茶樹油飼料添加劑對(duì)肉仔雞生長性能、血清生化及免疫性能的影響

張玥，石青青，顧秋麗，劉夢月，楊琳燕，胡德寶，范惠章，馬學(xué)軍，馬吉飛*

（1.天津農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院/天津市農(nóng)業(yè)動(dòng)物繁育與健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300384；2.天津嘉喜諾生物科技有限公司，天津 300384；3.河北康達(dá)畜禽養(yǎng)殖有限公司，河北 廊坊 065000）

茶樹油是從互葉白千層樹枝葉中提取的揮發(fā)性油狀液體，其中具有多種天然活性物質(zhì)，主要包括4-松油醇、γ-松油醇、α-松油醇、1,8-桉葉油素、α-油烯等環(huán)烯烴類和烯醇類化合物[1]，具有較強(qiáng)的抗菌[2]、抗炎[3]、抗病毒[4]、抗寄生蟲[5]和調(diào)節(jié)免疫[6]等作用，具有極大的藥用價(jià)值。

在畜牧生產(chǎn)中使用茶樹油添加劑已逐步得到認(rèn)可，丁兆坤等[7]研究發(fā)現(xiàn)在飼糧中添加適量茶樹油可達(dá)到顯著提高羅非魚的增重率和豐滿度的效果，王淑楠等[8]的研究表明斷奶仔豬日糧中添加適量茶樹油能提高斷奶仔豬的肝臟及胸腺指數(shù)并降低仔豬腹瀉率，郭乙冰[9]的研究表明在日糧中添加茶樹油能夠提高贛西山羊臟器指數(shù)，提高山羊的肌肉品質(zhì)。綜上所述，茶樹油不僅可促進(jìn)畜禽生長，而且能改善畜禽肉類的營養(yǎng)價(jià)值，是一種具有發(fā)展前景的天然飼料添加劑。本試驗(yàn)擬通過研究茶樹油飼料添加劑對(duì)肉仔雞生長性能、血清生化指標(biāo)、臟器指數(shù)以及雞新城疫病毒、H9亞型禽流感病毒和傳染性法氏囊炎病毒抗體效價(jià)的影響，為茶樹油添加劑在肉仔雞生產(chǎn)中的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

試驗(yàn)用茶樹油原液，由天津中澳嘉喜諾生物科技有限公司提供，生產(chǎn)批號(hào)為20170501；茶樹油飼料添加劑，由天津農(nóng)學(xué)院研制（含茶樹油10%）；1日齡平均初始體重相近的羅斯308肉雞630只，由河北康達(dá)畜禽養(yǎng)殖有限公司提供；新流二聯(lián)油苗（H9）、新支二聯(lián)苗、Ⅳ系新城疫疫苗，由天津瑞普生物技術(shù)有限公司提供；雞新城疫、H9禽流感和法氏囊陽性血清及抗原，由中國獸藥監(jiān)察所提供；試驗(yàn)所用基礎(chǔ)日糧按照我國《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY/T 33—2004）[10]標(biāo)準(zhǔn)配制，飼料由河北康達(dá)畜禽科技有限公司提供，飼糧營養(yǎng)水平見表1。

表1 飼料營養(yǎng)水平保證值 %

2 方法

2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組

將1日齡、平均初始體重相近的羅斯308肉仔雞630只隨機(jī)分為7組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)15只雞。試 驗(yàn) 分0~7日齡、8~14日 齡、15~35日齡、36~42日齡4個(gè)階段進(jìn)行。7個(gè)組分別在飲水中添加0、50、100、200、400、800、1 600 mg·L-1茶樹油添加劑。試驗(yàn)雞采用三層籠養(yǎng)，自由采食與飲水。試驗(yàn)期42 d。按照肉仔雞常規(guī)程序免疫和飼養(yǎng)管理。

2.2 指標(biāo)測定

2.2.1 生產(chǎn)性能

每日觀察各組肉仔雞的淘汰情況，記錄成活率。試驗(yàn)開始時(shí)稱量肉仔雞初始體重，試驗(yàn)期每日統(tǒng)計(jì)飼料消耗量，于35日齡測定肉仔雞空腹體重，計(jì)算1~35日齡平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料重比（F/G）。各指標(biāo)計(jì)算公式：成活率=成活數(shù)量/總數(shù)量×100%；平均日增重（ADG）=肉仔雞總增重/飼喂天數(shù)；平均日采食量（ADFI）=各組總飼料消耗量/飼喂日數(shù)；料重比（F/G）=平均日采食量/平均日增重。

