瓜拉納乳膏的開(kāi)發(fā)

★ 熊佳 高玲 申新剛 雷婉容 劉運(yùn)鋒 陳麗華 管詠梅 朱衛(wèi)豐（.江西中醫(yī)藥大學(xué)現(xiàn)代中藥制劑教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 南昌 330004；2.江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 南昌 330006）

瓜拉納（Paullinia cupana），又名巴西香可可，主要分布在巴西北部和委內(nèi)瑞拉一帶的亞馬遜熱帶雨林中，屬無(wú)患子科常綠木質(zhì)藤狀灌木［1-2］。國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)，瓜拉納中含有豐富的天然激情生物堿、咖啡因、四甲基黃嘌呤、氨基酸、單寧酸、蛋白質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)等人體必需的活力因子［3-4］，具有抗疲勞、抗肥胖、抗衰老等藥理作用［5-7］。由于其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高和在臨床上具有一定的療效，所以瓜拉納被稱為“健康活力的推進(jìn)劑”，廣泛應(yīng)用于食品飲料、制藥原料、保健品等［8］。

目前關(guān)于瓜拉納的產(chǎn)品開(kāi)發(fā)，大多數(shù)集中在抗疲勞飲料、運(yùn)動(dòng)飲料、能量棒、營(yíng)養(yǎng)代餐組合物等一些可食用方面，而關(guān)于瓜拉納的外用制劑較為少見(jiàn)。瓜拉納的提神醒腦功效，不僅可以用于制作抗疲勞飲料，制成類似清涼油的外用醒神乳膏也很有研究空間，因此，對(duì)于瓜拉納乳膏的開(kāi)發(fā)探索是十分必要的。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器

BSA-224S-CW 型電子天平( 賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；SZ-93 自動(dòng)雙蒸水蒸餾器（上海亞榮生化儀器廠）；KW-1000DC恒溫?cái)?shù)顯水浴鍋（國(guó)華電器有限公司）；FA25高剪切乳化器（上海弗魯克流體機(jī)械制造有限公司）；HKCB-3型恒控磁力攪拌器(溫州市醫(yī)療電器廠)；pH酸度計(jì)（上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司）；ZS881-6數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱（志勝烘箱設(shè)備有限公司）；HKL-100高速離心機(jī)（北京創(chuàng)維電子科技有限公司）；Nano-ZS 激光粒度儀（英國(guó)馬爾文儀器有限公司）；FR-1204型恒溫恒濕箱（上海一恒科技有限公司）；CX41 偏光顯微鏡（OLYMPU技術(shù)有限公司）。

1.2 試劑

瓜拉納種子（巴西）；迷迭香精油（深圳市中純植美化妝品有限公司）；白凡士林（南昌白云藥業(yè)有限公司）；羊毛脂(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；硬脂酸（沈陽(yáng)市東華試劑廠）；單硬脂酸甘油酯（浙江恒翔化工有限公司）；液體石蠟( 株洲九州化學(xué)化學(xué)試劑廠)；三乙醇胺( 長(zhǎng)沙市湘科精細(xì)化工廠)；甘油（天津市大茂化學(xué)試劑廠）；水為自制雙蒸水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 瓜拉納的提取

將干燥瓜拉納果粉碎成粗粉，稱取藥材粗粉適量，精密稱定，用20倍70%乙醇回流提取2次，每次2 h。過(guò)濾，合并濾液，濾液濃縮到相對(duì)密度為1.2～1.3 g/mL，得瓜拉納醇提取液，備用。

2.2 乳膏基質(zhì)處方的篩選

2.2.1 處方篩選原則乳膏基質(zhì)主要組分為水相、油相及乳化劑，主要有水包油（O/W）型和油包水（W/O）型兩類，其基質(zhì)特點(diǎn)滿足以下要求：油膩小、稠度適宜、易于涂布；利于經(jīng)皮滲透，對(duì)皮膚刺激性較小；易于清洗。對(duì)于W/O基質(zhì)，O/W基質(zhì)更易清洗，在實(shí)際臨床中大部分乳膏也是O/W基質(zhì)，為充分發(fā)揮瓜拉納提取物中活性成分和迷迭香精油的提神醒腦作用，預(yù)期篩選出幾組成分簡(jiǎn)單的乳膏劑基質(zhì)組成，制成 O/W 型乳膏。

2.2.2 處方查閱經(jīng)典的水包油型乳膏組成，篩選確立5個(gè)處方組成。見(jiàn)表1。

表1 瓜拉納乳膏的處方及用量 g/mL

2.2.3 乳膏制備羊毛脂、硬脂酸、液體石蠟、白凡士林、單硬脂酸甘油酯作為油相。三乙醇胺、甘油、雙蒸水為水相。稱取油相、水相成分分別置于燒杯中，分別加熱到80℃。瓜拉納提取液緩慢加入水相中，邊加邊攪拌溶解。將水相緩慢加入油相中并高剪切攪拌（10 000 r/min），同溫乳化5 min，冷卻，待溫度降至40 ℃時(shí)，加入迷迭香精油和薄荷腦，邊加邊攪拌，制成50 g，繼續(xù)攪拌至冷凝，即得。

