不同煎煮方法及時(shí)間對(duì)炮附子配伍大黃治療陽虛型便秘的效果及對(duì)心臟的影響

張曉芳，劉慧娜

鄭州市骨科醫(yī)院，鄭州 450052

附子是毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaeliiDebx.的子根的加工品，味辛、甘，性大熱，歸心、腎、脾經(jīng)，有毒，其功效主要為回陽救逆、補(bǔ)火助陽、散寒止痛，常用于亡陽虛脫、心腹冷痛、寒濕痹痛等[1]。大黃為蓼科掌葉大黃Rheum palmatumL.、唐古特大黃Rheum tanguticumMaxim. ex Bal￡.或藥用大黃Rheum officinaleBail1.的干燥根或根莖，味苦，性寒，歸胃、大腸、肝、脾、心包經(jīng)，具有瀉下攻積、清熱瀉火、涼血解毒、逐瘀通經(jīng)、利濕退黃的功效，主治實(shí)熱便秘、濕熱瀉痢、黃疸等[2]。附子與大黃配伍用藥首見于《金匱要略》記載的大黃附子湯，附子辛熱散寒、大黃苦寒攻下，寒熱并用，主要用于治療寒積便秘[3]。在現(xiàn)代臨床研究中，大黃附子湯加減方已在老年脾氣虛弱型便秘患者的治療中取得一定成效[4]。附子的主要活性成份烏頭類生物堿具有毒性，雖經(jīng)過炮制后可減緩毒性，但仍有可能引發(fā)機(jī)體中毒，造成心律失常等[5]，因此，應(yīng)嚴(yán)格把控附子的用藥劑量、煎煮方法、煎煮時(shí)間及配伍等。煎煮方法及時(shí)間可直接影響藥物活性成份的溶出，與臨床療效和毒性密切相關(guān)?；诖?，本研究探討不同煎煮方法及時(shí)間對(duì)炮附子配伍大黃治療陽虛型便秘的效果及對(duì)心臟的影響，以期為臨床應(yīng)用提供參考，詳情如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

無特定病原體健康成年SD大鼠共210只，體重220～240g，購于河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SYXK（豫）2020-0002，由本院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房飼養(yǎng)。大鼠自由飲食飲水，環(huán)境條件：溫度為22～25℃，濕度45%～70%，光照黑暗交替。實(shí)驗(yàn)經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理批號(hào)：202011-006）。

1.2 儀器

BL-420E生物信號(hào)采集系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）；ADVIA2400西門子全自動(dòng)生化分析儀（德國拜爾公司）；RE-20L旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（常州亞旺儀器有限公司）；1ml注射器（山東朱氏藥業(yè)）。

1.3 藥品與試劑

炮附子（產(chǎn)地四川江油，批號(hào)：20200708）、大黃（產(chǎn)地青海，批號(hào)：20200912）均購于寧波藥材股份有限公司，且經(jīng)本院中藥師鑒定；胃泌素（gastrin，GAS）、胃動(dòng)素（motilin，MTL）、血管活性腸肽（vasoactine intrestinal peptide，VIP）、內(nèi)皮素（endothelin，ET）試劑盒均購自上海晶抗生物工程有限公司，型號(hào)分別為BIO-JK60577、BIO-JK60429、BIO-JK60431、BIO-JK60235；白醋（山西老陳醋廠，總酸度>4.5g/100ml，批號(hào)：20200617）；活性炭（重慶東試化工有限公司，批號(hào)：20201152）；0.9%氯化鈉溶液（浙江吉諾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司，批號(hào)：2020-1064）；阿霉素（成都百裕制藥股份有限公司，批號(hào)：2020-0384）；烏拉坦（山東齊魯興華制藥有限公司，批號(hào)：2020-2564）。

1.4 藥液制備

1.4.1 炮附子、大黃單煎液

平行稱取炮附子10g，共5份，均加8倍量水浸泡30min，然后分別煎煮60、90、120、150、180min，紗布過濾出藥液后，再加入6倍量水并煎煮30min，紗布過濾。合并兩次藥液，采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將藥液減壓濃縮成2g/ml的炮附子水煎液；平行稱取大黃10g，共5份，煎煮方法同炮附子，得到濃度為2g/ml的大黃水煎液。按照煎煮時(shí)間的不同，分別合并炮附子和大黃的水煎液。

