基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接研究地黃飲子治療老年衰弱綜合征的活性成分及分子靶點(diǎn)

程雪樺，錢程，吳弢，陳潔，郭童杰，韓力

1.復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院中醫(yī)科，上海 200040；2.復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院藥劑科，上海 200040；3.上海市老年醫(yī)學(xué)臨床重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200040；4.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，內(nèi)蒙古齊齊哈爾 161000

地黃飲子首見于《黃帝素問宣明論方》，方中熟地黃、山茱萸、肉蓯蓉、巴戟天4 味君藥可填精溫腎、補(bǔ)養(yǎng)下元、收斂元?dú)?；附子、肉桂補(bǔ)火助陽、引火歸元，麥冬、石斛滋陰生津，五味子酸澀固腎，伍肉桂能補(bǔ)火助陽，共為臣藥；遠(yuǎn)志、石菖蒲、茯苓3 味化痰開竅兼健腦益智，是為佐藥；生姜、大棗調(diào)藥功兼佐使之用。地黃飲子治療的病證范圍較廣，除治喑痱外，還用于中風(fēng)及后遺癥、暴喑、痿證、眩暈等治療［1］。Lopez-Otin 等人［2］確定了9 種所謂的“衰老特征”，這些特征被廣泛應(yīng)用于衰老研究領(lǐng)域，其主要特征是基因組的不穩(wěn)定、端粒的磨損、表觀遺傳學(xué)的改變和蛋白酶沉積劑的喪失。衰老細(xì)胞可以釋放導(dǎo)致炎癥和功能障礙的因子，隨著年齡的增長(zhǎng)和多種慢性疾病的病因部位積累，而地黃飲子含藥腦脊液可顯著上調(diào)Aβ 沉積導(dǎo)致的大鼠神經(jīng)元及PC12 細(xì)胞的抗氧化酶（SOD、GSHPx 和過氧化氫酶）活性，降低MDA 水平，提高細(xì)胞抗氧化能力［3］?，F(xiàn)代藥理研究表明，地黃飲子還具有清除自由基，修復(fù)線粒體損傷，調(diào)節(jié)免疫功能以及抑制神經(jīng)凋亡等多種抗衰作用［4］。老年衰弱核心是多器官系統(tǒng)生理儲(chǔ)備力下降，從而對(duì)應(yīng)激源的易感性增加［5］。老年人下元虛衰，陰陽兩虧，虛陽上浮，痰濁隨之上泛。本課題組臨床發(fā)現(xiàn)，老年衰弱患者多兼夾痰濕之證，腎虛筋骨失養(yǎng)，故見筋骨痿軟無力，有學(xué)者對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞模型小鼠灌胃地黃飲子后發(fā)現(xiàn)小鼠的運(yùn)動(dòng)耐力、強(qiáng)度和負(fù)荷在一定程度上增強(qiáng)，運(yùn)動(dòng)疲乏可緩解［6］，此外，該方還有調(diào)節(jié)小鼠腎臟組織細(xì)胞周期的作用，可降低衰老小鼠腎臟組織P21、P53 蛋白及mRNA 表達(dá)進(jìn)而延緩腎臟衰老［7］。

衰弱已被確定為老年致殘的主要因素之一。根據(jù)歐洲SHARE 調(diào)查50 歲或以上居住在歐洲共同體的成年人中，超過50%的人合并衰弱或衰弱早期［8］。因此，本研究通過現(xiàn)代網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法探討多靶點(diǎn)干預(yù)老年衰弱綜合征的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用靶點(diǎn)進(jìn)行廣泛篩選具有重要意義。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是建立于高通量組學(xué)數(shù)據(jù)分析、網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫、計(jì)算機(jī)虛擬計(jì)算及網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)分析策略的基礎(chǔ)上來進(jìn)行生物網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建和分析，挖掘及預(yù)測(cè)中藥復(fù)方確效成分、靶標(biāo)蛋白以及疾病發(fā)生發(fā)展相關(guān)通路網(wǎng)絡(luò)之間的潛在機(jī)制，與中醫(yī)的整體觀相契合。本研究運(yùn)用TCMSP、TCMID、GeneCards 等數(shù)據(jù)庫收集地黃飲子治療老年衰弱的相關(guān)靶點(diǎn)，構(gòu)建“中藥-活性成分-交集靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)、PPI 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建、富集分析等多層次生物信息網(wǎng)絡(luò)，篩選出關(guān)鍵靶點(diǎn)和通路，為進(jìn)一步開展地黃飲子治療老年衰弱綜合征的藥理作用機(jī)制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 地黃飲子活性成分的收集與篩選

