家兔人工授精關(guān)鍵技術(shù)

馬 艷，李 芳，戴玉嬌，李星垚，王紹熙，田維菊

（1.瀘州市江陽(yáng)區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 瀘州 646000；2.重慶市大足區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，重慶 大足 402360；3.重慶市潼南區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村委員會(huì)，重慶 潼南 402660；4.瀘州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 瀘州 646000；5.重慶市農(nóng)業(yè)廣播電視學(xué)校，重慶 兩江新區(qū) 401121；6.豐都縣樹(shù)人鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，重慶 豐都 408200）

在中國(guó)兔養(yǎng)殖生產(chǎn)中，繁殖方法普遍采用自然交配、人工輔助交配和人工授精3 種方式。其中，兔人工授精是指采用人工方式采集優(yōu)良公兔的精液，將精液鏡檢、稀釋及保存，當(dāng)母兔發(fā)情時(shí)通過(guò)人工方式將精液輸送到母兔的生殖道，以人工的方式代替自然交配和人工輔助交配，從而使母兔受精的一種方式。

1 人工授精的優(yōu)勢(shì)

兔人工授精技術(shù)是迄今為止兔繁殖、品種改良經(jīng)濟(jì)、科學(xué)的方法，受胎率可達(dá)80%～90%［1］，其優(yōu)勢(shì)如下。

1.1 品種改良

人工授精能最大限度地發(fā)揮優(yōu)良種公兔的利用價(jià)值，提高公兔的配種效能，加快兔場(chǎng)的兔種品質(zhì)改良步伐，從中獲得更大的利潤(rùn)。

1.2 生產(chǎn)管理

人工授精使得養(yǎng)兔生產(chǎn)管理更有計(jì)劃性，更富靈活性。有效地提高現(xiàn)有兔場(chǎng)的母兔繁殖性能，可避免因公兔使用過(guò)多或其他原因造成公兔精液質(zhì)量不佳的問(wèn)題出現(xiàn)。同時(shí)，兔群更趨于整齊一致，便于飼養(yǎng)管理。

1.3 疾病防疫

人工授精會(huì)降低新疾病引入和傳播的風(fēng)險(xiǎn)，避免了公母兔的直接接觸，可防止多種疾病，特別是生殖道疾病的傳播。人工授精時(shí)，必須檢查精液，這樣可及時(shí)發(fā)現(xiàn)和治療不孕母兔，有助于淘汰不孕母兔和提高受胎率。

1.4 節(jié)約成本

人工授精技術(shù)推廣可以減少80%公兔飼養(yǎng)數(shù)量。如3 000 只母兔的養(yǎng)殖場(chǎng)需要500～600 只公兔，人工授精可以減少到150 只。減少的公兔每年飼料可以節(jié)約5 萬(wàn)多元，結(jié)余的籠位可飼養(yǎng)繁殖母兔，增加銷售收入。

2 人工授精站建設(shè)

2.1 選址

授精站場(chǎng)址應(yīng)符合相關(guān)法律法規(guī)及NY/T 682的規(guī)定；場(chǎng)址地勢(shì)高燥、背風(fēng)、向陽(yáng)、交通便利，水源充足，電力可靠。授精站距離交通干線和居民居住區(qū)≥1 000 m；距屠宰場(chǎng)、化工廠和畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)≥2 000 m；位于居民區(qū)及公共建筑群的下風(fēng)向。

2.2 布局

授精站宜設(shè)管理區(qū)、生產(chǎn)區(qū)等功能區(qū)，各區(qū)之間界限分明，聯(lián)系方便；管理區(qū)內(nèi)應(yīng)包括生活設(shè)施、辦公設(shè)施及生產(chǎn)輔助設(shè)施（飼料庫(kù)、車庫(kù)等），位于生產(chǎn)區(qū)主風(fēng)向的上風(fēng)向；生產(chǎn)區(qū)內(nèi)主要包括種公兔舍、后備種公兔舍、精液處理室及有關(guān)生產(chǎn)輔助設(shè)施。