2.2.2 血清生化指標(biāo)

分別于14日齡、35日齡，每組隨機(jī)取6只肉仔雞，翅下采血制備樣品。14日齡時(shí)測定血清中肌酐（CRE）和谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT），35日齡時(shí)加測血清白蛋白（ALB）、堿性磷酸酶（ALP）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、血糖（GLU）、磷（P）、總蛋白（TP）和尿素（UREA）。

2.2.3 臟器指數(shù)

于35日齡時(shí)，每組隨機(jī)取6只肉仔雞，屠宰后取心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟及法氏囊稱重，計(jì)算各臟器指數(shù)。

2.2.4 抗體水平

采集7日齡、14日齡、35日齡和42日齡肉雞血清，對(duì)雞新城疫病毒（NDV）抗體、H9禽流感病毒（AIV）抗體和傳染性法氏囊炎病毒（IBDV）抗體水平進(jìn)行檢測，檢測NDV、AIV抗體采取血凝抑制法，取潔凈的微量反應(yīng)板，每孔加50 μL生理鹽水，第11孔加100 μL稀釋液。取被檢血清50 μL加入第1孔并混合均勻，從第1孔吸出50 μL加入第2孔，如此進(jìn)行倍比稀釋到第10孔，從第10孔吸出50 μL棄去，第11孔和第12孔空白。給1~11孔各加4單位的抗原50 μL，第11孔不加血清，作為抗原對(duì)照，第12孔不加血清和抗原作為紅細(xì)胞對(duì)照。振蕩混勻，置37℃溫箱中或室溫下作用20~30 min。加1%紅細(xì)胞懸液，每孔加50 μL，置37℃作用20~30 min后觀察結(jié)果。待第11孔抗原對(duì)照孔的紅細(xì)胞均勻鋪在管壁（100%凝集），檢查各孔的紅細(xì)胞抑制情況。將反應(yīng)板45°傾斜，沉于管底的紅細(xì)胞若沿斜面流動(dòng)則表明紅細(xì)胞未被或不完全被病毒凝集，若孔底紅細(xì)胞鋪平凝固，傾斜后不流動(dòng)則表明紅細(xì)胞被病毒凝集，以完全抑制紅細(xì)胞凝集的最高血清稀釋倍數(shù)作為待檢血清抗體效價(jià)。IBDV抗體檢測采取瓊脂擴(kuò)散法，使用含8%的NaCl磷酸緩沖液制備瓊脂濃度1%、厚度3~4 mm的瓊脂板，梅花形打孔，將中心孔加IBDV抗原20 μL，周圍孔加入20 μL倍比稀釋的被檢血清，留1孔加雙蒸水作空白對(duì)照。37℃孵育24~48 h，觀察抗原抗體產(chǎn)生的白色沉淀線。

2.3 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，以P＜0.05為顯著水平，數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

3 結(jié)果與分析

3.1 生產(chǎn)性能

飲水中添加茶樹油添加劑對(duì)肉仔雞生產(chǎn)性能的影響見表2和表3。由表2和表3可知，35日齡時(shí)試驗(yàn)5組、試驗(yàn)6組肉仔雞體重明顯低于對(duì)照組、試驗(yàn)1組與試驗(yàn)2組（P＜0.05），而試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組與對(duì)照組相比沒有顯著差異（P＞0.05）。試驗(yàn)6組平均日增重、平均日采食量顯著低于對(duì)照組及試驗(yàn)1~4組（P＜0.05）；料重比提高，與其他組相比差異顯著（P＜0.05）。

表2 茶樹油添加劑對(duì)肉仔雞1~35日齡體重的影響 g

表3 茶樹油添加劑對(duì)1~35日齡肉仔雞生產(chǎn)性能的影響

3.2 血清生化指標(biāo)

飲水中添加茶樹油添加劑對(duì)肉仔雞血清生化指標(biāo)的影響見表4。由表4可知，14日齡時(shí)，各組之間CRE指標(biāo)無顯著差異（P＞0.05），試驗(yàn)3組ALT顯著高于對(duì)照組、試驗(yàn)1組、試驗(yàn)4組和試驗(yàn)5組（P＜0.05）。35日齡時(shí)，各組間ALB、ALP和AST指標(biāo)并無顯著差異（P＞0.05）；各試驗(yàn)組CRE指標(biāo)顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）；試驗(yàn)5組、試驗(yàn)6組ALT指標(biāo)顯著高于其他各組（P＜0.05）；試驗(yàn)6組GLU指標(biāo)顯著高于試驗(yàn)3組和試驗(yàn)4組（P＜0.05），其P、TP指標(biāo)則顯著高于包括對(duì)照組的其他各組（P＜0.05）；試驗(yàn)4組的TP指標(biāo)則顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）；所有試驗(yàn)組UREA指標(biāo)均低于對(duì)照組，尤其試驗(yàn)1組、試驗(yàn)4組和試驗(yàn)6組與對(duì)照組相比有顯著差異（P＜0.05）。

