高氏盆炎方三號(hào)對(duì)慢性盆腔炎大鼠炎癥介質(zhì)和生殖功能的影響

郝艷紅 高 慧 劉玉蘭

(承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，承德，067000)

盆腔炎性疾病(Pelvic Inflammatory Disease，PID)是指女性上生殖道的一組感染性疾病，包括子宮內(nèi)膜炎，子宮體炎，輸卵管炎，卵巢炎和盆腔腹膜炎等[1]。PID是我國(guó)常見的一種婦科疾患，是不孕癥的常見病因之一。當(dāng)患者急性盆腔炎癥未徹底治愈或勞累體虛或因病原體對(duì)藥物不敏感以致病情遷延可導(dǎo)致盆腔炎性疾病后遺癥(Sequelae of Pelvic Inflammatory Disease,SPID)即慢性盆腔炎(Chronic Pelvic Inflammatory Disease，CPID)，而長(zhǎng)期慢性炎癥存在或盆腔炎性疾病反復(fù)發(fā)作累及輸卵管，導(dǎo)致輸卵管性不孕。有研究報(bào)道，PID致輸卵管阻塞引起的不孕占20%～40%，且不孕癥的發(fā)生與患者PID的發(fā)作次數(shù)有明顯相關(guān)性，發(fā)作次數(shù)增加，不孕發(fā)生率隨之上升；病程越長(zhǎng)，不孕發(fā)生率越高，嚴(yán)重影響育齡期女性的生殖健康[2-3]。中醫(yī)無“盆腔炎”之病名，可歸屬于“不孕”“帶下病”“婦人腹痛”“癥瘕”等疾病范疇。臨床上高氏盆炎方三號(hào)治療CPID及炎性不孕取得了較好的效果，本研究通過苯酚凝膠聯(lián)合機(jī)械損傷制備大鼠CPID模型，觀察高氏盆炎方三號(hào)對(duì)CPID大鼠子宮組織病理及炎癥介質(zhì)的影響，并進(jìn)一步觀察其對(duì)盆腔炎大鼠生殖功能的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 健康雌性SD大鼠70只，體質(zhì)量220～250 g，無特定病原體(Specific Pathogen Free,SPF)清潔級(jí)，大鼠及飼料由河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室提供，動(dòng)物飼養(yǎng)于自然光照條件好，室溫在21～23 ℃的環(huán)境中。許可證號(hào)：SCXK(冀)2013-1003，批號(hào)：1801215。本研究獲承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利和倫理原則。

1.1.2 藥物 人胎盤組織液2 mL/支×6支/盒(湖南一格制藥有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：201705014)；蒲苓盆炎康顆粒(翔宇藥業(yè)股份有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：170724)。高氏盆炎方三號(hào)中藥組成：皂角刺30 g、當(dāng)歸12 g、紅花10 g、蒲公英30 g、穿山甲3 g、柴胡6 g、白芍10 g、香附10 g、山藥10 g、青皮10 g、陳皮10 g、路路通10 g、通草10 g。中藥飲片由石家莊市中醫(yī)院中藥房提供，濃縮成生藥濃度為3.4 g/mL的中藥液。