本研究將地黃飲子15 味中藥（肉蓯蓉，熟地黃，巴戟天、山茱萸、麥冬、五味子、石斛、遠(yuǎn)志、石菖蒲、熟附子、肉桂、茯苓、生姜、大棗、薄荷）分別輸入TCMSP 數(shù)據(jù)庫（http：/ /tcmspw.com/tcmsp.php） 以 及TCMID（http：/ /47.100.169.139/tcmid/）數(shù)據(jù)庫進(jìn)行化學(xué)成分的查詢，將化合物按照口服生物利用度（Oral Bioavailability，OB）≥30%，類藥性（Drug-Like，DL）≥0.18 進(jìn)行篩選，從而篩選出具有高活性的潛在有效化學(xué)成分。

1.2 地黃飲子活性成分作用靶點(diǎn)和相關(guān)疾病靶點(diǎn)的搜集

在有機(jī)小分子數(shù)據(jù)庫Pubchem （https：/ /pubchem.ncbi.nlm.nih.gov） 數(shù)據(jù)庫中整理地黃飲子的潛在有效化學(xué)成分的典型結(jié)構(gòu)式Canonical SMILES 號(hào)，將整理到的SMILES 號(hào)分別輸入成分靶點(diǎn)預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)庫Swiss Target Prediction（http：/ /www.swisstargetprediction.ch/），獲取地黃飲子有效化學(xué)成分對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)蛋白，根據(jù)Probability 指標(biāo)篩選大于0 的靶點(diǎn)，得到地黃飲子有效化學(xué)成分的對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)。采用Gene Cards（https：/ /www.genecards.org/）數(shù)據(jù)庫以“frailty in older adultls”、“frailty”、“aged”、“frailty syndrome”、“aging”作為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索，獲得與老年衰弱相關(guān)的靶點(diǎn)基因。

1.3 中藥-成分-交集靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)與PPI 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將疾病靶點(diǎn)與成分靶點(diǎn)取交集，將交集靶點(diǎn)信息整理并導(dǎo)入Cytoscape3.9.0 軟件，進(jìn)行中藥-成分-交集靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建。網(wǎng)絡(luò)圖中的節(jié)點(diǎn)分別代表了中藥、成分、交集靶點(diǎn)蛋白。再將此交集靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING （https：/ /string-db.org/）數(shù)據(jù)庫獲得蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)（Protein-Protein Interaction，PPI），將此網(wǎng)絡(luò)導(dǎo)入Cytoscape3.9.0 軟件進(jìn)行優(yōu)化以及網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治觥?/p>

1.4 GO 功能富集分析和KEGG Pathway 分析

為了進(jìn)一步探索地黃飲子治療老年衰弱在基因功能以及相關(guān)信號(hào)通路上的具體作用，利用DAVID數(shù)據(jù)庫對(duì)地黃飲子-老年衰弱交集靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG 通路富集分析，基因本體GO 富集分析，其中GO 富集分析包含分子功能（Molecular Function）、生物過程（biological process）及細(xì)胞組成（cellular component） 3 個(gè)部分，設(shè)定閾值P＜0.01 具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。選取前10個(gè)條目，并用微生信（http：/ /www.bioinformatics.com.cn/）在線繪圖工具將其可視化。