2.3 乳膏物理性能及穩(wěn)定性評(píng)價(jià)方法的建立

2.3.1 乳膏理化性質(zhì)評(píng)價(jià)方法

2.3.1.1 性狀觀察5個(gè)處方的乳膏性狀，肉眼觀察乳液是否色澤亮麗，有光澤，涂抹在手上時(shí)乳液是否均勻細(xì)膩，用水洗掉后皮膚是否會(huì)感覺(jué)油膩，經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)考察瓜拉納乳膏為淺黃色的軟膏，氣香，有清涼感，色澤均勻一致，質(zhì)地細(xì)膩，無(wú)粗糙感，無(wú)污物。結(jié)果顯示4個(gè)處方的乳膏均為淡黃色乳膏。

2.3.1.2 pH值從本品的5個(gè)處方取15個(gè)樣品（每個(gè)處方取3個(gè)樣品），每個(gè)樣品取2 g,用20 g冷雙蒸水溶解均勻，采用pH計(jì)測(cè)定本品的pH值。2010 版《中國(guó)藥典》二部附錄VIH規(guī)定的乳膏劑基質(zhì)O/W型乳劑基質(zhì)pH應(yīng)不大于8.3 的相關(guān)要求。

2.3.1.3 粒徑經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)分別將瓜拉納乳膏稀釋25、50、100、200倍的樣品采用激光粒度儀測(cè)粒徑，發(fā)現(xiàn)乳膏粒徑的分布隨稀釋的倍數(shù)增加而增加，當(dāng)乳膏稀釋至25倍時(shí)，分布最均勻，故選擇稀釋25倍進(jìn)行測(cè)量。取本品5個(gè)處方的乳膏用一定量雙蒸水稀釋25倍，每個(gè)處方測(cè)3次。采用激光粒度儀測(cè)粒徑，不得檢出大于180 μm的粒子。

2.3.2 偏光顯微鏡觀察微觀結(jié)構(gòu)偏光顯微鏡是在光學(xué)顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)中插入了起偏振鏡和檢偏振器，通常用來(lái)檢測(cè)生物體內(nèi)某些有序結(jié)構(gòu)、鏡體的存在及其折射光學(xué)性質(zhì)。1971年Barry B W［9］提出穩(wěn)定的乳膏體系微觀呈凝膠網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，主要由表面活性劑、兩親性化合物和水三元體系構(gòu)成。Savic S等［10］將其稱之為“扭曲馬爾他十字”，這是溶致液晶中典型的層狀液晶。在偏光顯微鏡下能觀察到乳膏凝膠網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，從預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果中確定觀察瓜拉納乳膏測(cè)定方法為：取適量乳膏至于載玻片上，均勻涂展，不能有氣泡，在放大40倍條件下觀察。

2.3.3 宏觀穩(wěn)定性評(píng)價(jià)方法

2.3.3.1 離心試驗(yàn)取5個(gè)處方樣品置于5 mL離心試管中，在離心機(jī)中離心，4 000 r/min，分別離心15、30、60 min，觀察軟膏離心前后有無(wú)油水分層等異變。

2.3.3.2 耐熱試驗(yàn)取5個(gè)處方樣品置于45 ℃恒溫箱里24 h，取出，放置恢復(fù)至室溫，剖開(kāi)軟膏管，觀察膏體，與試驗(yàn)前比較，無(wú)分層等明顯變化現(xiàn)象。

2.3.3.3 耐寒試驗(yàn)取5個(gè)處方樣品置于-15 ℃恒溫箱里24 h，取出，放置恢復(fù)至室溫，觀察軟膏無(wú)分層等明顯變化現(xiàn)象。

2.4 物理性能及穩(wěn)定性評(píng)價(jià)結(jié)果

2.4.1 性狀按照“2.3.1.1”項(xiàng)下的方法，對(duì)5個(gè)處方進(jìn)行觀察。5個(gè)處方基質(zhì)制備的瓜拉納乳膏，能很好的成型，均為淡黃色乳膏，均勻細(xì)膩，易涂布，且具有氣香，有清涼感。處方4、5顏色淡黃色較偏淺，稠度略稠。見(jiàn)表2和圖1。

表2 5種基質(zhì)處方組成的乳膏比較

圖1 乳膏外觀性狀

2.4.2 pH值按照“2.3.1.2”項(xiàng)下的方法，測(cè)5個(gè)處方的15個(gè)樣品的pH值。見(jiàn)表3。

表3 5個(gè)處方制備的乳膏pH值測(cè)定結(jié)果

2.4.3 粒徑按照“2.3.1.3”項(xiàng)下的方法，測(cè)5個(gè)處方分別稀釋25倍的粒徑。見(jiàn)表4和圖2。

表4 5種處方制備的乳膏粒徑測(cè)定結(jié)果 μm

圖2 5個(gè)處方粒徑分布圖

結(jié)合各處方的粒徑分布圖，可知處方1、2、3、5均有粒徑大于180 μm的粒子，不符合藥典規(guī)定。處方4未檢出大于180 μm，且粒徑積分曲線成光滑的曲線，均小于100 μm，符合規(guī)定。

