老年肺癌患者外周血Gm31083和miR-450b-5p表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系

李露 陳璇 錢俊峰

(麗水市人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，浙江 麗水 323000)

隨著老齡化加劇，老年肺癌發(fā)病率不斷上升，且病死率較高〔1，2〕。肺癌早期癥狀較為隱匿，通常確診時(shí)已屬中晚期，錯(cuò)失最佳根治時(shí)機(jī)，且我國(guó)晚期肺癌患者5年生存率低于15%〔3～5〕。因此，采取及時(shí)有效的診治老年肺癌患者方法對(duì)改善患者預(yù)后尤為關(guān)鍵。近年來(lái)，分子靶向治療肺癌成為新的突破方向和熱點(diǎn)。多項(xiàng)研究證實(shí)，長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA)和微小RNA(miR)在各種腫瘤中發(fā)揮重要作用，且通過(guò)與靶向mRNA3′端非翻譯區(qū)結(jié)合，以此干擾靶基因表達(dá)，從而發(fā)揮功能〔6，7〕。本研究旨在探討老年肺癌患者外周血Gm31083和miR-450b-5p表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇麗水市人民醫(yī)院2016年3月至2020年3月收治的老年肺癌患者120例為研究組，其中男73例，女47例；年齡65～79歲，平均(72.13±4.25)歲；體重指數(shù)17～29 kg/m2，平均(23.16±1.89)kg/m2；分化程度：低分化68例，中、高分化52例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期46例，Ⅲ～Ⅳ期74例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移72例。2017年3月至2020年3月老年健康體檢者102例為對(duì)照組，其中男62例，女40例；年齡65～78歲，平均(71.42±4.19)歲；體重指數(shù)18～27 kg/m2，平均(23.02±1.92)kg/m2。兩組一般資料無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)病理組織學(xué)證實(shí)為肺癌，且均為非小細(xì)胞肺癌；(2)年齡≥65歲；(3)具有完整臨床資料和隨訪資料；(4)簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)其他類型肺癌；(2)合并其他惡性腫瘤；(3)存在其他嚴(yán)重臟器疾病者；(4)嚴(yán)重精神疾病者。

1.2方法 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(qRT-PCR)測(cè)定外周血Gm31083和miR-450b-5p mRNA表達(dá)，抽取受試者外周靜脈血5 ml，分離提取血清，將其置于-80℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?，采用TRIzol試劑(美國(guó)Invitrogen公司)提取血清總RNA，取5 μl總RNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳并檢測(cè)總RNA的純度和完整度。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(美國(guó)Biomiga公司)使用說(shuō)明書將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，以U6作為內(nèi)參基因，檢測(cè)外周血Gm31083和miR-450b-5p mRNA表達(dá)。取cDNA進(jìn)行qRT-PCR，總反應(yīng)體系20 μl：SYBER GREEN 6.8 μl、PCR上游引物0.4 μl、DYE Ⅰ 0.4 μl、PCR下游引物0.4 μl、cDNA 2.0 μl、RNase-free H2O 10 μl，混勻，置于實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀擴(kuò)增。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性10 min，95℃ 15 s、60℃ 1 min，共完成40個(gè)循環(huán)，每個(gè)樣品設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。采用2-ΔΔCt法分析結(jié)果，ΔCt=Ct目的基因-CTU6；ΔΔCt=ΔCt實(shí)驗(yàn)組-ΔCt對(duì)照組。

1.3預(yù)后評(píng)價(jià) 隨訪至2021年12月，記錄老年肺癌患者總生存期(OS)，OS指從診斷日起至任何原因的死亡或至隨訪末。主要采取門診復(fù)診、電話、微信、上門隨訪等多種方式隨訪。

1.4觀察指標(biāo) (1)比較研究組與對(duì)照組Gm31083和miR-450b-5p mRNA表達(dá)；(2)不同病理特征Gm31083和miR-450b-5p mRNA表達(dá)；(3)觀察預(yù)后與Gm31083 mRNA、miR-450b-5p mRNA表達(dá)關(guān)系；(4)分析影響老年肺癌患者預(yù)后危險(xiǎn)因素。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS25.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)、Kaplan-Meier法、Log-rank檢驗(yàn)及Logistic回歸分析。

2 結(jié) 果

2.1研究組與對(duì)照組Gm31083和miR-450b-5p mRNA表達(dá)比較 研究組Gm31083 mRNA表達(dá)(1.87±0.35)高于對(duì)照組(0.97±0.03)，而miR-450b-5p mRNA表達(dá)(0.46±0.13)低于對(duì)照組(1.01±0.02)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=36.126、42.21，均P<0.05)。