1.5 分子對(duì)接

從pubchem 數(shù)據(jù)庫（https：/ /pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）下載地黃飲子活性化合物2D 結(jié)構(gòu)的mol2格式文件，導(dǎo)入AutoDockTools-1.5.6 軟件，將其修飾并保存為pdbqt 格式，作為對(duì)接配體。選取上述篩選的核心靶點(diǎn)，于Uniprot 數(shù)據(jù)庫（https：/ /www.uniprot.org/） 尋找核心靶點(diǎn)的3D 構(gòu)想，SRC、TP53、HSP90AA1、AKT1 的構(gòu)體分辨率分別為2.20?、1.24?、2.12?、2.46?；將此3D 結(jié)構(gòu)導(dǎo)入AutoDock-Tools-1.5.6 軟件，進(jìn)行去除水分子、加氫、加電荷及各項(xiàng)優(yōu)化，作為分子對(duì)接受體。將配體與受體導(dǎo)入Auto Dock Vina 1.1.2 進(jìn)行半柔性分子對(duì)接，得到其對(duì)接結(jié)果，再使用PyMOL 軟件進(jìn)行可視化。

2 結(jié)果

2.1 地黃飲子活性成分搜集與篩選

在TCMSP 數(shù)據(jù)庫中分別查詢地黃飲子的12 味組成成分肉蓯蓉、熟地黃、巴戟天、山茱萸、五味子、石菖蒲、熟附子、肉桂、茯苓、生姜、大棗、薄荷這些中藥的化學(xué)成分，在TCMID 數(shù)據(jù)庫中查詢麥冬、石斛、遠(yuǎn)志這3 味中藥的化學(xué)成分，根據(jù)OB≥30%和DL≥0.18的篩選條件，剔除重復(fù)后得到157 個(gè)化學(xué)成分。

2.2 地黃飲子活性成分作用靶點(diǎn)和相關(guān)疾病靶點(diǎn)的搜集

將預(yù)測(cè)的157 個(gè)活性化合物導(dǎo)入Swiss Target Prediction 數(shù)據(jù)庫中得到化合物相關(guān)的靶點(diǎn)，選取Probability＞0 的靶點(diǎn)去重，得到1 021 個(gè)靶點(diǎn)。通過GeneCards 關(guān)鍵詞檢索后獲得與老年衰弱相關(guān)的靶點(diǎn)基因，將收集到的疾病靶點(diǎn)去重，按照Relevance score（Relevance score＞3.84）高于3 倍均值進(jìn)行篩選得到2 056個(gè)靶點(diǎn)。將篩選到的這2 056個(gè)靶點(diǎn)與之前藥物預(yù)測(cè)的1 021個(gè)靶點(diǎn)取交集得到393 個(gè)交集靶點(diǎn)，其韋恩圖如圖1所示，交集靶點(diǎn)包含IL6、TP53、PDGFRB、TNF、MAPT、ACE、VEGFA 等靶點(diǎn)。

圖1 地黃飲子作用靶點(diǎn)與老年衰弱相關(guān)靶點(diǎn)交集Venn 圖

2.3 中藥-成分-交集靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)

地黃飲子的中藥-成分-交集靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖詳見圖2。此網(wǎng)絡(luò)圖紅色菱形代表地黃飲子的15 味中藥（以中文名稱首字母大寫代替），圓形黃色節(jié)點(diǎn)代表交集靶點(diǎn)，青色內(nèi)四邊形代表各味中藥的有效活性成分。由于此復(fù)方制劑的網(wǎng)絡(luò)復(fù)雜，成分繁多，故構(gòu)建其“中藥-成分”網(wǎng)絡(luò)（圖3）。其中地黃飲子的主要治療成分有beta-sitosterol（β-谷甾醇）、sitosterol（谷甾醇）、Stigmasterol（豆甾醇）、quercetin（槲皮素），分別是5 味、4味、3 味、2 味中藥共有的成分；且據(jù)圖2可知，上述成分分別可與145、116、78、110 個(gè)靶點(diǎn)相互作用。成分作用的主要作用靶點(diǎn)有CYP19A1、AR、ESR2、BCHE、ESR1、PTPN1 等，可分別與71、69、65、61、60、59 個(gè)活性成分相互作用。

