血清長鏈非編碼RNA小核仁RNA宿主基因3檢測聯(lián)合核磁共振彌散加權(quán)成像在乳腺癌診斷中的應(yīng)用

杜 森，趙 森，周 青，孫亮亮，吳海濱

(河南大學(xué)第一附屬醫(yī)院,河南 開封 475100)

乳腺癌是全球女性癌癥相關(guān)死亡的第二大原因[1]。據(jù)2018年全球癌癥統(tǒng)計(jì)，中國乳腺癌發(fā)生率為36.1%[2]。盡管乳腺癌的診斷方法在不斷優(yōu)化，但乳腺癌早期無典型癥狀，常需要與增生、乳腺炎、乳腺囊腫等良性病變進(jìn)行鑒別診斷。研究發(fā)現(xiàn)，磁共振成像(Magnetic resonance imaging，MRI)對乳腺癌的鑒別診斷率較高，可多方位、多序列成像，結(jié)果可靠性高，對軟組織分辨率也較高[3]。MRI是一種可準(zhǔn)確鑒別良、惡性乳腺癌的檢測方法，較為便捷和可靠，克服了B超結(jié)果的主觀性[4]。磁共振彌散加權(quán)成像(Diffusion-weighted imaging，DWI)是以MRI序列為基礎(chǔ)的高級(jí)影像學(xué)，可從腫瘤形態(tài)學(xué)和病理生理學(xué)方面對乳腺癌進(jìn)行定性定量，是唯一可觀察組織微觀動(dòng)態(tài)結(jié)構(gòu)變化的技術(shù)，但由于患者自主運(yùn)動(dòng)可能造成影響記錄失誤而出現(xiàn)錯(cuò)誤的ADC值[5]。因此DWI需要聯(lián)合其他診斷方法。李妍等[6]研究發(fā)現(xiàn)，抑制長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)小核仁RNA宿主基因3(Small nucleolar RNA host gene 3，SNHG3)表達(dá)可降低乳腺癌細(xì)胞增殖能力。因此，本研究分析DWI聯(lián)合血清lncRNA SNHG3表達(dá)對乳腺癌的診斷價(jià)值，以期為早期診斷乳腺癌提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2019年1月至2021年11月在本院就診的142例女性乳腺結(jié)節(jié)患者，年齡25～72歲，平均年齡(50.50±9.68)歲。將乳腺結(jié)節(jié)患者分為乳腺癌組(n=88)和良性病變組(n=54)。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：①X射線或超聲檢查顯示，單發(fā)乳腺結(jié)節(jié)；②符合DWI檢查適應(yīng)證且接受DWI檢查；③經(jīng)穿刺活檢明確是否為乳腺癌。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤或心、肝、腎功能障礙；②有乳腺假體填充；③接受過抗腫瘤治療。本研究患者及家屬均知情同意。

1.2 DWI檢查方法 先用GE DISCOVERY750型3.0 T磁共振成像儀常規(guī)掃描研究對象乳腺部位，患者乳房自然垂置于掃描儀中。掃描范圍包括雙側(cè)乳腺組織、腋窩及縱膈，進(jìn)行自旋回波序列T1WI、T2WI檢查及軸位DWI掃描。b值取800 s/mm2。將掃描數(shù)據(jù)導(dǎo)入BOLD和DTI軟件進(jìn)行處理，分別結(jié)合T2WI和軸位DWI序列在圖像上手動(dòng)選擇病灶感興趣區(qū)(ROI)，然后通過軟件分析獲得最小表觀擴(kuò)散系數(shù)(Apparent diffusion coefficient，ADC)值，測量3次并取平均值。以乳腺癌病變平均ADC值1.19作臨界值，定義ADC值≤1.19×10-3mm2/s為惡性，>1.19×10-3mm2/s為良性[7]。