表4 茶樹油添加劑對(duì)肉仔雞血清生化指標(biāo)的影響

3.3 臟器指數(shù)

飲水中添加茶樹油添加劑對(duì)肉仔雞臟器的指數(shù)影響見表5。

由表5中數(shù)據(jù)可知，心臟指數(shù)試驗(yàn)6組顯著高于試驗(yàn)2~4組（P＜0.05）；肝臟和肺臟指數(shù)試驗(yàn)5組顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；各組間肉仔雞脾臟指數(shù)無顯著差異（P＞0.05）；腎臟指數(shù)試驗(yàn)4組和試驗(yàn)5組顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；試驗(yàn)5組的法氏囊指數(shù)顯著高于除對(duì)照組和試驗(yàn)6組外的其他各組（P＜0.05），試驗(yàn)6組顯著高于試驗(yàn)2組（P＜0.05）。

表5 茶樹油添加劑對(duì)35日齡肉仔雞臟器指數(shù)的影響

3.4 抗體水平

肉仔雞血清抗體效價(jià)檢測結(jié)果見表6~表8，14日齡時(shí)試驗(yàn)5組和試驗(yàn)6組AIV抗體水平顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），試驗(yàn)6組NDV抗體水平顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），試驗(yàn)4組和5組NDV抗體水平顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）；35日齡時(shí)，試驗(yàn)1~3組的AIV抗體水平顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），NDV、IBDV抗體水平各組間無顯著差異（P＞0.05）；42日齡時(shí)，試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組和試驗(yàn)5組的AIV抗體水平顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），除試驗(yàn)4組和試驗(yàn)6組NDV抗體水平顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）外，其他各組NDV與IBDV抗體水平與對(duì)照組無顯著差異（P＞0.05）。

表6 茶樹油添加劑對(duì)肉仔雞血清AIV抗體水平的影響 lb

表7 茶樹油添加劑對(duì)肉仔雞血清NDV抗體水平的影響 lb

表8 茶樹油添加劑對(duì)肉仔雞血清IBDV抗體水平的影響 lb

4 討論

4.1 茶樹油添加劑對(duì)肉仔雞生產(chǎn)性能的影響

植物精油是植物生長過程中產(chǎn)生的天然油性物質(zhì)，含有大量的萜、烯、酚和酮等生物活性成分，作為添加劑能夠?qū)?xì)菌進(jìn)行選擇性抑制[11]，其獨(dú)特的氣味能刺激禽類采食，改善腸道微生物群結(jié)構(gòu)以及絨毛形態(tài)[12]，提高禽類腸道內(nèi)消化酶的活性[13]，從而提高機(jī)體對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，有利于禽類生長。有研究發(fā)現(xiàn)使用含有香芹酚和百里香酚成分的包被植物精油能夠提高麻黃肉雞全期末重[14]，飼糧中添加復(fù)合植物精油可提高中后期肉雞體重、增重及飼料轉(zhuǎn)化率[15]。在本試驗(yàn)中，35日齡時(shí)試驗(yàn)1組和試驗(yàn)2組肉仔雞的體重與對(duì)照組相比沒有顯著差異，除試驗(yàn)6組外各組之間料重比的差異也并不顯著。然而隨著茶樹油添加劑劑量增加，肉仔雞體重呈下降趨勢，飼料的轉(zhuǎn)化率降低，添加劑量至1 600 mg·L-1時(shí)肉仔雞料重比與其他各組相比顯著升高，可能是因?yàn)槿庾须u在飲水過程中攝入過量油劑導(dǎo)致機(jī)體代謝負(fù)擔(dān)增加，對(duì)生長發(fā)育有一定負(fù)面影響。但整體看來，當(dāng)茶樹油添加劑使用量低于100 mg·L-1時(shí)，肉仔雞的料重比和末期體重與對(duì)照組相比并沒有顯著差異。