圖2 中藥-成分-交集靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖

圖3 中藥-成分網(wǎng)絡(luò)圖

2.4 蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)（Protein-Protein Interaction，PPI）的構(gòu)建

取交集所獲取的393 個(gè)靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING（https：/ /string-db.org/）數(shù)據(jù)庫，獲得各個(gè)蛋白之間的相互關(guān)系（置信度分?jǐn)?shù)大于0.7，圖4A）。將此相互關(guān)系數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape3.9.1 軟件中進(jìn)行優(yōu)化，此網(wǎng)絡(luò)由382 個(gè)節(jié)點(diǎn)和2 902 條邊組成，再將網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)浞治?，度值排名?0 的靶點(diǎn)蛋白有SRC、TP53、HSP90AA1、AKT1、STAT3、MAPK3、EGFR、EP300、PIK3R1、IL6 （圖4B）。

圖4 蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)PPI 網(wǎng)絡(luò)

2.5 靶點(diǎn)富集分析

基于地黃飲子-老年衰弱交集網(wǎng)絡(luò)共篩選到393個(gè)靶點(diǎn)基因進(jìn)行富集分析，根據(jù)其基因數(shù)目，取排名前10 的顯著富集GO 功能和KEGG 代謝通路。如圖5和圖6所示。得到GO 條目998 條（P＜0.01），其中BP、CC、MF 分別有743、96、160 條，取排名前10 位的條目（圖5）。其中BP 主要涉及轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、凋亡過程的負(fù)調(diào)控等；CC 主要涉及質(zhì)膜、細(xì)胞質(zhì)、胞質(zhì)溶膠、核等；MF 主要涉及蛋白質(zhì)結(jié)合、相同的蛋白質(zhì)結(jié)合、ATP 結(jié)合等；KEGG 通路富集分析共篩選了162 條（P＜0.01）信號(hào)通路，選取基因數(shù)目排名前20 的通路進(jìn)行可視化（圖6）。其中主要涉及癌癥的通路、PI3K-Akt 信號(hào)通路、MAPK 信號(hào)通路、神經(jīng)活性配體-受體相互作用、脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化等。見表1。

表1 KEGG 通路富集分析結(jié)果表（前10）

圖5 地黃飲子治療老年衰弱（CHD）靶點(diǎn)GO 功能分析（前10）

圖6 地黃飲子作用靶點(diǎn)KEGG 富集分析的前20 條通路氣泡圖

2.6 分子對(duì)接

根據(jù)中藥-成分-交集靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)、PPI 網(wǎng)絡(luò)圖以及Gene Cards 數(shù)據(jù)庫篩選出的4 個(gè)核心靶點(diǎn)SRC、TP53、HSP90AA1、AKT1，將其與之前所預(yù)測(cè)的地黃飲子的4 個(gè)關(guān)鍵成分beta-sitosterol （β-谷甾醇）、sitosterol （谷甾醇）、Stigmasterol （豆甾醇）、quercetin （槲皮素）這4 個(gè)成分進(jìn)行分子對(duì)接，總共進(jìn)行16 次分子對(duì)接，最佳模式下，SRC 與β-谷甾醇、TP53 與槲皮素、HSP90AA1 與豆甾醇、AKT1 與β-谷甾醇的結(jié)合能分別為－7.9、－7.6、－7.4、－7.2 kcal/mol－1，取各個(gè)分子對(duì)接中良好的結(jié)果進(jìn)行可視化構(gòu)圖（圖7）。