1.1.3 試劑與儀器 GM-CSF試劑盒(上海森雄科技事業(yè)有限公司，批號(hào)：SXR006)、IL-4試劑盒(上海森雄科技事業(yè)有限公司，批號(hào)：SXR030)；核因子κB antibody(北京博奧生物，批號(hào)：bs-0465R)；ABC Kit(Vector公司，美國(guó)，批號(hào)：PK-4002)；DAB Kit(北京中杉金橋，批號(hào)：zlI-9610)。顯微鏡(Olympus Corporation，日本，型號(hào)：DP73)；離心機(jī)(上海安亭，型號(hào)：TDL-5-A)；酶標(biāo)儀(雷勃公司，芬蘭，型號(hào)：MK3)；恒溫振蕩器(常州國(guó)華，型號(hào)：SHA-B)；顯微圖像分析系統(tǒng)(武漢同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)，型號(hào)：HMIAS-2000)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國(guó)ABI，7500fast)；基因擴(kuò)增儀(PE公司，美國(guó)，型號(hào)：PE～9600)。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d，連續(xù)進(jìn)行陰道脫落細(xì)胞學(xué)涂片，光鏡下觀察，篩選動(dòng)情周期正常的雌性大鼠125只進(jìn)入正式實(shí)驗(yàn)。機(jī)械損傷聯(lián)合化學(xué)燒傷造模[4]。除空白組(17只大鼠)外，其余大鼠進(jìn)行造模，術(shù)前禁食水12 h，稱重，10%的水合氯醛以大鼠體質(zhì)量300 g/mL腹腔注射麻醉，麻藥起效后，固定、備皮、消毒，于大鼠下腹正中作1 cm左右大小的切口，尋找并暴露子宮。用1 mL注射器取25%的苯酚膠漿劑，自藥效組大鼠左側(cè)子宮進(jìn)針，向輸卵管—卵巢方向緩慢注入苯酚膠漿0.06 mL。生殖組大鼠自雙側(cè)子宮分別進(jìn)針，向雙側(cè)輸卵管—卵巢方向緩慢注入苯酚膠漿各0.06 mL，造模過程中用注射器針頭輕輕劃傷大鼠宮內(nèi)膜，夾閉針孔防止溶液流出，切口縫合、消毒，抬高大鼠臀部防止膠漿流出，待大鼠蘇醒。造模過程中隨機(jī)選取6只大鼠，取子宮組織，蘇木精-伊紅(Hematoxylin Eosin，HE)染色，造模第10天，光鏡下觀察大鼠出現(xiàn)子宮腔壁增厚，組織結(jié)構(gòu)紊亂，腺體紊亂萎縮變形，可見大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，內(nèi)膜充血水腫等病理改變情況，以確定造模成功。按照隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行分組，分為模型組、高氏盆炎方三號(hào)高、中、低劑量組(中藥高、中、低劑量組)、蒲苓組、胎盤組；藥效組每組10只，生殖組每組7只(共119只大鼠)。

1.2.2 給藥方法 空白組(自由食水)模型組給與生理鹽水1 mL/100 g，高氏盆炎方三號(hào)高、中、低劑量組每天分別給予34 g/kg、17 g/kg、8.5 g/kg高氏盆炎方三號(hào)藥液(以生藥計(jì)，根據(jù)每千克體質(zhì)量用藥量的人鼠比例換算)；蒲苓組給予3 g/kg蒲苓盆炎康顆粒，胎盤組肌內(nèi)注射人胎盤組織液1 mL/kg，連續(xù)用藥20 d。

1.2.3 合籠方法 給藥20 d后，觀察大鼠動(dòng)情周期，按照雌雄比7﹕2進(jìn)行合籠，即每7只雌性大鼠隨機(jī)與2只健康同周齡雄鼠關(guān)在同一籠子里交配[5]。由于大鼠性周期為4～5 d，其孕期19～23 d，平均21 d，以同籠飼養(yǎng)試受孕時(shí)間60 d為限(即大鼠12個(gè)動(dòng)情周期)。每天上午8:00開始進(jìn)行陰道涂片觀察及陰栓檢查，并描述、記錄觀察內(nèi)容。觀察各組大鼠受孕情況，受孕成功的雌鼠單獨(dú)喂養(yǎng)，而雄鼠仍可與其余雌鼠交配。