1.4.2 炮附子、大黃合煎液

平行稱取5份樣品，每份炮附子、大黃各10g，一起煎煮，均加8倍量水浸泡30min，其余同“1.4.1”項(xiàng)下方法，并將藥液減壓濃縮至2g/ml即得。

1.5 大鼠分組方法及陽虛型便秘大鼠模型建立

采用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為單煎組、合煎組與空白對(duì)照組，并進(jìn)一步按照煎煮時(shí)間分為60、90、120、150、180min共5個(gè)亞組，每個(gè)亞組7只。

采用白醋、0℃活性炭冰水建立陽虛便秘模型[6]（白醋首劑量5ml/只，從第2天開始3ml/200g，連續(xù)9天；從第7天開始給予0℃活性炭冰水，5ml/200g，連續(xù)3天）。

1.6 不同煎煮方法及時(shí)間對(duì)炮附子配伍大黃對(duì)陽虛型便秘大鼠的干預(yù)

除空白對(duì)照組各亞組外，單煎組、合煎組各亞組均在造模（陽虛型便秘模型）的同時(shí)給予相應(yīng)藥物灌胃（3g/kg），單煎組各亞組分別給予煎煮時(shí)間為60、90、120、150、180min的炮附子、大黃單煎合并水煎液；合煎組各亞組分別給予煎煮時(shí)間為60、90、120、150、180min炮附子、大黃合煎水煎液；空白對(duì)照組給予等體積0.9%氯化鈉溶液灌胃。

1.7 大鼠排便情況及血清GAS、血漿MTL、VIP、ET水平檢測(cè)

于第9天末次給藥后，禁食24h，觀察各亞組大鼠首粒排便時(shí)間及24h內(nèi)排便顆粒數(shù)。采集大鼠眼眶靜脈叢血，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清GAS及血漿MTL、VIP、ET水平。

1.8 心功能檢查及心律失常發(fā)生情況

對(duì)所有亞組大鼠均一次性腹腔注射阿霉素（10mg/kg）建造急性心衰模型，按“1.6”項(xiàng)下方法給藥。給藥2h后，各亞組大鼠腹腔注射20%烏拉坦溶液，待大鼠麻醉后，經(jīng)右頸總動(dòng)脈插管入左室腔，采用BL-420E生物信號(hào)采集系統(tǒng)對(duì)大鼠左室收縮壓（left ventricular systolic pressure，LVSP）、左室舒張末期壓（left ventricular end diastolic pressure，LVEDP）及左室內(nèi)最大下降速率（rate of pressure decline during myocardial relaxation，-dp/dtmax）、左室內(nèi)最大上升速率（rate of pressure development during myocardial contraction，+dp/dtmax）進(jìn)行測(cè)定，并檢測(cè)10min大鼠心電圖。心電圖顯示正常后，打開腹腔，暴露胃、十二指腸，分別將藥物（單煎組各亞組分別給予煎煮時(shí)間為60、90、120、150、180min的炮附子、大黃單煎合并水煎液，合煎組各亞組分別給予煎煮時(shí)間為60、90、120、150、180min的炮附子、大黃合煎水煎液）或0.9%氯化鈉溶液注入十二指腸（16g/kg）。給藥5min后，采用BL-420E生物信號(hào)采集系統(tǒng)監(jiān)測(cè)心電圖變化情況，持續(xù)60min，統(tǒng)計(jì)心律失常發(fā)生情況。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料用±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)；重復(fù)測(cè)量計(jì)量資料采用重復(fù)測(cè)量方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料用n（%）表示，行χ2檢驗(yàn)。P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 各亞組排便情況比較

單煎組、合煎組各亞組的首粒排便時(shí)間均短于空白對(duì)照組（P<0.05）；24h內(nèi)排便顆粒數(shù)均大于空白對(duì)照組（P<0.05）。合煎組各亞組的首粒排便時(shí)間均短于單煎組（P<0.05），24h內(nèi)排便顆粒數(shù)均大于單煎組（P<0.05）。單煎組及合煎組組內(nèi)煎煮120min亞組的首粒排便時(shí)間均短于同組內(nèi)煎煮