圖7 分子對(duì)接可視化圖

3 討論

衰弱綜合征與多個(gè)生理系統(tǒng)的老化有關(guān)，認(rèn)知障礙被認(rèn)為是衰弱的一個(gè)組成部分。流行病學(xué)證據(jù)表明，衰弱可能與老年人的認(rèn)知障礙、阿爾茨海默病、輕度認(rèn)知障礙、血管性癡呆的病理學(xué)有關(guān)［9］。地黃飲子在臨床上已長(zhǎng)期用于治療多種老年神經(jīng)系統(tǒng)疾病，并表現(xiàn)出神經(jīng)保護(hù)功能［10］。目前有學(xué)者對(duì)地黃飲子進(jìn)行代謝組學(xué)分析和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究，探討了其關(guān)鍵代謝物及其相關(guān)代謝途徑，發(fā)現(xiàn)地黃飲子所靶向的能量相關(guān)代謝途徑的核心關(guān)鍵是對(duì)線粒體結(jié)構(gòu)和功能的保護(hù)［11］。本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法共篩選出地黃飲子根據(jù)篩選條件得到157 個(gè)化學(xué)成分和393 個(gè)交集靶點(diǎn)。其中地黃飲子的根據(jù)度值篩選出的主要治療成分有beta-sitosterol（β-谷甾醇）、sitosterol（谷甾醇）、Stigmasterol（豆甾醇）、quercetin（槲皮素）分別是5味、4 味、3 味、2 味中藥共有的成分。其中槲皮素屬于類黃酮，黃酮類化合物具有廣泛的生理活性且藥理活性研究甚廣，有研究發(fā)現(xiàn)［12］達(dá)沙替尼和類黃酮槲皮素的組合是一種有效的抗衰老藥物，可以改善許多與年齡相關(guān)的疾病，包括衰弱、骨質(zhì)疏松和心血管疾病。另一方面，本研究基于合理的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)，對(duì)黃酮類化合物在中藥方劑的合理性地位以及在網(wǎng)絡(luò)圖中的度值進(jìn)行了綜合分析考量，并經(jīng)過分子對(duì)接證實(shí)了關(guān)鍵成分可以自發(fā)地與核心靶點(diǎn)相結(jié)合，確定其與相關(guān)蛋白確實(shí)有良好的結(jié)合能力。槲皮素的水溶性較差，生物利用度低，但已有研究通過降低結(jié)晶度、增加顆粒表面積或使用環(huán)糊精包合物來增加水溶性槲皮素，并且在人體中有較長(zhǎng)的半衰期［13］，因此其仍有良好的應(yīng)用前景。β-谷甾醇、谷甾醇、豆甾醇屬于植物甾醇類化合物（PSE），美國FDA、NCEP 等諸多機(jī)構(gòu)推薦膳食中添加PSE 可以降低血脂水平，學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)［14］補(bǔ)充PSE可有效降低內(nèi)皮素-1 水平，而內(nèi)皮素-1 濃度與血漿高LDL-c 水平密切相關(guān)，尤其是氧化型LDL，PSE 可通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的平衡抗主動(dòng)脈衰老［15］。