4.2 茶樹油添加劑對(duì)肉仔雞血清生化指標(biāo)的影響

血清生化指標(biāo)能夠反映動(dòng)物機(jī)體代謝和組織細(xì)胞通透性[16]。ALT和AST為細(xì)胞內(nèi)酶，正常情況下多存在于肝細(xì)胞與心肌細(xì)胞，而在血清中的活性很低。但當(dāng)機(jī)體組織細(xì)胞受損造成通透性增大時(shí)，血清中轉(zhuǎn)氨酶水平會(huì)升高，因此轉(zhuǎn)氨酶的活性能夠反映機(jī)體肝臟和心臟的健康狀況。有研究表明使用適量植物精油復(fù)合物能夠增強(qiáng)肝細(xì)胞膜的穩(wěn)定性，降低血清轉(zhuǎn)氨酶活性[17]。本試驗(yàn)中，在35日齡時(shí)試驗(yàn)1~4組ALT與AST水平與對(duì)照組相比沒有顯著差異，而當(dāng)添加劑劑量超過400 mg·L-1時(shí)，試驗(yàn)組ALT水平顯著高于對(duì)照組，可能與攝入茶樹油過量造成機(jī)體肝臟細(xì)胞損傷有關(guān)。ALP由成骨細(xì)胞和肝膽合成分泌，能夠反映骨組織新陳代謝的情況[18]。試驗(yàn)中試驗(yàn)1~4組的ALP水平雖與對(duì)照組相比沒有顯著差異，但均高于對(duì)照組，說明在適當(dāng)劑量下使用茶樹油添加劑對(duì)肉仔雞的骨骼發(fā)育具有一定作用。血清中TP、ALB含量常作為反映動(dòng)物機(jī)體蛋白質(zhì)代謝水平和氨基酸平衡狀況的指標(biāo)[19]。試驗(yàn)中試驗(yàn)1~3組的TP含量與對(duì)照組相比雖差異不顯著但均高于對(duì)照組；而各試驗(yàn)組的ALB水平與對(duì)照組相比沒有顯著差異，說明適當(dāng)劑量的茶樹油添加劑能夠在一定程度上提高機(jī)體總蛋白生成效率，促進(jìn)肉仔雞的生長發(fā)育。CRE是在肌肉中從磷酸肌酸轉(zhuǎn)化而成，其血清水平取決于機(jī)體內(nèi)肌酐的產(chǎn)量和腎臟代謝能力。在本試驗(yàn)中各試驗(yàn)組的CRE水平均顯著低于對(duì)照組，說明添加茶樹油對(duì)肉仔雞腎臟排氮功能有一定影響。UREA是蛋白質(zhì)代謝的產(chǎn)物，如果機(jī)體UREA水平較高，表示機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)分解速度變慢，腎功能發(fā)生障礙[20]。結(jié)果表明，各試驗(yàn)組的UREA含量全部低于對(duì)照組，證明使用茶樹油在一定程度能夠促進(jìn)腎臟代謝，提高蛋白質(zhì)分解效率。GLU作為體內(nèi)代謝過程中的重要物質(zhì)，P是機(jī)體參與代謝過程、調(diào)節(jié)酸堿平衡和構(gòu)成組織的重要物質(zhì)，兩者都是能夠反映機(jī)體能量代謝情況的指標(biāo)。試驗(yàn)中，35日齡時(shí)，試驗(yàn)1~5組的GLU與P水平與對(duì)照組之間沒有顯著差異，說明在一定劑量范圍內(nèi)使用茶樹油對(duì)肉仔雞的整體能量代謝情況并無影響。

