子宮內(nèi)膜異位癥患者血清中Gal-1和CRH水平變化及臨床意義

諸靜，冒麗靜

子宮內(nèi)膜異位癥（endometriosis，EMS）是指具有生理活性的子宮內(nèi)膜細胞生長在宮腔被覆黏膜外的其他部位，發(fā)病率較高［1］。EMS的主要臨床表現(xiàn)包括痛經(jīng)、性交痛及月經(jīng)異常，這也是導(dǎo)致不孕的常見原因。篩選可評估EMS嚴重程度的血清指標對選擇EMS早期治療方案具有重要意義。半乳糖凝集素-1（galectin-1，Gal-1）是一種內(nèi)源糖結(jié)合蛋白，由LGALSI基因編碼，定位于染色體22q13，常以同源二聚體形式存在，在多種組織中廣泛表達，參與細胞的轉(zhuǎn)移、黏附、增殖及凋亡等過程。Gal-1能夠誘導(dǎo)腦表達X2蛋白（brain expressed X-linked protein 2，BEX-2）磷酸化，促進血管內(nèi)皮細胞增殖，加速新生血管網(wǎng)形成，促進EMS的發(fā)生［2］。促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（corticotropin releasing hormone，CRH）是一種下丘腦神經(jīng)肽，其編碼基因位于8號染色體，與其他CRH家族成員具有高度同源性，對機體應(yīng)激反應(yīng)、血壓穩(wěn)定維持、胎兒的分娩及炎癥反應(yīng)等多種生命活動均具有調(diào)控作用，能夠誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜合成白細胞介素（interleukin，IL）-6和分泌前列腺素，啟動子宮內(nèi)膜蛻膜化過程，增加EMS發(fā)生風險［3］。目前，有關(guān)Gal-1和CRH在EMS中表達情況的研究鮮見，且Gal-1、CRH與EMS嚴重程度的關(guān)系尚不清楚，本研究就此進行探討。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2019年10月—2021年12月于南通市婦幼保健院就診的93例EMS患者（EMS組）為研究對象，年齡26～40歲，平均（34.02±7.26）歲；其中45例患有不孕癥。根據(jù)1985年修訂的美國生殖協(xié)會分期標準（revised classification of American Fertility Association，r-AFS），Ⅰ期15例、Ⅱ期21例、Ⅲ期37例、Ⅳ期20例。納入標準：（1）符合《2015年子宮內(nèi)膜異位癥的診治指南專家解讀》的診斷標準。（2）性生活正常，經(jīng)期規(guī)律，排卵正常。（3）半年內(nèi)無激素類藥物使用史。排除標準：（1）合并因輸卵管畸形、生殖系統(tǒng)腫瘤、多囊卵巢綜合征、配偶生育障礙及盆腔炎癥而致不孕者。（2）肝腎功能障礙者。（3）伴有輸卵管、卵巢及子宮手術(shù)既往史者。同期選取90例相同年齡層來院檢查的健康女性為對照組，年齡27～39歲，平均（34.18±8.71）歲。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準，且研究對象或其家屬均簽署知情同意書。