2.2不同病理特征Gm31083 mRNA、miR-4506-5p mRNA表達(dá)比較 不同性別、年齡、體重指數(shù)、腫瘤直徑和分化程度Gm31083 mRNA表達(dá)比較無(wú)明顯差異(P>0.05)；Ⅲ～Ⅳ期Gm31083 mRNA表達(dá)高于Ⅰ～Ⅱ期，miR-4506-5p mRNA表達(dá)低于Ⅰ～Ⅱ期；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移Gm31083 mRNA表達(dá)高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，miR-4506-5p mRNA表達(dá)低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 不同病理特征Gm31083 mRNA、miR-4506-5p mRNA表達(dá)比較

2.3預(yù)后與Gm31083 mRNA、miR-4506-5p mRNA表達(dá)關(guān)系 低表達(dá)Gm31083患者OS(31個(gè)月)長(zhǎng)于高表達(dá)Gm31083(17個(gè)月)；高表達(dá)miR-450b-5p患者OS(33個(gè)月)長(zhǎng)于低表達(dá)miR-450b-5p(16個(gè)月)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖1，圖2。

圖1 Gm31083 mRNA表達(dá)與預(yù)后關(guān)系

圖2 miR-450b-5p mRNA表達(dá)與預(yù)后關(guān)系

2.4影響老年肺癌預(yù)后危險(xiǎn)因素 TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Gm31083和miR-450b-5p為影響老年肺癌患者危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表2。

表2 影響老年肺癌預(yù)后危險(xiǎn)因素

3 討 論

肺癌是威脅人類健康的一種重大疾病，且是全球范圍發(fā)病率最高的一種惡性腫瘤，其死亡率和患病率位居惡性腫瘤第一位〔8，9〕。肺癌常見病因與職業(yè)因素(如煤焦油、石棉等)、電離輻射、家族史、大氣污染、肺部慢性疾病(如肺結(jié)核、慢性阻塞性肺疾病等)及人體內(nèi)在因素有關(guān)〔10，11〕。肺癌通常無(wú)自身典型臨床表現(xiàn)，且很容易發(fā)生區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。由于肺癌早期臨床表現(xiàn)無(wú)明顯特異性，早期診斷尚有困難，大部分患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已屬Ⅲb～Ⅳ期，已伴區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，故而整體5年生存率較低，預(yù)后較差〔12，13〕。

LncRNA是基因表達(dá)的一種重要調(diào)控因子，現(xiàn)已證實(shí)，LncRNA在多種生物學(xué)過(guò)程中均發(fā)揮重要作用，成為惡性腫瘤研究的熱點(diǎn)〔14，15〕。LncRNA在腫瘤細(xì)胞中的異常表達(dá)可作為促癌基因或抑癌基因，參與腫瘤細(xì)胞分化、增殖、凋亡、侵襲等過(guò)程中〔16,17〕。本研究表明，老年肺癌患者Gm31083高表達(dá)；Ⅲ～Ⅳ期Gm31083 mRNA表達(dá)高于Ⅰ～Ⅱ期，且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移Gm31083 mRNA表達(dá)高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，由此可見老年肺癌患者Gm31083高表達(dá)與Ⅲ～Ⅳ期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)；老年肺癌患者表達(dá)越高預(yù)后越差。

miR主要是在線粒體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的具有高度進(jìn)化保守性的一種非編碼小RNA，具有復(fù)雜的生物學(xué)功能。近年來(lái)多項(xiàng)研究證實(shí)，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中一些miRNA家族起重要作用，故而通過(guò)對(duì)miR的調(diào)控提高抗腫瘤療效及改善預(yù)后是當(dāng)前在治療肺癌領(lǐng)域中新的突破方向〔17～19〕。miR-450b-5p是miRNAs中的一員，其在多種惡性腫瘤中異常表達(dá)，但在肺癌中研究較少。張雷等〔20〕研究表明，miR-450b-5p在肝細(xì)胞癌組織和細(xì)胞系中表達(dá)均明顯降低，且其表達(dá)水平與腫瘤大小、靜脈侵犯、TNM分期及預(yù)后相關(guān)，為影響肝細(xì)胞癌患者獨(dú)立預(yù)后因素之一。本研究表明，老年肺癌患者miR-450b-5p低表達(dá)；miR-450b-5p高表達(dá)與Ⅲ～Ⅳ期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)；且老年肺癌患者miR-450b-5p表達(dá)越低預(yù)后越差。

綜上，老年肺癌患者外周血Gm31083高表達(dá)，而miR-450b-5p低表達(dá)，且與TNM分期、淋巴結(jié)和預(yù)后密切相關(guān)，且Gm31083和miR-450b-5p為影響老年肺癌患者危險(xiǎn)因素。