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    膠體金法檢測TP和HbsAg漏檢原因分析

    2022-09-01 09:32:08張波南寧中心血站廣西南寧530007
    首都食品與醫(yī)藥 2022年17期
    關(guān)鍵詞:膠體金初篩梅毒

    張波(南寧中心血站,廣西 南寧 530007)

    乙肝和梅毒居廣西乙類傳染病患者發(fā)病數(shù)前三位[1],乙肝和梅毒是經(jīng)血傳播性疾病,作為無償獻血常規(guī)檢測項目得到了采供血機構(gòu)的高度重視。以膠體金法進行乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體的聯(lián)合檢測,不僅操作簡單,而且不需要特殊檢測儀器和設(shè)備,在廣大獻血人群中進行TP和HbsAg篩查時發(fā)揮了重要作用,有效減少了血液的浪費[2],但是在血液初篩過程中因為各種原因?qū)е乱腋魏兔范韭z的情況時有發(fā)生,不僅造成了血液的浪費,還為血液安全埋下了隱患[3]。本文通過分析初篩環(huán)節(jié)TP和HbsAg漏檢的各項因素,探討初篩漏檢的主要原因并為減少血液浪費和保障血液安全提供依據(jù),報告如下。

    1 材料與方法

    1.1標本來源 2021年7月-11月南寧市各獻血點成功獻血采集的血液標本60521份。

    標本的保存:血液樣本用5ml的EDTA-K2真空采血管留取,2℃-8℃冰箱保存待用。

    1.2儀器與試劑 STAR全自動加樣系統(tǒng),帝肯EVO全自動加樣系統(tǒng),F(xiàn)AME全自動酶免分析儀,URANUS AE 368全自動酶免分析儀。梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法):北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司(WT)、上??迫A生物工程股份有限公司(KH)生產(chǎn)。乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法):北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司(WT)、法國伯樂生物藥業(yè)股份有限公司(BL)生產(chǎn)。乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測試劑(膠體金法):英科新創(chuàng)(廈門)科技股份有限公司(試劑5)生產(chǎn)。所有使用試劑均經(jīng)質(zhì)檢合格,在有效期范圍內(nèi)。

    1.3方法

    1.3.1留取所有的標本經(jīng)離心后(離心條件:離心力1600g,離心時間20min,離心溫度25℃)采用試劑1和試劑2進行常規(guī)抗-TP ELISA檢測、試劑3和試劑4進行常規(guī)抗-HbsAg ELISA檢測,將兩種試劑初、復(fù)檢測定的S/CO值≥1的反應(yīng)性標本(陽性標本)按照血液初篩要求用試劑5重新進行檢測。吸取60-80μL血液標本滴在加樣處,加樣15分鐘最終觀察并判斷結(jié)果。

    1.3.2用唐山9.0血站血液信息管理系統(tǒng)導(dǎo)出反應(yīng)性標本的血液初篩信息,包括采血點、檢測時間、檢測人員、獻血頻次、當天采集人數(shù)等信息。

    1.3.3統(tǒng)計學(xué)分析 計數(shù)資料利用構(gòu)成比進行統(tǒng)計描述,以[n(%)]表述,統(tǒng)計分析采用卡方檢驗計算P值,以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.160521份血液標本經(jīng)酶聯(lián)免疫法檢測后TP和HbsAg反應(yīng)性標本共112份,占所有經(jīng)血傳播疾病檢測項目237份不合格標本的47.26%。其中HbsAg反應(yīng)性標本60例、TP反應(yīng)性標本52例。反應(yīng)性標本用膠體金法檢測HbsAg陽性27例(45%)、陰性33例(55%);TP陽性37例(71.15%)、陰性15例(28.85%)。不同S/CO值金標法檢測陽性結(jié)果比例,χ2=24.772,P<0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,見表1。

    表1 金標法再次檢測反應(yīng)性標本漏檢情況[n(%)]