1.2 血清指標檢測 研究對象均于空腹狀態(tài)下采集10 mL靜脈血，通過離心機（美國Labnet公司，型號：SCI-12）以6 000 r/min（4℃）離心5 min，離心半徑10 cm，收集上清液，置于-80℃冰箱中保存。通過酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血清中卵泡 刺 激 素（follicle stimulating hormone，F(xiàn)SH）、雌 二 醇（estradiol，E2）、Gal-1和CRH水平。FSH試劑盒購自華夏遠洋科技有限公司（貨號：SEC947Hu）。E2試劑盒購自科潤達生物工程公司（貨號：RE52001）。Gal-1試劑盒購自上海信裕生物科技有限公司（貨號：XY-GAL1-H）。CRH試劑盒購自上海喬羽生物科技有限公司（貨號：QY-MB11250）。嚴格遵照試劑盒流程操作。其中將月經(jīng)量超過80 mL，或影響正常生活質(zhì)量的月經(jīng)量定義為月經(jīng)量過多。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 22.0和Medcalc 15.2軟件進行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布計量資料以±s表示，2組間比較采用獨立樣本t檢驗。多組間比較應(yīng)用單因素方差分析，組間多重比較采用LSD-t法。計數(shù)資料以例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。二元Logistic回歸模型分析EMS的獨立影響因素并建立Gal-1+CRH聯(lián)合診斷評估模型。采用Spearman相關(guān)分析血清Gal-1和CRH水平與r-AFS分期的相關(guān)性。采用Medcalc 15.2軟件行受試者工作特征（ROC）曲線分析各指標對EMS患者發(fā)生不孕癥的診斷價值。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組一般資料比較 EMS組伴有痛經(jīng)史者比例高于對照組（P＜0.01），其他指標差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表1。

Tab.1 Comparison of general data between the two groups表1 2組的一般資料比較

2.2 2組血清指標比較 EMS組血清中Gal-1和CRH水平較對照組升高（均P＜0.05），F(xiàn)SH和E2差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

Tab.2 Comparison of serum indexes between the two groups表2 2組血清指標比較 （±s）

Tab.2 Comparison of serum indexes between the two groups表2 2組血清指標比較 （±s）

＊＊P＜0.01。

組別對照組EMS組t n 90 93 Gal-1（μg/L）5.17±1.23 12.41±2.97 21.667＊＊CRH（μg/L）4.03±1.08 9.52±2.31 20.700＊＊FSH（IU/L）2.59±0.75 2.76±0.79 1.492 E2（ng/L）45.16±14.03 49.01±15.26 1.775

2.3 EMS影響因素分析 以痛經(jīng)（否=0，是=1）、Gal-1及CRH為自變量，以是否發(fā)生EMS為因變量（否=0，是=1），二元Logistic回歸分析顯示，較高水平Gal-1和CRH是影響EMS發(fā)生的危險因素（均P＜0.05），見表3。

2.4 不同r-AFS分期患者血清Gal-1和CRH水平比較 隨著r-AFS分期的進展，血清中Gal-1和CRH水平逐漸升高（均P＜0.05），見表4。血清中Gal-1、CRH水平與r-AFS分期均呈正相關(guān)（r分別為0.692和0.712，P＜0.01）。

Tab.3 Risk factors of EMS analyzed by binary Logistic regression model表3 二元Logistic回歸模型分析EMS的影響因素

Tab.4 Comparison of serum levels of Gal-1 and CRH between patients with different r-AFS stages表4 不同r-AFS分期患者血清Gal-1和CRH的比較（±s）

Tab.4 Comparison of serum levels of Gal-1 and CRH between patients with different r-AFS stages表4 不同r-AFS分期患者血清Gal-1和CRH的比較（±s）

＊＊P＜0.01；a與Ⅰ期比較，b與Ⅱ期比較，c與Ⅲ期比較，P＜0.05。

r-AFS分期Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ期Ⅳ期F n 15 21 37 20 Gal-1（μg/L）8.27±1.71 10.61±2.03a 13.39±2.12ab 15.59±2.68abc 39.609＊＊CRH（μg/L）7.26±1.03 8.06±1.02a 9.91±1.47ab 12.03±2.56abc 31.541＊＊

2.5 EMS不孕癥患者與無不孕癥者一般資料及血清指標比較 與無不孕癥組比較，不孕癥組血清中Gal-1和CRH水平升高（均P＜0.01），見表5。

Tab.5 Comparison of general data and serum parameters between EMS patients with infertile and EMS patients without infertile表5 EMS不孕癥患者與無不孕癥者一般資料及血清指標比較