授精站大門入口處設(shè)置長(zhǎng)≥4.5 m、深0.2 m 的消毒池；生產(chǎn)區(qū)入口處設(shè)置人員更衣、消毒室，兔舍入口處設(shè)消毒設(shè)施，配備必要的消毒器具。授精站四周建高度≥2 m 的圍墻。

2.3 設(shè)施建設(shè)

種公兔舍間距≥8 m；舍內(nèi)地面干燥，通風(fēng)良好，配備相應(yīng)的保暖、降溫設(shè)施；種公兔單籠飼養(yǎng)，籠底面積≥0.36 m2，籠高≥0.45 m。精液處理室面積≥15 m2；地面、墻壁、天花板、門窗等應(yīng)為耐腐蝕易清潔材料；配備窗簾、消毒滅菌以及防寒降溫、通風(fēng)換氣等設(shè)備；設(shè)置相應(yīng)的水槽及操作臺(tái)，具備精液檢驗(yàn)、稀釋處理和貯存等功能。

授精站供應(yīng)自來(lái)水，清污分流排水；種公兔給水設(shè)施應(yīng)為自動(dòng)飲水系統(tǒng)。

2.4 種公兔

采精種公兔數(shù)量≥50 只，并配備相應(yīng)臺(tái)兔。種公兔應(yīng)來(lái)自取得《種畜禽生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)許可證》《動(dòng)物防疫條件合格證》的種兔場(chǎng)，具有《種兔合格證》、完整系譜和性能測(cè)定記錄，按GB 16549 檢疫合格。

種公兔初次采精應(yīng)達(dá)到6～8 月齡、80%以上成年體重；采取的精液應(yīng)進(jìn)行檢查，檢查合格的精液進(jìn)行稀釋等處理后，可用于人工授精配種。

2.5 工作人員

授精站應(yīng)配備種公兔飼養(yǎng)、精液采集、稀釋、檢驗(yàn)和疫病防控等專業(yè)技術(shù)人員，主要崗位技術(shù)人員應(yīng)獲得相關(guān)資質(zhì)證書(shū)。

2.6 環(huán)境保護(hù)

授精站應(yīng)建設(shè)糞污等廢棄物及病害動(dòng)物無(wú)害化處理設(shè)施；廢棄物的處理和排放應(yīng)符合GB 18596 的規(guī)定。

2.7 管理制度

授精站應(yīng)建立崗位職責(zé)，建立飼養(yǎng)管理、衛(wèi)生防疫、精液采集、質(zhì)量檢驗(yàn)、儀器設(shè)備、銷售服務(wù)、檔案管理等制度。

2.8 兔場(chǎng)消毒程序

2.8.1 場(chǎng)區(qū)內(nèi)衛(wèi)生要求 場(chǎng)區(qū)內(nèi)應(yīng)無(wú)雜草、無(wú)垃圾，不準(zhǔn)堆放雜物，生活區(qū)要求整潔衛(wèi)生。

2.8.2 兔舍的清洗和消毒 兔舍消毒必須按程序進(jìn)行，清掃—水沖—噴灑消毒藥液—熏蒸。先徹底清掃兔舍地面、窗臺(tái)、屋頂以及每個(gè)角落，要求無(wú)兔毛、兔糞和灰塵。然后用高壓水槍由上到下，由內(nèi)向外沖洗。待兔舍干燥后，再用消毒劑從上到下噴霧消毒1 次。撤出的設(shè)備，如飲水器、料槽等用消毒液浸泡30 min，然后用清水沖洗，置陽(yáng)光下曝曬2～3 d，再搬入兔舍。進(jìn)兔前1 周，封閉門窗，用高錳酸鉀和福爾馬林（高錳酸鉀21 g/m3，福爾馬林42 mL/m3）密閉熏蒸24 h（舍內(nèi)溫度22～26 ℃，濕度75%～80%時(shí)消毒效果最佳），通風(fēng)3 d。人員進(jìn)兔舍，必須換工作服、工作鞋，腳踏消毒池。

