鼓風(fēng)干燥箱中110℃水解23 h 后冷卻，移入25 mL 比色管定容。取1 mL 清液，85℃水浴吹干后加水1 mL 吹干后加入10 mL 0.02 mol/L HCl搖勻，取500 μL 加入250 μL 的 0.1 mol/L 異硫氰酸苯酯乙腈進(jìn)行衍生1 h 后加入2 mL 正已烷，震蕩，靜置，分層。取下層通過0.45 μm 有機(jī)膜過膜，采用液相色譜儀-1260（Agilent，1260），色譜柱為C18 SHISEIDO（4.6 mm × 250 mm ×5 μm），進(jìn)樣量為10 μL，柱溫為40℃，波長為254 nm，在流動相A（0.1 mol/L 的無水乙酸鈉和乙腈按體積比97:3 混勻后調(diào)pH 至6.5）和流動相B（乙腈和水按體積比80:20 混合）下測定肌肉中氨基酸。

1.5.4 脂肪酸含量的測定 稱取適量解凍后的股二頭肌試樣，加入100 mg 焦性沒食子酸和幾粒沸石后與95%乙醇（2 mL）混勻后加入鹽酸（10 mL）混勻，75℃水浴40 min，冷卻至室溫。再與95%乙醇（10 mL）混勻后轉(zhuǎn)至分液漏斗，用50 mL 乙醚石油醚混合液沖洗并轉(zhuǎn)入分液漏斗，加蓋振搖5 min 靜置10 min。隨后，將醚層提取液收集到250 mL 燒瓶中（反復(fù)重復(fù)沖洗3 次），最后用乙醚石油醚混合液沖洗漏斗，收集到已恒重的燒瓶中水浴蒸干，103℃烘箱中干燥2 h。加入2%氫氧化鈉甲醇溶液2 mL，85℃水浴30 min 后加入14%三氟化硼甲醇溶液3 mL 85℃水浴30 min 后降到室溫。取上層清液100 μL，用正已烷定容到l mL，經(jīng)0.45 μm 濾膜過膜后采用氣相色譜儀-7890A（Agilent，7890A），色譜柱為CD-2560（100× 0.25 mm × 0.20 μm），進(jìn)樣口溫度為250℃，載氣流速為0.5 mL/min，分流進(jìn)樣（10:1）條件下測定脂肪酸，其中檢測器溫度為250℃。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2016 初步整理后，采用SPSS 21.0 進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANOVA)，用LSD 法進(jìn)行多重比較，試驗(yàn)結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，<0.05 表示顯著水平，<0.01 表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼糧中添加蘆丁對湖羊肝臟抗氧化能力的影響 由表2 可知，飼糧中添加蘆丁顯著影響肝臟CAT 活性，但對肝臟中T-SOD、T-AOC、GSH-Px 活性均無顯著影響。相比對照組，添加100 mg/kg 蘆丁能夠顯著提高肝臟中CAT 活性。

表2 飼糧中添加蘆丁對湖羊肝臟抗氧化能力的影響

2.2 飼糧中添加蘆丁對湖羊腿肌營養(yǎng)成分的影響

2.2.1 飼糧中添加蘆丁對湖羊腿肌基本營養(yǎng)成分的影響由表3 可知，飼糧中添加蘆丁對湖羊腿肌中水分、粗蛋白和粗脂肪含量均無顯著影響。

表3 飼糧中添加蘆丁對湖羊腿肌基本營養(yǎng)成分的影響 %

2.2.2 飼糧中添加蘆丁對湖羊腿肌氨基酸的影響 由表4 可知，飼糧中添加蘆丁在湖羊腿肌中測出7 種必需氨基酸、9 種非必需氨基酸。添加蘆丁對總氨基酸、甜味氨基酸、苦味氨基酸、鮮味氨基酸、必需氨基酸和非必需氨基酸含量均無顯著影響，但各處理組中的苦味、甜味和鮮味氨基酸分別在腿肌中占氨基酸的總量均超過41.00%、32.98%和26.02%。

表4 飼糧中添加蘆丁對湖羊腿肌氨基酸的影響 g/kg 凍肉

2.2.3 飼糧中添加蘆丁對湖羊腿肌脂肪酸的影響 由表5 可知，飼糧中添加蘆丁對湖羊腿肌中測定的12 種脂肪酸的含量均無顯著影響，其中腿肌中含量較高的脂肪酸為油酸、棕櫚酸。