1.3 血清中l(wèi)ncRNA SNHG3表達(dá)水平檢測 所有患者在入院檢查時(shí)用采集靜脈血6 ml裝于普通采血管，離心15 min(3000 r/min)，留上清。用總RNA提取試劑盒(上海吉至生化科技有限公司)提取血清總RNA，然后用cDNA合成試劑盒(北京索萊寶生物科技有限公司)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國BIO-RAD公司)對lncRNA SNHG3進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，以β-actin為內(nèi)參。lncRNA SNHG3，F(xiàn)：5’-TTCAAGCGATTCTCGTGCC3’，R：5’-AAGATTGTCAAACCCTCCCTGT-3’。β-actin，F(xiàn)：5’-GGGAAATCGTGCGTGACATTAAGG-3’，R：5’-CAGGAAGGAAGGCTGGAAGAGTG-3’。采用2-ΔΔCt算法計(jì)算lncRNA SNHG3的相對表達(dá)量。

1.4 腫瘤標(biāo)志物檢測 血清糖類抗原125(Carbohydrate antigen 125，CA125)和癌胚抗原(Carcino embryonic antigen，CEA)水平用DXI800全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測。正常參考值范圍：CA125為0～35 U/ml，CEA為0～5 ng/ml。

2 結(jié) 果

2.1 乳腺癌組、良性病變組血清CA125、CEA、lncRNA SNHG3水平及ADC值比較 與良性病變組相比，乳腺癌組血清CA125、CEA、lncRNA SNHG3水平較高(均P<0.05)，ADC值較低(P<0.05)，見表1。

表1 乳腺癌組、良性病變組血清CA125、CEA、lncRNA SNHG3水平及ADC值比較

2.2 乳腺癌組患者血清lncRNA SNHG3水平與CA125、CEA相關(guān)性分析 Pearson分析顯示，血清lncRNA SNHG3水平與CA125、CEA呈正相關(guān)(r= 0.516、0.521，P<0.05)。見圖1、2。

圖1 血清lncRNA SNHG3與CA125相關(guān)性

圖2 血清lncRNA SNHG3與CEA相關(guān)性

2.3 良惡性乳腺病變DWI圖像特征比較 乳腺癌組病灶形狀不規(guī)則、血管影增多、邊界模糊、毛刺征及淋巴結(jié)腫大比例高于良性病變組(均P<0.05)，見表2。

表2 良惡性乳腺病變DWI圖像特征比較[例(%)]

2.4 DWI聯(lián)合血清lncRNA SNHG3對乳腺癌診斷價(jià)值 ROC曲線顯示，血清lncRNA SNHG3診斷乳腺癌的準(zhǔn)確度為87.32%，其敏感度、特異性分別為86.36%、88.89%，lncRNA SNHG3相對表達(dá)的截?cái)嘀禐?.47(圖3)；ADC值診斷乳腺癌的準(zhǔn)確度為89.44%，其敏感度、特異性分別為90.91%、87.04%；血清lncRNA SNHG3聯(lián)合ADC值診斷乳腺癌的準(zhǔn)確度為88.03%，其敏感度、特異性分別為85.23%、92.59%。見表3、4。

圖3 血清lncRNA SNHG3診斷乳腺癌ROC曲線

表3 血清lncRNA SNHG3聯(lián)合ADC值對乳腺癌診斷價(jià)值(例)

表4 血清lncRNA SNHG3聯(lián)合ADC值對乳腺癌診斷價(jià)值(%)

3 討 論

乳腺癌是最常見的惡性腫瘤之一，大部分患者確診時(shí)，已發(fā)生區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，但早期乳腺癌治愈率超過90%[8-9]。因此，早期發(fā)現(xiàn)乳腺癌，能為患者治療爭取到黃金寶貴時(shí)間，提高治愈率。

乳腺癌是血管依賴性腫瘤，在腫瘤細(xì)胞增殖過程中需經(jīng)過內(nèi)皮細(xì)胞增殖、侵入階段形成新的毛細(xì)血管網(wǎng)，因此，乳腺癌內(nèi)部存在著復(fù)雜的血管網(wǎng)絡(luò)，會(huì)增加血管微循環(huán)，這是影像學(xué)診斷乳腺癌的病理基礎(chǔ)[10]。醫(yī)學(xué)影像診斷是乳腺癌早期診斷的重要方法，對腫瘤位置、形態(tài)掃描出來的圖像辨識(shí)率較為準(zhǔn)確，有利于發(fā)現(xiàn)多灶或微小腫瘤[11]。DWI是一種新興的乳腺癌診斷技術(shù)，可檢測水分子彌散運(yùn)動(dòng)，并用ADC值衡量[12]。