2.4.4 偏光顯微鏡觀察液晶結(jié)構(gòu)按照“2.3.2”項(xiàng)下的方法，在偏光顯微鏡下觀察微觀結(jié)構(gòu)。見(jiàn)圖3。五種處方在偏光顯微鏡下均能看到液晶結(jié)構(gòu)，但只有處方4具有明顯的“扭曲馬爾他十字”，該處方較其他處方微觀結(jié)構(gòu)更穩(wěn)定。

圖3 不同處方液晶結(jié)構(gòu)圖

2.4.5 離心穩(wěn)定性按照“2.3.3.1”項(xiàng)下的方法，對(duì)5種乳膏進(jìn)行離心試驗(yàn)。見(jiàn)圖4和表5。

圖4 乳膏穩(wěn)定性結(jié)果

表5 5種乳膏離心穩(wěn)定性測(cè)定結(jié)果

2.4.6 耐熱按照“2.3.3.2”項(xiàng)下的方法，對(duì)5種乳膏進(jìn)行耐熱試驗(yàn)。見(jiàn)表6和圖5。

表6 5種乳膏耐熱試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

圖5 乳膏耐熱結(jié)果

2.4.7 耐寒按照“2.3.3.3”項(xiàng)下的方法，對(duì)5種乳膏進(jìn)行耐寒實(shí)驗(yàn)。見(jiàn)表7和圖6。

圖6 乳膏耐寒結(jié)果

表7 5種乳膏耐寒試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

根據(jù)處方4基質(zhì)配比組成制備的瓜拉納乳膏，乳膏色澤為淡黃色，細(xì)膩，稠度較適宜，易涂布，微觀穩(wěn)定性、離心穩(wěn)定、耐熱、耐寒等均較好，可以作為本實(shí)驗(yàn)中最佳處方制備瓜拉納乳膏。

3 小結(jié)

瓜拉納在巴西亞馬遜地區(qū)常被印第安人用作興奮劑，具有提神供能、抗疲勞作用。本實(shí)驗(yàn)嘗試將瓜拉納醇提液制成乳膏，其藥理藥效作用有待后期繼續(xù)探討。

本實(shí)驗(yàn)采用的瓜拉納醇提取液是采用實(shí)驗(yàn)室前期進(jìn)行正交優(yōu)化瓜拉納醇提液試驗(yàn)中最優(yōu)的提取方法，但是對(duì)于瓜拉納醇提取液加入量的多少，目前只是參考大部分乳膏文獻(xiàn)中加入的量，初步試驗(yàn)了瓜拉納是否合適制成乳膏劑以及它是否能成型，初步考察了瓜拉納乳膏劑的外觀性狀、穩(wěn)定性等因素，為后期進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究奠定基礎(chǔ)。

本實(shí)驗(yàn)中采用處方4中基質(zhì)所做的乳膏，稠度略稠，后期將考慮再調(diào)整處方中水相和油相的比例，確立最佳的處方構(gòu)成，并對(duì)其各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行考察，看是否符合各項(xiàng)指標(biāo)要求。在實(shí)驗(yàn)研究過(guò)程中，主要存在的問(wèn)題是常溫放置時(shí)，隨著時(shí)間的推移，瓜拉納乳膏會(huì)發(fā)生顏色以及稠度上的變化，顏色有所加深，稠度變稀。但是油相和水相未發(fā)生分離，目前穩(wěn)定性較好，初步推測(cè)是氧化劑加入的量不合適，后期還將繼續(xù)調(diào)整處方中基質(zhì)的含量，以制備出符合藥典標(biāo)準(zhǔn)的合格產(chǎn)品。醒神的瓜拉納配伍同樣醒神作用的迷迭香精油和薄荷腦，不僅調(diào)節(jié)了氣味，更增強(qiáng)了瓜拉納乳膏劑的醒神功效。

乳膏劑是一種傳統(tǒng)劑型，但因?yàn)槠涫褂梅奖?、性質(zhì)穩(wěn)定、溶解性能較好等優(yōu)點(diǎn)越來(lái)越受到人們的關(guān)注，很多新的醫(yī)藥原料正在嘗試著制成乳膏通過(guò)透皮吸收達(dá)到較好的治療效果，特別是近幾年來(lái)，隨著中藥產(chǎn)業(yè)優(yōu)化的發(fā)展，很多中藥制劑也朝著這個(gè)方向發(fā)展，顯現(xiàn)著較好的發(fā)展態(tài)勢(shì)，目前關(guān)于瓜拉納的研究，外用制劑少之又少，而根據(jù)瓜拉納的提神醒腦的功效，將其制成外用的清涼油將會(huì)有很大的發(fā)展空間。