    2.2外采、血屋和首次、重復(fù)獻血者反應(yīng)性標本膠體金法檢測漏檢情況 膠體金法檢測TP和HbsAg陽性標本和陰性標本分別占總獻血人數(shù)的0.11%和0.08%。外采和血屋TP和HbsAg陽性占比,χ2=0.003,P>0.05,差別無統(tǒng)計學(xué)意義。首次和重復(fù)獻血者陽性占比,χ2=4.253,P<0.05,差別有統(tǒng)計學(xué)意義,見表2。

    表2 外采、血屋和首次、重復(fù)獻血者反應(yīng)性標本膠體金法檢測漏檢情況[n(%)]

    2.3采血人數(shù)對檢測結(jié)果的影響情況 外采和血屋不同采血人數(shù)TP和HbsAg陽性占比,P<0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。血屋采血人數(shù)16人以上TP和HbsAg漏檢比例為32.81%,外采人數(shù)超過100人時TP和HbsAg漏檢比例為45.31%,見表3。

    表3 血屋和外采不同采血人數(shù)漏檢情況[n(%)]

    2.4不同工齡和初篩時間段漏檢情況 工齡5-10年TP和HbsAg漏檢率分別為51.35%和51.85%。初篩時間分段統(tǒng)計TP漏檢各時間段無明顯差異。HbsAg漏檢9-12時占比較高,為59.26%,見表4。

    表4 不同工齡和初篩時間段漏檢情況

    2.5采血人數(shù)同陽性漏檢標本判斷時間對比情況 0-5分鐘的39例陽性漏檢標本中26例(66.67%)是在采集量大情形發(fā)生。10-15分鐘顯示結(jié)果有8例(12.5%),見表5。

    表5 采血人數(shù)與結(jié)果顯示時間情況

    3 討論

    乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋抗體聯(lián)合檢測試劑采用膠體金免疫層析技術(shù)同時測定全血、血清或血漿中乙型肝炎病毒表面抗原和梅毒抗體,操作簡單,檢測快速、特異度高而且肉眼可判斷結(jié)果[4],聯(lián)合試劑的應(yīng)用在獻血前經(jīng)血傳播疾病篩查中發(fā)揮了重要的作用。而且通過再次用膠體金法試驗驗證仍然有15例TP和33例HbsAg陽性漏檢,漏檢率為0.08%,酶聯(lián)免疫法檢測S/CO值>10時膠體金法檢出率較高,而S/CO值<10時膠體金法檢出率較低,甚至S/CO值<5時只有3例TP顯示陽性(表1),說明膠體金法檢測TP和HbsAg有一定的漏檢比例,主要是因為膠體金試劑靈敏度有限,其需要較高濃度的標記,而且直徑較大的膠體金顆粒才有較高的靈敏度[5],此外,層析速度過快也可導(dǎo)致對照線很快顯色,檢測線顯色不明顯出現(xiàn)假陰性的結(jié)果而出現(xiàn)漏檢[6]。提示生產(chǎn)廠家要采用高親和力和高特異性的材料制備試劑,提高試劑靈敏度和穩(wěn)定性。TP和HbsAg的漏檢同時提示,雖然在血液初篩環(huán)節(jié)已經(jīng)進行了TP和HbsAg的檢測,初篩結(jié)果合格也只是說明初篩結(jié)果符合獻血標準,并不能作為疾病檢測的依據(jù)。此外,在獻血者健康檢查過程中應(yīng)該重視獻血者健康宣教并且認真履行告知義務(wù),讓獻血者明白無償獻血不能作為化驗血液的途徑,不安全的血液會危害患者的生命和健康,獻血者捐獻具有傳染性的血液會給受血者帶來危險,應(yīng)承擔對受血者的道德責任。獻血者如果認為已捐獻的血液可能存在安全隱患,應(yīng)當盡快告知血站[7]。同時工作人員在血液及標本的處理過程中都應(yīng)該做好個人防護,不能因為獻血者血液初篩合格就放松防備,應(yīng)當謹慎地對待每一份血液和標本,嚴格按照操作規(guī)程進行操作,減少職業(yè)暴露的風險[8]。