2.6 血清Gal-1和CRH水平對EMS患者出現(xiàn)不孕癥的診斷價值 與Gal-1、CRH各單獨指標比較，Gal-1與CRH聯(lián)合診斷的效能較高，聯(lián)合診斷方程為log（P/1-P）=-0.681+0.770×CRH+0.625×Gal-1，見圖1、表6。

Fig.1 Diagnostic values of serum Gal-1 and CRH levels for infertility in EMS patients圖1 血清Gal-1和CRH水平對EMS患者出現(xiàn)不孕癥的診斷價值

3 討論

據(jù)流行病學(xué)統(tǒng)計，在育齡期女性中，EMS的發(fā)病率為10%～15%［1］。目前，EMS的病因尚未完全闡明，其為一種良性病變，但卻具有類似惡性腫瘤的生物學(xué)行為，子宮肌層、盆腔及陰道壁等常受累及［4］。EMS具有轉(zhuǎn)移性、復(fù)發(fā)性及廣泛性等特點，嚴重者可影響卵細胞產(chǎn)生、阻礙受精過程及干擾受精卵著床，從而造成不孕［5］。通常EMS患者中發(fā)生不孕癥的概率約為40%。目前，腹腔鏡檢查是診斷EMS及其合并癥的“金標準”，但其為有創(chuàng)檢查，且操作繁瑣［6］。因此，尋找有價值的血清指標對診斷EMS臨床意義重大。

Gal-1屬于原型凝集素家族，包含135個氨基酸殘基，分子質(zhì)量約為14.5 ku，極度親和具有β-半乳糖苷的糖復(fù)合物，對炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答及腫瘤惡性增殖和轉(zhuǎn)移具有重要的調(diào)控作用；Gal-1能夠抑制有絲分裂原，阻礙T細胞增殖，并誘導(dǎo)活化的T細胞凋亡，抑制機體的免疫反應(yīng)，有利于脫落的內(nèi)膜向?qū)m腔外種植［7］。體外實驗表明，Gal-1能夠促進分泌型焦磷酸蛋白1磷酸化，加速骨橋蛋白降解，增強滋養(yǎng)細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力［8］。本研究結(jié)果顯示，EMS組患者血清中Gal-1水平較對照組升高，表明Gal-1可能在EMS發(fā)病過程發(fā)揮重要作用，考慮可能原因為LGALSI基因的啟動子異?；罨?，經(jīng)轉(zhuǎn)錄翻譯合成Gal-1，通過自分泌的形式向胞外大量釋放，從而使血清中Gal-1水平升高［2］。本研究結(jié)果顯示，隨著r-AFS分期的進展，血清中Gal-1水平逐漸升高，表明Gal-1可能促進了EMS的進展，考慮可能機制為上調(diào)的Gal-1通過糖類識別結(jié)構(gòu)域（carbohydrate recognition domain，CRD）結(jié)合神經(jīng)纖毛蛋白-1（neuropilin-1，NRP-1），促進血管內(nèi)皮生長因子受體2（vascular endothelial growth factor receptor 2，VEGFR2）磷酸化，使血管內(nèi)皮細胞黏附、遷移，促進新生血管形成，從而滋養(yǎng)異位的子宮內(nèi)膜，導(dǎo)致EMS進展［9］。此外，Gal-1能夠激活絲裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase，MAPK）信號通路，誘導(dǎo)異位的子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞大量增殖，加重EMS［2，7-8］。

Tab.6 Diagnostic values of serum Gal-1 and CRH levels for infertility in EMS patients表6 血清Gal-1和CRH水平對EMS患者出現(xiàn)不孕癥的診斷價值