地黃飲子的靶點(diǎn)類型多樣，為了確定共有靶點(diǎn)之間的相互作用，本研究構(gòu)建了PPI 網(wǎng)絡(luò)，并根據(jù)度值篩選出前10 個(gè)核心靶點(diǎn)，即SRC、TP53、HSP90AA1、AKT1、STAT3、MAPK3、PIK3R1 等是地黃飲子治療老年衰弱的關(guān)鍵靶點(diǎn)。Src 是一種蛋白酪氨酸激酶，它參與細(xì)胞多種關(guān)鍵的生理過程，在細(xì)胞生長(zhǎng)、分裂、遷移和存活信號(hào)通路中發(fā)揮關(guān)鍵作用，也可以直接參與調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄或核骨架結(jié)構(gòu)，其表達(dá)及活性異常往往與乳腺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌等腫瘤相關(guān)［16］。TP53 基因是編碼腫瘤蛋白p53 的抑癌基因，是人類多種癌癥中最常見的突變基因，p53 基因的活化對(duì)細(xì)胞凋亡通路起著至關(guān)重要的控制作用［17］，而p53/p21 信號(hào)通路的p21 和p53 是細(xì)胞周期的重要調(diào)節(jié)因子，當(dāng)某種外界刺激作用到細(xì)胞時(shí)，p53 蛋白會(huì)出現(xiàn)應(yīng)激性快速上調(diào)，正常的細(xì)胞周期受阻，細(xì)胞發(fā)生衰老。mTOR 通路是調(diào)控衰老的重要信號(hào)通路之一，有研究表明［18］PI3K-AKT/mTOR 信號(hào)通路在調(diào)節(jié)人血管平滑肌細(xì)胞的復(fù)制性衰老中起重要作用。STAT3 在細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡等許多細(xì)胞過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，STAT3 的線粒體易位可抑制氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的自噬，并可有效保護(hù)線粒體免受有絲分裂吞噬的降解［19］。MAPK3 是一種絲裂原活化蛋白激酶，它們?cè)诎ㄑ趸瘧?yīng)激、DNA 損傷、癌癥發(fā)展下被激活。HSP90 會(huì)調(diào)節(jié)某些表觀遺傳修飾物的活性調(diào)節(jié)從而對(duì)環(huán)境變化作出反應(yīng)［20］。

基于地黃飲子-老年衰弱交集網(wǎng)絡(luò)共篩選到393 個(gè)共有靶點(diǎn)顯著富集于998 個(gè)GO 條目和145 條KEGG通路中（P＜0.01），地黃飲子治療老年衰弱靶點(diǎn)GO 生物過程富集涉及轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控、凋亡過程、細(xì)胞增殖、蛋白質(zhì)結(jié)合等，這些生物過程在地黃飲子治療老年衰弱中起到了關(guān)鍵作用。通過KEGG 富集分析顯示，地黃飲子主要活性成分相關(guān)靶點(diǎn)涉及癌癥通路、PI3K-Akt 信號(hào)通路、MAPK 信號(hào)通路、神經(jīng)活性配體-受體相互作用、脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化等信號(hào)通路作用于衰弱。

研究發(fā)現(xiàn)［21］地黃飲子可以通過保護(hù)線粒體結(jié)構(gòu)，來提高線粒體功能，從而促進(jìn)三羧酸循環(huán)和氧化磷酸化進(jìn)行，達(dá)到改善能量代謝的作用。線粒體自噬是一種自噬形式，可選擇性地降解多余或受損的線粒體，在預(yù)防年齡相關(guān)疾病中起著關(guān)鍵作用，PI3K/AKT/mTOR 信號(hào)通路［22］可能通過調(diào)節(jié)線粒體自噬、線粒體生物合成等機(jī)制保證線粒體功能。本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法說明地黃飲子通過多成分、多靶點(diǎn)、多通路治療老年衰弱，但有其一定的局限性。活性成分在衰弱患者體內(nèi)的不同組織中分布差別缺乏對(duì)地黃飲子的定量檢測(cè)和數(shù)學(xué)分析，可進(jìn)一步利用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)分析地黃飲子化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)及體內(nèi)代謝，再結(jié)合體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)調(diào)控線粒體自噬、動(dòng)脈粥樣硬化等信號(hào)通路來明確地黃飲子有效性和安全性的評(píng)價(jià)。

綜上所述，地黃飲子治療老年衰弱綜合征可能通過類黃酮槲皮素、植物甾醇類等活性成分與交集靶點(diǎn)（SRC、TP53、HSP90AA1、AKT1 等）來參與線粒體自噬、動(dòng)脈粥樣硬化、腫瘤等相關(guān)信號(hào)通路和生物細(xì)胞過程的調(diào)節(jié)，有必要對(duì)地黃飲子進(jìn)行進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證研究，探討其關(guān)鍵作用機(jī)制。