    既往已經(jīng)在我站成功獻血并且血液檢測結(jié)果合格的獻血者再次來獻血的,血液初篩時不再重復(fù)進行TP和HbsAg項目的檢測,導(dǎo)致本研究中重復(fù)獻血者有8例HbsAg和2例TP陽性標本漏檢,漏檢率為0.016%。目前部分采供血機構(gòu)在血液初篩環(huán)節(jié)對所有獻血者進行乙肝/梅毒項目檢測,這在一定程度上減少了不合格血液的浪費,但是會增加初篩檢測時間成本和材料成本。血液初篩環(huán)節(jié)TP和HbsAg膠體金法檢測陽性標本漏檢64例,占比0.11%,這在獻血屋和外采獻血人數(shù)分類統(tǒng)計中可以看出,漏檢受獻血場所影響不大,但是隨著獻血人數(shù)的增加,漏檢比例增加明顯,采血人數(shù)在15人以內(nèi)時漏檢比例較低(3.13%),隨著獻血人數(shù)的增加,尤其是外采采血人數(shù)超過100人時,漏檢比例增幅明顯(45.31%)。說明隨著獻血者增加,工作量明顯增加,在工作人員不足的情況下,為了提高工作效率、加快工作進度,在初篩加樣還有觀察時間上會大打折扣[9]。膠體金法5分鐘能夠檢出陽性結(jié)果39例中捐血屋31人以上獻血的8例、外采100人以上獻血的18例,占比66.67%。一方面提示血站要根據(jù)血液采集計劃合理安排工作人員,采集任務(wù)超出工作能力范圍時,需及時增補工作人員,以保障優(yōu)質(zhì)的服務(wù)質(zhì)量和血液檢測質(zhì)量,避免工作人員長期高強度作業(yè)導(dǎo)致漏檢或者差錯事故的發(fā)生。另一方面則是膠體金法5分鐘能夠檢出陽性結(jié)果39例中有13例是在采血量不大的情況下漏檢,說明工作人員日常工作質(zhì)量存在問題,應(yīng)該加大培訓(xùn)力度,在常規(guī)工作下要保持嚴謹?shù)墓ぷ鲬B(tài)度和高度的責任心。64例陽性漏檢標本中,8例是在10-15分鐘內(nèi)出現(xiàn)陽性結(jié)果,提示檢測人員要嚴格按照加樣量和時間觀察要求操作,確保血液初篩結(jié)果的準確性。S/CO值>10仍然有17例漏檢(15.18%),說明工作中要注意試劑的保存,防止受潮、避免空氣中暴露時間過長,做到隨用隨加,確保試劑的有效和正確使用[10]。工作人員工齡和初篩時間的統(tǒng)計結(jié)果顯示,工齡5-10年陽性漏檢率較高,主要原因為工作一段時間后積累了一定的工作經(jīng)驗,雖然初篩操作熟練程度提高,動作更加麻利,但是此時更加容易出現(xiàn)麻痹大意,暴露出工作中不注意細節(jié)、工作嚴謹性不夠等問題,從而出現(xiàn)誤判、漏判導(dǎo)致漏檢現(xiàn)象發(fā)生。這也提示血站在對員工的培訓(xùn)中不僅要加強新員工培訓(xùn)和考核,同時對有一定工作經(jīng)驗的員工也要進行崗位技能的再培訓(xùn)、再學(xué)習(xí),從而達到糾偏目的,讓各項操作和技能更趨成熟。

    綜上所述,膠體金法檢測TP和HbsAg在血液初篩環(huán)節(jié)的應(yīng)用價值明顯,但是仍然存在一定的漏檢比例,這提示一方面要按照要求保存和使用試劑,保證試劑的靈敏性和特異性,另一方面要做好初篩環(huán)節(jié)的關(guān)鍵點控制,加強工作人員職業(yè)技能培訓(xùn),提高工作人員的質(zhì)量意識和血液安全意識,保障獻血場所人員配備,可以進一步降低TP和HbsAg漏檢率。

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