1.2.4 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.2.4.1 藥效組 1)在末次給藥治療24 h后，麻醉大鼠(10%水合氯醛)，腹主動(dòng)脈取血后離心10 min(3 000 r/min，r=10 cm)，取上層血清；分離大鼠雙子宮稱重，后取左側(cè)部分組織置于多聚甲醛中固定保存，一部分裝到EP管中，-80 ℃留存待測(cè)。2)取大鼠雙側(cè)子宮組織，稱濕質(zhì)量，計(jì)算子宮腫脹度(子宮腫脹度=左側(cè)子宮質(zhì)量-右側(cè)子宮質(zhì)量；抑制率模型組子宮平均腫脹度-給藥組子宮平均腫脹度/模型組子宮平均腫脹度×100%。將左側(cè)子宮組織標(biāo)本固定、包埋、切片，染色，光鏡下觀察病理改變[6-7]。3)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法法檢測(cè)血清粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage Colony StimulatingFactor，GM-CSF)、白細(xì)胞介素(Interleukin，IL)-4水平。嚴(yán)格按試劑盒說明書逐步操作進(jìn)行檢測(cè)。4)免疫組織化學(xué)法和實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定核因子κB蛋白和基因表達(dá)。5)核因子κB蛋白表達(dá)：將石蠟切片脫蠟水化，磷酸鹽緩沖液(Phosphate-Buffered Saline,PBS)溶液洗3次(5 min)，于3% H2O2溶液(室溫中)靜置15 min后PBS洗3次(5 min)；非免疫血清封閉40 min；加已稀釋I抗(4 ℃過夜)→復(fù)溫→PBS洗3次(5 min)；加已稀釋Ⅱ抗，37 ℃孵育20 min，PBS洗3次(5 min)；加SP，37 ℃孵育15 min，PBS洗3次(5 min)；加入顯色劑(DAB)顯色(5 min)后自來水沖洗，蘇木精復(fù)染、脫水、透明、中性樹膠封片，顯微鏡觀察，拍照，用HMIAS-2000高清晰度彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)計(jì)算平均光密度值(IOD)，陽(yáng)性表達(dá)則可見棕黃色或棕褐色顆粒染色部位。6)核因子κB mRNA表達(dá)水平：取-80 ℃留存大鼠子宮組織粉碎搖勻添加RNA提取試劑，提取總RNA，測(cè)RNA濃度后，取總RNA 2 μg，先在含寡dT纖維素引物、脫氧核苷三磷酸的混合液中65 ℃ 5 min使模板RNA變性后，冰上迅速冷卻。添加反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液(包括PrimeScript II Buffer，PrimeScript II RTase，Rnase Inhibitor等)，用焦碳酸二乙酯水將反應(yīng)液容積增至20 μL，緩慢搖勻后離心，置于PCR儀中，42 ℃靜置45 min合成cDNA，95 ℃置5 min使酶失活，冷卻后于-20 ℃保存?zhèn)溆?。使用兩步法反?yīng)程序，95 ℃，10 min預(yù)變性；而后40個(gè)循環(huán)反應(yīng)：95 ℃ 15 s。進(jìn)行RT-PCR結(jié)果分析，擴(kuò)增完畢后，得到核因子κB基因及內(nèi)參基因GAPDH的Ct值，△Ct=核因子κB基因的Ct值-內(nèi)參基因GAPDH的Ct值，得出核因子κB基因的Q值及Q均值(Q=2-△Ct)，最后求得所需的RQ值(即核因子κB基因表達(dá)的相對(duì)定量值，RQ=Q值/Q均值)，將RQ統(tǒng)計(jì)分析。

1.2.4.2 生殖組 觀察60 d(約大鼠12個(gè)動(dòng)情周期)內(nèi)各組大鼠一般情況，受孕率，產(chǎn)仔數(shù)等變化。

表1 引物序列

2 結(jié)果

2.1 藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 各組大鼠子宮組織病理學(xué)表現(xiàn) 空白組：子宮壁結(jié)構(gòu)清晰完整，腺體完整，子宮內(nèi)膜無充血及水腫，未見炎癥細(xì)胞。模型組：子宮腔壁增厚，組織結(jié)構(gòu)紊亂，腺體紊亂萎縮變形，可見大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，內(nèi)膜充血水腫明顯。中藥高劑量組：炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)較少，余同空白組。中藥中劑量組：部分腔壁稍增厚，內(nèi)見少量炎癥細(xì)胞輕度浸潤(rùn)，稍有內(nèi)膜充血、水腫。中藥低劑量組及蒲苓組：腔壁輕度增厚，結(jié)構(gòu)雜亂，內(nèi)膜充血、水腫，全層可見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。胎盤組：部分可見少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。

圖1 光鏡下各組大鼠子宮形態(tài)學(xué)變化(HE染色，×400)

2.1.2 各組大鼠血清GM-CSF、IL-4的水平比較 與模型組比較，其余各組大鼠血清GM-CSF水平均明顯降低，IL-4水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；中藥高劑量組血清GM-CSF及IL-4水平與空白組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；中藥中、低劑量組大鼠與空白組大鼠比較，血清GM-CSF水平升高，血清IL-4水平降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；中藥高劑量組與蒲苓組及胎盤組比較，GM-CSF表達(dá)降低，IL-4水平明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；中藥中、低劑量組大鼠血清GM-CSF及IL-4水平與蒲苓組及胎盤組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。見表2。

