柿葉黃酮分散片的處方優(yōu)化及質(zhì)量控制

韓 偉，方 琳，張玲貞，宋信莉，李 哲

(1. 貴州中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院, 貴陽550025；2. 貴州中醫(yī)藥大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院, 貴陽 550025；3. 貴州中醫(yī)藥大學(xué) 獸用中藥制劑創(chuàng)新研發(fā)中心, 貴陽550025)

柿葉為柿樹科植物柿 (DiospyroskakiL.f.) 的新鮮或干燥葉，最初在明代的《滇南本草》中就有其入藥的記載，藥用歷史悠久[1].柿葉中主要的活性成分為柿葉總黃酮，柿葉總黃酮主要以莰非醇-3-O-葡萄糖苷、蘆丁、槲黃酮、金絲桃甙等組成[2-4]，具有抗炎癥[5]、抗氧化[6-7]、保肝[8]，以及可以保護(hù)心腦血管系統(tǒng)等[3，9]藥理作用，而且柿葉黃酮毒性和副作用比較小、使用比較安全，國內(nèi)外醫(yī)藥界在對柿葉黃酮類化合物上的研究上越來越多也越來越深入[10-11].

分散片是能在水中能夠快速分解且平均分布的一種片劑[12].它即具有液體制劑生物利用度高的特點又具有片劑服用方便的特點，適用于老年人、兒童，以及吞服困難的患者[13]，同時還具有攜帶和貯存方便并且性質(zhì)比較穩(wěn)定的特點.相比于普通片劑和膠囊劑等一些凝固體制成的藥物，分散片制作方式簡單，服用方法簡便，可以增加難溶性藥物的生物利用度，并且用比較少的劑量表現(xiàn)出良好的治療效果，能夠減少藥物的毒副作用[14-15].分散片適合于難溶性和生物利用度低的藥物.

本文以崩解時間為考察標(biāo)準(zhǔn)，對柿葉黃酮分散片進(jìn)行處方優(yōu)化，并對其進(jìn)行體外溶出度進(jìn)行考察，為柿葉黃酮的新劑型及臨床應(yīng)用提供一定的科學(xué)依據(jù).

1 儀器與試劑

1.1 儀器

YP-1.5L型單沖壓片機(jī)(廣州市旭朗機(jī)械設(shè)備有限公司)，RC-6型智能溶出儀(天津盛達(dá)三合光學(xué)儀器有限公司)，SY-6D型片劑四用測定儀(上海黃海藥檢儀器有限公司)，Multiskan SkyHigh型全波長酶標(biāo)儀(美國Thermo公司)，JA2003型電子天平(上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司)，片劑硬度測定儀(上海黃海藥檢儀器有限公司).

1.2 試劑

柿葉黃酮(純度≥80%，西安開來生物工程有限公司，批號：K20984)，蘆丁對照品(純度≥98%)，批號：408E023(北京索萊寶科技有限公司)，交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮(北京索萊寶科技有限公司，批號：190622)，低取代羥丙基纖維素(上海源葉生物科技有限公司，批號：190401)，微晶纖維素(北京索萊寶科技有限公司，批號：190512)，硬脂酸鎂(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號：190608)，α-乳糖(一水)(成都市科龍化工試劑廠，批號：190505)，UV-透明平底96孔板(美國Corning公示，批號：3635).

2 方法與結(jié)果

2.1 柿葉黃酮分散片的制備

本實驗每片含柿葉黃酮 40 mg的分散片，把均過80目篩的柿葉黃酮與輔料，按等量遞增法混勻，粉末直接壓片法制備，即得片重400 mg的藥品.

2.2 單因素實驗

2.2.1 崩解劑的考察

以MCC∶乳糖(3∶1)為填充劑，0.5 %硬脂酸鎂為潤滑劑，崩解劑分別以交聯(lián)聚乙烯毗咯烷酮(PVPP)，交聯(lián)梭甲纖維素鈉(cCMC-Na)，羧甲基淀粉鈉(CMS-Na)和低取代羥丙基纖維素(L-HPC)，對分散片崩解時間和分散均勻性作為考察方式，選擇出最適合的崩解劑.結(jié)果顯示使用崩解劑L-HPC崩解時限最短，且藥片光滑，無斷裂，所以選擇使用L-HPC為崩解劑.