表5 飼糧中添加蘆丁對湖羊腿肌脂肪酸的影響 g/100g 凍肉

3 討 論

3.1 飼糧中添加蘆丁對湖羊機(jī)體抗氧化能力的影響 正常生理狀況下，動物體能夠維持機(jī)體自由基動態(tài)平衡，但在應(yīng)激狀態(tài)下，體內(nèi)自由基可使生物大分子發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)的氧化損傷，影響細(xì)胞的正常生理功能。研究發(fā)現(xiàn)黃酮類化合物不僅能作用于細(xì)胞內(nèi)抗氧化信號通路，激活相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子并調(diào)控下游基因的表達(dá)，還能螯合或結(jié)合金屬離子，清除自由基，抑制自由基生成相關(guān)酶和激發(fā)體內(nèi)抗氧化酶活性，改善動物生產(chǎn)性能，促進(jìn)SOD 將超氧自由基轉(zhuǎn)化成HO，并經(jīng)GSH-Px 和CAT 轉(zhuǎn)化為水，保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。而GSHPx 還能利用還原型谷胱甘肽清除過氧化物和有害代謝產(chǎn)物，中斷自由基鏈反應(yīng)，而CAT 通過清除HO抵御羥自由基對機(jī)體的潛在危害。Nirure 等研究表明，口服50 和100 mg/kg 蘆丁能提高大鼠肝臟的抗氧化能力。體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，添加100 μg/mL 蘆丁能提高奶牛乳腺上皮細(xì)胞的CAT 活性。同時(shí)，飼糧中添加500 和1 000 mg/kg 蘆丁能顯著增加斷奶仔鼠空腸CAT mRNA 表達(dá)量。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加蘆丁能夠提高肝臟中CAT 活性，增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力，這與羅永光、張佳琦等研究結(jié)果相似。蘆丁經(jīng)胃腸道轉(zhuǎn)運(yùn)或微生物降解后能保護(hù)肝臟及腸道黏膜，降低細(xì)胞的氧化應(yīng)激，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力，降低機(jī)體感染性疾病的風(fēng)險(xiǎn)。

3.2 飼糧中添加蘆丁對湖羊肌肉營養(yǎng)成分的影響 水分、粗蛋白質(zhì)和粗脂肪含量直接影響肉品的營養(yǎng)價(jià)值和風(fēng)味，其中水分含量和保水性呈負(fù)相關(guān)。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加蘆丁對腿肌中水分、粗蛋白、粗脂肪含量均無顯著影響，這與陳仁偉研究發(fā)現(xiàn)沙蔥黃酮對肉羊基本營養(yǎng)成分無影響的結(jié)果一致。反芻動物飼糧中的粗蛋白首先經(jīng)瘤胃微生物作用轉(zhuǎn)變?yōu)槲⑸锏鞍?，并通過胃腸吸收代謝轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟，參與養(yǎng)分循環(huán)供給和維持機(jī)體生命活動和正常代謝平衡。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)飼糧中添加蘆丁不會改變?nèi)赓|(zhì)中氨基酸的含量和組分，且腿肌中必需氨基酸/非必需氨基酸（EAA/NEAA）達(dá)到0.63以上，且必需氨基酸/總氨基酸（EAA/TAA）達(dá)到0.38以上，基本達(dá)到FAO/WHO 理想蛋白質(zhì)模式（EAA/NEAA 達(dá)到0.60 以上，且EAA/TAA 達(dá)到0.40 以上）的要求。腿肌中呈味氨基酸中苦味氨基酸含量最高，依次為甜味氨基酸和鮮味氨基酸，分別占腿肌氨基酸總量的40.97%、32.97%和26.06%以上，豐富的苦味氨基酸能起到預(yù)防脂肪肝、糖尿病、肥胖等疾病和降壓作用，有利于維護(hù)機(jī)體健康。

反芻動物產(chǎn)品中沉積的脂肪酸主要來源為飼糧中的脂肪酸、瘤胃微生物合成的脂肪酸和反芻動物自身合成的脂肪酸。脂肪酸體內(nèi)的沉積是衡量羊肉風(fēng)味、營養(yǎng)價(jià)值和食用價(jià)值的重要指標(biāo)，并受營養(yǎng)、基因、品種、性別、年齡等因素的影響，其中營養(yǎng)對調(diào)控肌肉脂肪代謝及機(jī)體抗氧化功能發(fā)揮主要作用。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加蘆丁對湖羊腿肌中12 種脂肪酸含量均無顯著影響，但含量最豐富的是單不飽和脂肪酸油酸，豐富的油酸具有降低血脂、膽固醇的功能。研究發(fā)現(xiàn)，飽和脂肪酸（SFA）能夠引起血液膽固醇和低密度脂蛋白（LDL-C）含量升高，過量的LDL-C 會導(dǎo)致血管壁增厚，導(dǎo)致血管堵塞，增加心血管疾?。ㄌ貏e是冠狀動脈硬化）的風(fēng)險(xiǎn)。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)飼糧中添加蘆丁對腿肌中SFA 含量無顯著影響，說明飼糧中添加蘆丁不會改變肌肉中SFA 含量。

4 結(jié) 論

在本試驗(yàn)條件下，飼糧中添加50 和100 mg/kg 蘆丁對湖羊腿肌中基本營養(yǎng)成分、氨基酸和脂肪酸含量均無顯著影響，但100 mg/kg 蘆丁能夠提高肝臟中CAT活性，增強(qiáng)肝臟抗氧化能力。