腫瘤組織的微觀改變早于形態(tài)學(xué)改變，ADC值是一種功能性指標(biāo)，由于正常組織發(fā)生癌變，導(dǎo)致組織微觀結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，DWI圖像顯示為高信號(hào)，ADC值降低[13]。人體中，水分子會(huì)受毛細(xì)血管、小靜脈微循環(huán)血流灌注影響，而ADC值在一定程度上與組織微循環(huán)灌注有關(guān)，其能間接反映出腫瘤細(xì)胞構(gòu)成，腫瘤細(xì)胞惡性程度越高，密集性高，異形性越明顯，細(xì)胞外間隙較正常細(xì)胞較小，細(xì)胞增殖旺盛，水分子擴(kuò)散受限，導(dǎo)致ADC下降，且ADC值越低，腫瘤分期越高[14-15]。有研究[16]顯示，乳腺癌病灶形狀不規(guī)則比例、毛刺征及淋巴結(jié)腫大比例、血管影增多比例、邊界模糊比例明顯高于良性病變，與本研究結(jié)果一致，表明DWI可用于乳腺癌診斷，利用機(jī)體內(nèi)水分子的自由性，從形態(tài)學(xué)上可對良惡性病變進(jìn)行有效鑒別。本研究ADC值診斷乳腺癌的準(zhǔn)確度為89.44%，其敏感度、特異性分別為90.91%、87.04%，從中發(fā)現(xiàn)，DWI檢查在乳腺癌診斷中敏感度較高，但患者自主運(yùn)動(dòng)可能造成影像記錄失誤而出現(xiàn)錯(cuò)誤的ADC值，另外出血可導(dǎo)致腫瘤高信號(hào)和ADC值低，誤診為惡性腫瘤[17]。

lncRNAs可作為腫瘤的抑制基因或癌基因，影響腫瘤的細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲等過程，參與腫瘤的發(fā)生過程[18]。lncRNA SNHG3是一種新型致癌lncRNA，在各種腫瘤中異常表達(dá)，包括乳腺癌[19]、肝癌[20]等，其表達(dá)水平上調(diào)有助于腫瘤細(xì)胞增殖、遷移及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化[21]。lncRNA SNHG3是在乳腺癌組織中表達(dá)上調(diào)的lncRNA，其表達(dá)水平與乳腺癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移有關(guān)[22]。有研究報(bào)道，lncRNA SNHG3可作為高度保守的診斷生物標(biāo)志物[23]。CA125、CEA是腫瘤標(biāo)志物，常用于乳腺癌早期診斷，是現(xiàn)階段乳腺癌診斷的重要標(biāo)志物[24]。本研究顯示，乳腺癌組血清CA125、CEA、lncRNA SNHG3水平高于良性病變組，乳腺癌患者血清lncRNA SNHG3與CA125、CEA呈正相關(guān)，提示lncRNA SNHG3可影響乳腺癌的發(fā)展。本研究分析顯示血清lncRNA SNHG3聯(lián)合ADC值診斷乳腺癌的準(zhǔn)確度為88.03%，其敏感度、特異性分別為85.23%、92.59%，聯(lián)合診斷的特異性高于lncRNA SNHG3、ADC值單獨(dú)診斷，提示血清lncRNA SNHG3聯(lián)合DWI可提高對乳腺癌的診斷價(jià)值。單一的影像學(xué)指標(biāo)不足以診斷乳腺癌，許多研究側(cè)重于使用影像學(xué)指標(biāo)聯(lián)合血清標(biāo)志物來提高診斷準(zhǔn)確性。

綜上所述，lncRNA SNHG3在乳腺癌患者血清中表達(dá)上調(diào)，DWI聯(lián)合血清lncRNA SNHG3水平對乳腺癌有較好的診斷價(jià)值。本研究仍需擴(kuò)大研究樣本，進(jìn)一步驗(yàn)證DWI聯(lián)合血清lncRNA SNHG3水平對乳腺癌的鑒別診斷價(jià)值。