2.2.2 填充劑的考察

崩解劑使用低取代羥丙基纖維素(L-HPC)，0.5 %硬脂酸鎂為潤滑劑,對蔗糖：填充劑分別為蔗糖∶糊精(3∶1)，微晶纖維素(MCC)∶乳糖(3∶1)，MCC∶淀粉(5∶1)和MCC∶甘露醇(2∶1)，以分散片崩解時間長短和分散均勻性的影響為指標(biāo)，對填充劑種類進(jìn)行考察.結(jié)果顯示使用填充劑MCC∶乳糖(3∶1)崩解時限最短，且藥片光滑，無斷裂，所以選擇使用MCC∶乳糖(3∶1)為填充劑.見表1、2.

表1 不同崩解劑對分散片的影響

表2 不同填充劑對分散片的影響

2.2.3 潤滑劑的考察

崩解劑使用低取代羥丙基纖維素(L-HPC)，以MCC∶乳糖(3∶1)為填充劑,以潤滑劑的種類對分散片崩解時間和分散均勻性的影響，篩選出最合適的潤滑劑.結(jié)果顯示硬脂酸鎂與滑石粉的崩解時限相接近，但使用硬脂酸鎂的藥品更為光滑，崩解后溶液更澄清，故選擇使用硬脂酸鎂.見表3.

表3 不同潤滑劑對分散片的影響

2.3 正交試驗

在單因素試驗基礎(chǔ)上，采用正交試驗優(yōu)化處方工藝.固定藥物量(10 % ) 的比例，以L-HPC的用量、MCC與乳糖的比例、硬脂酸鎂的用量(A、B、C)為影響因素，以崩解時間為評價指標(biāo).按照L9(34)正交表進(jìn)行實驗操作，因素水平見表4.

表4 因素水平表

通過分析，結(jié)果見表5、表6，表明各個因素對綜合指標(biāo)的影響大小為:B>A>C，且因素B(P<0.05)對其崩解時間有顯著性影響，所以可以選擇B3，選擇A、C均無顯著性，所以根據(jù)直觀分析最終確定最佳處方組成和用量為A2B3C1.即崩解劑用量為10 % L-HPC，以乳糖與MCC的比例為1∶3的填充劑，潤滑劑用量為0.5 %硬脂酸鎂.

表5 正交實驗表

表6 方差分析表

2.4 重現(xiàn)性試驗

制備以最優(yōu)處方工藝制成的柿葉黃酮分散片，每批10片，共3批，其得到的結(jié)果為片劑外觀光滑無斷裂，硬度適中，測定其崩解時間平均約為26 s，表明最優(yōu)處方工藝穩(wěn)定，可重復(fù)生產(chǎn).

2.5 柿葉黃酮分散片質(zhì)量檢測

2.5.1 供試品的制備

取6片柿葉黃酮分散片，稱量取平均值，混合研細(xì)，取平均質(zhì)量的一份，用50 %乙醇溶解，過濾，定容于400 mL量瓶中，再用50 %乙醇稀釋一倍制得供試品.

2.5.2 蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密稱取蘆丁對照品1.6 mg(純度98 %)，置于20 mL量瓶中，用50 %乙醇為溶劑，超聲溶解后放冷，再用50 %乙醇定容，搖勻，即得質(zhì)量濃度為 80 μg /mL的蘆丁對照品溶液.精密吸取5 mL對照品溶液于10 mL量瓶中，加50 %乙醇定容，搖勻，放置適當(dāng)時間，再從中精密吸取5 mL密吸取 5 mL對照品溶液于10 mL量瓶中，加50 %乙醇定容，搖勻，放置一會兒，再如此操作四次，分別得到質(zhì)量濃度為80、40、20、10、5、2.5 μg/mL的對照品待測液，空白對照組為不加蘆丁對照品的50 %乙醇，采用酶標(biāo)儀在254 nm波長處下，測定其吸光度，得回歸方程C= 0.019 6A+ 0.092 7(R2= 0.9996)(其中C為蘆丁質(zhì)量濃度，A為吸光度值)，結(jié)果顯示蘆丁對照品質(zhì)量濃度在(2.5 ～80 μg/mL)范圍內(nèi)與吸收度線性關(guān)系良好.

2.5.3 精密度試驗

取用50 %乙醇稀釋一倍后，制得質(zhì)量濃度為 40 μg /mL的蘆丁對照品溶液，精密吸取200 μL，共6份，使用酶標(biāo)儀，分別測定吸光度，結(jié)果得RSD=1.66 %，表明本方法精密度良好.

2.5.4 重復(fù)性實驗

精密吸取供試品200 μL，共6份，使用酶標(biāo)儀，分別測定吸光度，結(jié)果得RSD=2.89 %，本方法可重復(fù).