60min亞組、90min亞組（P<0.05），24h內(nèi)排便顆粒數(shù)均大于同組內(nèi)煎煮60min亞組、90min亞組（P<0.05）。單煎組及合煎組組內(nèi)煎煮120min亞組的首粒排便時(shí)間均稍短于同組內(nèi)煎煮150min亞組、180min亞組，24h內(nèi)排便顆粒數(shù)均稍大于同組內(nèi)煎煮150min亞組、180min亞組，但比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。單煎組及合煎組組內(nèi)煎煮150min亞組的首粒排便時(shí)間、24h內(nèi)排便顆粒數(shù)與同組內(nèi)煎煮180min亞組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

表1 排便情況比較 n=7，±s

表1 排便情況比較 n=7，±s

a：與同組60min亞組比較，P<0.05；b：與同組90min亞組比較，P<0.05；c：與單煎組同時(shí)間亞組比較，P<0.05；d：與合煎組同時(shí)間亞組比較，P<0.05。下同

組別 煎煮時(shí)間（min） 首粒排便時(shí)間（min） 24h內(nèi)排便顆粒數(shù)（粒）單煎組 60 57.94±10.21 14.01±2.33 90 59.13±10.38 15.47±2.41 120 44.07±8.46ab 21.94±4.05ab 150 49.14±8.69 17.26±3.27 180 53.28±9.52 17.03±3.16合煎組 60 46.24±7.83c 20.75±3.81c 90 48.03±8.24c 19.41±3.43c 120 35.76±5.22abc 27.42±5.06abc 150 40.08±5.14c 23.88±4.46c 180 40.15±6.35c 23.58±4.39c空白對(duì)照組 60 105.62±13.48cd 5.62±1.03cd 90 108.94±14.21cd 5.94±1.15cd 120 110.32±13.67cd 5.28±0.94cd 150 104.21±12.09cd 5.46±1.12cd 180 107.58±12.54cd 5.79±1.24cd

2.2 血清GAS及血漿MTL、VIP、ET水平比較

單煎組、合煎組各亞組的GAS、MTL、VIP、ET水平均高于空白對(duì)照組（P<0.05）；合煎組各亞組均高于單煎組（P<0.05）。單煎組及合煎組組內(nèi)煎煮120min亞組的GAS、MTL、VIP、ET均高于同組內(nèi)煎煮60min亞組、90min亞組（P<0.05）。單煎組及合煎組組內(nèi)煎煮120min亞組的GAS、MTL、VIP、ET水平均稍高于同組內(nèi)煎煮150min亞組、180min亞組，但比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。單煎組及合煎組組內(nèi)煎煮150min亞組的GAS、MTL、VIP、ET水平與同組內(nèi)煎煮180min亞組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

表2 血清GAS及血漿MTL、VIP、ET水平比較 n=7，±s，pg/ml

表2 血清GAS及血漿MTL、VIP、ET水平比較 n=7，±s，pg/ml

組別 煎煮時(shí)間（min） GAS MTL VIP ET單煎組 60 62.35±10.06 123.45±13.68 63.94±10.78 141.94±13.57 90 63.94±10.17 124.97±12.81 65.01±10.62 143.06±13.19 120 76.78±11.31ab 140.85±13.16ab 78.29±11.38ab 159.26±14.03ab 150 72.18±11.25 136.94±13.07 74.05±11.27 155.14±14.17 180 70.23±10.49 134.62±12.53 70.56±10.43 151.78±14.23合煎組 60 74.61±10.24c 139.81±13.52c 76.31±10.23c 158.24±13.85c 90 76.12±10.59c 140.98±13.67c 77.94±10.51c 159.61±13.76c 120 89.98±11.29abc 157.82±14.23abc 91.92±11.49abc 176.63±14.09abc 150 86.19±11.53c 154.27±15.03c 87.74±11.36c 172.19±14.01c 180 83.26±11.41c 151.28±14.26c 83.21±10.92c 170.28±13.89c空白對(duì)照組 60 46.94±8.35cd 96.09±11.28cd 45.18±7.23cd 116.52±13.28cd 90 45.08±8.19cd 99.45±12.17cd 46.79±8.15cd 112.48±12.94cd 120 50.31±9.57cd 106.73±12.34cd 50.68±9.34cd 125.36±14.16cd 150 48.93±9.36cd 103.48±11.96cd 49.17±9.26cd 121.89±13.54cd 180 47.65±9.21cd 100.88±12.09cd 48.02±8.97cd 118.67±14.03cd