4.3 茶樹油添加劑對(duì)肉仔雞臟器指數(shù)的影響

研究表明在肉雞飼養(yǎng)過程中添加抗氧劑能夠減輕自由基對(duì)機(jī)體的損傷，有效地預(yù)防和治療例如腹水綜合征等肺動(dòng)脈高壓等血管性疾病[21]。本試驗(yàn)中試驗(yàn)1~4組在肺臟指數(shù)方面與對(duì)照組沒有顯著差異，而心臟指數(shù)都低于對(duì)照組，這可能與茶樹油對(duì)機(jī)體內(nèi)自由基的清除和抗氧化能力增強(qiáng)有關(guān)。肝臟是消化系統(tǒng)中最大的消化腺，具有儲(chǔ)存糖元、分泌膽汁、合成分泌性蛋白質(zhì)等功能[22]。有研究表明[8]使用茶樹油飼喂的斷奶仔豬其肝臟及胸腺指數(shù)有所提高。在本試驗(yàn)中，除試驗(yàn)1組外，其他試驗(yàn)組隨著添加劑用量增大肝臟指數(shù)都高于對(duì)照組，可能是因?yàn)椴铇溆透缓妮葡╊惡痛碱惖榷喾N有效活性成分對(duì)機(jī)體具有調(diào)節(jié)代謝的作用。腎臟是機(jī)體內(nèi)重要的代謝器官，負(fù)責(zé)將代謝產(chǎn)物排出體外，維持機(jī)體水分、電解質(zhì)和酸堿的平衡[23]。在本試驗(yàn)中，雖然試驗(yàn)1~3組的腎臟指數(shù)與對(duì)照組之間沒有顯著差異，但隨著茶樹油添加劑用量的增加，試驗(yàn)組的腎臟指數(shù)也隨之升高，試驗(yàn)4組和5組腎臟指數(shù)與對(duì)照組相比出現(xiàn)顯著差異，說明茶樹油對(duì)促進(jìn)動(dòng)物腎臟的生長、維持動(dòng)物機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定有一定的積極作用。法氏囊是禽類中樞免疫器官，脾臟屬于外周免疫器官。研究結(jié)果表明，澳洲茶油精油能夠在肉雞養(yǎng)殖中后期促進(jìn)肉雞法氏囊、脾臟的發(fā)育[24]。在本試驗(yàn)中，使用茶樹油添加劑的試驗(yàn)組脾臟指數(shù)與對(duì)照組相比雖無顯著差異，但基本都高于對(duì)照組，試驗(yàn)5組（800 mg·L-1）和試驗(yàn)6組（1 600 mg·L-1）的法氏囊指數(shù)高于對(duì)照組但差異并不顯著，說明茶樹油可在一定程度上促進(jìn)肉仔雞脾臟和法氏囊發(fā)育。

4.4 茶樹油添加劑對(duì)肉仔雞AIV、NDV和IBDV抗體效價(jià)的影響

有研究表明，在飼糧中添加50~150 mg·kg-1桉樹精油可提高肉雞生長性能，顯著提高肉雞的抗氧化機(jī)能，提高肉雞免疫器官指數(shù)和血清新城疫抗體效價(jià)[25]；在肉仔雞日糧中添加牛至油，精油試驗(yàn)組肉雞血清中新城疫抗體效價(jià)顯著提高，免疫器官指數(shù)相對(duì)增加[26]。本試驗(yàn)在注射新流二聯(lián)油苗7 d后，試驗(yàn)5組和試驗(yàn)6組肉仔雞AIV抗體水平基本高于對(duì)照組，但差異不顯著；42日齡時(shí)所有試驗(yàn)組AIV抗體水平基本皆高于對(duì)照組；而接種Ⅳ系新城疫疫苗后，7日齡時(shí)除試驗(yàn)6組外其他各試驗(yàn)組NDV抗體水平與對(duì)照組相比沒有顯著差異，42日齡時(shí)試驗(yàn)1~3組和試驗(yàn)5組NDV抗體水平與對(duì)照組沒有顯著差異。IBDV主要感染未成熟的B細(xì)胞或B細(xì)胞前體細(xì)胞[27]，而法氏囊是B細(xì)胞發(fā)育成熟的場所，其發(fā)育情況直接關(guān)系到肉雞B細(xì)胞的增殖與發(fā)育。試驗(yàn)中42日齡時(shí)各試驗(yàn)組IBDV抗體水平檢測結(jié)果基本全部高于對(duì)照組，說明使用茶樹油添加劑飼喂肉仔雞一定時(shí)間后能夠促進(jìn)肉雞B細(xì)胞的增殖與發(fā)育。綜合來看，茶樹油添加劑的使用劑量為50~200 mg·L-1時(shí)對(duì)肉仔雞抗體效價(jià)有提升效果。

5 結(jié) 論

試驗(yàn)結(jié)果表明，在飲水中加入50~400 mg·L-1茶樹油添加劑對(duì)肉仔雞生產(chǎn)性能無有益影響，但能夠促進(jìn)肉仔雞生長發(fā)育，增強(qiáng)肉仔雞免疫能力；茶樹油添加劑劑量超過400 mg·L-1時(shí)則會(huì)超過肉仔雞耐受量，造成不良反應(yīng)。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，肉仔雞飲水中茶樹油添加劑的適宜添加量應(yīng)低于200 mg·L-1。