2.8.3 物流管理消毒 物品及工具應(yīng)清洗和消毒，防止在產(chǎn)品流通環(huán)節(jié)中交叉感染。所有物品在入舍前都必須徹底消毒。場(chǎng)內(nèi)公用籠箱、飼料車、運(yùn)兔工具，若受污染就會(huì)波及全場(chǎng)，所以場(chǎng)內(nèi)應(yīng)設(shè)各類專用車，舍內(nèi)各種工具專用固定，嚴(yán)禁串用。

2.8.4 重要地點(diǎn)消毒 場(chǎng)區(qū)入口及兔舍進(jìn)出口要設(shè)消毒池，放入0.2%的新潔爾滅，每3 d 更換1 次。

2.8.5 飲水管的消毒 空舍內(nèi)，進(jìn)兔前2 d，在飲水管中加入飲水消毒液放置1 d，然后放掉消毒液，再放清水沖洗5 min，方可為兔供水。

2.8.6 兔場(chǎng)廢棄物及污物消毒 糞便、污水、尸體、其他廢棄物是病原體的主要集存地。糞便應(yīng)及時(shí)運(yùn)到指定地點(diǎn)堆積發(fā)酵處理或制成有機(jī)肥，污水進(jìn)入沼氣池或化糞池處理，病死兔尸體焚燒、深埋或微生物分解處理，所有的廢棄物必須進(jìn)行無(wú)害化處理。

3 種公兔選擇與調(diào)教

3.1 種公兔選擇

應(yīng)選擇符合品種特征，體質(zhì)結(jié)實(shí)，結(jié)構(gòu)勻稱，生殖器官發(fā)育正常，精液品質(zhì)良好，性欲旺盛，健康無(wú)病的種公兔。

3.2 種公兔調(diào)教

配種前1 個(gè)月開(kāi)始開(kāi)始加強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)。配種前3 周將成年母兔放入可配種的后備種公兔籠，誘導(dǎo)公兔爬跨，進(jìn)行調(diào)教訓(xùn)練，每次時(shí)間以不超過(guò)10 min 為宜，每周2～3 次。

4 采精前準(zhǔn)備

4.1 采精公兔準(zhǔn)備

對(duì)公兔外生殖器四周的兔毛作清潔消毒處理。

4.2 臺(tái)兔準(zhǔn)備

選擇與公兔體重接近、性格溫順、四肢有力的非種用母兔作臺(tái)兔。

4.3 采精器械準(zhǔn)備

采精器包括假陰道外殼、假陰道內(nèi)胎和集精瓶，經(jīng)清洗、高溫煮沸或微波消毒后備用，采精前將假陰道的外殼和內(nèi)胎組長(zhǎng)成假陰道。

4.4 精液品質(zhì)檢查器具準(zhǔn)備

160～400 倍顯微鏡、載玻片、蓋玻片、玻璃量筒、玻璃棒、紗布等經(jīng)清洗、高溫煮沸或微波消毒后備用。

4.5 稀釋液及激素準(zhǔn)備

稀釋液可選擇5%葡萄糖、0.9%生理鹽水或其他商品稀釋液，35 ℃?zhèn)溆?。激素選用促排卵制劑。

5 采精

5.1 采精方法

采精地點(diǎn)可在公兔籠中，用母兔做臺(tái)兔時(shí)，先將發(fā)情的母兔放入公兔籠內(nèi)。術(shù)者一手固定母兔頭部，另一手握假陰道，將其置于母兔腹下兩后股之間，當(dāng)公免爬跨時(shí)，術(shù)者根據(jù)陰莖伸出的方向和角度，及時(shí)調(diào)整假陰道位置，以迎合公兔陰莖插入射精。爬跨后，公兔骨盆進(jìn)行數(shù)次強(qiáng)烈抽動(dòng)，當(dāng)公兔向前一挺，然后向一側(cè)倒去，有時(shí)發(fā)出“咕”的一聲尖叫，就是已射精的表現(xiàn)。此時(shí)術(shù)者放開(kāi)母兔，迅速將假陰道豎直，并放氣減壓，使精液流入集精器，然后及時(shí)送到化驗(yàn)室鏡檢和稀釋。若化驗(yàn)室離采精地點(diǎn)較遠(yuǎn)，應(yīng)將裝精液的試管放入30 ℃左右的溫水杯內(nèi)。