2.5.5 穩(wěn)定性實驗

分別取0、1、2、3、4、5、6、8、10、12、24 h搖勻后的供試品，精密吸取各時間段的供試品200 μL，各6份，使用酶標(biāo)儀，分別測定吸光度，結(jié)果得RSD=0.90 %，表明24 h內(nèi)完成測定時結(jié)果準(zhǔn)確穩(wěn)定.

2.5.6 加樣回收實驗

以自身對照品溶液質(zhì)量濃度為中間質(zhì)量濃度，分別量取2、4 、6、8 mL溶液，分別制得80 %、100 %、120 %、140 %的溶液，取其中200 μL續(xù)濾液，用酶標(biāo)儀測吸光度，結(jié)果得RSD=1.91 %.

2.5.7 含量測定

取10片柿葉黃酮分散片，精密稱定，將10片藥片研成細(xì)粉，精稱平均1 片的質(zhì)量的細(xì)粉，共3份，置400 mL量瓶中定容，充分溶解，過濾，稀釋一倍,取稀釋液壓200 μL用酶標(biāo)儀，測吸光度，測得含平均柿葉黃酮量為31.24 mg/片.

2.5.8 分散均勻度的檢查

采用升降式崩解儀測定.取供試品6片，分別置于吊籃的玻璃管中，啟動崩解儀進(jìn)行檢查，各片均在3 min內(nèi)全部崩解，且均能通過內(nèi)徑為710 μm的濾網(wǎng).

2.5.9 硬度檢查

測試得藥品平均硬度為5.38 kg/cm3，證明藥品硬度良好.

2.5.10 脆碎度檢查

稱取16片藥品，吹去片劑表面浮粉，精密稱定其質(zhì)量，置于脆碎度檢查儀的圓筒中，轉(zhuǎn)速為(25±1)r/min，轉(zhuǎn)動100次.結(jié)束后取出藥片，再用吹風(fēng)機(jī)除去脫落的粉末，精密稱重，減失質(zhì)量小于1%，且沒有斷裂、粉碎片.所以該藥品的脆碎度符合規(guī)定.

2.5.11 質(zhì)量差異檢驗

取制備好的柿葉黃酮分散片20片，精密稱定其總質(zhì)量，計算出平均片重，再分別精密稱定每一片的質(zhì)量，之后再用每片質(zhì)量與平均片重比較，計算結(jié)果均符合規(guī)定的質(zhì)量差異.

2.5.12 分散片溶出度的測定

用轉(zhuǎn)籃法測定溶出度，稱取分散片6片置于轉(zhuǎn)籃的6個孔洞中，溫度恒定在(37±0.5)℃之間，轉(zhuǎn)速為100 r/min，使用溶出介質(zhì)為蒸餾水，以分散片進(jìn)入介質(zhì)時為開始進(jìn)行計時，45 min后，取5 mL樣品，立即用0.45 μm微孔濾膜濾過，取其中200 μL測定，以分散片中柿葉黃酮總含有量為對照品，計算溶出度.結(jié)果顯示，柿葉黃酮在45 min的溶出度為93.62 %，釋放情況良好.

3 討 論

在進(jìn)行處方優(yōu)選時主要考察其崩解分散均勻度，一般以崩解時限，分散均勻度，溶出度做為評價指標(biāo)，所以選用一些崩解性能較好的崩解劑和溶脹材料[15].因MCC有較好的塑形性可以直接壓片，且通過考察崩解時限和分散均勻度以符合要求，所以本實驗采用了粉末直接壓片法直接壓片.由于崩解時限不能決定溶出度，所以本實驗又對所制得的柿葉黃酮分散片最優(yōu)處方進(jìn)行了溶出度等的質(zhì)量控制.

通過對柿葉黃酮分散片進(jìn)行了含量測定，考察其穩(wěn)定性、重復(fù)性、重現(xiàn)性，可得到粉末直接壓片法制備的柿葉黃酮分散片的穩(wěn)定性、重復(fù)性較好，可大批量生產(chǎn).通過對柿葉黃酮分散片溶出度的考察，得到柿葉黃酮在45 min的溶出度為93.62 %，達(dá)到了較快的釋放速度，可以有效的提高柿葉黃酮的生物利用度，對柿葉黃酮之后的劑型研究有一定的指導(dǎo)意義，為柿葉黃酮分散片的推廣提供了一定的依據(jù).

4 結(jié) 語

本實驗結(jié)果顯示，選擇10 % L-HPC為崩解劑，79.5 % MCC與乳糖比例為(3∶1)的填充劑，0.5 %硬脂酸鎂為潤滑劑，可使藥片迅速崩解成粉末，形成分散均勻的懸濁液，并且能夠迅速溶出藥物有效成分.