表2 各組大鼠血清GM-CSF、IL-4的水平比較

2.1.3 各組大鼠子宮組織核因子κB蛋白及mRNA表達(dá)水平比較 與模型組比較，其余各組大鼠子宮組織核因子κB蛋白及核因子κB mRNA表達(dá)明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；與空白組比較，中藥低劑量組大鼠子宮核因子κB蛋白及核因子κB mRNA表達(dá)明顯上升，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；空白組大鼠子宮組織核因子κB蛋白及核因子κB mRNA表達(dá)水平與中藥高、中劑量組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；中藥高、中、低劑量組大鼠子宮組織核因子κB蛋白及核因子κB mRNA表達(dá)水平與胎盤組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；中藥高劑量組大鼠子宮組織核因子κB蛋白及核因子κB mRNA表達(dá)水平降低，與蒲苓組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；蒲苓組大鼠子宮組織核因子κB蛋白及核因子κB mRNA表達(dá)水平與高氏盆炎方三號(hào)中、低劑量組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3及圖2。

表3 各組大鼠子宮組織核因子κB蛋白及基因表達(dá)水平

圖2 各組核因子κB蛋白表達(dá)(免疫組織化學(xué)染色，×400)

2.2 生殖組實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 第1～10天受孕率 觀察雌雄合籠第1～10天(即大鼠2個(gè)性周期)受孕情況，空白組受孕率為100%，模型組受孕率為0，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型組比較，中藥高、中低劑量組及胎盤組第1～10天受孕率明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；中藥高、中、低劑量組第1～10天受孕率與對(duì)照組、胎盤組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與其他各給藥組比較，蒲苓組第1～10天受孕率低于中藥各劑量組，且較空白組及中藥組受孕時(shí)間后延。

2.2.2 總?cè)焉锫?試受孕60 d后，模型組7只雌鼠仍未受孕，與模型組比較，各給藥組60 d的總體妊娠率明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；中藥高、中、低劑量組及胎盤組大鼠60 d內(nèi)全部受孕，妊娠率達(dá)到100%，蒲苓組僅有1只未孕，總?cè)焉锫蔬_(dá)到85.7%(1只受孕中期死亡，但總?cè)焉锫嗜悦黠@高于模型組)。見表4。

表4 生殖組各組大鼠受孕率情況(%，n=7)

2.2.3 子鼠情況 模型組受孕率為0，產(chǎn)子數(shù)為0?？瞻捉M、中藥高劑量組產(chǎn)仔數(shù)、平均產(chǎn)仔數(shù)較多，各組子鼠存活率較高(93.1～98.7%)。各組平均產(chǎn)仔數(shù)與模型組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；中藥中、低劑量組平均產(chǎn)仔數(shù)低于空白組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，空白組平均產(chǎn)仔數(shù)與中藥高劑量組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表5。

表5 生殖組各組大鼠子數(shù)情況(n=7)

3 討論

近年CPID發(fā)病率逐年上升，為婦科常見及多發(fā)病。而不孕癥是指男女雙方同居1年以上，有正常的性生活且未采取任何避孕措施，女性仍未受孕，或曾有過妊娠，之后未避孕1年以上而未再妊娠。不孕癥是婦科常見、多發(fā)且難治性疾病。不孕癥的病因復(fù)雜多樣，近年來隨著人工流產(chǎn)術(shù)等宮腔操作次數(shù)的增加、工作節(jié)奏的加快、急性盆腔炎未能得到及時(shí)有效治療以及性傳播疾病的增加，導(dǎo)致盆腔炎性不孕的發(fā)病率也隨之上升，其中PID是導(dǎo)致輸卵管性不孕的主要原因。西醫(yī)治療PID在急性期以抗生素治療為主，后期常采用手術(shù)或輔助生殖技術(shù)治療，西醫(yī)手術(shù)治療可縮短治療時(shí)間，但對(duì)機(jī)體損害相對(duì)較大，輸卵管疏通后仍有再次粘連或堵塞的風(fēng)險(xiǎn)。中醫(yī)多靶點(diǎn)治療可促進(jìn)患者整體恢復(fù)、預(yù)防術(shù)后并發(fā)癥，提高受孕率。在治療盆腔炎及盆腔炎性不孕有其獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。