5.2 注意事項(xiàng)

采精時(shí)待假陰道內(nèi)層溫度降到40～42 ℃即可迅速采精。公兔陰莖對(duì)溫度極為敏感，低于40 ℃不易引起射精；過(guò)高溫度采精會(huì)養(yǎng)成嗜高溫的壞習(xí)慣，對(duì)精液品質(zhì)也有影響。采精過(guò)程中假陰道位置要正確，應(yīng)置于水平斜向上30°～45°，絕不能向下傾斜，以免精液流失。采精期間采精者應(yīng)鎮(zhèn)靜自若，不能煩躁，更不能對(duì)公兔采取暴力行為。合理使用種公兔，頻繁采精，不僅精子活力降低，而且可使其精液中抗精子抗原的抗體上升，使精子活力下降。每只公兔每天采精1 次，每周4～5 次。采精期間應(yīng)盡量避免用藥，如種兔有病，應(yīng)停止采精。采精期間應(yīng)加強(qiáng)種公兔管理，每天加喂雞蛋和胡蘿卜，加強(qiáng)運(yùn)動(dòng)［2］。

6 精液檢查

進(jìn)行肉兔精液品質(zhì)檢查時(shí)，一般應(yīng)在18～25 ℃為宜，并在采精后立即進(jìn)行。

6.1 外觀檢查

在實(shí)際應(yīng)用中，一般以目測(cè)估計(jì)。正常公兔的精液呈淡乳白色，具有特殊的腥味，也有少數(shù)兔子的精液不正常，混入尿液有臭味；生殖器有炎癥出血的帶紅色；清水樣的為無(wú)精子。兔子的精量很少，一般在0.2～2 mL，平均為0.8 mL。

6.2 顯微鏡檢查

目測(cè)法是根據(jù)精子在視野中的分布概況，即精子與精子之間的距離評(píng)定為密、中、稀3 種等級(jí)。該方法雖是主觀評(píng)定，但簡(jiǎn)便易行，實(shí)際工作中多采用此法。家兔的精子密度隨季節(jié)變化也十分明顯。

精子活力是指精液中直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子所占百分率。標(biāo)記為0.9、0.8、0.7、……，分別代表90%、80%、70%……的精子具有直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)力，是一種主觀評(píng)定法，有經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)員估計(jì)的結(jié)果很接近實(shí)際數(shù)。兔精子活力應(yīng)在0.5 級(jí)以上方可用于授精。不同季節(jié)的精子活力差異也十分明顯。主要是精子密度的檢查和活力的評(píng)定。精子密度是指單位容積內(nèi)所含有的精子數(shù)目。精子數(shù)的計(jì)算，直接關(guān)系到授精劑量中含有活精子數(shù)。

7 精液稀釋

7.1 主要因素

精液稀釋的目的在于擴(kuò)大精液量，增加輸精母兔只數(shù)，延長(zhǎng)精子存活時(shí)間。在配制肉兔精液稀釋液時(shí)應(yīng)當(dāng)考慮稀釋劑、營(yíng)養(yǎng)成分、保護(hù)成分等主要因素［3］。

7.1.1 稀釋劑 多為等滲緩沖液，可增加精液體積。在實(shí)際生產(chǎn)中，一般常用0.9%NaCI 或5%葡萄糖溶液做稀釋精液。

7.1.2 營(yíng)養(yǎng)成分 可以給精子補(bǔ)充外源性營(yíng)養(yǎng)和能源，從而延長(zhǎng)精子壽命，如葡萄糖、果糖、蔗糖、氨基乙酸、奶、卵黃等。