2.3 心功能指標(biāo)水平比較

單煎組及合煎組各亞組的LVSP、+dp/dtmax均高于空白對(duì)照組（P<0.05），且合煎組各亞組均高于單煎組（P<0.05）；單煎組及合煎組各亞組的-dp/dtmax、LVEDP均低于空白對(duì)照組（P<0.05），且合煎組均低于單煎組（P<0.05）。單煎組及合煎組組內(nèi)煎煮120min亞組的LVSP、+dp/dtmax均大于同組內(nèi)煎煮60min亞組、90min亞組（P<0.05），且-dp/dtmax、LVEDP均低于同組內(nèi)煎煮60min亞組、90min亞組（P<0.05）。單煎組及合煎組組內(nèi)煎煮120min亞組的LVSP、+dp/dtmax水平均稍高于同組內(nèi)煎煮150min亞組、180min亞組，-dp/dtmax、LVEDP水平均稍低于同組內(nèi)煎煮150min亞組、180min亞組，但比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。單煎組及合煎組組內(nèi)煎煮150min亞組的LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax、LVEDP與同組內(nèi)煎煮180min比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。見表3。

表3 心功能變化情況比較 n=7，±s

表3 心功能變化情況比較 n=7，±s

+dp/dtmax（mmHg/s）組別 煎煮時(shí)間（min）LVSP（mmHg）LVEDP（mmHg）-dp/dtmax（mmHg/s）單煎組 60 165.97±13.58 10.46±2.01 7125.33±371.43 11665.38±827.63 90 167.01±12.76 10.15±2.03 7034.79±352.68 11984.29±831.04 120 181.85±12.43ab 7.96±1.37ab 6603.17±350.74ab 12976.35±826.17ab 150 177.01±11.49 8.39±1.44 6835.71±356.41 12405.83±840.29 180 174.95±12.36 8.94±1.52 6927.38±363.76 12063.75±816.53合煎組 60 180.95±11.46c 8.31±1.46c 6695.43±355.09c 12654.36±851.39c 90 182.03±12.07c 8.06±1.15c 6574.28±346.37c 12968.73±820.13c 120 197.76±13.45abc 6.38±1.19abc 6123.49±356.84abc 13967.84±835.21abc 150 192.85±12.78c 6.73±1.25c 6359.74±365.29c 13401.22±843.17c 180 189.64±11.39c 7.11±1.36c 6495.72±361.88c 13085.29±838.05c空白對(duì)照組 60 141.38±11.29cd 13.47±2.85cd 7768.94±375.83cd 9785.42±759.43cd 90 143.97±11.46cd 14.83±2.71cd 7965.42±361.28cd 10361.46±853.94cd 120 150.72±12.15cd 15.98±3.01cd 7841.56±384.27cd 9895.27±764.23cd 150 145.83±11.67cd 16.72±3.06cd 7623.91±368.23cd 10654.32±866.74cd 180 148.49±11.72cd 15.39±2.94cd 7903.79±382.03cd 9953.84±794.81cd

2.4 心律失常發(fā)生情況

空白對(duì)照組未出現(xiàn)心律失常；單煎組煎煮60min亞組、90min亞組、120min亞組分別有3只（42.86%）、2只（28.57%）、1只（14.29%）大鼠出現(xiàn)心律失常；合煎組煎煮60min亞組有1只（14.29%）出現(xiàn)心律失常。合煎組各亞組的心律失常發(fā)生率與空白對(duì)照組、單煎組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。