中醫(yī)認(rèn)為本病關(guān)鍵是“瘀”，“瘀”既是疾病的病理產(chǎn)物，又是致病因素，病機(jī)為邪(寒熱濕毒)阻沖任氣機(jī)，氣滯血瘀，胞脈瘀阻不通。高氏盆炎方三號(hào)重用活血化瘀、軟堅(jiān)散結(jié)，消癥通絡(luò)的皂角刺、穿山甲、當(dāng)歸、紅花、路路通起到抗粘連作用。葉天士曾云“女子以肝為先天”，方中柴胡、白芍、香附、青皮行氣疏肝，調(diào)情志，主要針對(duì)女性生理特點(diǎn)，且因肝脈過陰器，又有“經(jīng)脈所過，主治所及”，選用入肝經(jīng)中藥，引藥入位，可治療盆腔疾病，疏通輸卵管治療不孕?，F(xiàn)代藥理研究表明，理氣藥能夠?qū)節(jié)B出和增生性炎癥，增強(qiáng)機(jī)體的免疫力，又具明顯鎮(zhèn)痛作用[8]。方中山藥、陳皮能調(diào)和脾胃以祛濕，一則健脾扶正，正氣強(qiáng)則邪氣消，提高機(jī)體免疫力，防止慢性炎癥急性發(fā)作；二則脾胃強(qiáng)則能受納藥物(防止活血化瘀、軟堅(jiān)散結(jié)藥損傷脾胃)。另外加入具有清熱解毒之功的蒲公英、通草，起到抗炎作用，避免慢性炎癥急性發(fā)作導(dǎo)致疾病進(jìn)展。研究表明，清熱解毒類中藥有多種抗炎成分，它們通過多種途徑發(fā)揮抗炎作用[9]。高氏盆炎方三號(hào)切中病機(jī)，臨床中除用來治療CPID外，在治療CPID合并輸卵管阻塞和輸卵管阻塞性不孕癥等方面具有優(yōu)勢(shì)。

CPID存在不同程度的炎癥損傷，前期以組織充血、腫脹、滲出等病理改變?yōu)橹鳎笃跁?huì)呈現(xiàn)不同程度增生、粘連及瘢痕的表現(xiàn)，不僅容易造成盆腔粘連，還容易造成輸卵管粘連阻塞，最終導(dǎo)致不孕發(fā)生。高慧教授[10]根據(jù)其病理特點(diǎn)將前者定義為“濕性炎癥”，如盆腔積液，輸卵管積液、積膿，后者則稱為“干性炎癥”，如盆腔粘連、輸卵管不通，輸卵管阻塞等。本實(shí)驗(yàn)中，藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，各給藥組較模型組大鼠子宮腫脹度減輕，光鏡下觀察模型組可見明顯炎細(xì)胞浸潤(rùn)，內(nèi)膜充血水腫，子宮腔壁增厚，組織結(jié)構(gòu)紊亂，腺體紊亂萎縮變形，提示造模成功，各給藥組大鼠的病理表現(xiàn)有不同程度的改善。