CRH屬于內(nèi)分泌調(diào)節(jié)因子，由41個氨基酸殘基組成，主要在下丘腦和胎盤中合成，能夠結(jié)合G蛋白偶聯(lián)受體，發(fā)揮促炎、調(diào)節(jié)血管通透性及維持生物節(jié)律等多種功能［10］。Kapoor等［10］研究發(fā)現(xiàn)，CRH能夠促進類固醇合成因子1（steroidogenic factor-1，SF-1）表達，激活芳香化酶，促進雌激素大量合成，導(dǎo)致雌激素優(yōu)勢，這是EMS發(fā)病的重要條件。You等［11］發(fā)現(xiàn)，CRH能夠激活一氧化氮合酶，促進核因子κB（NF-κB）活化和局部炎癥反應(yīng)，從而介導(dǎo)異位子宮內(nèi)膜與其他組織的黏附。本研究結(jié)果顯示，EMS組患者血清中CRH水平較對照組升高，表明CRH可能參與調(diào)控EMS的起病過程，考慮可能原因為EMS患者體內(nèi)的雌/孕激素比例異常，通過正反饋作用誘導(dǎo)下丘腦合成釋放CRH，從而使血清中CRH水平升高［3，10］。本研究結(jié)果顯示，隨著r-AFS分期的進展，血清中CRH水平逐漸升高，表明CRH可能在EMS進展過程中發(fā)揮促進作用，考慮可能機制為CRH水平升高后，通過結(jié)合促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素受體 1（corticotropinreleasing hormone receptor 1，CRHR1）而激活腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factorα，TNF-α），促進IL-6和集落刺激因子釋放，增強基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metallo-proteinases，MMPs）活性，有利于異位的子宮內(nèi)膜黏附周圍組織，促進EMS演化過程［12］。此外，CRH能夠作用于雌激素受體2（estrogen receptor 2，ER2），影響機體正常的免疫應(yīng)答反應(yīng)，使異位的子宮內(nèi)膜形成免疫耐受，逃避免疫監(jiān)視，從而加重EMS［13］。

二元Logistic回歸分析顯示，較高水平的Gal-1和CRH是EMS發(fā)生的危險因素，血清中Gal-1、CRH水平與r-AFS分期均呈正相關(guān)，表明Gal-1、CRH水平能夠協(xié)助判斷EMS分期，反映EMS的嚴重程度，有望成為動態(tài)監(jiān)測EMS的潛在血清指標，其原因可能是Gal-1升高后，通過促進細胞間黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）表達，激活MMPs和重組肌動蛋白，使內(nèi)膜基質(zhì)易于穿透細胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）向?qū)m腔被覆黏膜外的其他區(qū)域種植、侵襲，加速EMS的進展過程［14］。上調(diào)的CRH能夠結(jié)合CRHR1，誘導(dǎo)巨噬細胞釋放血管內(nèi)皮生長因子和IL-1β，促進炎癥反應(yīng)，增強內(nèi)膜間質(zhì)細胞的黏附性及侵襲性，有利于EMS進展［15］。本研究結(jié)果顯示，與EMS無不孕癥者相比，EMS合并不孕癥患者血清中Gal-1和CRH水平升高，表明Gal-1和CRH可能參與調(diào)控EMS合并不孕癥過程。ROC曲線顯示，Gal-1與CRH聯(lián)合檢測的AUC值明顯高于單一Gal-1或CRH，同時，聯(lián)合檢測的敏感度較單一指標明顯升高，有利于早期篩查可能發(fā)生不孕癥的患者，為臨床早期進行針對性治療提供可靠支持。

綜上所述，EMS患者血清中Gal-1和CRH水平升高，血清中Gal-1、CRH水平能夠反映EMS的嚴重程度，可成為動態(tài)監(jiān)測EMS的潛在血清學(xué)指標。Gal-1和CRH聯(lián)合檢測對EMS患者是否出現(xiàn)不孕癥具有良好的診斷效能，且敏感度較高，可為臨床早期針對性治療提供有力幫助，但血清中Gal-1、CRH變化的具體機制尚不清楚，需要在后續(xù)的基礎(chǔ)實驗中進一步證實。