7.1.3 保護(hù)成分 ①緩沖物質(zhì)，如檸檬酸鈉、檸酸二氫鉀、檸酸二氫鈉、三羥甲基氨甲烷等，可調(diào)節(jié)精液的酸堿度。②非電解物質(zhì)，如糖類、檸酸鹽類等，可改變、中和副性腺分泌物的電離程度，以防止精子凝集并補(bǔ)充精子能源。③防冷刺激物質(zhì)，如奶類、甘油等，可防止精子遇冷時(shí)休克，喪失活力。④抗菌物質(zhì)，常用青霉素（每l mL 稀釋液加入500～1 000 單位）、鏈霉素（每l mL 稀釋液加人500～1 000μg）等，防止有害微生物的繁殖，延長(zhǎng)精子壽命和提高受胎率。⑤抗凍物質(zhì)，如甘油、二甲基亞砜等，用于超低溫冷凍精液。

7.2 稀釋方法

根據(jù)精液的質(zhì)量和活力稀釋倍數(shù)一般稀釋2～10 倍，若超過(guò)10 倍的高倍稀釋，一定要分次稀釋。在稀釋時(shí)，用干凈的膠頭滴管沿著集精杯的內(nèi)壁加入稀釋液，讓稀釋液緩緩流入到集精杯底部。注入后再用玻璃棒輕輕攪動(dòng)，使其均勻混合。稀釋后的精液應(yīng)再做一次鏡檢，發(fā)現(xiàn)活力不強(qiáng)或死亡過(guò)多的精子則不能用作輸精。把鏡檢合格的稀釋精液全部倒入集精瓶?jī)?nèi)，再把集精瓶密封好放入17 ℃的恒溫箱內(nèi)。

7.3 注意事項(xiàng)

一是配制稀釋液用的蒸餾水為雙蒸水，pH 為6.6 以上，雙蒸水必須現(xiàn)用現(xiàn)制備。二是配置稀釋液的蒸餾水溫度在30～40 ℃，稀釋液的溫度和精液的溫度必須一致。三是沒(méi)有使用完的稀釋液放在5 ℃冰箱內(nèi)保存，保存期不能超過(guò)2 d。

8 輸精

輸精就是將精液注入母兔的生殖道內(nèi)，是人工授精的最后一環(huán)。人工授精前6 d 增加光照刺激，每天光照16 h，每只母兔的光照度應(yīng)大于60 lx。輸精前，每只母兔肌肉注射絨毛膜促性腺激素50～100單位，注射后4～6 h 方可輸精。

8.1 輸精器

可用玻璃輸精器，前端長(zhǎng)10 cm 左右的空心小玻管與2 mL 注射器相連，也可用試驗(yàn)滴管代替，每輸精一次應(yīng)更換一支無(wú)菌輸精器。

8.2 輸精母兔的選擇

應(yīng)選擇健康無(wú)病，處于發(fā)情期的母兔進(jìn)行授精，這對(duì)提高受胎率有很大益處。

8.3 輸精方法

由助手抓住母兔的背部，使母兔臀部略朝上，輸精員持輸精器（如一人操作，可一手抓兔，一手持輸精器）。取經(jīng)過(guò)稀釋的精液0.5 mL（約含精子1 000萬(wàn)個(gè)以上）慢慢插入母兔陰道內(nèi)6～7 cm 處即可輸精。插入時(shí)應(yīng)輕輕向前上方旋動(dòng)，要邊旋邊進(jìn)，切不可硬插，以免損傷生殖道。插入后可來(lái)回輕輕抽動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)幾次，有助于刺激子宮頸。抽出輸精器時(shí)也應(yīng)邊轉(zhuǎn)動(dòng)邊抽出，以防精液隨輸精器溢出。抽出輸精器后，即由助手拍打一下兔子的臀部，使母兔受驚，以便精子吸入。

9 輸精后處理

一是采完精后，把假陰道拆開(kāi)，沖洗內(nèi)胎和集精杯，再用蒸餾水清洗1 次，晾干、備用。二是輸精后24 h 內(nèi)不準(zhǔn)在兔舍內(nèi)做任何工作，讓兔子休息。三是輸精結(jié)束后，倒出沒(méi)有用完的精液。把輸精槍調(diào)到最大處，再倒入20 mL 75%乙醇清洗1 次，再用蒸餾水20 mL 清洗1 次，晾干、備用。四是關(guān)閉烘箱和顯微鏡電源，把實(shí)驗(yàn)室整理清潔［4］。