在CPID細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中，核因子κB的活化是一中心環(huán)節(jié)，核因子κB是介導(dǎo)機(jī)體炎癥反應(yīng)的信號(hào)通路，受到物理創(chuàng)傷、細(xì)胞因子刺激后被激活，從而啟動(dòng)和調(diào)控炎癥細(xì)胞、黏附分子等參與炎癥反應(yīng)過程(其中包括炎癥介質(zhì)GM-CSF)，進(jìn)一步擴(kuò)大炎癥反應(yīng)，并通過炎癥反應(yīng)加重組織損傷[11-14]。有研究指出核因子кB參與組織纖維化(肺、肝等)，與宮腔粘連密切相關(guān)[15]。GM-CSF是在炎癥反應(yīng)過程中由損傷內(nèi)皮細(xì)胞釋放出的一種炎癥反應(yīng)的敏感性標(biāo)志物，與CPID密切相關(guān)[16]。核因子κB的活化可上調(diào)GM-CSF的表達(dá)，通過核因子κB失活抑制了GM-CSF生成[17-18]。IL-4主要由Th2細(xì)胞產(chǎn)生的免疫抗炎因子，在炎癥反應(yīng)中，隨著IL-4水平的逐漸升高，其抑炎作用增強(qiáng)，炎癥介質(zhì)被抑制，恢復(fù)體內(nèi)自身的免疫動(dòng)態(tài)平衡[19]。既往已有研究表明，IL-4能夠負(fù)調(diào)控核因子κB通路抑制炎癥反應(yīng)[20-23]。本研究結(jié)果表明，與模型組比較，高氏盆炎方三號(hào)各劑量組大鼠血清GM-CSF水平均降低；IL-4水平均升高，子宮組織核因子κB蛋白及基因表達(dá)下調(diào)，說明了中藥發(fā)揮免疫抗炎作用，通過升高IL-4的水平，提高了機(jī)體免疫力，抑制核因子ΚB活性，阻斷炎癥信號(hào)通路傳導(dǎo)，從而下調(diào)GM-CSF水平，抑制了炎癥介質(zhì)激活釋放，最終降低炎癥反應(yīng)，從而修復(fù)大鼠子宮組織結(jié)構(gòu)、病理?yè)p傷，預(yù)防和抗粘連，改善盆腔炎癥結(jié)局。

本研究通過觀察生殖觀察組不孕大鼠模型，結(jié)果表明，模型組60 d(大鼠以5 d為一個(gè)性周期，12個(gè)周期為60 d)總體妊娠率為0，而藥物觀察組均受孕產(chǎn)子，其受孕率、產(chǎn)仔數(shù)、平均產(chǎn)仔數(shù)、存活率較高。主要考慮以下3方面因素影響受孕：1)因炎癥改變盆腔內(nèi)環(huán)境；2)炎癥導(dǎo)致輸卵管炎癥及輸卵管阻塞；3)炎癥經(jīng)輸卵管蔓延至卵巢(大鼠動(dòng)情周期改變)，影響卵巢功能；其中任何一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題均可能導(dǎo)致不孕發(fā)生。本研究模型組雌鼠均未受孕也再次證明了盆腔炎模型制備成功(無論是子宮體炎、輸卵管炎、輸卵管炎性阻塞、卵巢炎均屬于盆腔炎)。經(jīng)高氏盆炎方三號(hào)治療后大鼠受孕率明顯升高，且產(chǎn)仔只數(shù)較模型組明顯增多，治療效果理想，提示高氏盆炎方三號(hào)可有效改善盆腔炎大鼠的生殖功能，一方面因盆腔炎的治愈，控制了輸卵管炎和卵巢炎，疏通輸卵管炎性阻塞，而最終起到治療炎性不孕的效果，達(dá)到他病愈則自能成孕。另一方面通過抗炎，抑制CPID癥進(jìn)一步擴(kuò)散，起到預(yù)防損傷進(jìn)一步進(jìn)展，提高了妊娠率和治療效果。運(yùn)用倒查機(jī)制，以受孕成功說明炎癥粘連恢復(fù)，盆腔內(nèi)環(huán)境恢復(fù)。

綜上所述，高氏盆炎方三號(hào)對(duì)CPID及炎性不孕大鼠有良好的治療作用，其作用機(jī)制可能是通過促進(jìn)抗炎細(xì)胞因子IL-4分泌水平，提高機(jī)體免疫力，恢復(fù)體內(nèi)自身的免疫動(dòng)態(tài)平衡，抑制核因子κB通路的激活，進(jìn)而降低炎癥介質(zhì)GM-CSF釋放，減輕子宮炎癥反應(yīng)，減少CPID的損害，預(yù)防粘連發(fā)生，改善大鼠子宮組織病理形態(tài)，提示高氏盆炎方三號(hào)能夠有效治療CPID。同時(shí)通過治療盆腔炎癥(包括治療輸卵管炎和卵巢炎；疏通輸卵管炎性阻塞，恢復(fù)卵巢排卵功能)，抑制盆腔炎癥進(jìn)一步進(jìn)展，恢復(fù)盆腔內(nèi)環(huán)境，修復(fù)因炎癥造成的盆腔生殖功能的損傷，提高CPID大鼠受孕率及妊娠率，為臨床應(yīng)用高氏盆炎方三號(hào)治療CPID及炎性不孕提供了更多的理論依據(jù)。