3 討論

附子為回陽救逆第一要藥，是臨床治療心悸、胸痹等病證的常用藥物之一[7]。大黃可用于治療慢性心力衰竭患者的便秘等病證[8]。附子與大黃配伍可增強(qiáng)腸運(yùn)動(dòng)、改善心功能等，臨床上常用二者治療老年人便秘、危重膿毒癥等[9-10]。有研究表明，在西醫(yī)常規(guī)治療基礎(chǔ)上聯(lián)合大黃附子湯可提高慢性肺心病并發(fā)心力衰竭患者的左室射血分?jǐn)?shù)，降低腦鈉肽水平[11]；大黃附子細(xì)辛湯治療陽虛型便秘患者可取得較好的臨床療效[12]。但因炮附子具有一定的毒性，相關(guān)研究[13]指出附子可顯著降低心力衰竭模型大鼠心肌組織心肌肌鈣蛋白T含量，亦可升高正常大鼠心肌組織心肌肌鈣蛋白T含量。故臨床應(yīng)用時(shí)不僅要保證藥物發(fā)揮最大藥效，且需保證用藥安全性。正確把控藥方的煎煮方法及時(shí)間可起到促進(jìn)腸運(yùn)動(dòng)、改善心功能等作用，本研究針對(duì)不同煎煮方法及時(shí)間對(duì)炮附子配伍大黃的增效減毒作用進(jìn)行了探討。

本研究結(jié)果顯示，單煎組及合煎組各亞組首粒排便時(shí)間、24h內(nèi)排便顆粒數(shù)及GAS、MTL、VIP、ET、LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax、LVEDP水平均優(yōu)于空白對(duì)照組，表明炮附子配伍大黃應(yīng)用時(shí)，不論是分開煎煮還是合并煎煮，均可緩解陽虛型便秘大鼠排便困難情況，改善大鼠胃腸功能、心功能。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，合煎組各亞組首粒排便時(shí)間、24h內(nèi)排便顆粒數(shù)及GAS、MTL、VIP、ET、LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax、LVEDP水平均優(yōu)于單煎組各亞組，表明在相同煎煮時(shí)間里，炮附子與大黃合煎的方法在緩解陽虛型便秘大鼠排便困難情況、改善胃腸運(yùn)動(dòng)及改善心肌收縮力、舒張功能方面的療效強(qiáng)于炮附子、大黃單煎后合并的方案。此外，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，單煎組及合煎組組內(nèi)煎煮120min亞組的首粒排便時(shí)間、24h內(nèi)排便顆粒數(shù)及GAS、MTL、VIP、ET、LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax、LVEDP水平均優(yōu)于同組內(nèi)煎煮60min亞組、90min亞組，另雖然與同組內(nèi)煎煮150min亞組、180min亞組相比并未顯示出統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但各指標(biāo)亦有所升高或降低，該結(jié)果提示炮附子與大黃配伍應(yīng)用時(shí)，不論是分開煎煮還是合并煎煮，煎煮120min即可有較佳的療效。本研究亦顯示，合煎組各亞組心律失常發(fā)生率與單煎組各亞組、空白對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。根據(jù)上述研究結(jié)果，在炮附子與大黃配伍應(yīng)用時(shí)，建議合并煎煮120min。

烏頭類酯性生物堿是附子的主要毒性成份，可分為單酯與雙酯，其中以雙酯性生物堿（烏頭堿、新烏頭堿等）毒性最強(qiáng)。有研究表明，附子配伍大黃的水煎液中，單酯性生物堿及雙酯性生物堿含量明顯降低，提示二者配伍具有較好的減毒作用[14]。另有研究表明，在一定加水、加熱條件下，雙酯性生物堿可水解成相應(yīng)的單酯性生物堿。但單酯性生物堿同時(shí)還是附子的有效成份，煎煮時(shí)間過長(zhǎng)可導(dǎo)致其水解過度而影響藥效[15]。

綜上所述，炮附子配伍大黃對(duì)陽虛型便秘大鼠有確切的治療效果，可能與促進(jìn)胃腸功能改善有關(guān)，且大黃與附子配伍具有一定的減毒作用，可保護(hù)心臟，二者合并煎煮120min時(shí)可有較佳療效。